本发明涉及多肽提取的技术领域，具体涉及檀香多肽的制备工艺。
背景技术：
檀香籽油是含有三键结构的不饱和脂肪酸的天然植物油脂。其中含有30～35％的西门木炔酸，西门木炔酸可以抗炎，抗癌，抗衰老，减肥，减脂，生发。檀香籽油可以杀菌消炎，防治痈肿，生发等。
二氧化碳超临界萃取法提取檀香籽油，优点：低温提取，不含有机溶剂残留，残渣可以继续分离蛋白肽。檀香籽油是从檀香果中提取出来的天然油脂，这种檀香果通过二氧化碳超临界萃取法可以提取出高达30～35％的檀香籽油。但是，直接使用传统的超临界提取工艺，取得的油中会悬浮大量的类似胶粒的物质，严重影响檀香籽油的品质。
而榨油之后的饼粕中保留了檀香中的一部分营养物质，榨油后的副产物内含有较多的蛋白质、谷氨酸、精氨酸、天冬氨酸、亮氨酸和赖氨酸等，具有较高的价值，但现在用作饲料造成了极大地浪费。
技术实现要素：
本发明要解决的问题是提供一种提高残渣使用率的，能够解决蛋白浪费问题的檀香多肽制备工艺。
为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：檀香多肽的制备工艺，具体步骤如下：
步骤一：对檀香果进行预处理去除杂质或灰尘，然后进行干燥粉碎，粉碎至目数为2～20目，得到檀香果粉末，备用；
步骤二：将步骤一中檀香果粉末与麦麸皮按照质量比10:1～1:3进行混合，将混合后原料进行二氧化碳超临界萃取，提取檀香籽油后，获得残渣a；檀香果中含有大量的蛋白，蛋白纤维在超临界工艺下会聚集成团，影响檀香籽油的品质，并使得檀香籽油呈浑浊状态，通过在超临界萃取中添加麦麸皮，通过麦麸皮起到的吸附作用，可以吸附纤维，胶等颗粒物质，从而提高檀香籽油的品质；
步骤三：将步骤二中的含有麦麸皮的残渣a按照体积比1:1～1:3加入丙酮，进行索氏抽提6h，进行去脂，60℃烘干5～7h去除溶剂，得到残渣b；由于残渣a中含有大量在超临界萃取过程中吸附的檀香果中的蛋白和檀香籽油，加入丙酮能够去除残渣a中残留的檀香籽油，从而提高檀香多肽的品质；
步骤四：将步骤三中的含有麦麸皮的残渣b按照体积比1:2～1:5加蒸馏水浸泡，超声震荡12h，超声温度30℃，得到混合物a；通过加蒸馏水浸泡和超声震荡的方法能够促进残渣b中蛋白质和多肽的溶解；
步骤五：将步骤四中混合物a离心20min，去除不溶性杂质，得到多肽粗提液a；
步骤六：采用质量分数的3％盐酸溶液调整步骤五中的多肽粗提液a的ph值为3.8～4.2，获得酸沉淀的浑浊溶液a；
步骤七：将步骤六中的浑浊溶液a离心20min获得沉淀a；
步骤八：使用蒸馏水将步骤七中的沉淀a洗至中性，干燥为蛋白质粉，备用；
步骤九：将所述步骤八中的蛋白质粉按照质量比1:10～1：15加入蒸馏水，升温到50～60℃，搅拌，然后添加ph调节剂将ph调节至中性，然后加入蛋白质粉质量的8％～12％的蛋白酶充分搅拌，保证酶与底物充分接触，使用恒温水浴锅以45℃进行震荡，酶解5h，得到酶解液a；
步骤十：将步骤九中的酶解液a置于120℃的油浴中10min进行灭酶，取上清液为多肽水解液，进行干燥，得到檀香多肽。
进一步的，所述步骤七和步骤九中干燥可为冷冻干燥或微波干燥，所述微波干燥的条件为真空度0.04mpa～0.08mpa，温度为55～65℃，所述冷冻干燥的条件为-40～-50℃，20～30pa。
进一步的，所述步骤五和步骤七中采用4000r/min的条件离心。
