载体构建体的制作方法

文档序号:21697869发布日期:2020-07-31 22:49阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种载体构建体,其包含以下组分:

(i)编码将蛋白质导入tat分泌途径的信号肽的序列;和

(ii)与编码pviii噬菌体外壳蛋白的序列融合的编码荧光团的序列。

2.根据权利要求1所述的载体构建体,其中所述荧光团是具有或包含β-桶结构或架构的荧光团。

3.根据权利要求2所述的载体构建体,其中所述荧光团是gfp、gfp衍生物,或者具有gfp架构。

4.根据权利要求3所述的载体构建体,其中所述荧光团是mneongreen或其变体。

5.根据权利要求4所述的载体构建体,其中所述mneongreen包含seqidno:4,或者其中所述变体序列是与seqidno:4具有至少70%同一性的序列。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的载体构建体,其中所述信号肽是tora或其变体。

7.根据权利要求6所述的载体构建体,其中所述tora变体是torab7或其变体。

8.根据权利要求7所述的载体构建体,其中所述torab7包含seqidno:2,或者其中所述变体序列是与seqidno:2具有至少70%同一性的序列。

9.根据权利要求1至8中任一项所述的载体构建体,其中所述pviii噬菌体外壳蛋白对应于来自m13、fd或f1噬菌体的pviii外壳蛋白或其变体。

10.根据权利要求1至9中任一项所述的载体构建体,其中所述pviii噬菌体外壳蛋白包含seqidno:8,或者其中所述变体序列是与seqidno:8具有至少70%同一性的序列。

11.根据权利要求10所述的载体构建体,其中所述pviii噬菌体外壳蛋白或变体序列在seqidno:8的位置33或相应的位置具有缬氨酸至异亮氨酸突变。

12.根据权利要求11所述的载体构建体,其中编码所述异亮氨酸残基的核酸序列包含密码子ata。

13.根据权利要求11或权利要求12所述的载体构建体,其中所述pviii噬菌体外壳蛋白包含seqidno:61,或与seqidno:61具有至少70%同一性的序列,或者由包含seqidno:60的核酸序列或与seqidno:60具有至少70%同一性的序列编码。

14.根据权利要求1至9中任一项所述的载体构建体,其中所述pviii噬菌体外壳蛋白包含seqidno:25,或者其中所述变体序列是与seqidno:25具有至少70%同一性的序列。

15.根据权利要求1至14中任一项所述的载体构建体,其中所述载体还包含编码所述荧光团和所述pviii噬菌体外壳蛋白之间的接头的序列。

16.根据权利要求15所述的载体构建体,其中所述接头包含seqidno:6或其变体,其中所述变体序列是与seqidno:6具有至少70%同一性的序列。

17.根据权利要求1至16中任一项所述的载体构建体,其中所述载体还包含编码可检测标签的序列。

18.根据权利要求17所述的载体构建体,其中所述标签位于所述信号肽和所述荧光团之间。

19.根据权利要求17或权利要求18所述的载体构建体,其中所述标签是flag标签或其衍生物,或另一种带负电荷的标签。

20.根据权利要求1至19中任一项所述的载体构建体,其中所述载体还包含一个或多个核糖体结合位点(rbs)。

21.根据权利要求20所述的载体构建体,其中驱动所述荧光团-pviii融合蛋白的翻译的rbs是弱rbs。

22.根据权利要求1至21中任一项所述的载体构建体,其中所述载体构建体编码包含seqidno:16的序列或与其具有至少70%同一性的序列。

23.根据权利要求1至21中任一项所述的载体构建体,其中所述载体构建体编码包含seqidno:18的序列或与其具有至少70%同一性的序列。

24.根据权利要求1至21中任一项所述的载体构建体,其中所述载体构建体编码包含seqidno:20的序列或与其具有至少70%同一性的序列。

25.根据权利要求1至21中任一项所述的载体构建体,其中所述载体构建体编码包含seqidno:22的序列或与其具有至少70%同一性的序列。

26.根据权利要求23至25中任一项所述的载体构建体,其中所述pviii噬菌体外壳蛋白或变体序列在对应于seqidno:8的位置33的位置处具有缬氨酸至异亮氨酸突变。

27.根据权利要求26所述的载体构建体,其中编码所述异亮氨酸残基的核酸序列包含密码子ata。

28.根据权利要求1至27中任一项所述的载体构建体,其中所述载体构建体还包含与编码非pviii噬菌体外壳蛋白的序列融合的编码感兴趣的蛋白的序列。

29.根据权利要求1至28中任一项所述的载体构建体,其中所述载体是噬菌粒或噬菌体载体。

30.一种核酸分子,其包含如权利要求1至29中任一项所定义的组分。

31.噬菌体颗粒,其包含根据权利要求1至30中任一项所述的载体或核酸分子,并且在表面上表达荧光团-pviii融合蛋白。

32.根据权利要求31所述的噬菌体颗粒,其中所述噬菌体颗粒是丝状噬菌体的颗粒。

33.一种噬菌体颗粒的文库,其中所述噬菌体颗粒根据权利要求31或权利要求32中所述,并且其中多种不同的感兴趣的蛋白在所述噬菌体颗粒的表面上表达。

34.一种噬菌体展示系统,其包含根据权利要求1至30中任一项所述的载体构建体或核酸分子。

35.根据权利要求34所述的噬菌体展示系统,其还包含过度表达蛋白tata、tatb和tatc的大肠杆菌(e.coli)宿主细胞。

36.一种用于产生荧光噬菌体颗粒的方法,其包含使用根据权利要求1至30中任一项所述的载体构建体或核酸分子或根据权利要求34或权利要求35所述的噬菌体展示系统。


技术总结
本发明提供了一种载体构建体,其包含以下组分:(i)编码将蛋白质导入Tat分泌途径的信号肽的序列;和(ii)与编码pVIII噬菌体外壳蛋白的序列融合的编码荧光团的序列。还提供了包含组分(i)和(ii)的核酸分子,以及噬菌体颗粒,所述噬菌体颗粒包含这样的载体或核酸分子并在表面上表达荧光团‑pVIII融合蛋白。还提供了用于产生这样的荧光噬菌体颗粒的方法。

技术研发人员:G·A·洛塞特;T·弗利斯塔德;S·卑尔根赛德尔;N·R·尼尔森;I·桑德利
受保护的技术使用者:内克斯特伊拉股份公司
技术研发日:2018.11.05
技术公布日:2020.07.31
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