海藻酸中空微纤维的制作方法

本发明涉及抗体生产用的海藻酸凝胶纤维、该凝胶纤维的制造方法、和使用该凝胶纤维的抗体的制造方法。

背景技术：

利用基因重组技术进行抗体生产。迄今为止，使用cho细胞、sp2/0细胞、ns0细胞或大肠杆菌等作为抗体产生细胞，产生了各种抗体。

尤其是，cho细胞(来自中国仓鼠卵巢)是可进行悬浮培养的细胞，并且细胞的增殖速度快，通过cho细胞的大量培养，容易大量生产目标蛋白质，因此被频繁用于抗体的培养。

近年来，在抗体药物的开发/制造中，要求解决抗体药物的稳定生产、低成本化，为了达到这些要求，产率更高的有效的生产系统(例如，连续生产方法、用于利用小规模生产设备产生必要量的抗体的新型培养技术等)的开发受到关注。

抗体产生细胞的培养是使抗体产生细胞株在旋转烧瓶等中唤醒细胞后，边控制培养基组成/温度/搅拌条件/气体交换/ph等培养条件边进行扩大培养，最终利用数千～1万升规模的大规模的生产培养罐进行培养。

在以高密度连续培养抗体产生细胞的情况下，有时细胞与培养液的分离方法、有效的氧的供给方法等成为问题。关于前者，研究使用重力沉降管或连续离心分离机进行分离的方法等，关于后者，研究通过装入培养罐内的多孔管的氧扩散法、在培养液中添加氧溶解度高的氟化碳等的各种方法，以谋求各种改善。然而，为了有效地生产抗体，还需要解决各种问题。

已知在芯部包含各种细胞的具有芯/壳结构的微纤维(专利文献1：国际公开第2011/046105号小册子)。

已知包含细胞层的中空(空心)微纤维、该微纤维的制造方法(专利文献2：国际公开第2015/178427号小册子)。

已知通过在海藻酸凝胶中空纤维的中空部培养悬浮在含有生物适应性聚合物的水溶液中的细胞来制作线状细胞凝集块的方法(专利文献3：日本特开2014-236698号公报)。

已知可将培养液供给至组织的各个部位的三维细胞结构体的制造方法和培养方法(专利文献4：日本特开2016-77229号公报)。

已知一种微管，其特征在于：具备内部包含细胞或水溶性化学物质、且最外层包含疏水性聚合物的半透膜(专利文献5：日本特开2017-77473号公报)。

已知使用具有双同轴层流的微流体装置，将胞外基质(ecm)蛋白质和分化细胞或体细胞干细胞制成胶囊的meter(米)长度的芯-壳水凝胶微小纤维的制造方法(非专利文献1)。

已知使用由海藻酸盐和聚丙烯酰胺构成的双网络(dn)水凝胶，使机械特性和操作性提高的含细胞的水凝胶微纤维(非专利文献2)。

然而，在专利文献1～5以及非专利文献1和2中，关于将包含抗体产生细胞的芯层用包含具有高机械强度的海藻酸凝胶(优选具有较芯层高的机械强度的海藻酸凝胶)的壳层进行包覆而得到的具有高机械强度的海藻酸凝胶纤维、和使用该海藻酸凝胶纤维的抗体的制造方法，既没有公开也没有暗示。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：国际公开第2011/046105号小册子；

专利文献2：国际公开第2015/178427号小册子；

专利文献3：日本特开2014-236698号公报；

专利文献4：日本特开2016-77229号公报；

专利文献5：日本特开2017-77473号公报；

非专利文献

非专利文献1：naturematerials.,12,第584-590页,2013年；

非专利文献2：acsbiomater.sci.eng.,3(3),第392-398页,2017年。

技术实现要素：

发明所要解决的课题

迄今为止，并不知晓将包含抗体产生细胞(例如cho细胞等)和基材(例如胶原、培养基、海藻酸等的溶液或凝胶)的芯层用包含交联海藻酸凝胶(例如来自天然的交联海藻酸凝胶)的壳层进行包覆而得到的抗体生产用的海藻酸凝胶纤维、和使用该凝胶纤维进行重组抗体生产。迄今为止，还不知晓形成具有一定长度的上述海藻酸凝胶纤维、或使用了该海藻酸凝胶纤维的连续的抗体的生产方法。

在这样的状况下，要求进一步的抗体的生产方法。

用于解决课题的手段

本发明人反复进行了深入研究，结果发现了：通过将包含抗体产生细胞和基材(例如选自胶原、培养基、海藻酸等的溶液或凝胶的基材)的芯层用包含具有高机械强度的海藻酸凝胶(优选具有较芯层高的机械强度的海藻酸凝胶)的壳层进行包覆，可制作抗体产生用的海藻酸凝胶纤维。还发现了：在使用如此制作的海藻酸凝胶纤维进行抗体产生细胞的培养时，可长期连续地产生抗体，从而完成了本发明。

由后述的实施例可知：将包含作为抗体产生细胞的插入有抗体基因的cho细胞和作为基材的胶原凝胶的芯层用包含具有高机械强度的钙交联海藻酸凝胶(优选具有较芯层高的机械强度的钙交联海藻酸凝胶)的壳层进行包覆，制作具有高机械强度的海藻酸凝胶纤维，并培养该凝胶纤维时，可长期连续地产生抗体(基因重组)。如此，所制作的海藻酸凝胶纤维通过抗体产生cho细胞提供适合抗体的连续产生的环境，芯层中产生的抗体连续地透过壳层释放到凝胶纤维外。

发明效果

利用本发明，提供进一步的抗体的生产方法。

在若干个方案中，通过将包含抗体产生细胞和基材的芯层用包含具有高机械强度的海藻酸凝胶(优选具有较芯层高的机械强度的海藻酸凝胶)的壳层进行包覆，提供具有高机械强度的海藻酸凝胶纤维。在后述的实施例中，制作将包含抗体产生细胞的芯层用由海藻酸钠溶液(a-2或b-2)形成的钙交联海藻酸凝胶进行包覆以形成具有高机械强度的壳的海藻酸凝胶纤维，其具有以下特征：通过培养抗体产生细胞，芯层中长期连续地产生抗体，该抗体透过壳层，连续地释放到海藻酸凝胶纤维外。

优选方案的海藻酸凝胶纤维提供适合抗体生产的环境。由于细胞被封入芯层中，所以在培养液中对抗体产生细胞的物理应激(stress，胁迫)少，期待所封入的抗体产生细胞长期地持续产生抗体。因此，可期待使用了这样的海藻酸凝胶纤维的抗体的制造方法使抗体的生产效率飞跃性地提高。例如，还期待不同于需要大规模的培养罐的抗体的悬浮培养，而是利用小规模的生产设备制造抗体。还期待作为也适合制造少量/多个品种的抗体药物的下一代抗体药物的连续生产技术。