进一步的，所述步骤九中蛋白酶为中性蛋白酶和植物蛋白酶按照质量比1:1进行配比的蛋白酶，中性蛋白酶是由枯草芽孢杆菌经发酵提取而得的，属于一种内切酶，可用于各种蛋白质水解处理，在一定温度、ph值下，本品能将大分子蛋白质水解为氨基酸等产物。可广泛应用于动植物蛋白的水解，植物蛋白酶是以植物为原料，按照对提取的产品用途的需要，经过物理化学提取分离过程，定向获取和浓集植物中的一种或多种有效成分，而不改变其有效成分结构而形成的产品；其广泛用于保健食品，化妆品、医药、日常生活用品等领域，植物蛋白酶提取的原材料比较宽泛，如蚕豆、芸豆、豌豆、荞麦、麦、香茹、银耳、木耳等。
进一步的，所述中性蛋白酶和植物蛋白酶共5000u/g。
进一步的，所述步骤九中ph调节剂为盐酸或氢氧化钠的一种。
进一步的，所述步骤八酶解过程中需要使用ph调节剂调节ph一直为中性。
进一步的，所述檀香多肽为1000～3000道尔顿的小分子蛋白肽。
进一步的，所述檀香多肽的含量为4.8～8.6g/kg。
与现有技术相比，本发明具有的优点和积极效果是：
本发明提供的檀香多肽的制备工艺，通过添加麦麸皮能够吸附檀香籽油中的多肽和蛋白质，得到澄清的檀香籽油，且通过除杂粉碎、二氧化碳超临界萃取，提取檀香籽油、抽提去脂、超声震荡、离心提纯、酸化酶解、灭酶干燥等步骤提纯处理含有麦麸皮的残渣，能够直接获得一种小分子的檀香多肽，且通过索氏抽提的方式能够在提取蛋白的过程中减少残余的檀香籽油的影响，而且采用微波干燥或冷冻干燥的方式进行处理，以中性蛋白酶与植物蛋白酶的协同酶解，能够得到性质更加稳定，得率较高的檀香多肽，本发明所提取的檀香多肽为1000～3000道尔顿的小分子蛋白肽，且檀香多肽的含量为4.8～8.6g/kg，本发明提供檀香多肽的制备工艺步骤简单、得率较高、能够有效的提高残渣使用率，解决蛋白浪费问题进行进一步的利用。
具体实施方式
为了更好的理解本发明，下面结合具体实施例对本发明进行进一步的描述。
实施例1：
步骤一：对檀香果进行预处理去除杂质或灰尘，然后进行干燥粉碎，使檀香果的含水量低于10％，粉碎至目数为2目，得到檀香果粉末，备用；
步骤二：将步骤一中檀香果粉末与麦麸皮按照质量比10:1进行混合，将混合后原料进行二氧化碳超临界萃取，提取檀香籽油后，获得残渣a；
步骤三：将步骤二中的含有麦麸皮的残渣a按照体积比1:1加入丙酮，进行索氏抽提6h，进行去脂，60℃烘干6h去除溶剂，得到残渣b；
步骤四：将步骤三中的含有麦麸皮的残渣b按照体积比1:2加蒸馏水浸泡，超声震荡12h，超声温度30℃，得到混合物a；
步骤五：将步骤四中混合物a以4000r/min离心20min，去除不溶性杂质，得到多肽粗提液a；
步骤六：采用质量分数的3％盐酸溶液调整步骤五中的多肽粗提液a的ph值为3.8，获得酸沉淀的浑浊溶液a；
步骤七：将步骤六中的浑浊溶液a以4000r/min离心20min获得沉淀a；
步骤八：使用蒸馏水将步骤七中的沉淀a洗至中性，以0.04mpa，温度为55℃的条件进行微波干燥，得到蛋白质粉，备用；
步骤九：将所述步骤八中的蛋白质粉按照质量比1:10加入蒸馏水，升温到50℃，搅拌，然后添加ph调节剂将ph调节至中性，然后加入蛋白质粉质量的8％的蛋白酶，(中性蛋白酶和木瓜蛋白酶按照质量比1:1进行配比，中性蛋白酶和木瓜蛋白酶共5000u/g)充分搅拌，保证酶与底物充分接触，使用恒温水浴锅以45℃进行震荡，酶解5h，得到酶解液a；
