本发明涉及基因工程及分子遗传学领域，具体涉及一种用于检测心肌病和/或心律失常的致病和/或易感基因的个性化捕获、测序的探针组及试剂盒。
背景技术：
心肌病是心血管系统的一组复杂疾病，即可局限于心肌，也可以是全身系统性疾病的一部分，即心肌形态学及功能学异常的疾病，除外一切足以独立引起上述异常的其他疾病。
肥厚型心肌病(hypertrophiccardiomyopathy，hcm)是临床最常见的遗传性心肌病，以左和/或右心室不对称肥厚为特征，室间隔最常受累，并以心肌细胞肥大和排列紊乱为主要病理特征。hcm的临床表现具有较强的异质性，从无症状到晕厥、心律失常、心力衰竭、心原性猝死等。hcm在普通人群中的发病率为1/500，是青少年和运动员发生心原性猝死的主要原因。hcm是最常见的单基因遗传性心血管病，是一种常染色体显性遗传性疾病，具有显著的遗传异质性。研究发现，约50％的hcm患者具有明显的家族聚集倾向，称之为家族性肥厚型心肌病。因此，寻找、发现心肌病的致病基因，不仅能够明确疾病的遗传因素，而且有助于该疾病的鉴别诊断和家系筛查，对家系成员的早期诊断以及突变携带者的早期干预治疗具有重要的临床意义。
肥厚型心肌病(hcm)是一种临床表型具有高度异质性的遗传性心肌病，从无症状到心力衰竭、心源性猝死等；发病时间不一，有在青少年发病，在中年后发病等；病程进展缓慢和迅速等；而且在不同的家族间和同一家族内存在广泛的临床异质性。近年来对hcm的致病基因和发病机制的认识取得了很大进展，但仍有很多问题尚待解决。目前，心肌病的诊断方法主要是临床经验诊断，心脏影像学技术(包括超声心动图、ct影像学技术、心脏磁共振成像)、心电图、及家族病史的筛查等。临床实践中对本病的认识也随之提高，但由于国情和经济发展水平的差异，我国对于hcm的致病基因筛查尚未在临床工作中大面积开展，致病基因的筛查多用于临床研究。目前多为sanger测序，对基因筛查阳性的先证者，应用sanger测序检测家系中其他成员的特定基因。过去的二十年间，已有超过27个与hcm相关的致病基因相继被发现，超过1500个突变与hcm相关。目前对于已知hcm致病基因的检测，只能在确定目标检测基因后采用逐一设计引物、pcr扩增、sanger法测序、与reference序列比对的方法进行，费时费力且检测费用不菲；而对于在已知致病基因没有发现严重突变的患儿，其分子遗传学诊断往往难以确立，这些都对遗传咨询及许多相关问题的解决造成了巨大的障碍。
基因检测有助于hcm的鉴别诊断和家系筛查，但在危险预测与分层中的应用还十分有限，因为hcm基因型和表型具有明显的异质性，大多数已报道的致病突变局限于少数家系或散发病例中，基因型和表型的关系仍需进一步研究。第二代高通量测序技术(next-generationsequencingtechnology)具有快速、准确、低成本的优点，可同时对多个基因的各种类型突变进行检测，已经被广泛应用于遗传缺陷的病因检测和分子遗传学诊断，然而到目前为止，一直尚未有专门针对遗传性心肌病的致病基因检测的高通量探针、芯片或试剂盒，使得本病相关领域的进展严重滞后，不能够明确疾病的遗传原因，诊断敏感性较低，家系筛查和必要的早期干预治疗无法施行，不仅给患者和其家庭带来的巨大的痛苦和沉重的经济负担，也严重阻碍了我国整体人口素质的大幅度提高。
综上所述，开发一种高效、准确、快速、低价的hcm试剂盒，用于心肌病致病基因的基因筛查和分子遗传学诊断，意义非常重大。
与hcm发病相关的基因包括肌球蛋白必须轻链基因(myl3)、肌球蛋白调节轻链基因(myl2)、心肌肌钙蛋白t基因(tnnt2)、心肌肌钙蛋白c基因(tnnc1)、心肌肌钙蛋白i基因(tnni3)、α-原肌球蛋白基因(tpml)、肌动蛋白基因(actc)、z盘(tcap、vcl、ldb3、actn2、myoz2、ankrdl、nexn)。其中，超过1500种致病性突变在至少27个肥厚型心肌病相关基因中被确认，超过70％的突变为编码肌小节的肌球蛋白重链(myh7)和肌球蛋白结合蛋白c(mybpc3)的基因，此二者为hcm主要致病基因。目前，现有技术中公开了检测心肌病或心律失常的致病或易感基因有单基因检测或者多基因检测，例如：
专利cn107058538a公开了一种引物组合物及其组成的试剂盒和应用，所述的引物组合物包括taz基因新突变位点c.622a>g的引物或探针。
专利cn106868175a公开了一种引物组合物及其应用，所述的引物组合物包括检测myh7、prkag2和tnni3基因的引物或探针。
专利cn106191290a公开了一种扩张型心肌病遗传性易感基因筛查试剂盒，所述的试剂盒检测基因为myh7、mybpc3和scn5a，所述的试剂盒还包括对myh7、mybpc3和scn5a三个基因进行全外显子测序的试剂。
专利cn105695606a公开了用于非治疗目的的肥厚型心肌病相关致病基因突变的筛选方法，其靶基因包括myh7、tnnt2、mybpc3、prkag2、tnni3、myl3、myl2、actc1及myh6。
专利cn105506115a公开了一种通过靶向高通量半导体测序技术检测遗传性心肌病致病基因突变的dna文库及其应用。所述的基因包括80种不同的致病基因，其80种不同的致病基因来自omim数据库、hgmd数据库及clinvar数据库。
专利cn103509867b公开了一种筛查扩张型心肌病的试剂盒，所述试剂盒检测基因为人scn5a、myh7、mybpc3、及mypn基因。
综上所述，上述专利分别公开了基因myh7、tnnt2、mybpc3、prkag2、tnni3、myl3、myl2、actc1、myh6、mypn、scn5a或taz用于检测心肌病或心律失常。但是，均未公开本发明所述的心肌病或心律失常的致病或易感基因的组合，本发明所述的基因的组合中含有很多现有技术中没有公开的基因，其检测更加准确。
技术实现要素：
本发明人通过创造性劳动筛选出约312种与心肌病的致病和/或易感基因，根据这些基因的任意组合提供相应组合的探针组或试剂盒，为个体提供分子学遗传诊断，对患病家属的家系筛查，以及对突变携带者的早期干预治疗具有重要的临床意义，也可对再次妊娠的风险进行精确评估。同时，本发明所述的探针组及试剂盒具有高效、检测位点多、准确、快速、实用性强且成本低的优势。
优选的，所述筛选的方法为结合大量数据库检索和/或对患者基因测序结果进行筛选。
本发明的第一方面，涉及一种探针组，所述探针组检测的各基因为myh7、tnnt2、tpm1、mybpc3、prkag2、tnni3、myl3、ttn、myl2、actc1、csrp3、tnnc1、myh6、vcl、myoz2、jph2、pln、calr3、nexn、mypn、actn2、ldb3、tcap、flnc、mylk2、cav3、fhl1、cryab、trim63、ankrd1、klf10、myom1、fxn、casq2、pdlim3、myo6、acta1、fhod3、elac2、mrpl3、trmu、des、map2k1、map2k2、gla、calm3、braf、ndufaf1、slc25a3、slc25a4、ndufv2、raf1、sos1、mto1、sri、obscn、taco1、fastkd2、cox20、cox10、pet100、apopt1、cox14、cox6b1、agk、mgme1、gaa、agl、ids、ptpn11、kras、nras、rit1、sos2、lztr1、cbl、shoc2、nf1、lamp2、nsd1、cdkn1c、h19、kcnq1ot1、mrps16、tsfm、mrps22、aars2、mrpl44、gtpbp3、sco2、cox15、coa5、coa6、acad9、mlycd、slc22a5、fhl2、lmna、scn5a、eya4、sgcd、abcc9、tmpo、psen1、psen2、fktn、dsg2、rbm20、sdha、bag3、lama4、prdm16、gatad1、dmd、dsp、tnni3k、taz、chrm2、nebl、ctf1、dsc2、emd、flt1、ilk、isl1、lama2、synm、tcf21、txnrd2、cacna2d1、ryr2、dtna、myoz1、dolk、speg、pmm2