附图说明

[图1]是芯层中含有抗体产生细胞的海藻酸凝胶纤维的截面图。

[图2]是说明芯层中含有抗体产生细胞的海藻酸凝胶纤维的制造过程的一个方案的示意图。

[图3]是说明芯层中含有抗体产生细胞的海藻酸凝胶纤维的横截面、所产生的抗体、代谢物、废物、培养液(营养源)、和氧透过壳层的示意图。

[图4]是海藻酸凝胶纤维a的培养后(12天)的显微镜照片。

[图5]是海藻酸凝胶纤维b的培养后(28天)的显微镜照片。

具体实施方式

[具体方案]

这里，对海藻酸凝胶纤维、该凝胶纤维的制造方法、和使用该凝胶纤维的抗体的制造方法的具体方案进行说明。更具体而言，如以下的方案[1]～[12-1]所述。

[1]第1方案涉及海藻酸凝胶纤维，其是将包含抗体产生细胞和基材的芯层用包含具有高机械强度的海藻酸凝胶的壳层进行包覆而形成的。

[1-1]上述方案[1]中，芯层中所含的抗体产生细胞例如为选自cho细胞、cho细胞亚株、cos细胞、sp2/0细胞、ns0细胞、sp2细胞、perc6细胞、yb2/0细胞、ye2/0细胞、1r983f细胞、namalwa细胞、wil-2细胞、jurkat细胞、vera细胞、molt-4细胞、293-hek细胞、bhk细胞、kgh6细胞、p3x63ag8.653细胞、c127细胞、jc细胞、la7细胞、zr-45-30细胞、htert细胞、nm2c5细胞、uacc-812细胞等的细胞；优选为选自cho细胞、cho细胞亚株、cos细胞、sp2/0细胞、ns0细胞、sp2细胞和perc6细胞的细胞；更优选为选自cho细胞、sp2/0细胞和ns0细胞的细胞；进一步优选为cho细胞。

[1-2]上述方案[1]或[1-1]中，海藻酸凝胶纤维的芯层中所含的抗体产生细胞为cho细胞，cho细胞例如为选自莫罗单抗(muromonab)-cd3产生cho细胞、曲妥珠单抗(trastuzumab)产生cho细胞、利妥昔单抗(rituximab)产生cho细胞、帕利珠单抗(palivizumab)产生cho细胞、英夫利昔单抗(infliximab)产生cho细胞、巴利昔单抗(basiliximab)产生cho细胞、托珠单抗(tocilizumab)产生cho细胞、吉妥珠单抗奥佐米星(gemtuzumabozogamicin)产生cho细胞、贝伐珠单抗(bevacizumab)产生cho细胞、替伊莫单抗(ibritumomabtiuxetan)产生cho细胞、阿达木单抗(adalimumab)产生cho细胞、西妥昔单抗(cetuximab)产生cho细胞、兰尼单抗(ranibizumab)产生cho细胞、奥马珠单抗(omalizumab)产生cho细胞、依库珠单抗(eculizumab)产生cho细胞、帕尼单抗(panitumumab)产生cho细胞、乌司奴单抗(ustekinumab)产生cho细胞、戈利木单抗(golimumab)产生cho细胞、卡那单抗(canakinumab)产生cho细胞、地诺单抗(denosumab)产生cho细胞、莫格利珠单抗(mogamulizumab)产生cho细胞、赛妥珠单抗(certolizumabpegol)产生cho细胞、奥法木单抗(ofatumumab)产生cho细胞、帕妥珠单抗(pertuzumab)产生cho细胞、曲妥珠单抗-美坦新偶联物(trastuzumabemtansine)产生cho细胞、贝伦妥单抗-维多汀(brentuximabvedotin)产生cho细胞、那他珠单抗(natalizumab)产生cho细胞、纳武单抗(nivolumab)产生cho细胞、阿仑珠单抗(alemtuzumab)产生cho细胞、苏金单抗(secukinumab)产生cho细胞、雷莫芦单抗(ramucirumab)产生cho细胞、伊匹木单抗(ipilimumab)产生cho细胞、依洛尤单抗(evolocumab)产生cho细胞、美泊利单抗(mepolizumab)产生cho细胞、阿利珠单抗(alirocumab)产生cho细胞、依奇珠单抗(ixekizumab)产生cho细胞、柏达鲁单抗(brodalumab)产生cho细胞、依达赛珠单抗(idarucizumab)产生cho细胞、埃罗妥珠单抗(elotuzumab)产生cho细胞、帕博利珠单抗(pembrolizumab)产生cho细胞、沙利鲁单抗(sarilumab)产生cho细胞、贝洛托舒单抗(bezlotoxumab)产生cho细胞、贝利木单抗(belimumab)产生cho细胞、达雷木单抗(daratumumab)产生cho细胞、阿维鲁单抗(avelumab)产生cho细胞、度匹鲁单抗(dupilumab)产生cho细胞、阿替利珠单抗(atezolizumab)产生cho细胞、贝那利珠单抗(benralizumab)产生cho细胞、伊珠单抗-奥佐米星(inotuzumabozogamicin)产生cho细胞、艾美赛珠单抗(emicizumab)产生cho细胞、古塞库单抗(guselkumab)产生cho细胞、度伐利尤单抗(durvalumab)产生cho细胞、奥比妥珠单抗(obinutuzumab)产生cho细胞、维多珠单抗(vedolizumab)产生cho细胞等的cho细胞；优选为选自曲妥珠单抗产生cho细胞、利妥昔单抗产生cho细胞、英夫利昔单抗产生cho细胞、托珠单抗产生cho细胞、阿达木单抗产生cho细胞和纳武单抗产生cho细胞的cho细胞；更优选为托珠单抗产生cho细胞。

[1-3]上述方案[1]～[1-2]的任一项中，芯层中所含的基材例如为选自胶原溶液、胶原凝胶、培养基(或培养液)、海藻酸溶液(例如海藻酸钠溶液)、海藻酸凝胶、或它们的混合物等的基材；优选为选自胶原溶液、胶原凝胶、培养基(或培养液)、海藻酸溶液、海藻酸凝胶的基材；更优选为胶原溶液或胶原凝胶。

[2]第2方案涉及上述方案[1]～[1-3]中任一项所述的海藻酸凝胶纤维，其中，壳层中所含的海藻酸凝胶的原料为海藻酸钠，海藻酸钠的m/g比为0.4～1.8的范围或0.1～0.4的范围。

[3]第3方案涉及上述方案[1]～[2]中任一项所述的海藻酸凝胶纤维，其中，壳层中所含的海藻酸凝胶的原料为海藻酸钠，海藻酸钠的分子量(gpc)为700,000～1,000,000的范围或800,000～1,000,000的范围。

