基因修饰的异丙基苹果酸异构酶酶复合物及用其制备伸长的2-酮酸和C5-C10化合物的方法与流程

文档序号:20888110发布日期:2020-05-26 17:41阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种基因修饰的leucd′酶复合物,其包括:

(a)基因修饰的leuc′亚单位,其包括:

(1)与具有c端的seqidno:1具有至少80%同源性的氨基酸序列;和

(2)与(a)(1)的所述氨基酸序列的c端偶联的c端氨基酸或肽,其中所述c端氨基酸选自任何天然存在的氨基酸,且其中所述c端肽包括氨基酸序列:(xaa)1(xaa)2(xaa)3(xaa)4(xaa)5(xaa)6(xaa)7(xaa)8(xaa)9(xaa)10(seqidno:39),其中:

(xaa)1、(xaa)2、(xaa)3、(xaa)4、(xaa)5、(xaa)6、(xaa)7、(xaa)8、(xaa)9和(xaa)10各自独立地选自任何天然存在的氨基酸,或不存在,条件是(xaa)1、(xaa)2、(xaa)3、(xaa)4、(xaa)5、(xaa)6、(xaa)7、(xaa)8、(xaa)9或(xaa)10中的至少两个存在于所述c端肽中;和

(b)leud亚单位,其包括与seqidno:2具有至少80%同源性的氨基酸序列,其中所述基因修饰的leucd′酶复合物具有异丙基苹果酸异构酶活性。

2.根据权利要求1所述的基因修饰的leucd′酶复合物,其中所述基因修饰的leucd′亚单位包括所述c端肽,且存在其中(xaa)1、(xaa)2、(xaa)3、(xaa)4、(xaa)5、(xaa)6、(xaa)7、(xaa)8、(xaa)9或(xaa)10中的至少六个。

3.根据权利要求1或权利要求2所述的基因修饰的leucd′酶复合物,其中所述基因修饰的leuc′亚单位包括所述c端肽,且其中存在于所述c端肽中的(xaa)1、(xaa)2、(xaa)3、(xaa)4、(xaa)5、(xaa)6、(xaa)7、(xaa)8、(xaa)9或(xaa)10中的每个独立地选自ser、thr、his、lys和arg。

4.根据权利要求1到3中任一项所述的基因修饰的leucd′酶复合物,其中:

所述基因修饰的leuc′亚单位包括所述c端肽;

(xaa)1、(xaa)2、(xaa)9和(xaa)10各自独立地选自ser和thr;并且

(xaa)3、(xaa)4、(xaa)5、(xaa)6、(xaa)7和(xaa)8各自独立地选自his、lys和arg。

5.根据权利要求1到4中任一项所述的基因修饰的leucd′酶复合物,其中所述基因修饰的leuc′亚单位包括所述c端肽(seqidno:40)。

6.一种包括至少一种基因修饰的leucd′酶复合物的微生物体,所述复合物包括:

(a)基因修饰的leuc′亚单位,其包括:

(1)与具有c端的seqidno:1具有至少80%同源性的氨基酸序列;和

(2)与(a)(1)的所述氨基酸序列的c端偶联的c端氨基酸或肽,其中所述c端氨基酸选自任何天然存在的氨基酸,且其中所述c端肽包括氨基酸序列:(xaa)1(xaa)2(xaa)3(xaa)4(xaa)5(xaa)6(xaa)7(xaa)8(xaa)9(xaa)10(seqidno:39),其中:

(xaa)1、(xaa)2、(xaa)3、(xaa)4、(xaa)5、(xaa)6、(xaa)7、(xaa)8、(xaa)9和(xaa)10各自独立地选自任何天然存在的氨基酸,或不存在,条件是(xaa)1、(xaa)2、(xaa)3、(xaa)4、(xaa)5、(xaa)6、(xaa)7、(xaa)8、(xaa)9或(xaa)10中的至少两个存在于所述c端肽中;和

(b)包括与seqidno:2具有至少80%同源性的氨基酸序列的leud亚单位,其中所述至少一种基因修饰的leucd′酶复合物具有异丙基苹果酸异构酶活性。

7.根据权利要求6所述的微生物体,其中所述基因修饰的leuc′亚单位包括所述c端肽,且其中存在(xaa)1、(xaa)2、(xaa)3、(xaa)4、(xaa)5、(xaa)6、(xaa)7、(xaa)8、(xaa)9或(xaa)10中的至少六个。

8.根据权利要求6或权利要求7所述的微生物体,其中所述基因修饰的leuc′亚单位包括所述c端肽,且其中存在于所述c端肽中的(xaa)1、(xaa)2、(xaa)3、(xaa)4、(xaa)5、(xaa)6、(xaa)7、(xaa)8、(xaa)9或(xaa)10中的每个独立地选自ser、thr、his、lys和arg。