、dpm1、dpm3、b4galt1、cog7、alg1、cpt2、chkb、rbck1、acad8、fkrp、tgfb3、tmem43、pkp2、jup、ctnna3、tp63、mib1、myh7b、ttr、gsn、hras、kat6b、spred1、actb、actg1、syne1、syne2、trim37、gpx4、dcaf8、xpnpep3、anks6、asah1、gnptab、glb1、epg5、d2hgdh、idh2、tsc1、vcp、myot、tpm2、tnnt3、ampd1、acadvl、dnajc19、hadh、hadha、acads、ndufb11、hfe、hfe2、hamp、cbs、naga、lpin1、pnpla2、ryr1、myf6、sgcg、scn4a、ighmbp2、iscu、gnptg、mcoln1、gusb、pigm、kctd7、notch3、hexb、gfm1、lias、pomt1、pomt2、pomgnt1、ispd、pomgnt2、dag1、tmem5、b3galnt2、pomk、b4gat1、gmppb、gys1、xk、wfs1、slc25a20、ndufb3、ndufaf2、ndufb9、ndufs1、nubpl、ndufs2、ndufs3、ndufv1、ndufs4、foxred1、ndufs6、ndufaf4、ndufa1、ndufa11、ndufaf3、ndufaf5、atpaf2、tmem70、atp5e、atp5a1、gbe1、gyg1、pgm1、coq2、pdss1、coq9、coq4、pdss2、nsdhl、abcc6、large1、kcnq1、kcnh2、ank2、kcne1、kcne2、kcnj2、cacna1c、scn4b、akap9、snta1、kcnj5、calm1、calm2、alg10、kcne3、sdhaf3、trdn、gnai2、cacnb2、gpd1l、scn1b、scn3b、hcn4、kcnd3、scn10a、kcnj8、rangrf、slmap、scn2b、fgf12、kcne5、hey2、trpm4、nkx2-5、tbx5、gata4、akap10、nppa、kcna5、gja5、nup155、gja1、pitx2、prrx1、cacna2d4、gata5、gata6、kcnk3、zfhx3、dpp6、slc6a4、cacna1s、trpa1、ppox、dchs1、agxt、naa10或nos1ap中的两种或两种以上的组合。
优选的，所述探针组检测的各基因的组合中至少包括mybpc3、vcl、tnnt2或myh7中的一种或两种以上的组合。
进一步优选的，所述探针组检测的各基因为bag3、mrpl3、mybpc3、vcl、tmem43、kcna5、tnnt2、kras或myh7中的两种或两种以上的组合。
在本发明的一个具体实施方式中，所述探针组检测的各基因为myh7、mybpc3、myl3、myl2、tnnt2、tnnc1、tnni3、tcap、vcl、ldb3、actn2、myoz2和nexn。
在本发明的一个具体实施方式中，所述的探针组检测的各基因为gaa、kcnh2、braf、kcnq1、lamp2、dsg2、jup或pkp2中的两种或两种以上的组合。
在本发明的一个具体实施方式中，所述的探针组检测的各基因为gaa、kcnh2、braf、kcnq1、lamp2、dsg2、jup和pkp2。
在本发明的一个具体实施方式中，所述探针组检测的各基因为myh7、mybpc3、myl3、myl2、tnnt2、tnnc1、tnni3、tpml、actc、tcap、vcl、ldb3、actn2、myoz2、ankrdl和nexn。
在本发明的一个具体实施方式中，所述探针组检测的各基因为bag3、mrpl3、mybpc3、vcl、tmem43、kcna5、tnnt2、kras和myh7。
在本发明的一个具体实施方式中，所述探针组包含能同时特异性捕获312个致病基因的探针，所述探针组检测的各致病基因为myh7、tnnt2、tpm1、mybpc3、prkag2、tnni3、myl3、ttn、myl2、actc1、csrp3、tnnc1、myh6、vcl、myoz2、jph2、pln、calr3、nexn、mypn、actn2、ldb3、tcap、flnc、mylk2、cav3、fhl1、cryab、trim63、ankrd1、klf10、myom1、fxn、casq2、pdlim3、myo6、acta1、fhod3、elac2、mrpl3、trmu、des、map2k1、map2k2、gla、calm3、braf、ndufaf1、slc25a3、slc25a4、ndufv2、raf1、sos1、mto1、sri、obscn、taco1、fastkd2、cox20、cox10、pet100、apopt1、cox14、cox6b1、agk、mgme1、gaa、agl、ids、ptpn11、kras、nras、rit1、sos2、lztr1、cbl、shoc2、nf1、lamp2、nsd1、cdkn1c、h19、kcnq1ot1、mrps16、tsfm、mrps22、aars2、mrpl44、gtpbp3、sco2、cox15、coa5、coa6、acad9、mlycd、slc22a5、fhl2、lmna、scn5a、eya4、sgcd、abcc9、tmpo、psen1、psen2、fktn、dsg2、rbm20、sdha、bag3、lama4、prdm16、gatad1、dmd、dsp、tnni3k、taz、chrm2、nebl、ctf1、dsc2、emd、flt1、ilk、isl1、lama2、synm、tcf21、txnrd2、cacna2d1、ryr2、dtna、myoz1、dolk、speg、pmm2、dpm1、dpm3、b4galt1、cog7、alg1、cpt2、chkb、rbck1、acad8、fkrp、tgfb3、tmem43、pkp2、jup、ctnna3、tp63、mib1、myh7b、ttr、gsn、hras、kat6b、spred1、actb、actg1、syne1、syne2、trim37、gpx4、dcaf8、xpnpep3、anks6、asah1、gnptab、glb1、epg5、d2hgdh、idh2、tsc1、vcp、myot、tpm2、tnnt3、ampd1、acadvl、dnajc19、hadh、hadha、acads、ndufb11、hfe、hfe2、hamp、cbs、naga、lpin1、pnpla2、ryr1、myf6、sgcg、scn4a、ighmbp2、iscu、gnptg、mcoln1、gusb、pigm、kctd7、notch3、hexb、gfm1、lias、pomt1、pomt2、pomgnt1、ispd、pomgnt2、dag1、tmem5、b3galnt2、pomk、b4gat1、gmppb、gys1、xk、wfs1、slc25a20、ndufb3、ndufaf2、ndufb9、ndufs1、nubpl、ndufs2、ndufs3、ndufv1、ndufs4、foxred1、ndufs6、ndufaf4、ndufa1、ndufa11、ndufaf3、ndufaf5、atpaf2、tmem70、atp5e、atp5a1、gbe1、gyg1、pgm1、coq2、pdss1、coq9、coq4、pdss2、nsdhl、abcc6、large1、kcnq1、kcnh2、ank2、kcne1、kcne2、kcnj2、cacna1c、scn4b、akap9、snta1、kcnj5、calm1、calm2、alg10、kcne3、sdhaf3、trdn、gnai2、cacnb2、gpd1l、scn1b、scn3b、hcn4、kcnd3、scn10a、kcnj8、rangrf、slmap、scn2b、fgf12、kcne5、hey2、trpm4、nkx2-5、tbx5、gata4、akap10、nppa、kcna5、gja5、nup155、gja1、pitx2、prrx1、cacna2d4、gata5、gata6、kcnk3、zfhx3、dpp6、slc6a4、cacna1s、trpa1、ppox、dchs1、agxt、naa10和nos1ap。