[4]第4方案涉及上述方案[1]～[3]中任一项所述的海藻酸凝胶纤维，其中，壳层中所含的海藻酸凝胶的原料为海藻酸钠，海藻酸钠的1w/w%的粘度为50～150(mpa·s)的范围或70～150(mpa·s)的范围。

[5]第5方案涉及上述方案[1]～[4]中任一项所述的海藻酸凝胶纤维，其中，海藻酸凝胶纤维的外径例如为0.2μm～2000μm的范围。

[5-1]上述方案[5]中，海藻酸凝胶纤维的外径例如为50μm～1000μm的范围；优选为300μm。

[6]第6方案涉及上述方案[1]～[5-1]中任一项所述的海藻酸凝胶纤维，其中，海藻酸凝胶纤维的芯层的直径例如为0.1μm～1000μm的范围。

[6-1]上述方案[6]中，海藻酸凝胶纤维的芯层的直径例如为10μm～150μm的范围；优选为100μm。

[7]第7方案涉及上述方案[1]～[6-1]中任一项所述的海藻酸凝胶纤维，其中，海藻酸凝胶纤维的外径为0.2μm～2000μm的范围，海藻酸凝胶纤维的芯层的直径为0.1μm～1000μm的范围。

[7-1]上述方案[7]中，例如海藻酸凝胶纤维的外径为50μm～1000μm的范围，海藻酸凝胶纤维的芯层的直径为10μm～150μm的范围；优选海藻酸凝胶纤维的外径为300μm，海藻酸凝胶纤维的芯层的直径为100μm。

[8]第8方案涉及海藻酸凝胶纤维的制造方法，其是将包含抗体产生细胞和基材的芯层用包含海藻酸凝胶的壳层进行包覆而形成的具有高机械强度的海藻酸凝胶纤维的制造方法，其特征在于：

使用微流体装置10，所述微流体装置10包括：导入管40、导入管40的导入口1、位于导入口1的下游的导入管40的导入口2、位于导入口2的下游的导入管40的导入口3、和位于导入口2的下游的导入管40的出口50，

且包括以下步骤：

步骤(1)，从导入口1导入抗体产生细胞6和基材并进行射出，在导入管40内形成抗体产生细胞6和基材的第1层流；

步骤(2)，从导入口2导入海藻酸钠溶液并进行射出，形成覆盖第1层流的外周的海藻酸钠溶液的第2层流；

步骤(3)，从导入口3导入包含二价金属离子的溶液并进行射出，形成覆盖第2层流的外周的包含二价金属离子的溶液的第3层流；以及

步骤(4)，得到将从出口50射出的包含抗体产生细胞和基材的芯层用包含海藻酸凝胶的壳层进行包覆而形成的海藻酸凝胶纤维。

[8-1]上述方案[8]中，抗体产生细胞6例如为上述方案[1-1]所述的细胞，即，例如为选自cho细胞、cho细胞亚株、cos细胞、sp2/0细胞、ns0细胞、sp2细胞、perc6细胞、yb2/0细胞、ye2/0细胞、1r983f细胞、namalwa细胞、wil-2细胞、jurkat细胞、vera细胞、molt-4细胞、293-hek细胞、bhk细胞、kgh6细胞、p3x63ag8.653细胞、c127细胞、jc细胞、la7细胞、zr-45-30细胞、htert细胞、nm2c5细胞、uacc-812细胞等的细胞；优选为选自cho细胞、cho细胞亚株、cos细胞、sp2/0细胞、ns0细胞、sp2细胞和perc6细胞的细胞；更优选为选自cho细胞、sp2/0细胞和ns0的细胞；进一步优选为cho细胞。

[8-2]上述方案[8]或[8-1]中，海藻酸凝胶纤维的芯层中所含的抗体产生细胞为cho细胞，cho细胞例如为选自莫罗单抗-cd3产生cho细胞、曲妥珠单抗产生cho细胞、利妥昔单抗产生cho细胞、帕利珠单抗产生cho细胞、英夫利昔单抗产生cho细胞、巴利昔单抗产生cho细胞、托珠单抗产生cho细胞、吉妥珠单抗奥佐米星产生cho细胞、贝伐珠单抗产生cho细胞、替伊莫单抗产生cho细胞、阿达木单抗产生cho细胞、西妥昔单抗产生cho细胞、兰尼单抗产生cho细胞、奥马珠单抗产生cho细胞、依库珠单抗产生cho细胞、帕尼单抗产生cho细胞、乌司奴单抗产生cho细胞、戈利木单抗产生cho细胞、卡那单抗产生cho细胞、地诺单抗产生cho细胞、莫格利珠单抗产生cho细胞、赛妥珠单抗产生cho细胞、奥法木单抗产生cho细胞、帕妥珠单抗产生cho细胞、曲妥珠单抗-美坦新偶联物产生cho细胞、贝伦妥单抗-维多汀产生cho细胞、那他珠单抗产生cho细胞、纳武单抗产生cho细胞、阿仑珠单抗产生cho细胞、苏金单抗产生cho细胞、雷莫芦单抗产生cho细胞、伊匹木单抗产生cho细胞、依洛尤单抗产生cho细胞、美泊利单抗产生cho细胞、阿利珠单抗产生cho细胞、依奇珠单抗产生cho细胞、柏达鲁单抗产生cho细胞、依达赛珠单抗产生cho细胞、埃罗妥珠单抗产生cho细胞、帕博利珠单抗产生cho细胞、沙利鲁单抗产生cho细胞、贝洛托舒单抗产生cho细胞、贝利木单抗产生cho细胞、达雷木单抗产生cho细胞、阿维鲁单抗产生cho细胞、度匹鲁单抗产生cho细胞、阿替利珠单抗产生cho细胞、贝那利珠单抗产生cho细胞、伊珠单抗-奥佐米星产生cho细胞、艾美赛珠单抗产生cho细胞、古塞库单抗产生cho细胞、度伐利尤单抗产生cho细胞、奥比妥珠单抗产生cho细胞、维多珠单抗产生cho细胞等的cho细胞；优选为选自曲妥珠单抗产生cho细胞、利妥昔单抗产生cho细胞、英夫利昔单抗产生cho细胞、托珠单抗产生cho细胞、阿达木单抗产生cho细胞和纳武单抗产生cho细胞的cho细胞；更优选为托珠单抗产生cho细胞。

