本发明涉及类风湿性关节炎技术领域，具体涉及一种将外周血microrna-23b指标用于评估类风湿性关节炎的研究方法。
背景技术：
类风湿性关节炎是现在困扰很多人的疾病，给很多患者带来了长久的痛苦，因为类风湿性关节炎病因未明，且是一种慢性的疾病。类风湿性关节炎可能会对肾脏、内脏、呼吸系统等造成危害，还可能造成关节畸形，因此，类风湿性关节炎越早发现越好，便于治疗。
技术实现要素：
本发明的目的是为了解决现有技术的不足，提供一种将外周血microrna-23b指标用于评估类风湿性关节炎的研究方法。
本发明的目的是通过以下技术方案实现的：
一种将外周血microrna-23b指标用于评估类风湿性关节炎的研究方法，包括：
(1)将静脉抽取的类风湿性关节炎患者血液3～4毫升进行离心，分离出血浆；
(2)采用试剂盒提取血浆中的microrna；
(3)设计microrna-23b特异性引物及内参引物u6，采用实时pcr检测血浆内的microrna-23b表达量；
(4)将检测到的microrna-23b表达量与正常人microrna-23b表达范围进行对比。
上述的方法，所述步骤(2)具体包括：
(2.1)在300μl血浆中加入90μl的mlp(裂解缓冲液)，震荡混匀5s，室温条件下放置3分钟；
(2.2)在上述血浆中加入30μl的mpp(蛋白沉淀缓冲液)，震荡混匀5s，室温条件下放置1分钟后，11000g离心3分钟；
(2.3)将上清转移至收集管中并加入400μl异丙醇，震荡混匀5s，将混合物加入收集柱中，室温静置2分钟，然后11000g离心30秒弃去滤过液体；
(2.4)加入100μlmw1清洗收集柱，11000g离心30秒弃去滤过液体；加入700μlmw2清洗收集柱，11000g离心30秒弃去滤过液体；
(2.5)加入250μlmw2清洗收集柱，11000g离心2分钟弃去滤过液体；
(2.6)在收集柱正当中膜上加入30μl无rna酶的去离子水，室温静置1分钟，放入新的收集管中，11000g离心1分钟收集rna；
(2.7)利用nanodrop微量分光光度计定量rna含量。
外周血microrna-23b在类风湿性关节炎诊断中的应用，其中，将外周血microrna-23b作为诊断类风湿性关节炎的生物标记物，类风湿性关节炎患者血浆中，microrna-23b表达升高。
综上所述，由于采用了上述技术方案，本发明与现有技术相比，有以下优点：
本发明将外周血microrna-23b作为诊断类风湿性关节炎的生物标记物，稳定性好，且对比显著，可以方便类风湿性关节炎的发现。
具体实施方式
下面对本发明的具体实施方式作进一步详细介绍。
本发明提供了一种将外周血microrna-23b指标用于评估类风湿性关节炎的研究方法，因外周血mirna具有稳定性，外周血mirna可以与argonaunt2等蛋白质复合体结合来实现其稳定性，这种特性有利于mirna作为疾病诊断的生物标记物。
上述研究方法具体包括：
(1)静脉抽取类风湿性关节炎患者血液3-4毫升，1000xg离心10分钟分离出血浆；
(2)采用试剂盒提取血浆中的microrna；
(3)设计microrna-23b特异性引物及内参引物u6，采用实时pcr检测血浆内的microrna-23b表达量；
(4)将检测到的microrna-23b表达量与正常人microrna-23b表达范围进行对比。
上述的步骤(2)，优选的，采用的试剂盒为macherey-nagel品牌
(2.1)在300μl血浆中加入90μl的mlp(裂解缓冲液)，震荡混匀5s，室温条件下放置3分钟；
(2.2)在上述血浆中加入30μl的mpp(蛋白沉淀缓冲液)，震荡混匀5s，室温条件下放置1分钟后，11000g离心3分钟；
(2.3)将上清转移至收集管中并加入400μl异丙醇，震荡混匀5s，将混合物加入
(2.4)加入100μl洗涤缓冲液mw1清洗收集柱，11000g离心30秒弃去滤过液体；加入700μl洗涤缓冲液mw2清洗收集柱，11000g离心30秒弃去滤过液体；
(2.5)加入250μl洗涤缓冲液mw2清洗收集柱，11000g离心2分钟弃去滤过液体；
(2.6)在收集柱正当中膜上加入30μl无rna酶的去离子水，室温静置1分钟，放入新的收集管中，11000g离心1分钟收集rna；
(2.7)利用nanodrop微量分光光度计定量rna含量。
本发明将外周血microrna-23b作为诊断类风湿性关节炎的生物标记物，经对比发现，类风湿性关节炎患者血浆中，microrna-23b表达显著升高。在患者治疗后，可以再次通过上述方法再次检查microrna-23b表达量，并与正常人microrna-23b表达范围进行对比；经检测发现，治疗后外周血血浆中microrna-23b表达明显降低。
以上所述的实施例仅用于说明本发明的技术思想及特点，其目的在于使本领域内的技术人员能够了解本发明的内容并据以实施，不能仅以本实施例来限定本发明的专利范围，即凡依本发明所揭示的精神所作的同等变化或修饰，仍落在本发明的专利范围内。