步骤十：将步骤九中的酶解液a置于120℃的油浴中10min进行灭酶，取上清液为多肽水解液，以0.04mpa，温度为55℃的条件进行微波干燥，得到檀香多肽，作为实验组a。
实施例2：
步骤一：对檀香果进行预处理去除杂质或灰尘，然后进行干燥粉碎，使檀香果的含水量低于10％，粉碎至目数为10目，得到檀香果粉末，备用；
步骤二：将步骤一中檀香果粉末与麦麸皮按照质量比1:1进行混合，将混合后原料进行二氧化碳超临界萃取，提取檀香籽油后，获得残渣a；
步骤三：将步骤二中的含有麦麸皮的残渣a按照体积比1:2加入丙酮，进行索氏抽提6h，进行去脂，60℃烘干6h去除溶剂，得到残渣b；
步骤四：将步骤三中的含有麦麸皮的残渣b按照体积比1:3加蒸馏水浸泡，超声震荡12h，超声温度30℃，得到混合物a；
步骤五：将步骤四中混合物a以4000r/min离心20min，去除不溶性杂质，得到多肽粗提液a；
步骤六：采用质量分数的3％盐酸溶液调整步骤五中的多肽粗提液a的ph值为4.0，获得酸沉淀的浑浊溶液a；
步骤七：将步骤六中的浑浊溶液a离心20min获得沉淀a；
步骤八：使用蒸馏水将步骤七中的沉淀a洗至中性，以0.08mpa，温度为65℃的条件进行微波干燥，得到蛋白质粉，备用；
步骤九：将所述步骤八中的蛋白质粉按照质量比1:13加入蒸馏水，升温到55℃，搅拌，然后添加ph调节剂将ph调节至中性，然后加入蛋白质粉质量的10％的蛋白酶(中性蛋白酶和木瓜蛋白酶按照质量比1:1进行配比，中性蛋白酶和木瓜蛋白酶共5000u/g)充分搅拌，保证酶与底物充分接触，使用恒温水浴锅以45℃进行震荡，酶解5h，得到酶解液a；
步骤十：将步骤九中的酶解液a置于120℃的油浴中10min进行灭酶，取上清液为多肽水解液，以0.08mpa，温度为65℃的条件进行微波干燥，得到檀香多肽，作为实验组b。
实施例3：
步骤一：对檀香果进行预处理去除杂质或灰尘，然后进行干燥粉碎，使檀香果的含水量低于10％，粉碎至目数为20目，得到檀香果粉末，备用；
步骤二：将步骤一中檀香果粉末与麦麸皮按照质量比1:3进行混合，将混合后原料进行二氧化碳超临界萃取，提取檀香籽油后，获得残渣a；
步骤三：将步骤二中的含有麦麸皮的残渣a按照体积比1:3加入丙酮，进行索氏抽提6h，进行去脂，60℃烘干7h去除溶剂，得到残渣b；
步骤四：将步骤三中的含有麦麸皮的残渣b按照体积比1:5加蒸馏水浸泡，超声震荡12h，超声温度30℃，得到混合物a；
步骤五：将步骤四中混合物a以4000r/min离心20min，去除不溶性杂质，得到多肽粗提液a；
步骤六：采用质量分数的3％盐酸溶液调整步骤五中的多肽粗提液a的ph值为4.2，获得酸沉淀的浑浊溶液a；
步骤七：将步骤六中的浑浊溶液a离心20min获得沉淀a；
步骤八：使用蒸馏水将步骤七中的沉淀a洗至中性，以-40℃，20pa的条件进行冷冻干燥，得到蛋白质粉，备用；
步骤九：将所述步骤八中的蛋白质粉按照质量比1:15加入蒸馏水，升温到60℃，搅拌，然后添加ph调节剂将ph调节至中性，然后加入蛋白质粉质量的12％的蛋白酶(中性蛋白酶和木瓜蛋白酶按照质量比1:1进行配比，中性蛋白酶和植物蛋白酶共5000u/g)充分搅拌，保证酶与底物充分接触，使用恒温水浴锅以45℃进行震荡，酶解5h，得到酶解液a；
步骤十：将步骤九中的酶解液a置于120℃的油浴中10min进行灭酶，取上清液为多肽水解液，以-40℃，20pa的条件进行冷冻干燥，得到檀香多肽，作为实验组c。