[8-3]上述方案[8]～[8-2]的任一项中，芯层中所含的基材为：

例如，选自胶原溶液、胶原凝胶、培养基(或培养液)、海藻酸溶液(例如海藻酸钠溶液)、海藻酸凝胶、和它们的混合物等的基材；

优选为选自胶原溶液、胶原凝胶、培养基(或培养液)、海藻酸溶液、和海藻酸凝胶的基材；

更优选为胶原溶液或胶原凝胶。

[8-4]上述方案[8]～[8-3]的任一项中，二价金属离子例如为选自钙离子、镁离子、钡离子、锶离子、锌离子等的离子；优选为钙离子。

[8-5]上述方案[8]～[8-4]的任一项中，包含二价金属离子的溶液例如为选自氯化钙水溶液、碳酸钙水溶液、葡萄糖酸钙水溶液等的水溶液；优选为氯化钙水溶液。

[8-6]上述方案[8]～[8-5]的任一项中，包含二价金属离子的溶液的二价金属离子的浓度例如为1mm～1m的范围、或50～500mm的范围；优选为100mm。

[8-7]上述方案[8]～[8-6]的任一项中，从微流体装置10的导入口1射出的抗体产生细胞6和基材的流速例如为10～500μl/分钟的范围。

[8-8]上述方案[8]～[8-7]的任一项中，从微流体装置10的导入口2射出的海藻酸钠溶液的流速例如为10～500μl/分钟的范围。

[8-9]上述方案[8]～[8-8]的任一项中，从微流体装置10的导入口3射出的包含二价金属离子的溶液的流速例如为1～10ml/分钟的范围。

[8-10]上述方案[8]～[8-9]的任一项中，例如，从微流体装置10的导入口1射出的抗体产生细胞6和基材的流速为10～500μl/分钟的范围，从微流体装置10的导入口2射出的海藻酸钠溶液的流速为10～500μl/分钟的范围，从微流体装置10的导入口3射出的包含二价金属离子的溶液的流速为1～10ml/分钟的范围。

[8-11]上述方案[8]～[8-10]的任一项中，海藻酸凝胶纤维的制法时的温度例如为4～25℃的范围。

[9]第9方案涉及抗体的制造方法，其是使用将包含抗体产生细胞和基材的芯层用包含海藻酸凝胶的壳层进行包覆而形成的海藻酸凝胶纤维的抗体的制造方法，通过将上述方案[1]～[7-1]中任一项所述的海藻酸凝胶纤维装入培养容器中，添加培养基使上述海藻酸凝胶纤维浸渍，进行振荡培养，从而形成抗体。

[9-1]上述方案[9]中，培养容器例如为选自三角烧瓶、t-烧瓶、旋转烧瓶等的容器；优选为三角烧瓶。

[9-2]上述方案[9]或[9-1]中，振荡培养的条件例如在37℃、5%co2培养箱内为125rpm。

[9-3]上述方案[9]～[9-2]的任一项中，进行振荡培养的期间例如为30天；或12天；或28天。

[9-4]上述方案[9]～[9-3]的任一项中，抗体产生细胞例如为上述方案[1-1]所述的细胞，即，例如为选自cho细胞、cho细胞亚株、cos细胞、sp2/0细胞、ns0细胞、sp2细胞、perc6细胞、yb2/0细胞、ye2/0细胞、1r983f细胞、namalwa细胞、wil-2细胞、jurkat细胞、vera细胞、molt-4细胞、293-hek细胞、bhk细胞、kgh6细胞、p3x63ag8.653细胞、c127细胞、jc细胞、la7细胞、zr-45-30细胞、htert细胞、nm2c5细胞、uacc-812细胞等的细胞；优选为选自cho细胞、cho细胞亚株、cos细胞、sp2/0细胞、ns0细胞、sp2细胞和perc6细胞的细胞；更优选为选自cho细胞、sp2/0细胞和ns0的细胞；进一步优选为cho细胞。

[9-5]上述方案[9]～[9-4]的任一项中，抗体产生细胞为cho细胞，cho细胞例如为选自莫罗单抗-cd3产生cho细胞、曲妥珠单抗产生cho细胞、利妥昔单抗产生cho细胞、帕利珠单抗产生cho细胞、英夫利昔单抗产生cho细胞、巴利昔单抗产生cho细胞、托珠单抗产生cho细胞、吉妥珠单抗奥佐米星产生cho细胞、贝伐珠单抗产生cho细胞、替伊莫单抗产生cho细胞、阿达木单抗产生cho细胞、西妥昔单抗产生cho细胞、兰尼单抗产生cho细胞、奥马珠单抗产生cho细胞、依库珠单抗产生cho细胞、帕尼单抗产生cho细胞、乌司奴单抗产生cho细胞、戈利木单抗产生cho细胞、卡那单抗产生cho细胞、地诺单抗产生cho细胞、莫格利珠单抗产生cho细胞、赛妥珠单抗产生cho细胞、奥法木单抗产生cho细胞、帕妥珠单抗产生cho细胞、曲妥珠单抗-美坦新偶联物产生cho细胞、贝伦妥单抗-维多汀产生cho细胞、那他珠单抗产生cho细胞、纳武单抗产生cho细胞、阿仑珠单抗产生cho细胞、苏金单抗产生cho细胞、雷莫芦单抗产生cho细胞、伊匹木单抗产生cho细胞、依洛尤单抗产生cho细胞、美泊利单抗产生cho细胞、阿利珠单抗产生cho细胞、依奇珠单抗产生cho细胞、柏达鲁单抗产生cho细胞、依达赛珠单抗产生cho细胞、埃罗妥珠单抗产生cho细胞、帕博利珠单抗产生cho细胞、沙利鲁单抗产生cho细胞、贝洛托舒单抗产生cho细胞、贝利木单抗产生cho细胞、达雷木单抗产生cho细胞、阿维鲁单抗产生cho细胞、度匹鲁单抗产生cho细胞、阿替利珠单抗产生cho细胞、贝那利珠单抗产生cho细胞、伊珠单抗-奥佐米星产生cho细胞、艾美赛珠单抗产生cho细胞、古塞库单抗产生cho细胞、度伐利尤单抗产生cho细胞、奥比妥珠单抗产生cho细胞、维多珠单抗产生cho细胞等的cho细胞；优选为选自曲妥珠单抗产生cho细胞、利妥昔单抗产生cho细胞、英夫利昔单抗产生cho细胞、托珠单抗产生cho细胞、阿达木单抗产生cho细胞和纳武单抗产生cho细胞的细胞；更优选为托珠单抗产生cho细胞。

[10]第10方案涉及在通过上述方案[9]～[9-5]中任一项所述的抗体的制造方法得到的海藻酸凝胶纤维的芯层中产生且透过壳层的抗体为具有选自igg、iga、igm、igd和ige等的同种型的抗体。

[10-1]上述方案[10]中，在芯层中产生且透过壳层的抗体所具有的同种型优选为igg或ige；更优选为igg。

[11]第11方案涉及在通过上述方案[9]～[9-5]中任一项所述的抗体的制造方法得到的海藻酸凝胶纤维的芯层中产生且透过壳层的抗体的分子量为45,000～900,000的范围的抗体。