9.根据权利要求6到8中任一项所述的微生物体,其中:

所述基因修饰的leuc′亚单位包括所述c端肽;

(xaa)1、(xaa)2、(xaa)9和(xaa)10各自独立地选自ser和thr;并且

(xaa)3、(xaa)4、(xaa)5、(xaa)6、(xaa)7和(xaa)8各自独立地选自his、lys和arg。

10.根据权利要求6到9中任一项所述的微生物体,其中所述基因修饰的leuc′亚单位包括所述c端肽(seqidno:40)。

11.一种制备c7-c112-酮酸的方法,所述方法包括:(i)提供c4-c102-酮酸底物中的至少一种,其具有:

(a)至少一种具有异丙基苹果酸合成酶活性的异丙基苹果酸合成酶;

(b)至少一种具有异丙基苹果酸脱氢酶活性的异丙基苹果酸脱氢酶;和

(c)至少一种基因修饰的leucd′酶复合物,其包括:

(1)基因修饰的leuc′亚单位,其包括:

(i)与具有c端的seqidno:1具有至少80%同源性的氨基酸序列;和

(ii)与(i)(c)(1)(i)的氨基酸序列的c端偶联的c端氨基酸或肽,其中所述c端氨基酸选自任何天然存在的氨基酸,且其中所述c端肽包括氨基酸序列:(xaa)1(xaa)2(xaa)3(xaa)4(xaa)5(xaa)6(xaa)7(xaa)8(xaa)9(xaa)10(seqidno:39),其中:

(xaa)1、(xaa)2、(xaa)3、(xaa)4、(xaa)5、(xaa)6、(xaa)7、(xaa)8、(xaa)9和(xaa)10各自独立地选自任何天然存在的氨基酸,或不存在,条件是(xaa)1、(xaa)2、(xaa)3、(xaa)4、(xaa)5、(xaa)6、(xaa)7、(xaa)8、(xaa)9或(xaa)10中的至少两个存在于所述c端肽中;和

(2)包括与seqidno:2具有至少80%同源性的氨基酸序列的leud亚单位;

在所述c4-c102-酮酸底物中的至少一种转化为所述c7-c112-酮酸的条件下,其中:

所述至少一种基因修饰的leucd′酶复合物具有异丙基苹果酸异构酶活性,并且

所述c4-c102-酮酸底物的至少一种转化为所述c7-c112-酮酸通过一种或多种生化反应发生。

12.根据权利要求11所述的方法,其中所述基因修饰的leuc′亚单位包括所述c端肽,且其中存在(xaa)1、(xaa)2、(xaa)3、(xaa)4、(xaa)5、(xaa)6、(xaa)7、(xaa)8、(xaa)9或(xaa)10中的至少六个。

13.根据权利要求11或权利要求12所述的方法,所述基因修饰的leuc′亚单位包括所述c端肽,其中存在于所述c端肽中的(xaa)1、(xaa)2、(xaa)3、(xaa)4、(xaa)5、(xaa)6、(xaa)7、(xaa)8、(xaa)9或(xaa)10中的每个独立地选自ser、thr、his、lys和arg。

14.根据权利要求11到13中任一项所述的方法,其中:

所述基因修饰的leuc′亚单位包括所述c端肽;

(xaa)1、(xaa)2、(xaa)9和(xaa)10各自独立地选自ser和thr;并且

(xaa)3、(xaa)4、(xaa)5、(xaa)6、(xaa)7和(xaa)8各自独立地选自his、lys和arg。

15.根据权利要求11到14中任一项所述的方法,其中所述基因修饰的leuc′亚单位包括所述c端肽(seqidno:40)。


技术总结
基因修饰的异丙基苹果酸异构酶酶复合物(例如LeuCD′酶复合物)、包含基因修饰的异丙基苹果酸异构酶酶复合物(例如LeuCD′)的微生物体;和用基因修饰的异丙基苹果酸异构酶酶复合物(例如LeuCD′)制备C7‑C11 2‑酮酸的方法。所述基因修饰的异丙基苹果酸异构酶酶复合物(例如LeuCD′酶复合物)、微生物体和制备C7‑C11 2‑酮酸的方法可用于在体内和在体外产生C6‑C1o醛、烷烃、醇和羧酸。

技术研发人员:P·桑格哈尼;E·C·史乐;S·A·格林沃尔特
受保护的技术使用者:陶氏环球技术有限责任公司
技术研发日:2018.09.25
技术公布日:2020.05.26
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