实施例4：
步骤一：对檀香果进行预处理去除杂质或灰尘，然后进行干燥粉碎，使檀香果的含水量低于10％，粉碎至目数为20目，得到檀香果粉末，备用；
步骤二：将步骤一中檀香果粉末与麦麸皮按照质量比1:5进行混合，将混合后原料进行二氧化碳超临界萃取，提取檀香籽油后，获得残渣a；
步骤三：将步骤二中的含有麦麸皮的残渣a按照体积比1:5加入丙酮，进行索氏抽提6h，进行去脂，60℃烘干7h去除溶剂，得到残渣b；
步骤四：将步骤三中的含有麦麸皮的残渣b按照体积比1:5加蒸馏水浸泡，超声震荡12h，超声温度30℃，得到混合物a；
步骤五：将步骤四中混合物a以4000r/min离心20min，去除不溶性杂质，得到多肽粗提液a；
步骤六：采用质量分数的3％盐酸溶液调整步骤五中的多肽粗提液a的ph值为4.2，获得酸沉淀的浑浊溶液a；
步骤七：将步骤六中的浑浊溶液a离心20min获得沉淀a；
步骤八：使用蒸馏水将步骤七中的沉淀a洗至中性，以-40℃，20pa的条件进行冷冻干燥，得到蛋白质粉，备用；
步骤九：将所述步骤八中的蛋白质粉按照质量比1:15加入蒸馏水，升温到60℃，搅拌，然后添加ph调节剂将ph调节至中性，然后加入蛋白质粉质量的12％的蛋白酶(中性蛋白酶和木瓜蛋白酶按照质量比1:1进行配比，中性蛋白酶和植物蛋白酶共5000u/g)充分搅拌，保证酶与底物充分接触，使用恒温水浴锅以45℃进行震荡，酶解5h，得到酶解液a；
步骤十：将步骤九中的酶解液a置于120℃的油浴中10min进行灭酶，取上清液为多肽水解液，以-40℃，20pa的条件进行冷冻干燥，得到檀香多肽，作为实验组d。
实施例5：
步骤一：对檀香果进行预处理去除杂质或灰尘，然后进行干燥粉碎，使檀香果的含水量低于10％，粉碎至目数为10目，得到檀香果粉末，备用；
步骤二：将步骤一中檀香果粉末与麦麸皮按照质量比1:1进行混合，将混合后原料进行二氧化碳超临界萃取，提取檀香籽油后，获得残渣a；
步骤三：将步骤二中的含有麦麸皮的残渣a按照体积比1:2加入丙酮，进行索氏抽提6h，进行去脂，60℃烘干6h去除溶剂，得到残渣b；
步骤四：将步骤三中的含有麦麸皮的残渣b按照体积比1:3加蒸馏水浸泡，超声震荡12h，超声温度30℃，得到混合物a；
步骤五：将步骤四中混合物a以4000r/min离心20min，去除不溶性杂质，得到多肽粗提液a；
步骤六：采用质量分数的3％盐酸溶液调整步骤五中的多肽粗提液a的ph值为4.0，获得酸沉淀的浑浊溶液a；
步骤七：将步骤六中的浑浊溶液a离心20min获得沉淀a；
步骤八：使用蒸馏水将步骤七中的沉淀a洗至中性，以-50℃，30pa的条件进行冷冻干燥，得到蛋白质粉，备用；
步骤九：将所述步骤八中的蛋白质粉按照质量比1:13加入蒸馏水，升温到65℃，搅拌，然后添加ph调节剂将ph调节至中性，然后加入蛋白质粉质量的10％的木瓜蛋白酶(5000u/g)充分搅拌，保证酶与底物充分接触，使用恒温水浴锅以45℃进行震荡，酶解5h，得到酶解液a；
步骤十：将步骤九中的酶解液a置于120℃的油浴中10min进行灭酶，取上清液为多肽水解液，以-50℃，30pa的条件进行冷冻干燥，得到檀香多肽，作为对照组a。
实施例6：
步骤一：对檀香果进行预处理去除杂质或灰尘，然后进行干燥粉碎，使檀香果的含水量低于10％，粉碎至目数为10目，得到檀香果粉末，备用；
步骤二：将步骤一中檀香果粉末与麦麸皮按照质量比1:1进行混合，将混合后原料进行二氧化碳超临界萃取，提取檀香籽油后，获得残渣a；