[11-1]上述方案[11]中，在芯层中产生且透过壳层的抗体的分子量优选为45,000～160,000的范围；更优选为140,000～150,000的范围。

[12]第12方案涉及通过上述方案[9]～[9-5]中任一项所述的抗体的制造方法得到的抗体是如下抗体：

例如，使用莫罗单抗-cd3产生cho细胞时为莫罗单抗-cd3，使用曲妥珠单抗产生cho细胞时为曲妥珠单抗，使用利妥昔单抗产生cho细胞时为利妥昔单抗，使用帕利珠单抗产生cho细胞时为帕利珠单抗，使用英夫利昔单抗产生cho细胞时为英夫利昔单抗，使用巴利昔单抗产生cho细胞时为巴利昔单抗，使用托珠单抗产生cho细胞时为托珠单抗，使用吉妥珠单抗奥佐米星产生cho细胞时为吉妥珠单抗奥佐米星，使用贝伐珠单抗产生cho细胞时为贝伐珠单抗，使用替伊莫单抗产生cho细胞时为替伊莫单抗，使用阿达木单抗产生cho细胞时为阿达木单抗，使用西妥昔单抗产生cho细胞时为西妥昔单抗，使用兰尼单抗产生cho细胞时为兰尼单抗，使用奥马珠单抗产生cho细胞时为奥马珠单抗，使用依库珠单抗产生cho细胞时为依库珠单抗，使用帕尼单抗产生cho细胞时为帕尼单抗，使用乌司奴单抗产生cho细胞时为乌司奴单抗，使用戈利木单抗产生cho细胞时为戈利木单抗，使用卡那单抗产生cho细胞时为卡那单抗，使用地诺单抗产生cho细胞时为地诺单抗，使用莫格利珠单抗产生cho细胞时为莫格利珠单抗，使用赛妥珠单抗产生cho细胞时为赛妥珠单抗，使用奥法木单抗产生cho细胞时为奥法木单抗，使用帕妥珠单抗产生cho细胞时为帕妥珠单抗，使用曲妥珠单抗-美坦新偶联物产生cho细胞时为曲妥珠单抗-美坦新偶联物，使用贝伦妥单抗-维多汀产生cho细胞时为贝伦妥单抗-维多汀，使用那他珠单抗产生cho细胞时为那他珠单抗，使用纳武单抗产生cho细胞时为纳武单抗，使用阿仑珠单抗产生cho细胞时为阿仑珠单抗，使用苏金单抗产生cho细胞时为苏金单抗，使用雷莫芦单抗产生cho细胞时为雷莫芦单抗，使用伊匹木单抗产生cho细胞时为伊匹木单抗，使用依洛尤单抗产生cho细胞时为依洛尤单抗，使用美泊利单抗产生cho细胞时为美泊利单抗，使用阿利珠单抗产生cho细胞时为阿利珠单抗，使用依奇珠单抗产生cho细胞时为依奇珠单抗，使用柏达鲁单抗产生cho细胞时为柏达鲁单抗，使用依达赛珠单抗产生cho细胞时为依达赛珠单抗，使用埃罗妥珠单抗产生cho细胞时为埃罗妥珠单抗，使用帕博利珠单抗产生cho细胞时为帕博利珠单抗，使用沙利鲁单抗产生cho细胞时为沙利鲁单抗，使用贝洛托舒单抗产生cho细胞时为贝洛托舒单抗，使用贝利木单抗产生cho细胞时为贝利木单抗，使用达雷木单抗产生cho细胞时为达雷木单抗，使用阿维鲁单抗产生cho细胞时为阿维鲁单抗，使用度匹鲁单抗产生cho细胞时为度匹鲁单抗，使用阿替利珠单抗产生cho细胞时为阿替利珠单抗，使用贝那利珠单抗产生cho细胞时为贝那利珠单抗，使用伊珠单抗-奥佐米星产生cho细胞时为伊珠单抗-奥佐米星，使用艾美赛珠单抗产生cho细胞时为艾美赛珠单抗，使用古塞库单抗产生cho细胞时为古塞库单抗，使用度伐利尤单抗产生cho细胞时为度伐利尤单抗，使用奥比妥珠单抗产生cho细胞时为奥比妥珠单抗，或者使用维多珠单抗产生cho细胞时为维多珠单抗。

[12-1]上述方案[12]中，作为可利用上述方案[9]～[9-5]中任一项所述的抗体的制造方法产生的抗体，优选的是，使用曲妥珠单抗产生cho细胞时为曲妥珠单抗，使用利妥昔单抗产生cho细胞时为利妥昔单抗，使用英夫利昔单抗产生cho细胞时为英夫利昔单抗，使用托珠单抗产生cho细胞时为托珠单抗，使用阿达木单抗产生cho细胞时为阿达木单抗，或者使用纳武单抗产生cho细胞时为纳武单抗；更优选的是，使用托珠单抗产生cho细胞时为托珠单抗。

以下，详细地进行说明。

1.海藻酸：

本说明书中，在记载为海藻酸的情况下，是指选自海藻酸、海藻酸酯、和它们的盐(例如海藻酸钠)的至少1种海藻酸(有时称为“海藻酸类”)。使用的海藻酸可以来自天然也可以是合成物，但优选来自天然。优选使用的海藻酸类是由巨藻属(lessonia)、巨藻类(macrocystis)、海带属(laminaria)、泡叶藻(ascophyllum)、公牛藻(durvillaea)、杜父鱼(sculpin)、荒布(arame，褐色海带)、昆布等褐藻类提取的生物体内吸收性的多糖类，是d-甘露糖醛酸(m)和l-古罗糖醛酸(g)这两种糖醛酸以直链状聚合而得到的聚合物。更具体而言，是d-甘露糖醛酸的均聚物组分(mm组分)、l-古罗糖醛酸的均聚物组分(gg组分)和d-甘露糖醛酸与l-古罗糖醛酸随机排列而得到的组分(m/g组分)任意结合而成的嵌段共聚物。

海藻酸钠可使用市售品的海藻酸钠。例如，海藻酸钠可使用下表中记载的a-1、a-2、a-3、b-1、b-2或b-3的海藻酸钠(销售商持田制药株式会社)。各海藻酸钠的1w/w%(质量%)的水溶液的粘度、重均分子量和m/g等见表1。

[表1]

上述海藻酸钠a-1、a-2和a-3的各物性值通过下述的各种方法进行测定，但测定方法并不限于该方法。

[海藻酸钠的粘度测定]

按照日本药典(第16版)的粘度测定法，利用旋转粘度计法(椎板型旋转粘度计)进行测定。具体的测定条件如下。样品溶液的调制使用milliq水来进行。测定仪器使用椎板型旋转粘度计(粘度粘弹性测定装置rheostressrs600(thermohaakegmbh)传感器：35/1)。测定1w/w%(质量%)海藻酸钠溶液时转速设为1rpm。读取时间测定2分钟，取从开始1分钟到2分钟的平均值。以3次测定的平均值作为测定值。测定温度设为20℃。