优选的，根据上述各基因通过公知、通用的方法设计并合成探针序列，对目的片段进行特异性特异性捕获、扩增、测序，以达到检测样本的目的。
本发明所述的基因为与心肌病的致病和/或易感相关的基因。
优选的，所述的心肌病为遗传性心肌病。进一步优选的，所述的心肌病选自扩张型心肌病、肥厚型心肌病、家族性肥厚型心肌病4型、家族性肥厚型心肌病15型、家族性致心律失常性右心室发育不良5型、家族性房颤7型、家族性限制性心肌病3型、心房纤颤、努南综合征3型或家族性肥厚型心肌病1型。
优选的，所述的心肌病表现的症状为心律不齐、心力衰竭或心原性猝死。
本发明的第二方面，涉及一种应用所述探针组进行基因检测的方法，包括将待检基因与所述探针组混合。
优选的，所述的基因检测包括检测所述基因的有或无或突变的有或无。进一步优选的，所述的突变选自剪切位点突变、无义突变或移码突变。
优选的，所述的基因检测包括检测所述基因的水平。
本发明所述的基因检测的方法可以为非诊断目的或诊断目的。
本发明所述的非诊断目的为应用所述的探针组检测上述基因组合中各基因的突变有或无以及检测上述基因组合中各基因的水平。
本发明所述的诊断目的为应用所述的探针组检测上述基因后诊断或预测疾病。
本发明的第三方面，涉及一种检测心肌病的致病和/或易感基因的试剂在制备诊断心肌病的产品中的应用，所述心肌病的致病和/或易感基因为myh7、tnnt2、tpm1、mybpc3、prkag2、tnni3、myl3、ttn、myl2、actc1、csrp3、tnnc1、myh6、vcl、myoz2、jph2、pln、calr3、nexn、mypn、actn2、ldb3、tcap、flnc、mylk2、cav3、fhl1、cryab、trim63、ankrd1、klf10、myom1、fxn、casq2、pdlim3、myo6、acta1、fhod3、elac2、mrpl3、trmu、des、map2k1、map2k2、gla、calm3、braf、ndufaf1、slc25a3、slc25a4、ndufv2、raf1、sos1、mto1、sri、obscn、taco1、fastkd2、cox20、cox10、pet100、apopt1、cox14、cox6b1、agk、mgme1、gaa、agl、ids、ptpn11、kras、nras、rit1、sos2、lztr1、cbl、shoc2、nf1、lamp2、nsd1、cdkn1c、h19、kcnq1ot1、mrps16、tsfm、mrps22、aars2、mrpl44、gtpbp3、sco2、cox15、coa5、coa6、acad9、mlycd、slc22a5、fhl2、lmna、scn5a、eya4、sgcd、abcc9、tmpo、psen1、psen2、fktn、dsg2、rbm20、sdha、bag3、lama4、prdm16、gatad1、dmd、dsp、tnni3k、taz、chrm2、nebl、ctf1、dsc2、emd、flt1、ilk、isl1、lama2、synm、tcf21、txnrd2、cacna2d1、ryr2、dtna、myoz1、dolk、speg、pmm2、dpm1、dpm3、b4galt1、cog7、alg1、cpt2、chkb、rbck1、acad8、fkrp、tgfb3、tmem43、pkp2、jup、ctnna3、tp63、mib1、myh7b、ttr、gsn、hras、kat6b、spred1、actb、actg1、syne1、syne2、trim37、gpx4、dcaf8、xpnpep3、anks6、asah1、gnptab、glb1、epg5、d2hgdh、idh2、tsc1、vcp、myot、tpm2、tnnt3、ampd1、acadvl、dnajc19、hadh、hadha、acads、ndufb11、hfe、hfe2、hamp、cbs、naga、lpin1、pnpla2、ryr1、myf6、sgcg、scn4a、ighmbp2、iscu、gnptg、mcoln1、gusb、pigm、kctd7、notch3、hexb、gfm1、lias、pomt1、pomt2、pomgnt1、ispd、pomgnt2、dag1、tmem5、b3galnt2、pomk、b4gat1、gmppb、gys1、xk、wfs1、slc25a20、ndufb3、ndufaf2、ndufb9、ndufs1、nubpl、ndufs2、ndufs3、ndufv1、ndufs4、foxred1、ndufs6、ndufaf4、ndufa1、ndufa11、ndufaf3、ndufaf5、atpaf2、tmem70、atp5e、atp5a1、gbe1、gyg1、pgm1、coq2、pdss1、coq9、coq4、pdss2、nsdhl、abcc6、large1、kcnq1、kcnh2、ank2、kcne1、kcne2、kcnj2、cacna1c、scn4b、akap9、snta1、kcnj5、calm1、calm2、alg10、kcne3、sdhaf3、trdn、gnai2、cacnb2、gpd1l、scn1b、scn3b、hcn4、kcnd3、scn10a、kcnj8、rangrf、slmap、scn2b、fgf12、kcne5、hey2、trpm4、nkx2-5、tbx5、gata4、akap10、nppa、kcna5、gja5、nup155、gja1、pitx2、prrx1、cacna2d4、gata5、gata6、kcnk3、zfhx3、dpp6、slc6a4、cacna1s、trpa1、ppox、dchs1、agxt、naa10或nos1ap中的两种或两种以上的组合。
优选的，所述的心肌病的致病和/或易感基因中至少包括mybpc3和/或vcl和/或tnnt2和/或myh7。
优选的，所述的心肌病的致病和/或易感基因为bag3、mrpl3、mybpc3、vcl、tmem43、kcna5、tnnt2、kras或myh7中的两种或两种以上的组合。
优选的，所述心肌病的致病和/或易感基因为gaa、kcnh2、braf、kcnq1、lamp2、dsg2、jup或pkp2中的两种或两种以上的组合。
在本发明的一个具体实施方式中，所述的心肌病的致病和/或易感基因为mybpc3、vcl、tnnt2和myh7。
在本发明的一个具体实施方式中，所述的心肌病的致病和/或易感基因为bag3、mrpl3、mybpc3、vcl、tmem43、kcna5、tnnt2、kras和myh7。
在本发明的一个具体实施方式中，所述心肌病的致病和/或易感基因为gaa、kcnh2、braf、kcnq1、lamp2、dsg2、jup和pkp2。
在本发明的一个具体实施方式中，所述心肌病的致病和/或易感基因为myh7、tnnt2、tpm1、mybpc3、prkag2、tnni3、myl3、ttn、myl2、actc1、csrp3、tnnc1、myh6、vcl、myoz2、jph2、pln、calr3、nexn、mypn、actn2、ldb3、tcap、flnc、mylk2、cav3、fhl1、cryab、trim63、ankrd1、klf10、myom1、fxn、casq2、pdlim3、myo6、acta1、fhod3、elac2、mrpl3、trmu、des、map2k1、map2k2、gla、calm3、braf、ndufaf1、slc25a3、slc25a4、ndufv2、raf1、sos1、mto1、sri、obscn、taco1、fastkd2、cox20、cox10、pet100、apopt1、cox14、cox6b1、agk、mgme1、gaa、agl、ids、ptpn11、kras、nras、rit1、sos2、lztr1、cbl、shoc2、nf1、lamp2、nsd1、cdkn1c、h19、kcnq1ot1、mrps16、tsfm、mrps22、aars2、mrpl44、gtpbp3、sco2、cox15、coa5、coa6、acad9、mlycd、slc22a5、fhl2、lmna、scn5a、eya4、sgcd、abcc9