1.一种基因修饰的leucd′酶复合物,其包括:
(a)基因修饰的leuc′亚单位,其包括:
(1)与具有c端的seqidno:1具有至少80%同源性的氨基酸序列;和
(2)与(a)(1)的所述氨基酸序列的c端偶联的c端氨基酸或肽,其中所述c端氨基酸选自任何天然存在的氨基酸,且其中所述c端肽包括氨基酸序列:(xaa)1(xaa)2(xaa)3(xaa)4(xaa)5(xaa)6(xaa)7(xaa)8(xaa)9(xaa)10(seqidno:39),其中:
(xaa)1、(xaa)2、(xaa)3、(xaa)4、(xaa)5、(xaa)6、(xaa)7、(xaa)8、(xaa)9和(xaa)10各自独立地选自任何天然存在的氨基酸,或不存在,条件是(xaa)1、(xaa)2、(xaa)3、(xaa)4、(xaa)5、(xaa)6、(xaa)7、(xaa)8、(xaa)9或(xaa)10中的至少两个存在于所述c端肽中;和
(b)leud亚单位,其包括与seqidno:2具有至少80%同源性的氨基酸序列,其中所述基因修饰的leucd′酶复合物具有异丙基苹果酸异构酶活性。
2.根据权利要求1所述的基因修饰的leucd′酶复合物,其中所述基因修饰的leucd′亚单位包括所述c端肽,且存在其中(xaa)1、(xaa)2、(xaa)3、(xaa)4、(xaa)5、(xaa)6、(xaa)7、(xaa)8、(xaa)9或(xaa)10中的至少六个。
3.根据权利要求1或权利要求2所述的基因修饰的leucd′酶复合物,其中所述基因修饰的leuc′亚单位包括所述c端肽,且其中存在于所述c端肽中的(xaa)1、(xaa)2、(xaa)3、(xaa)4、(xaa)5、(xaa)6、(xaa)7、(xaa)8、(xaa)9或(xaa)10中的每个独立地选自ser、thr、his、lys和arg。
4.根据权利要求1到3中任一项所述的基因修饰的leucd′酶复合物,其中:
所述基因修饰的leuc′亚单位包括所述c端肽;
(xaa)1、(xaa)2、(xaa)9和(xaa)10各自独立地选自ser和thr;并且
(xaa)3、(xaa)4、(xaa)5、(xaa)6、(xaa)7和(xaa)8各自独立地选自his、lys和arg。
5.根据权利要求1到4中任一项所述的基因修饰的leucd′酶复合物,其中所述基因修饰的leuc′亚单位包括所述c端肽(seqidno:40)。
6.一种包括至少一种基因修饰的leucd′酶复合物的微生物体,所述复合物包括:
(a)基因修饰的leuc′亚单位,其包括:
(1)与具有c端的seqidno:1具有至少80%同源性的氨基酸序列;和
(2)与(a)(1)的所述氨基酸序列的c端偶联的c端氨基酸或肽,其中所述c端氨基酸选自任何天然存在的氨基酸,且其中所述c端肽包括氨基酸序列:(xaa)1(xaa)2(xaa)3(xaa)4(xaa)5(xaa)6(xaa)7(xaa)8(xaa)9(xaa)10(seqidno:39),其中:
(xaa)1、(xaa)2、(xaa)3、(xaa)4、(xaa)5、(xaa)6、(xaa)7、(xaa)8、(xaa)9和(xaa)10各自独立地选自任何天然存在的氨基酸,或不存在,条件是(xaa)1、(xaa)2、(xaa)3、(xaa)4、(xaa)5、(xaa)6、(xaa)7、(xaa)8、(xaa)9或(xaa)10中的至少两个存在于所述c端肽中;和
(b)包括与seqidno:2具有至少80%同源性的氨基酸序列的leud亚单位,其中所述至少一种基因修饰的leucd′酶复合物具有异丙基苹果酸异构酶活性。
7.根据权利要求6所述的微生物体,其中所述基因修饰的leuc′亚单位包括所述c端肽,且其中存在(xaa)1、(xaa)2、(xaa)3、(xaa)4、(xaa)5、(xaa)6、(xaa)7、(xaa)8、(xaa)9或(xaa)10中的至少六个。