[海藻酸钠的重均分子量测定]

利用(1)凝胶渗透层析(gpc)和(2)gpc-mals这两种测定方法进行测定。测定条件如下。

[前处理方法]

在样品中加入洗脱液进行溶解后，用0.45μm薄膜滤器进行过滤，以所得滤液作为测定溶液。

(1)凝胶渗透层析(gpc)测定

[测定条件(相对分子量分布测定)]

柱：tskgelgmpw-xl×2+g2500pw-xl(7.8mmi.d.×300mm×3根)；

洗脱液：200mm的硝酸钠水溶液；

流量：1.0ml/分钟；

浓度：0.05%；

检测器：ri检测器；

柱温：40℃；

注入量：200μl；

分子量标准：标准普鲁兰多糖(pullulan)、葡萄糖。

(2)gpc-mals测定

[折射率增量(dn/dc)测定(测定条件)]

示差折射率计：optilabt-rex；

测定波长：658nm；

测定温度：40℃；

溶剂：200mm的硝酸钠水溶液；

样品浓度：0.5～2.5mg/ml(5种浓度)。

[测定条件(绝对分子量分布测定)]

柱：tskgelgmpw-xl×2+g2500pw-xl(7.8mmi.d.×300mm×3根)；

洗脱液：200mm的硝酸钠水溶液；

流量：1.0ml/分钟；

浓度：0.05%；

检测器：ri检测器、光散射检测器(mals)；

柱温：40℃；

注入量：200μl。

本说明书中，在海藻酸、海藻酸衍生物、交联海藻酸、和交联海藻酸的分子量中，有时标记da(道尔顿)作为单位。

海藻酸类的d-甘露糖醛酸与l-古罗糖醛酸的构成比(m/g比)主要根据海藻等作为来源的生物的种类而不同，另外还受到其生物的生长场所或季节的影响，从m/g比为约0.2的高g型到m/g比为约5的高m型遍及宽范围。已知海藻酸类的凝胶化能力和所生成的凝胶的性质受到m/g比的影响，通常在g比率高的情况下，离子交联海藻酸的凝胶强度变高。除此以外，m/g比还受到凝胶的硬度、脆性、吸水性、柔软性等的影响。使用的海藻酸类和/或其盐的m/g比例如为0.4～1.8的范围，或者为0.1～0.4的范围。

本说明书中，用“～”表示的数值范围表示分别包含“～”前后所记载的数值作为最小值和最大值的范围。

对使用的“海藻酸酯”、“海藻酸盐”没有特别限定，但为了与交联剂进行反应，要求不具有阻碍交联反应的官能团。作为海藻酸酯，可优选列举海藻酸丙二醇酯等。

作为海藻酸盐，例如可列举：海藻酸的一价盐、海藻酸的二价盐。作为海藻酸的一价盐，优选列举海藻酸钠、海藻酸钾、海藻酸铵等，更优选为海藻酸钠或海藻酸钾，特别优选为海藻酸钠。作为海藻酸的二价盐，优选列举海藻酸钙、海藻酸镁、海藻酸钡、海藻酸锶等。

海藻酸为高分子多糖类，准确地确定分子量较为困难，通常以重均分子量计为1000～1000万、优选为1万～800万、更优选为2万～300万的范围。在来自天然物的高分子物质的分子量测定中，已知其值可根据测定方法而产生差异。

在若干个方案中，通过凝胶渗透层析(gpc)或凝胶过滤层析(还将这些统称为尺寸排阻层析)测定的海藻酸的重均分子量例如为300,000～400,000的范围、700,000～1,000,000的范围、1,100,000～1,700,000的范围、400,000～500,000的范围、800,000～1,000,000的范围、或1,500,000～1,900,000的范围。

例如，通过凝胶渗透层析(gpc)或凝胶过滤层析(还将这些统称为尺寸排阻层析)测定的重均分子量如下：例如，海藻酸a-1为300,000～400,000的范围；海藻酸a-2为700,000～1,000,000的范围；海藻酸a-3为1,100,000～1,700,000的范围；海藻酸b-1为400,000～500,000的范围；海藻酸b-2为800,000～1,000,000的范围；海藻酸b-3为1,500,000～1,900,000的范围。

在优选方案中，通过凝胶渗透层析(gpc)或凝胶过滤层析(还将这些统称为尺寸排阻层析)测定的海藻酸的重均分子量为700,000～1,000,000的范围、或800,000～1,000,000的范围。

优选为海藻酸a-2的700,000～1,000,000的范围、或海藻酸b-2的800,000～1,000,000的范围。

另外，例如可根据gpc-mals法测定绝对重均分子量。

在若干个方案中，通过gpc-mals法测定的重均分子量(绝对分子量)例如为60,000～80,000的范围、100,000～200,000的范围、200,000～400,000的范围、70,000～90,000的范围、100,000～200,000的范围、或200,000～350,000的范围。

例如通过gpc-mals法测定的重均分子量(绝对分子量)如下：例如，海藻酸a-1为60,000～80,000的范围；海藻酸a-2为100,000～200,000的范围；海藻酸a-3为200,000～400,000的范围；海藻酸b-1为70,000～90,000的范围；海藻酸b-2为100,000～200,000的范围；海藻酸b-3为200,000～350,000的范围。

在优选方案中，通过gpc-mals法测定的重均分子量(绝对分子量)为100,000～200,000的范围。

优选为海藻酸a-2的100,000～200,000的范围、或海藻酸b-2的100,000～200,000的范围。

通常，在利用如上所述的方法计算高分子多糖类的分子量的情况下，可产生10%～20%的测定误差。例如，如果是40万，则可在32万～48万左右的范围产生值的变化；如果是50万，则可在40万～60万左右的范围产生值的变化；如果是100万，则可在80万～120万左右的范围产生值的变化。

海藻酸类的分子量的测定可按照常规方法进行测定。

在分子量测定中采用凝胶过滤层析的情况下的代表性的条件如上所述。柱例如可使用superose6increase10/300gl柱(gehealthcarescience公司)，例如可使用包含0.15mol/lnacl的10mmol/l的磷酸缓冲液(ph7.4)作为展开溶剂，可使用蓝色葡聚糖、甲状腺球蛋白、铁蛋白、醛縮酶、伴清蛋白、卵清蛋白、核糖核酸酶a和抑肽酶作为分子量标准。

对本说明书中使用的海藻酸的粘度没有特别限定，在以1w/w%的海藻酸类水溶液的形式测定粘度的情况下，例如，海藻酸a-1为10～40(mpa·s)的范围；海藻酸a-2为50～150(mpa·s)的范围；海藻酸a-3为300～600(mpa·s)的范围；海藻酸b-1为10～40(mpa·s)的范围；海藻酸b-2为70～150(mpa·s)的范围；海藻酸b-3为400～600(mpa·s)的范围。