、tmpo、psen1、psen2、fktn、dsg2、rbm20、sdha、bag3、lama4、prdm16、gatad1、dmd、dsp、tnni3k、taz、chrm2、nebl、ctf1、dsc2、emd、flt1、ilk、isl1、lama2、synm、tcf21、txnrd2、cacna2d1、ryr2、dtna、myoz1、dolk、speg、pmm2、dpm1、dpm3、b4galt1、cog7、alg1、cpt2、chkb、rbck1、acad8、fkrp、tgfb3、tmem43、pkp2、jup、ctnna3、tp63、mib1、myh7b、ttr、gsn、hras、kat6b、spred1、actb、actg1、syne1、syne2、trim37、gpx4、dcaf8、xpnpep3、anks6、asah1、gnptab、glb1、epg5、d2hgdh、idh2、tsc1、vcp、myot、tpm2、tnnt3、ampd1、acadvl、dnajc19、hadh、hadha、acads、ndufb11、hfe、hfe2、hamp、cbs、naga、lpin1、pnpla2、ryr1、myf6、sgcg、scn4a、ighmbp2、iscu、gnptg、mcoln1、gusb、pigm、kctd7、notch3、hexb、gfm1、lias、pomt1、pomt2、pomgnt1、ispd、pomgnt2、dag1、tmem5、b3galnt2、pomk、b4gat1、gmppb、gys1、xk、wfs1、slc25a20、ndufb3、ndufaf2、ndufb9、ndufs1、nubpl、ndufs2、ndufs3、ndufv1、ndufs4、foxred1、ndufs6、ndufaf4、ndufa1、ndufa11、ndufaf3、ndufaf5、atpaf2、tmem70、atp5e、atp5a1、gbe1、gyg1、pgm1、coq2、pdss1、coq9、coq4、pdss2、nsdhl、abcc6、large1、kcnq1、kcnh2、ank2、kcne1、kcne2、kcnj2、cacna1c、scn4b、akap9、snta1、kcnj5、calm1、calm2、alg10、kcne3、sdhaf3、trdn、gnai2、cacnb2、gpd1l、scn1b、scn3b、hcn4、kcnd3、scn10a、kcnj8、rangrf、slmap、scn2b、fgf12、kcne5、hey2、trpm4、nkx2-5、tbx5、gata4、akap10、nppa、kcna5、gja5、nup155、gja1、pitx2、prrx1、cacna2d4、gata5、gata6、kcnk3、zfhx3、dpp6、slc6a4、cacna1s、trpa1、ppox、dchs1、agxt、naa10和nos1ap。
优选的，所述的检测心肌病的致病和/或易感基因的试剂为检测心肌病的致病和/或易感基因的突变位点的试剂。
更优选的，所述的突变位点为gaa基因的c.796c>t、gaa基因的c.1432g>a、kcnh2基因的c.781g>a、braf基因的c.1502a>g、kcnq1基因的c.1640a>g、lamp2基因的c.864+3_864+6delgagt(splicing)、dsg2基因的c.105t>a、jup基因的c.1807g>t
、jup基因的c.698g>a或pkp2基因的c.2421c>a。
优选的，所述的试剂为探针组或引物组。所述的产品包含所述的试剂或所述的产品为试剂盒。
本发明的第四方面，涉及一种含有本发明所述的探针组或本发明所述的探针的试剂盒。
优选的，所述的试剂盒还包括杂交液和/或缓冲液和/或洗涤液。
进一步优选的，所述试剂盒还包括富集缓冲液、杂交缓冲液、结合缓冲液、漂洗液、naoh溶液、tris-hcl缓冲液、pcr反应液、te缓冲液。
本发明还提供了一种所述的含有探针组的试剂盒的制备方法，包括：
1)根据上述心肌病的各致病和/或易感基因制备相应的探针序列；
2)为步骤1)获得的探针序列加上生物素标记；
3)配制所需杂交液和/或缓冲液和/或洗涤液。
本发明的第五方面，涉及一种心肌病的诊断标志物，所述的诊断标志物为myh7、tnnt2、tpm1、mybpc3、prkag2、tnni3、myl3、ttn、myl2、actc1、csrp3、tnnc1、myh6、vcl、myoz2、jph2、pln、calr3、nexn、mypn、actn2、ldb3、tcap、flnc、mylk2、cav3、fhl1、cryab、trim63、ankrd1、klf10、myom1、fxn、casq2、pdlim3、myo6、acta1、fhod3、elac2、mrpl3、trmu、des、map2k1、map2k2、gla、calm3、braf、ndufaf1、slc25a3、slc25a4、ndufv2、raf1、sos1、mto1、sri、obscn、taco1、fastkd2、cox20、cox10、pet100、apopt1、cox14、cox6b1、agk、mgme1、gaa、agl、ids、ptpn11、kras、nras、rit1、sos2、lztr1、cbl、shoc2、nf1、lamp2、nsd1、cdkn1c、h19、kcnq1ot1、mrps16、tsfm、mrps22、aars2、mrpl44、gtpbp3、sco2、cox15、coa5、coa6、acad9、mlycd、slc22a5、fhl2、lmna、scn5a、eya4、sgcd、abcc9、tmpo、psen1、psen2、fktn、dsg2、rbm20、sdha、bag3、lama4、prdm16、gatad1、dmd、dsp、tnni3k、taz、chrm2、nebl、ctf1、dsc2、emd、flt1、ilk、isl1、lama2、synm、tcf21、txnrd2、cacna2d1、ryr2、dtna、myoz1、dolk、speg、pmm2、dpm1、dpm3、b4galt1、cog7、alg1、cpt2、chkb、rbck1、acad8、fkrp、tgfb3、tmem43、pkp2、jup、ctnna3、tp63、mib1、myh7b、ttr、gsn、hras、kat6b、spred1、actb、actg1、syne1、syne2、trim37、gpx4、dcaf8、xpnpep3、anks6、asah1、gnptab、glb1、epg5、d2hgdh、idh2、tsc1、vcp、myot、tpm2、tnnt3、ampd1、acadvl、dnajc19、hadh、hadha、acads、ndufb11、hfe、hfe2、hamp、cbs、naga、lpin1、pnpla2、ryr1、myf6、sgcg、scn4a、ighmbp2、iscu、gnptg、mcoln1、gusb、pigm、kctd7、notch3、hexb、gfm1、lias、pomt1、pomt2、pomgnt1、ispd、pomgnt2、dag1、tmem5、b3galnt2、pomk、b4gat1、gmppb、gys1、xk、wfs1、slc25a20、ndufb3、ndufaf2、ndufb9、ndufs1、nubpl、ndufs2、ndufs3、ndufv1、ndufs4、foxred1、ndufs6、ndufaf4、ndufa1、ndufa11、ndufaf3、ndufaf5、atpaf2、tmem70、atp5e、atp5a1、gbe1、gyg1、pgm1、coq2、pdss1、coq9、coq4、pdss2、nsdhl、abcc6、large1、kcnq1、kcnh2、ank2、kcne1、kcne2、kcnj2、cacna1c、scn4b、akap9、snta1、kcnj5、calm1、calm2、alg10、kcne3、sdhaf3、trdn、gnai2、cacnb2、gpd1l、scn1b、scn3b、hcn4、kcnd3、scn10a、kcnj8、rangrf、slmap、scn2b、fgf12、kcne5、hey2、trpm4、nkx2-5、tbx5、gata4、akap10、nppa、kcna5、gja5、nup155、gja1、pitx2、prrx1、cacna2d4、gata5、gata6、kcnk3、zfhx3、dpp6、slc6a4、cacna1s、trpa1、ppox、dchs1、agxt、naa10或nos1ap中的两种或两种以上的组合。
