本发明属于生物工程领域，涉及一种检测试剂，具体来说是一种能同时检测dna和rna的多重荧光pcr预存冻干试剂。
背景技术：
：聚合酶链式反应(polymerasechainreaction)，简称pcr，是一种体外扩增技术，是在模板核酸、引物和脱氧核苷酸存在的条件下，依赖于聚合酶的酶促反应，将待扩增的dna片段经反复循环，在短时间内获得大量的特定基因片段。具有灵敏高、特异性强等优点，目前广泛应用于核酸诊断领域。荧光pcr(real-timepcr),又称实时荧光pcr，是指在pcr反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号累积实时监测整个pcr进程，最后通过标准曲线对未知模板进行总量分析或通过ct值对模板进行相对定量。荧光pcr根据化学原理的不同可分为探针法和染料法。其中，taqman荧光定量技术以taqman荧光探针为基础，此探针为一寡核苷酸，在序列的5’端标记有一个荧光发射基团，在3’端标记有一个淬灭基团，探针完整时，发射基团的荧光信号被淬灭基团吸收，当pcr扩增时，由于taq酶的外切酶作用使探针发生降解，从而使荧光基团发出荧光，荧光pcr仪通过探测荧光信号的积累而对样品进行检测。多重荧光pcr(multiplexpcr),又称多重引物荧光pcr或复合pcr，它是在同一pcr反应体系里加上两对以上的引物、探针，从而对两种或两种以上的不同核酸片段进行pcr扩增。多重pcr主要用于多种病院微生物的同时检测或鉴定某些病原微生物、某些遗传病。目前，基于荧光探针的多重荧光pcr试剂基本都是对同一种类型的核酸进行检测，如都针对dna类的核酸进行多重荧光pcr，或都针对rna类的核酸进行多重荧光pcr。传统用于dna和rna的荧光pcr检测试剂多为液态的单重检测试剂，一个反应体系只能检测一个靶标，检测项目单一、耗材和试剂成本高，检测通量低。同时，由于是液体状态试剂，在运输过程中，需要低温保存运输，增加了运输的成本及复杂性。目前的pcr扩增试剂基本呈液体状态，在常温下保存并不稳定，尤其是rna反应试剂。而且液体试剂每次使用都需要反复冻融，对试剂的活性有很大影响，对pcr试剂长途运输会受到很大的影响，容易因温度不当导致试剂性能下降。本发明的可同时检测dna和rna的多重pcr预冻试剂可有效克服上述缺点。技术实现要素：针对现有技术中的上述技术问题，本发明提供了一种能同时检测dna和rna的多重荧光pcr预存冻干试剂，所述的这种能同时检测dna和rna的多重荧光pcr预存冻干试剂要解决现有技术中的用于dna和rna的荧光pcr检测试剂只能检测一个靶标/检测项目单一、耗材和试剂成本高/检测通量低、而且运输不方便的技术问题。本发明提供了一种能同时检测dna和rna的多重荧光pcr预存冻干试剂，包含以下组份：逆转录酶，所述的逆转录酶的终浓度为0.02u/ul-0.2u/ul；dna聚合酶，所述的dna聚合酶的终浓度为0.05u/ul-0.1u/ul；pcr缓冲液，所述的pcr缓冲液由终浓度为10mm-50mm的kcl、终浓度为5mm-30mm的tris-hcl、终质量百分比浓度为0.005％-0.05％tween20组成；mg2+，所述的mg2+的终浓度为1.5mm-5mm；dntp，所述的dntp的终浓度为0.1mm-0.5mm；冻干保护剂，所述的冻干保护剂由终质量百分比浓度为0.5％-5％的海藻糖、终浓度为5mm-100mm的山梨糖醇、终质量百分比浓度为0.2％-1.5％的bsa(牛血清白蛋白)组成。本发明能在同一反应管里同时针对dna和rna两种不同类型的核酸进行多重荧光pcr扩增检测，可以解决在针对不同类型的核酸，需要多次扩增的情况，节省了时间和耗材成本。本发明和已有技术相比，其技术进步是显著的。本发明的可冻干试剂可对两种不同类型的病原体核酸进行扩增检测，即采用一个反应体系同时检测dna(乙型肝炎病毒)和rna(丙型肝炎病毒)不同类型的靶标，大大节约了试剂和检测耗材。同时，对试剂冻干后，具有运输方便，稳定性好等优点。具体实施方式实施例11)本发明提供了一种能同时检测dna和rna的多重荧光pcr预存冻干试剂，其成分含有0.02u/ul-0.2u/ul的逆转录酶，0.05u/ul-0.1u/ul的dna聚合酶，1.5mm-5mm的mg2+，0.1mm-0.5mm的dntp，10mm-50mmkcl、5mm-30mmtris-hcl、0.005％-0.05％tween20，0.5％-5％海藻糖、5mm-100mm山梨糖醇、0.2％-1.5％bsa。可同时对dna和rna核酸进行检测。2)具体方案如下：1、实验组(冻干试剂)配方如下：浓度kcl25mmtris-hcl20mmtween200.01％mg2+3mmdntp0.2mmdna聚合酶0.05u/ul逆转录酶0.05u/ul海藻糖0.5％山梨糖醇10mmbsa0.5％hbv-f0.2umhbv-r0.2umhbv-p0.05umhcv-f0.2umhcv-r0.2umhcv-p0.05um按上表配方配成液体试剂后，将液体试剂放入预冻装置中，将液体试剂在-50℃预冻，逐渐升温进行真空冷冻干燥即可。2、对照组(液体试剂)配方如下:振荡混匀，分装到8连96孔板中。hbv-f序列为：5’-tcgcatcaggactcctaggacc-3’(seqidno.1所示)；hbv-r序列为：5’-cgagtctagactctgtggtattgtgagg-3’(seqidno.2所示)；hbv-p探针序列为：5’-cy5-ctgctcgtgttacaggcggggtttttcttg-bhq3-3’(seqidno.3所示)；hcv-f序列为：5’-ctagccatggcgttagtatgagtgt-3’(seqidno.4所示)；hcv-r序列为：5’-tggcaattccggtgtactcac-3’(seqidno.5所示)；hcv-p探针序列为：5’-fam-cgggagagccatagtggtctgcggaa-bhq1-3’(seqidno.6所示)；3、从临床样本血浆中提取dna和rna，分别加入到上述分装好的实验组和对照组试剂中。4、设置程序如下：50℃，25min；95℃，10min；5×(95℃，15s；55℃，20s；72℃，20s；)45×(95℃，10s；60℃，45s；采集荧光；)5、实验组和对照组检测结果如下表：5.1表adna检测结果组号灵敏度实验组10iu对照组10iu表brna检测结果组号灵敏度实验组50iu对照组50iu由表a、表b可知，实验组(冻干试剂)与对照试剂(液体试剂)检测灵敏度基本一致，冻干试剂能够保持液体试剂的高灵敏度。本发明的优点在于检测试剂能同时检测dna和rna两种不同类型的核酸，能实现对多种核酸的检测，大大节约了试剂盒检测耗材，扩大了应用范围。本发明的预存冻干试剂在冻干处理后，让试剂具有运输方便，稳定性好等优点。当前第1页12