优选为海藻酸a-2的50～150(mpa·s)的范围、或海藻酸b-2的70～150(mpa·s)的范围。

海藻酸水溶液的粘度测定可按照常规方法进行测定。例如，可使用旋转粘度计法的同轴双圆筒形旋转粘度计、单一圆筒形旋转粘度计(布氏粘度计)、圆锥-平板形旋转粘度计(椎板型粘度计)等进行测定。优选希望遵照日本药典(第16版)的粘度测定法。更优选使用椎板型粘度计。

海藻酸类在由褐藻类提取之初分子量大、粘度高，但在基于热的干燥、纯化等过程中分子量变小，粘度降低。通过制造步骤的温度等条件管理、作为原料的褐藻类的选择、制造步骤中的分子量的分馏等方法，可制造分子量不同的海藻酸类。而且，通过与具有不同的分子量或粘度的另一批次的海藻酸类混合，还可成为具有目标分子量的海藻酸类。

在其他的若干个方案中，对用于形成海藻酸凝胶纤维的芯层或壳层的海藻酸(海藻酸钠)没有特别限定，例如可从上述表1所记载的海藻酸钠a-1、a-2、a-3、b-1、b-2或b-3中选择。使用上述海藻酸钠调整的海藻酸钠溶液的浓度例如为0.1～2.0质量%(w/w%)的范围。另外，用于形成壳层的海藻酸钠优选为a-2或b-2，另外，使用该海藻酸钠调整的海藻酸钠溶液的浓度优选为1.5质量%(w/w%)。

在若干个方案中，对用于形成海藻酸凝胶纤维的芯层或壳层的海藻酸(海藻酸钠)没有特别限定，还可混合胶原溶液或培养基(或培养液)等进行使用。

尚需说明的是，海藻酸钠溶液、胶原溶液等中使用的溶剂如后所述。

2.海藻酸凝胶(壳层)

海藻酸溶液通过二价金属离子成为形成部分交联的海藻酸凝胶(离子交联海藻酸)。

通过与二价金属离子接触而形成海藻酸凝胶的时间例如为瞬间(例如1～5秒)～数小时(例如1～3小时)。

对用于得到上述海藻酸凝胶的二价金属离子没有特别限定，例如可列举：钙离子、镁离子、钡离子、锶离子、锌离子等，优选为钙离子。

对包含二价金属离子的溶液没有特别限定，例如可列举：包含钙离子的溶液(例如氯化钙水溶液、碳酸钙水溶液、葡萄糖酸钙水溶液等的水溶液)，优选为氯化钙水溶液。

对包含二价金属离子的溶液的二价金属离子浓度(例如钙离子浓度)没有特别限定，例如为1mm～1m的范围、或5mm～500mm的范围，更优选为100mm。

如上所述，上述方法中使用的海藻酸，其凝胶强度等物性根据其分子量或m/g比、以及作为溶液的海藻酸浓度、钙离子浓度而不同。因此，具有高机械强度的所期望的凝胶、例如具有较芯层高的机械强度的所期望的凝胶可通过调节这些来制造。

对壳层中的海藻酸溶液、包含二价金属离子的溶液等中的溶剂也没有特别限定，例如可分别独立地列举：自来水、纯水(例如蒸馏水、离子交换水、ro水、ro-edi水等)、超纯水(milliq水)、培养基(即细胞培养用培养基(或培养液))、磷酸缓冲生理盐水(pbs)和生理盐水等，优选为超纯水。

3.海藻酸凝胶纤维

“海藻酸凝胶纤维”是指含有芯层和包含海藻酸凝胶的壳层的纤维状结构体。图1显示作为具有芯/壳结构的纤维而形成的海藻酸凝胶纤维的一个例子的截面图。该海藻酸凝胶纤维其外径为c，包含直径a的芯层5和厚度c的壳层4，芯层5中包含抗体产生细胞6和基材，壳层4包含海藻酸凝胶。

这里，海藻酸凝胶纤维的芯层中所含的基材和构成壳层的基材(即海藻酸凝胶)可以是不同的基材，或者可以是同一基材。若干个方案的海藻酸凝胶纤维是包含抗体产生细胞和胶原(溶剂或凝胶)的芯层用包含海藻酸凝胶的壳层包覆而形成的纤维、即芯层中所含的基材和构成壳层的基材不同的纤维。

“海藻酸凝胶纤维”具有上述的芯/壳结构(通过中心轴的中空部分结构)，海藻酸凝胶纤维的外径例如为0.2μm～2000μm左右(但外径并不限于该径)，由于纤维状的结构体中具有该结构，因此这里有时也称为“海藻酸中空微纤维”。

作为与海藻酸凝胶纤维的中心轴垂直的方向的截面形状，可以是圆形、椭圆形或多边形(例如四边形、五边形等)等各种各样的形状，优选为如图1所示的圆形的截面形状。

对海藻酸凝胶纤维的芯层(中空部)的直径没有特别限定，例如为0.1μm～1000μm的范围，或者可以是10μm～150μm的范围，优选为100μm。尚需说明的是，壳层的内径与芯层的直径相等。

关于海藻酸凝胶纤维的壳层的厚度，壳层的厚度可通过“(海藻酸凝胶纤维的外径﹣芯层的直径)/2”而求得。

对海藻酸凝胶纤维的外径没有特别限定，例如为0.2μm～2000μm的范围，或者可以是50μm～1000μm的范围，优选为300μm。

在若干个方式中，海藻酸凝胶纤维的芯层的直径为100μm，而且海藻酸凝胶纤维的外径为300μm。此时，壳层的厚度为100μm。

上述的海藻酸凝胶纤维的芯层(中空部)的直径、以及壳层的内径和海藻酸凝胶纤维外径例如是来自基于相位差光学显微镜的图像的测量值，以该海藻酸凝胶纤维的几处的测量值的平均值表示。上述的海藻酸凝胶纤维的芯层和壳层通常具有实质上均匀的厚度，优选各层具有±5%的范围内的厚度均匀性。

对海藻酸凝胶纤维的长度没有特别限定，例如为1mm～200m，例如可以是1cm～50m，优选为1～30m。

本说明书中，在海藻酸凝胶纤维中，作为形成芯层的基材，只要是不具有细胞毒性的基材即可，没有特别限定，例如为选自胶原溶液、胶原凝胶、培养基(或培养液)、海藻酸溶液(例如海藻酸钠溶液)、海藻酸凝胶、和它们的混合物等的基材；优选为选自胶原溶液、胶原凝胶、培养基(或培养液)、海藻酸溶液和海藻酸凝胶的基材；更优选为胶原溶液或胶原凝胶。