本发明的第六方面，涉及心肌病的致病和/或易感基因在制备诊断心肌病的产品中的应用，所述心肌病的致病和/或易感基因为myh7、tnnt2、tpm1、mybpc3、prkag2、tnni3、myl3、ttn、myl2、actc1、csrp3、tnnc1、myh6、vcl、myoz2、jph2、pln、calr3、nexn、mypn、actn2、ldb3、tcap、flnc、mylk2、cav3、fhl1、cryab、trim63、ankrd1、klf10、myom1、fxn、casq2、pdlim3、myo6、acta1、fhod3、elac2、mrpl3、trmu、des、map2k1、map2k2、gla、calm3、braf、ndufaf1、slc25a3、slc25a4、ndufv2、raf1、sos1、mto1、sri、obscn、taco1、fastkd2、cox20、cox10、pet100、apopt1、cox14、cox6b1、agk、mgme1、gaa、agl、ids、ptpn11、kras、nras、rit1、sos2、lztr1、cbl、shoc2、nf1、lamp2、nsd1、cdkn1c、h19、kcnq1ot1、mrps16、tsfm、mrps22、aars2、mrpl44、gtpbp3、sco2、cox15、coa5、coa6、acad9、mlycd、slc22a5、fhl2、lmna、scn5a、eya4、sgcd、abcc9、tmpo、psen1、psen2、fktn、dsg2、rbm20、sdha、bag3、lama4、prdm16、gatad1、dmd、dsp、tnni3k、taz、chrm2、nebl、ctf1、dsc2、emd、flt1、ilk、isl1、lama2、synm、tcf21、txnrd2、cacna2d1、ryr2、dtna、myoz1、dolk、speg、pmm2、dpm1、dpm3、b4galt1、cog7、alg1、cpt2、chkb、rbck1、acad8、fkrp、tgfb3、tmem43、pkp2、jup、ctnna3、tp63、mib1、myh7b、ttr、gsn、hras、kat6b、spred1、actb、actg1、syne1、syne2、trim37、gpx4、dcaf8、xpnpep3、anks6、asah1、gnptab、glb1、epg5、d2hgdh、idh2、tsc1、vcp、myot、tpm2、tnnt3、ampd1、acadvl、dnajc19、hadh、hadha、acads、ndufb11、hfe、hfe2、hamp、cbs、naga、lpin1、pnpla2、ryr1、myf6、sgcg、scn4a、ighmbp2、iscu、gnptg、mcoln1、gusb、pigm、kctd7、notch3、hexb、gfm1、lias、pomt1、pomt2、pomgnt1、ispd、pomgnt2、dag1、tmem5、b3galnt2、pomk、b4gat1、gmppb、gys1、xk、wfs1、slc25a20、ndufb3、ndufaf2、ndufb9、ndufs1、nubpl、ndufs2、ndufs3、ndufv1、ndufs4、foxred1、ndufs6、ndufaf4、ndufa1、ndufa11、ndufaf3、ndufaf5、atpaf2、tmem70、atp5e、atp5a1、gbe1、gyg1、pgm1、coq2、pdss1、coq9、coq4、pdss2、nsdhl、abcc6、large1、kcnq1、kcnh2、ank2、kcne1、kcne2、kcnj2、cacna1c、scn4b、akap9、snta1、kcnj5、calm1、calm2、alg10、kcne3、sdhaf3、trdn、gnai2、cacnb2、gpd1l、scn1b、scn3b、hcn4、kcnd3、scn10a、kcnj8、rangrf、slmap、scn2b、fgf12、kcne5、hey2、trpm4、nkx2-5、tbx5、gata4、akap10、nppa、kcna5、gja5、nup155、gja1、pitx2、prrx1、cacna2d4、gata5、gata6、kcnk3、zfhx3、dpp6、slc6a4、cacna1s、trpa1、ppox、dchs1、agxt、naa10或nos1ap中的两种或两种以上的组合。
本发明的第七方面，涉及一种检测心肌病的致病和/或易感基因的试剂，所述的心肌病的致病和/或易感基因为myh7、tnnt2、tpm1、mybpc3、prkag2、tnni3、myl3、ttn、myl2、actc1、csrp3、tnnc1、myh6、vcl、myoz2、jph2、pln、calr3、nexn、mypn、actn2、ldb3、tcap、flnc、mylk2、cav3、fhl1、cryab、trim63、ankrd1、klf10、myom1、fxn、casq2、pdlim3、myo6、acta1、fhod3、elac2、mrpl3、trmu、des、map2k1、map2k2、gla、calm3、braf、ndufaf1、slc25a3、slc25a4、ndufv2、raf1、sos1、mto1、sri、obscn、taco1、fastkd2、cox20、cox10、pet100、apopt1、cox14、cox6b1、agk、mgme1、gaa、agl、ids、ptpn11、kras、nras、rit1、sos2、lztr1、cbl、shoc2、nf1、lamp2、nsd1、cdkn1c、h19、kcnq1ot1、mrps16、tsfm、mrps22、aars2、mrpl44、gtpbp3、sco2、cox15、coa5、coa6、acad9、mlycd、slc22a5、fhl2、lmna、scn5a、eya4、sgcd、abcc9、tmpo、psen1、psen2、fktn、dsg2、rbm20、sdha、bag3、lama4、prdm16、gatad1、dmd、dsp、tnni3k、taz、chrm2、nebl、ctf1、dsc2、emd、flt1、ilk、isl1、lama2、synm、tcf21、txnrd2、cacna2d1、ryr2、dtna、myoz1、dolk、speg、pmm2、dpm1、dpm3、b4galt1、cog7、alg1、cpt2、chkb、rbck1、acad8、fkrp、tgfb3、tmem43、pkp2、jup、ctnna3、tp63、mib1、myh7b、ttr、gsn、hras、kat6b、spred1、actb、actg1、syne1、syne2、trim37、gpx4、dcaf8、xpnpep3、anks6、asah1、gnptab、glb1、epg5、d2hgdh、idh2、tsc1、vcp、myot、tpm2、tnnt3、ampd1、acadvl、dnajc19、hadh、hadha、acads、ndufb11、hfe、hfe2、hamp、cbs、naga、lpin1、pnpla2、ryr1、myf6、sgcg、scn4a、ighmbp2、iscu、gnptg、mcoln1、gusb、pigm、kctd7、notch3、hexb、gfm1、lias、pomt1、pomt2、pomgnt1、ispd、pomgnt2、dag1、tmem5、b3galnt2、pomk、b4gat1、gmppb、gys1、xk、wfs1、slc25a20、ndufb3、ndufaf2、ndufb9、ndufs1、nubpl、ndufs2、ndufs3、ndufv1、ndufs4、foxred1、ndufs6、ndufaf4、ndufa1、ndufa11、ndufaf3、ndufaf5、atpaf2、tmem70、atp5e、atp5a1、gbe1、gyg1、pgm1、coq2、pdss1、coq9、coq4、pdss2、nsdhl、abcc6、large1、kcnq1、kcnh2、ank2、kcne1、kcne2、kcnj2、cacna1c、scn4b、akap9、snta1、kcnj5、calm1、calm2、alg10、kcne3、sdhaf3、trdn、gnai2、cacnb2、gpd1l、scn1b、scn3b、hcn4、kcnd3、scn10a、kcnj8、rangrf、slmap、scn2b、fgf12、kcne5、hey2、trpm4、nkx2-5、tbx5、gata4、akap10、nppa、kcna5、gja5、nup155、gja1、pitx2、prrx1、cacna2d4、gata5、gata6、kcnk3、zfhx3、dpp6、slc6a4、cacna1s、trpa1、ppox、dchs1、agxt、naa10或nos1ap中的两种或两种以上的组合，其中，所述的试剂选自探针组、引物组。