步骤三：将步骤二中的含有麦麸皮的残渣a按照体积比1:2加入丙酮，进行索氏抽提6h，进行去脂，60℃烘干6h去除溶剂，得到残渣b；
步骤四：将步骤三中的含有麦麸皮的残渣b按照体积比1:3加蒸馏水浸泡，超声震荡12h，超声温度30℃，得到混合物a；
步骤五：将步骤四中混合物a以4000r/min离心20min，去除不溶性杂质，得到多肽粗提液a；
步骤六：采用质量分数的3％盐酸溶液调整步骤五中的多肽粗提液a的ph值为4.0，获得酸沉淀的浑浊溶液a；
步骤七：将步骤六中的浑浊溶液a离心20min获得沉淀a；
步骤八：使用蒸馏水将步骤七中的沉淀a洗至中性，以-50℃，30pa的条件进行冷冻干燥，得到蛋白质粉，备用；
步骤九：将所述步骤八中的蛋白质粉按照质量比1:13加入蒸馏水，升温到55℃，搅拌，然后添加ph调节剂将ph调节至中性，然后加入蛋白质粉质量的10％的中性蛋白酶(5000u/g)充分搅拌，保证酶与底物充分接触，使用恒温水浴锅以45℃进行震荡，酶解5h，得到酶解液a；
步骤十：将步骤九中的酶解液a置于120℃的油浴中10min进行灭酶，取上清液为多肽水解液，以-50℃，30pa的条件进行冷冻干燥，得到檀香多肽，作为对照组b。
实施例7：
步骤一：对檀香果进行预处理去除杂质或灰尘，然后进行干燥粉碎，使檀香果的含水量低于10％，粉碎至目数为10目，得到檀香果粉末，备用；
步骤二：将步骤一中檀香果粉末进行二氧化碳超临界萃取，提取檀香籽油后，获得残渣a；
步骤三：将步骤二中的含有麦麸皮的残渣a按照体积比1:2加入丙酮，进行索氏抽提6h，进行去脂，60℃烘干6h去除溶剂，得到残渣b；
步骤四：将步骤三中的含有麦麸皮的残渣b按照体积比1:3加蒸馏水浸泡，超声震荡12h，超声温度30℃，得到混合物a；
步骤五：将步骤四中混合物a以4000r/min离心20min，去除不溶性杂质，得到多肽粗提液a；
步骤六：采用质量分数的3％盐酸溶液调整步骤五中的多肽粗提液a的ph值为4.0，获得酸沉淀的浑浊溶液a；
步骤七：将步骤六中的浑浊溶液a离心20min获得沉淀a；
步骤八：使用蒸馏水将步骤七中的沉淀a洗至中性，以-50℃，30pa的条件进行冷冻干燥，得到蛋白质粉，备用；
步骤九：将所述步骤八中的蛋白质粉按照质量比1:13加入蒸馏水，升温到55℃，搅拌，然后添加ph调节剂将ph调节至中性，然后加入蛋白质粉质量的10％的蛋白酶(中性蛋白酶和木瓜蛋白酶按照质量比1:1进行配比，中性蛋白酶和木瓜蛋白酶共5000u/g)充分搅拌，保证酶与底物充分接触，使用恒温水浴锅以45℃进行震荡，酶解5h，得到酶解液a；
步骤十：将步骤九中的酶解液a置于120℃的油浴中10min进行灭酶，取上清液为多肽水解液，以-50℃，30pa的条件进行冷冻干燥，得到檀香多肽，作为对照组c。
实施例8：
步骤一：对檀香果进行预处理去除杂质或灰尘，然后进行干燥粉碎，使檀香果的含水量低于10％，粉碎至目数为10目，得到檀香果粉末，备用；
步骤二：将步骤一中檀香果粉末与麦麸皮按照质量比1:1进行混合，将混合后原料进行二氧化碳超临界萃取，提取檀香籽油后，获得残渣a；
步骤三：将步骤二中的含有麦麸皮的残渣a按照体积比1:3加蒸馏水浸泡，超声震荡12h，超声温度30℃，得到混合物a；
步骤四：将步骤三中混合物a以4000r/min离心20min，去除不溶性杂质，得到多肽粗提液a；