8.根据权利要求6或权利要求7所述的微生物体,其中所述基因修饰的leuc′亚单位包括所述c端肽,且其中存在于所述c端肽中的(xaa)1、(xaa)2、(xaa)3、(xaa)4、(xaa)5、(xaa)6、(xaa)7、(xaa)8、(xaa)9或(xaa)10中的每个独立地选自ser、thr、his、lys和arg。
9.根据权利要求6到8中任一项所述的微生物体,其中:
所述基因修饰的leuc′亚单位包括所述c端肽;
(xaa)1、(xaa)2、(xaa)9和(xaa)10各自独立地选自ser和thr;并且
(xaa)3、(xaa)4、(xaa)5、(xaa)6、(xaa)7和(xaa)8各自独立地选自his、lys和arg。
10.根据权利要求6到9中任一项所述的微生物体,其中所述基因修饰的leuc′亚单位包括所述c端肽(seqidno:40)。
11.一种制备c7-c112-酮酸的方法,所述方法包括:(i)提供c4-c102-酮酸底物中的至少一种,其具有:
(a)至少一种具有异丙基苹果酸合成酶活性的异丙基苹果酸合成酶;
(b)至少一种具有异丙基苹果酸脱氢酶活性的异丙基苹果酸脱氢酶;和
(c)至少一种基因修饰的leucd′酶复合物,其包括:
(1)基因修饰的leuc′亚单位,其包括:
(i)与具有c端的seqidno:1具有至少80%同源性的氨基酸序列;和
(ii)与(i)(c)(1)(i)的氨基酸序列的c端偶联的c端氨基酸或肽,其中所述c端氨基酸选自任何天然存在的氨基酸,且其中所述c端肽包括氨基酸序列:(xaa)1(xaa)2(xaa)3(xaa)4(xaa)5(xaa)6(xaa)7(xaa)8(xaa)9(xaa)10(seqidno:39),其中:
(xaa)1、(xaa)2、(xaa)3、(xaa)4、(xaa)5、(xaa)6、(xaa)7、(xaa)8、(xaa)9和(xaa)10各自独立地选自任何天然存在的氨基酸,或不存在,条件是(xaa)1、(xaa)2、(xaa)3、(xaa)4、(xaa)5、(xaa)6、(xaa)7、(xaa)8、(xaa)9或(xaa)10中的至少两个存在于所述c端肽中;和
(2)包括与seqidno:2具有至少80%同源性的氨基酸序列的leud亚单位;
在所述c4-c102-酮酸底物中的至少一种转化为所述c7-c112-酮酸的条件下,其中:
所述至少一种基因修饰的leucd′酶复合物具有异丙基苹果酸异构酶活性,并且
所述c4-c102-酮酸底物的至少一种转化为所述c7-c112-酮酸通过一种或多种生化反应发生。
12.根据权利要求11所述的方法,其中所述基因修饰的leuc′亚单位包括所述c端肽,且其中存在(xaa)1、(xaa)2、(xaa)3、(xaa)4、(xaa)5、(xaa)6、(xaa)7、(xaa)8、(xaa)9或(xaa)10中的至少六个。
13.根据权利要求11或权利要求12所述的方法,所述基因修饰的leuc′亚单位包括所述c端肽,其中存在于所述c端肽中的(xaa)1、(xaa)2、(xaa)3、(xaa)4、(xaa)5、(xaa)6、(xaa)7、(xaa)8、(xaa)9或(xaa)10中的每个独立地选自ser、thr、his、lys和arg。
14.根据权利要求11到13中任一项所述的方法,其中:
所述基因修饰的leuc′亚单位包括所述c端肽;
(xaa)1、(xaa)2、(xaa)9和(xaa)10各自独立地选自ser和thr;并且
(xaa)3、(xaa)4、(xaa)5、(xaa)6、(xaa)7和(xaa)8各自独立地选自his、lys和arg。
15.根据权利要求11到14中任一项所述的方法,其中所述基因修饰的leuc′亚单位包括所述c端肽(seqidno:40)。