本发明的第八方面，涉及一种心肌病的致病和/或易感基因的的检测方法，包括：
(1)提取待检测的dna，制备全基因组文库；
(2)将步骤(1)获得的全基因组文库与心肌病的致病和/或易感基因的检测试剂混合，进行pcr；
(3)纯化步骤(2)所述的pcr产物；
(4)对步骤(3)纯化后的pcr产物进行测序；
(5)对步骤(4)的测序结果进行分析；
其中，所述的试剂为探针组或引物组。
优选的，所述的分析包括snp分析和/或indel分析。
本发明的第九方面，涉及一种本发明所述的探针组，或本发明所述的试剂盒在制备检测/预防心肌病的致病和/或易感基因的产品中的应用。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅是本发明的部分实施例，而不是全部。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1本发明探针组的设计和制备
1、致病和/或易感基因的筛选
本实施例中的致病和/或易感基因为myh7、tnnt2、tpm1、mybpc3、prkag2、tnni3、myl3、ttn、myl2、actc1、csrp3、tnnc1、myh6、vcl、myoz2、jph2、pln、calr3、nexn、mypn、actn2、ldb3、tcap、flnc、mylk2、cav3、fhl1、cryab、trim63、ankrd1、klf10、myom1、fxn、casq2、pdlim3、myo6、acta1、fhod3、elac2、mrpl3、trmu、des、map2k1、map2k2、gla、calm3、braf、ndufaf1、slc25a3、slc25a4、ndufv2、raf1、sos1、mto1、sri、obscn、taco1、fastkd2、cox20、cox10、pet100、apopt1、cox14、cox6b1、agk、mgme1、gaa、agl、ids、ptpn11、kras、nras、rit1、sos2、lztr1、cbl、shoc2、nf1、lamp2、nsd1、cdkn1c、h19、kcnq1ot1、mrps16、tsfm、mrps22、aars2、mrpl44、gtpbp3、sco2、cox15、coa5、coa6、acad9、mlycd、slc22a5、fhl2、lmna、scn5a、eya4、sgcd、abcc9、tmpo、psen1、psen2、fktn、dsg2、rbm20、sdha、bag3、lama4、prdm16、gatad1、dmd、dsp、tnni3k、taz、chrm2、nebl、ctf1、dsc2、emd、flt1、ilk、isl1、lama2、synm、tcf21、txnrd2、cacna2d1、ryr2、dtna、myoz1、dolk、speg、pmm2、dpm1、dpm3、b4galt1、cog7、alg1、cpt2、chkb、rbck1、acad8、fkrp、tgfb3、tmem43、pkp2、jup、ctnna3、tp63、mib1、myh7b、ttr、gsn、hras、kat6b、spred1、actb、actg1、syne1、syne2、trim37、gpx4、dcaf8、xpnpep3、anks6、asah1、gnptab、glb1、epg5、d2hgdh、idh2、tsc1、vcp、myot、tpm2、tnnt3、ampd1、acadvl、dnajc19、hadh、hadha、acads、ndufb11、hfe、hfe2、hamp、cbs、naga、lpin1、pnpla2、ryr1、myf6、sgcg、scn4a、ighmbp2、iscu、gnptg、mcoln1、gusb、pigm、kctd7、notch3、hexb、gfm1、lias、pomt1、pomt2、pomgnt1、ispd、pomgnt2、dag1、tmem5、b3galnt2、pomk、b4gat1、gmppb、gys1、xk、wfs1、slc25a20、ndufb3、ndufaf2、ndufb9、ndufs1、nubpl、ndufs2、ndufs3、ndufv1、ndufs4、foxred1、ndufs6、ndufaf4、ndufa1、ndufa11、ndufaf3、ndufaf5、atpaf2、tmem70、atp5e、atp5a1、gbe1、gyg1、pgm1、coq2、pdss1、coq9、coq4、pdss2、nsdhl、abcc6、large1、kcnq1、kcnh2、ank2、kcne1、kcne2、kcnj2、cacna1c、scn4b、akap9、snta1、kcnj5、calm1、calm2、alg10、kcne3、sdhaf3、trdn、gnai2、cacnb2、gpd1l、scn1b、scn3b、hcn4、kcnd3、scn10a、kcnj8、rangrf、slmap、scn2b、fgf12、kcne5、hey2、trpm4、nkx2-5、tbx5、gata4、akap10、nppa、kcna5、gja5、nup155、gja1、pitx2、prrx1、cacna2d4、gata5、gata6、kcnk3、zfhx3、dpp6、slc6a4、cacna1s、trpa1、ppox、dchs1、agxt、naa10及nos1ap。
对100位心肌病患者(患者为医院心血管内科临床确诊的心肌病相关疾病，各患者均签署知情及自愿协议，并经医院医学伦理委员会批准)进行全外显子组测序，覆盖、检测范围为人类基因组已知的全部3万余个基因的所有外显子，其中，心肌病患者的突变基因高度集中，基因组的其余基因(占绝大多数)虽然也有累及，但突变频率非常低，很多甚至只在单一患者有发现，其与疾病的相关性难以确定。因此在设计本发明探针组时，纳入在本病患者发生突变概率最高的上述312个基因，其突变累及频率均大于5，这样能够在最大限度地增加检出致病和/或易感基因的同时合理控制检测成本。
二、探针的制备
根据上述致病和/或易感基因的基因组序列，本领域技术人员可以通过公知、通用的方法设计并合成探针序列(例如专利wo2013/003585)，本实施例中对合成的探针序列进行生物素标记，具体操作为：采用本领域公知方法合成探针序列，均匀混合在总体积1.2ml的dh2o中，取其中15μl利用通用的pcr引物(5’端序列为gactacatgggacat(seqidno：1)、3’端的序列为ggaacctacgacgta(seqidno：2))，分三管进行pcr扩增，其中引物gactacatgggacat(seqidno：1)为带有生物素标记的引物。
pcr扩增体系：上述探针溶液，5μl；正向引物(25μm)，2μl；反向引物(25μm)，2μl；mgcl2(50mm)，4μl；10xplatinumtaq聚合酶缓冲液(购自lifetechnologies)，5μl；dntps(每种10mm)，4μl；platinumtaq聚合酶(5u/μl，购自lifetechnologies)，1μl；h2o，27μl；总体积50μl。
扩增条件：98℃，30s；(98℃，30s，60℃，25s，72℃，45s)35个循环；72℃，5min。