步骤五：采用质量分数的3％盐酸溶液调整步骤四中的多肽粗提液a的ph值为4.0，获得酸沉淀的浑浊溶液a；
步骤六：将步骤五中的浑浊溶液a离心20min获得沉淀a；
步骤七：使用蒸馏水将步骤六中的沉淀a洗至中性，以-50℃，30pa的条件进行冷冻干燥，得到蛋白质粉，备用；
步骤八：将所述步骤七中的蛋白质粉按照质量比1:13加入蒸馏水，升温到55℃，搅拌，然后添加ph调节剂将ph调节至中性，然后加入蛋白质粉质量的10％的蛋白酶(中性蛋白酶和木瓜蛋白酶按照质量比1:1进行配比，中性蛋白酶和木瓜蛋白酶共5000u/g)充分搅拌，保证酶与底物充分接触，使用恒温水浴锅以45℃进行震荡，酶解5h，得到酶解液a；
步骤九：将步骤八中的酶解液a置于120℃的油浴中10min进行灭酶，取上清液为多肽水解液，以-50℃，30pa的条件进行冷冻干燥，得到檀香多肽，作为对照组c。
实施例9：
蛋白质含量的测定：利用2200型半自动凯式定氮仪测定实验组a、实验组b、实验组c、实验组d、对照组a、对照组b、对照组c和对照组d的含氮量，再乘以换算系数(粗蛋白质(％)＝(v1-v2)×0.0140×6.25/m×100％)，可得出样品中的蛋白质含量。
试样的消化：分别称取实验组a、实验组b、实验组c、实验组d、对照组a、对照组b、对照组c和对照组d的试样1g，放入消化管中，加入混合催化剂，再加10ml浓硫酸，置于420℃微博消化炉中消化1h，至透明的蓝绿色。
利用2200型半自动凯式定氮仪将消化管插在蒸馏装置上，蒸馏装置的冷凝管末端要浸入装有35ml的硼酸吸收液的蒸馏瓶中，向消化管中加入80ml蒸馏水，50ml的40％的氢氧化钠溶液至消化液变黑，进行蒸馏直至吸收液体体积到150ml，降下锥形瓶，用蒸馏水洗冷凝管，然后将洗液流入锥形瓶中。
然后用0.1mol/l的盐酸溶液进行滴定，溶液由蓝绿色变为灰红色为终点。实验组a、实验组b、实验组c、实验组d、对照组a、对照组b、对照组c和对照组d的蛋白质含量见表1。
表1.蛋白质含量的测定
实验组a、实验组b、实验组c和实验组d之间进行对比可知，在本发明得到的蛋白质含量随麦麸皮含量的增加而增加，但檀香果粉末与麦麸皮的质量比高于1:3，得到的蛋白质的含量增加量不明显，这是由于麦麸皮中的蛋白质是由檀香籽油中吸附得到的，增加麦麸皮的含量，能够增大麦麸皮的吸收量，但并不能增大檀香籽油中的蛋白质含量，且添加过多的麦麸皮会造成大量檀香籽油的消耗，导致檀香籽油的萃取量下降。
实验组b、对照组a和对照组b之间进行对比可知，中性蛋白酶与木瓜蛋白酶的复配效果要好于单独的中性蛋白酶或木瓜蛋白酶，能够有效的增大蛋白酶解效率。
实验组b与对照组c之间进行对比可知，不添加麦麸皮的残渣中的蛋白质含量远远小于添加麦麸皮的残渣，这是由于残渣中的蛋白质是由檀香籽油中吸附得到的，而不添加麦麸皮，檀香籽中游离的蛋白质依旧游离在檀香籽油中，得到的檀香籽油为浑浊的乳白色，其中含有大量的悬浮的蛋白质胶粒，且残渣中的蛋白质含量较低。
实验组b与对照组d之间进行对比可知，没有经过索氏抽提的对照组d中的蛋白质含量远高于实验组b，这是因为对照组d中除了蛋白质还残存有檀香籽油，檀香籽油中含有少量的吡嗪等含氮的成分对蛋白质的测定结果造成影响。
以上对本发明的实施例进行了详细说明，但所述内容仅为本发明的较佳实施例，不能被认为用于限定本发明的实施范围。凡依本发明范围所作的均等变化与改进等，均应仍归属于本专利涵盖范围之内。