本发明涉及生物工程技术领域，尤其涉及一种植物转基因细胞制备方法。
背景技术：
植物转基因技术是指把从动物、植物或微生物中分离到的目的基因，通过各种方法转移到植物的基因组中，使之稳定遗传并赋予植物新的农艺性状，如抗虫、抗病、抗逆、高产、优质等。
转基因植物是拥有来自其他物种基因的植物。该基因变化过程可以来自不同物种之间的杂交，但今天该名词更多的特指那些在实验室里通过重组dna技术人工插入其他物种基因以创造出拥有新特性的植物。转基因植物的研究主要在于改进植物的品质，改变生长周期或花期等提高其经济价值或观赏价值，以植物作为生物技术的实验材料有其特定的优点，那就是植物细胞大部分都有全能性，可以用单个细胞分化发育出整个植株。这样，经过基因工程改造的单个植物细胞有可能再生成一棵完整的转基因植株。植物基因工程用作外源基因的转化受体有许多种，包括胚性愈伤组织、分生细胞、幼胚、成熟胚、受精胚珠、种子和原生质体等。从这些受体细胞都可获得再生的转基植株。现有的基因细胞在制备过程中，容易生成载体环化分子，降低基因细胞的制备效率。
技术实现要素：
本发明提出了一种植物转基因细胞制备方法，以解决上述背景技术中提出的问题。
本发明提出了一种植物转基因细胞制备方法，包括如下步骤：
s1：从植物供体中采用酶切法获取目的基因；
s2：用pcr技术扩增目的基因，目的基因的扩增步骤为：
a：将目的基因倒入加热容器中，调节温度，加热至90～95℃，持续1-2分钟，dna解链；
b：降低温度，将温度调节到45-55℃，并加入引物、四种脱氧核苷酸和dna聚合酶，结合到互补dna链；
c：升高温度，将温度调节到70-75℃，热稳定dna聚合酶从引物起始互补链的合成；
s3：选取载体和目的基因构建基因载体；
s4：通过基因枪将基因载体导入受体细胞。
优选的，所述s1中，目的基因的获取步骤为：
(1)、从植物供体中制备纯度为90％以上的染色体基因组dna；
(2)、向基因组dna溶液中加入一定量的限制酶，限制酶将dna切割成若干个片段；
(3)、将dna片段分别与适当的载体分子进行体外连接；
(4)、将重组的载体包装成噬菌体,放入培养基中培养，保持适宜的温度，并加入培养液；
(5)、观察培养基中的噬菌斑,筛选阳性克隆,再将其克隆中的目的基因提取分离出来，得到目的基因。
优选的，所述培养液为水、无机盐、维生素、蔗糖、氨基酸和激素的混合物，植物细胞的分裂和生长需要植物激素的调节，促进生长的生长素和促进细胞分裂的分裂素是最基本的激素，激素是由吲哚乙酸和细胞分裂素混合而成，且吲哚乙酸和细胞分裂素的质量比例的1:2。
优选的，所述s2中，pcr技术扩增目的基因过程中，在引入酶切位点后，加入凝血酶，促进细胞的分裂，扩增目的基因。
优选的，所述s3中，选取质粒载体，在质粒载体上剪出带有粘性末端的切口，将带有相同粘结末端的目的基因片段导入切口内，添加dna连接酶和抑制剂，生成基因表达载体。
优选的，所述抑制剂为碱性磷酸酶，在目的基因上的粘性末端与质粒载体上的粘性切口粘接时，会产生一定数量的载体环化分子，碱性磷酸酶抑制环化分子的产生，使得基因上的粘性末端可以和质粒载体上的粘性切口相粘结，使得基因表达载体生成，提高基因表达载体生成的数量。
优选的，所述s4中，基因载体导入受体的过程为将直径4um的钨粉或金粉在供体dna中浸泡2-3分钟，然后启动基因枪，将这些粒子打入细胞、组织或器官中，小颗粒穿钨粉或金粉透力强，不需除去细胞壁和细胞膜而进入基因组，实现稳定转化，基因枪转化时间短，转化频率高。
本发明提出的一种植物转基因细胞制备方法，有益效果在于：
1、通过基因枪注射基因载体，不需除去细胞壁和细胞膜而进入基因组，实现稳定转化，基因枪转化时间短，转化频率高。
2、碱性磷酸酶抑制环化分子的产生，使得基因上的粘性末端可以和质粒载体上的粘性切口相粘结，使得基因表达载体生成，提高基因表达载体生成的数量。
具体实施方式
下面结合具体实施例来对本发明做进一步说明。
本发明提出了一种植物转基因细胞制备方法，包括如下步骤：
s1：从植物供体中采用酶切法获取目的基因，目的基因的获取步骤为：
(1)、从植物供体中制备纯度为90％以上的染色体基因组dna；
(2)、向基因组dna溶液中加入一定量的限制酶，限制酶对基因组dna进行切割，限制酶将dna切割成若干个片段；
(3)、将dna片段分别与适当的载体分子进行体外连接，生成重组的载体，重组载体内含有基因组dna；
(4)、将重组的载体包装成噬菌体,放入培养基中培养，保持适宜的温度，并加入培养液，培养液促进细胞的繁殖，获得足够的噬菌细胞，培养液为水、无机盐、维生素、蔗糖、氨基酸和激素的混合物，植物细胞的分裂和生长需要植物激素的调节，促进生长的生长素和促进细胞分裂的分裂素是最基本的激素，激素是由吲哚乙酸和细胞分裂素混合而成，且吲哚乙酸和细胞分裂素的质量比例的1:2；
(5)、观察培养基中的噬菌斑,通过筛选机构筛选出阳性噬菌斑，将噬菌斑进行克隆,从克隆中的噬菌斑中将目的基因提取分离出来，得到目的基因；
s2：用pcr技术扩增目的基因，使得目的基因的数量增加，pcr技术扩增目的基因过程中，在引入酶切位点后，加入凝血酶，促进细胞的分裂，扩增目的基因，目的基因的扩增步骤为：
a：将目的基因倒入加热容器中，调节温度，加热至90～95℃，持续1-2分钟，dna解链；
b：降低温度，将温度调节到45-55℃，并加入引物、四种脱氧核苷酸和dna聚合酶，结合到互补dna链；
c：升高温度，将温度调节到70-75℃，热稳定dna聚合酶从引物起始互补链的合成；
s3：选取载体和目的基因构建基因载体，使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传至下一代，使目的基因能够表达和发挥作用，选取质粒载体，在质粒载体上剪出带有粘性末端的切口，将带有相同粘结末端的目的基因片段导入切口内，添加dna连接酶和抑制剂，生成基因表达载体，抑制剂为碱性磷酸酶，在目的基因上的粘性末端与质粒载体上的粘性切口粘接时，会产生一定数量的载体环化分子，碱性磷酸酶抑制环化分子的产生，使得基因上的粘性末端可以和质粒载体上的粘性切口相粘结，使得基因表达载体生成，提高基因表达载体生成的数量；
s4：通过基因枪将基因载体导入受体细胞，基因载体导入受体的过程为将直径4um的钨粉或金粉在供体dna中浸泡2-3分钟，然后启动基因枪，将这些粒子打入细胞、组织或器官中，小颗粒穿钨粉或金粉透力强，不需除去细胞壁和细胞膜而进入基因组，实现稳定转化，基因枪转化时间短，转化频率高。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。