将pcr产物用minelutepcr纯化试剂盒(购自lifetechnologies)纯化后，取500ng，用myone链酶亲和素磁珠(购自invitrogen)将pcr产物结合下来。然后加入碱性naoh将没有生物素的互补链变性、洗脱下来；然后将整个磁珠用100℃的甲酰胺液体洗涤，使探针从磁珠上分离下来。用乙醇沉淀后即得到生物素标记的本实施例的探针组。
实施例2本发明试剂盒组成、制备及应用。
本实施例所述的用于检测心肌病的致病和/或易感基因的试剂盒，是通过检测上述312个致病和/或易感基因的突变来进行受检个体的分子遗传学诊断或发病风险预测的试剂盒。
一、试剂盒的组成
所述试剂盒包含的成分为：实施例1所获得的探针组(160μl，150ng/μl)、富集缓冲液(208μl)、杂交缓冲液(800μl)、结合缓冲液(3.2ml)、漂洗液1(9ml)、漂洗液2(45ml)、naoh溶液(0.1m，1ml)、tris-hcl缓冲液(1m，ph7.5，1.2ml)、pcr反应液(580μl)、te缓冲液(800μl，10mmtris-hcl，1mmedta，调ph至8.0，水定容至500ml)。其中各缓冲液组成如下：
(1)富集缓冲液(每20μl)：
人cot-1dna(购自invitrogen)，7μl；鲑鱼精dna(购自invitrogen)，3μl；
特异性封闭引物，共10μl，每种引物浓度为1nmol/μl：
引物1：
aatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctct(seqidno：3)；
引物2：
caagcagaagacggcatacgagatcggtctcggcattcctgctgaaccgc(seqidno：4)；
(2)杂交缓冲液：5倍浓度的sspe(购自amresco公司)，5倍浓度的denhardt溶液(购自usb公司)，5mmedta(0.5m，ph8.0，购自mediatech公司)，0.1％sds；
(3)结合缓冲液：1mnacl，10mmtris-hcl(ph7.5)，1mmedta；
(4)漂洗液1：1倍浓度的ssc溶液(nacl175g，柠檬酸三钠88g，调ph至7.4，dh2o定容至1升)，0.1％sds；
(5)漂洗液2：0.1倍浓度的ssc溶液(nacl175g，柠檬酸三钠88g，调ph至7.4，dh2o定容至1升)，0.1％sds；
(6)pcr反应液：2μldntps(每种10mm)，
0.5μl引物3(aatgatacggcgaccaccga*g(seqidno：5)，50pmol)，
0.5μl引物4(caagcagaagacggcatacg*a(seqidno：6)，50pmol)，20μl5倍浓度的phusion缓冲液(购自newenglandbiolab公司)，1μlhotstartphusion酶(购自newenglandbiolabs)，5μldmso，51μldh2o；*表示中间有硫代修饰；
二、试剂盒的应用
1、dna提取及全基因组文库制备
使用qiagendnaminikit(250)(购自qiagen)试剂盒提取外周血中的dna。用分光光度计定量，琼脂糖凝胶电泳检测样本质量，完整的基因组dna电泳条带通常应不小于20kb。质检合格的dna将浓度调整到75ng/μl，总量3-5μgdna随机打断、扩增，从而建立全基因组文库。
2、目标致病和/或易感基因片段的特异性捕获及测序
1)制备以下混合体系：取1μg步骤1的构建好的全基因组文库，13μl富集缓冲液，5μl实施例1的本发明探针组；置于pcr仪上：95℃，7min，之后65℃，2min；
2)取65℃预热的杂交缓冲液23μl加入到上述步骤1)得到的混合液中，然后于pcr仪上65℃杂交22小时，得到富集体系混合物。
3)将myonec1链霉亲和素磁珠(购自invitrogen)漩涡震荡使磁珠充分悬浮，短暂离心，使磁珠离心至管底部，取50μlmyonec1链霉亲和素磁珠到新的1.5ml的离心管。
4)将装有50μlmyonec1链霉亲和素磁珠的1.5ml离心管漩涡震荡至少5s，使磁珠充分悬浮，短暂离心后放入磁力架上保持静止一分钟(不要旋转离心管)，小心吸弃上清。
5)取下离心管，加入50μl的1倍浓度的结合缓冲液，旋窝震荡至少5s，短暂离心后放入磁力架上静止一分钟，小心吸弃上清，重复三次。
6)取下离心管，加入100μl的2倍浓度的结合缓冲液，旋窝震荡至少5s，短暂离心后放入磁力架上静止一分钟。
7)将步骤2)得到的富集体系混合物加入到骤6)的离心管中，旋窝震荡至少5s(不用离心)，置于旋转仪上室温旋转1小时(60转/分钟)。
8)然后，利用漂洗液1室温清洗步骤7)的磁珠一次，15分钟，然后再用漂洗液2清洗3次，65℃，每次15分钟。
9)将步骤8)的磁珠用0.1mnaoh室温下洗脱10分钟，然后将洗脱液漩涡震荡至少5s，短暂离心后放入磁力架上静止一分钟，然后将上清液转移到含有70μltris-hcl缓冲液(1m，ph7.5)的干净离心管中。
10)采用qiagenminelutecolumn(购自qiagen)对步骤9)得到的dna溶液进行纯化，其纯化步骤参照qiagenminelutekit的实验操作手册。
11)纯化的dna通过pcr最终扩增15个循环：
pcr反应液：2μldntps(每种10mm)，0.5μl引物
3(aatgatacggcgaccaccga*g，50pmol(seqidno：5))，0.5μl引物4(caagcagaagacggcatacg*a(seqidno：6)，50pmol)，20μl5倍浓度的phusion缓冲液(购自newenglandbiolabs)，1μlhotstartphusion酶(购自newenglandbiolabs)，5μldmso，51μldh2o；*表示中间有硫代修饰。pcr程序：98℃，30s(1cycle)；98℃，
25s，65℃；30s，72℃；30s(15cycles)；72℃，5min(1cycle)。
12)利用agencourtampurexp核酸纯化试剂盒(购自beckmancoulter)，根据使用手册纯化步骤11)的pcr产物。
13)将步骤12)得到的dna产物在illuminanexseq500测序仪上进行测序。
3、生物信息学分析流程及结果输出：
(1)snp分析流程
①获取原始短序列；
②去除测序数据中的接头和低质量数据等；
③把短序列用soapaligner软件定位到人mhc3.6m基因组数据相应的位置上，所用到参数：soap2.20-a-b-t-v3-l42-s63-m100-x400，其中序列错配数为3，具体参数含义参考：http://soap.genomics.org.cn/soapaligner.html；
④统计测序结果信息，短序列数量、目标区域覆盖大小、平均测序深度等；
⑤soapsnp用于在目标区域找出位点的基因型，所用到参数：soapsnp-i-d-o-r0.00005-e0.0001-m-t-u-l-s-2–t，具体参数含义参考：http://soap.genomics.org.cn/soapsnp.html；
⑥过滤低质量值(质量值>＝20)和低覆盖度(深度>＝10)的snp；
⑦利用ccds、人基因组数据库(ncbi37.2)、dbsnp(v138)信息对snp进行注释，确定突变位点发生的基因、坐标、mrna位点、氨基酸改变、snp功能(错义突变/无义突变/可变剪切位点)、sift预测snp影响蛋白功能预测等；
⑧根据疾病样品和正常样品信息，选出疾病样品所共有的而在正常组中不存在的snp作为候选的snps，在候选的snps中去除掉在dbsnp、hapmap、1000人mhc3.6m基因组、其他外显子测序项目中出现的snp。同时，过滤掉sift预测对蛋白功能无影响的snps作为最后疾病相关的候选snps；
(2)indel分析流程
①把去除接头序列和低质量的测序数据用burrows-wheeleraligner(bwa)比对到人mhc3.6m基因组上，所用到参数：bwaaln-l-l31-i10-k2-t7-e40，具体参数含义参考：http://bio-bwa.sourceforge.net/bwa.shtml；
②用gatk软件找出序列中所含有的插入/缺失(indel)的信息；
③利用ccds、人基因组数据库(ncbi37.2)、dbsnp(v138)信息对indel进行注释，确定突变位点发生的基因、坐标、mrna位点、编码区域序列的改变、对氨基酸的影响、indel功能(氨基酸插入/氨基酸缺失/移码突变)。
三、实验结果
应用上述制备的试剂盒检测90例样本，所述样品提取自心肌病患者血液，通过全基因组文库构建、试剂盒中探针进行目的基因的捕获，并对捕获的基因进行测序，目的基因测序的数据质量结果见表1。
表1目的致病和/或易感基因测序数据质量
由表1所示，本发明所述探针组对目的致病和/或易感基因的捕获率效果很好，目标区域的平均有效测序数据量达到251.44mb，目标区域的平均测序深度为389.14x，远远高于一般的遗传疾病诊断要求(一般为20x)。
实施例3本发明探针组的临床诊断实例
利用本发明实施例1制备的探针组对8例遗传性心肌病及相关综合征患者做出的分子遗传学诊断。患者为医院心血管内科临床确诊的心肌病相关疾病，各患者均签署知情及自愿协议，并经医院医学伦理委员会批准。
按照实施例2所述的试剂盒的组成、制备及应用的步骤进行本实施例的患者的分子遗传学诊断。其分子遗传学诊断结果见表2。
表2遗传性心肌病及相关综合征患者做出的分子遗传学诊断
1、一例糖原累积症患者分子遗传学诊断
患儿(编号：ddm201)，男，年龄6月13天，临床诊断为心肌病待查，有心肌病家族史。临床表现为：肌张力减退；肌无力所致呼吸功能不全；呼吸困难；肝肿大；利用本发明所述试剂盒检测患儿外周血dna样本后发现了gaa基因有2个杂合突变：c.796c>t和c.1432g>a。c.796c>t：经家系验证分析，患儿父亲该位点杂合变异，受检人之母该位点无变异。c.1432g>a：经家系验证分析，患儿父亲该位点无变异，受检人之母该位点杂合变异。此基因变异为复合杂合变异，此变异为疑似致病性变异，可导致糖原累积症ii型，其严重的婴幼儿型(又称庞贝病)，表现为患儿一出生就在肌肉、心和肝内沉积了大量的糖原，心肌病和肌张力过低是本型患者在心脏方面的主要表现，患者的生存期不足两年。我们在追查病历后发现本患儿的容貌特征、心肌病等临床表现符合该综合征诊断。鉴于此患儿的分子遗传学诊断已经明确，后续可以针对胎儿的相应基因进行目的性明确的检测以避免罹患相同综合征的患者出生。
2、一例长qt综合征患者分子遗传学诊断
患儿(编号：ddm101)，女，年龄27岁，临床诊断为长qt综合征待查。临床表现为：心源性猝死；qt间期延长；晕厥；不规则的心脏跳动；利用本发明所述试剂盒检测患儿外周血dna样本后发现了kcnh2基因有1个杂合突变：c.781g>a。由于缺少其父亲的样本，只对其母亲样本进行家系验证分析。受检人之母该位点杂合变异。该位点为疑似致病性变异。此错义突变可导致长qt综合征2型和短qt综合征1型。长qt综合征2型主要临床特征为心电图显示qt间期延长以及多发室性心律失常。短qt综合征是一种心脏疾病，患者不存在心脏结构缺陷，心电图显示均匀性持续性短qt间期，本病可能会导致晕厥和猝死。本发明试剂盒的应用有效地提高了类似疾病的遗传学诊断效率，可以在显著节约经济成本的同时为患者的尽早、合理干预、治疗提供依据。
3、一例努南综合征患者分子遗传学诊断
患儿(编号：ddm901)，女，年龄5月12天，临床诊断为心肌病、努南综合征待查，无家族史。临床表现为：矮小；面部形状异常；先天性心脏缺陷；肥厚型心肌病；眼距过宽；睑裂下斜；低位耳；利用本发明所述试剂盒检测患儿外周血dna样本后发现了braf基因有1个杂合突变：c.1502a>g。经家系验证分析，受检人之父该位点无变异，受检人之母该位点无变异。此变异为自发突变，该位点为致病性变异。此错义突变可导致努南综合征7型等，其是一种常染色体显性遗传病，临床特征为身材矮小，面部畸形如眼距过宽、睑裂下斜和低位耳向后旋转，以及高的先天性心脏缺陷和肥厚型心肌病的发病率。
4、三例心肌病患者分子遗传学诊断
①患儿(编号：ddm501)，女，年龄4月25天，临床诊断为扩张型心肌病待查，有家族史，家里前两个孩子分别在2岁、10月因扩张型心肌病去世。利用本发明所述试剂盒检测患儿外周血dna样本后发现了kcnq1基因有1个杂合突变：c.1640a>g。经家系验证分析，患儿父亲该位点杂合变异，患儿母亲该位点无变异，此杂合突变来源于父亲。
②患儿(编号：ddm301)，男，年龄8月26天，临床诊断为家族性肥厚型心肌病7型，病史：生后发现肥厚性心肌病，出生八个月后gt球菌感染，发热，原因未明，肝功能异常。利用本发明所述试剂盒检测患儿外周血dna样本后发现了lamp2基因有1个半合子突变：c.864+3_864+6delgagt(splicing)。经家系验证分析，受检人之父该位点无变异，受检人之母该位点无变异，此变异为自发突变。
③患儿(编号：ddm401)，男，年龄14岁9月，临床诊断为遗传性心肌病，病史：遗传性心肌病，心肌致密化不全。利用本发明所述试剂盒检测患儿外周血dna样本后发现了dsg2基因有1个杂合突变：c.105t>a。经家系验证分析，未收到母亲样本，王昱超父亲该位点杂合变异；
5、两例心律失常患者分子遗传学诊断
①患儿(编号：ddm801)，男，19岁5月，临床诊断为心律失常，病史：没休息好的时候或者熬夜会有血压高，心动过缓，心率不齐。患者父亲和父亲的姐姐有痘性心动过缓。患者的姥姥有冠心病，患者的大舅是心源性猝死，患者母亲怀疑有高原性心脏病。患者母亲因工作压力有时会有心脏不适，出虚汗。利用本发明所述试剂盒检测患儿外周血dna样本后发现了jup基因有2个杂合突变：c.1807g>t和c.698g>a。经家系验证分析，受检人之父该位点杂合变异，受检人之母该位点无变异，此杂合突变来源于父亲。
②患儿(编号：ddm701)，女，11岁10月，临床诊断为心律失常，病史：去年体检发现心律失常，服药控制不佳，心超发现心肌病，既往有一哥哥因心肌病死亡。利用本发明所述试剂盒检测患儿外周血dna样本后发现了pkp2基因有1个杂合突变：c.2421c>a。经家系验证分析，受检人之父该位点无变异，受检人之母该位点杂合变异，受检人之姐妹该位点杂合变异。此杂合突变来源于母亲。
以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本发明的保护范围。
另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。
序列表
<110>中国人民解放军总医院
北京迈基诺基因科技股份有限公司
<120>一种用于检测遗传性心肌病/心律失常的致病/易感基因的探针组
<130>1
<160>6
<170>patentinversion3.5
<210>1
<211>15
<212>dna/rna
<213>人工序列(artificialsequence)
<400>1
gactacatgggacat15
<210>2
<211>15
<212>dna/rna
<213>人工序列(artificialsequence)
<400>2
ggaacctacgacgta15
<210>3
<211>50
<212>dna/rna
<213>人工序列(artificialsequence)
<400>3
aatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctct50
<210>4
<211>50
<212>dna/rna
<213>人工序列(artificialsequence)
<400>4
caagcagaagacggcatacgagatcggtctcggcattcctgctgaaccgc50
<210>5
<211>21
<212>dna/rna
<213>人工序列(artificialsequence)
<400>5
aatgatacggcgaccaccgag21
<210>6
<211>21
<212>dna/rna
<213>人工序列(artificialsequence)
<400>6
caagcagaagacggcatacga21