本说明书中，芯层由在上述基材中包含抗体产生细胞、且整体为适当浓度的溶液形成。在使用海藻酸钠溶液的情况下，例如为0.1～2.0质量%(w/w%)溶液，优选为1.5质量%(w/w%)溶液；在使用胶原溶液的情况下，例如为0.1～2.0质量%(w/w%)溶液，优选为0.2质量%(w/w%)溶液。

对芯层的基材中使用的溶剂也没有特别限定，例如可列举：自来水、纯水(例如蒸馏水、离子交换水、ro水、ro-edi水等)、超纯水(milliq水)、细胞培养用培养基(或培养液)、磷酸缓冲生理盐水(pbs)、和生理盐水等，优选为超纯水。

本说明书中，在细胞培养用培养基中可使用市售的培养基基材或调制完的培养基、或者自制的培养基。另外，还可使用天然培养基(例如有lb培养基、nutrientbroth(nb，营养肉汤)培养基、大豆酪蛋白消化物培养基(scd培养基)等)或合成培养基(增殖所需的各种营养素均通过化学药品来补充的培养基)。另外，对该培养基没有特别限定，只要是含有细胞的存活增殖所需的成分(无机盐、碳水化合物、激素、必需氨基酸、非必需氨基酸、维生素等)的基础培养基即可，例如可列举：dmem、最小必需培养基(mem，minimumessentialmedium)、rpmi-1640、eagle基础培养基(bme，basalmediumeagle)、杜氏改良eagle培养基(dulbecco'smodifiedeagle'smedium)：nutrientmixturef-12(dmem/f-12)、glasgow最小必需培养基(glasgowmem)、g016培养基等。

另外，上述培养基中可进一步包含血清。对上述血清没有特别限定，例如可列举：fbs/fcs(fetalbovine/calfserum：胎牛/小牛血清)、ncs(newborncalfserum：新生小牛血清)、cs(calfserum：小牛血清)、hs(horseserum：马血清)等。培养基中所含的血清的浓度例如为2质量%以上且10质量%以下。

对海藻酸凝胶纤维的芯层中可包含的抗体产生细胞没有特别限定，例如可从下述细胞中适当选择：cho细胞、cho细胞亚株、cos细胞、sp2/0细胞、ns0细胞、sp2细胞、perc6细胞、yb2/0细胞、ye2/0细胞、1r983f细胞、namalwa细胞、wil-2细胞、jurkat细胞、vera细胞、molt-4细胞、293-hek细胞、bhk细胞、kgh6细胞、p3x63ag8.653细胞、c127细胞、jc细胞、la7细胞、zr-45-30细胞、htert细胞、nm2c5细胞、或uacc-812细胞等(这些细胞还包括可由美国典型培养物保藏中心(americantypeculturecollection)获取的atcc细胞系目录中记载的细胞)。

海藻酸凝胶纤维的芯层中可包含的抗体产生细胞优选为cho细胞、cho细胞亚株、cos细胞、sp2/0细胞、ns0细胞、sp2细胞或perc6细胞，更优选为cho细胞、sp2/0细胞或ns0，进一步优选为cho细胞。

本说明书中，对海藻酸凝胶纤维的芯层中可包含的cho细胞没有特别限定，例如可列举：莫罗单抗-cd3产生cho细胞、曲妥珠单抗产生cho细胞、利妥昔单抗产生cho细胞、帕利珠单抗产生cho细胞、英夫利昔单抗产生cho细胞、巴利昔单抗产生cho细胞、托珠单抗产生cho细胞、吉妥珠单抗奥佐米星产生cho细胞、贝伐珠单抗产生cho细胞、替伊莫单抗产生cho细胞、阿达木单抗产生cho细胞、西妥昔单抗产生cho细胞、兰尼单抗产生cho细胞、奥马珠单抗产生cho细胞、依库珠单抗产生cho细胞、帕尼单抗产生cho细胞、乌司奴单抗产生cho细胞、戈利木单抗产生cho细胞、卡那单抗产生cho细胞、地诺单抗产生cho细胞、莫格利珠单抗产生cho细胞、赛妥珠单抗产生cho细胞、奥法木单抗产生cho细胞、帕妥珠单抗产生cho细胞、曲妥珠单抗-美坦新偶联物产生cho细胞、贝伦妥单抗-维多汀产生cho细胞、那他珠单抗产生cho细胞、纳武单抗产生cho细胞、阿仑珠单抗产生cho细胞、苏金单抗产生cho细胞、雷莫芦单抗产生cho细胞、伊匹木单抗产生cho细胞、依洛尤单抗产生cho细胞、美泊利单抗产生cho细胞、阿利珠单抗产生cho细胞、依奇珠单抗产生cho细胞、柏达鲁单抗产生cho细胞、依达赛珠单抗产生cho细胞、埃罗妥珠单抗产生cho细胞、帕博利珠单抗产生cho细胞、沙利鲁单抗产生cho细胞、贝洛托舒单抗产生cho细胞、贝利木单抗产生cho细胞、达雷木单抗产生cho细胞、阿维鲁单抗产生cho细胞、度匹鲁单抗产生cho细胞、阿替利珠单抗产生cho细胞、贝那利珠单抗产生cho细胞、伊珠单抗-奥佐米星产生cho细胞、艾美赛珠单抗产生cho细胞、古塞库单抗产生cho细胞、度伐利尤单抗产生cho细胞、奥比妥珠单抗产生cho细胞、或维多珠单抗产生cho细胞等。

本说明书中，作为海藻酸凝胶纤维的芯层中可包含的cho细胞，更优选为选自曲妥珠单抗产生cho细胞、利妥昔单抗产生cho细胞、英夫利昔单抗产生cho细胞、托珠单抗产生cho细胞、阿达木单抗产生cho细胞和纳武单抗产生cho细胞的cho细胞，进一步优选为托珠单抗产生cho细胞。

海藻酸凝胶纤维的壳层包含交联海藻酸凝胶(例如来自天然的交联海藻酸凝胶)。该海藻酸凝胶可以是与被包覆的包含抗体产生细胞的芯层相比具有更高或同等的机械强度的凝胶，优选该海藻酸凝胶是与被包覆的包含抗体产生细胞的芯层相比具有更高的机械强度的凝胶。另外，该凝胶对培养时存在于海藻酸凝胶纤维外的培养液(营养源)和氧等成分具有充分的透过性。

关于上述交联海藻酸凝胶的机械强度，可按照本领域技术人员所周知的方法，通过在水中使用拉伸试验机的方法等测定拉伸强度或载荷强度等。上述交联海藻酸凝胶中，根据需要还可添加生物成分或非生物成分。

若干个方案的海藻酸凝胶是通过外部刺激进行凝胶化的海藻酸凝胶。作为外部刺激，例如可列举：二价金属离子的添加(包含二价金属离子的溶液的添加)、氧处理、ph变化、加热、uv照射、放射线照射等，但并不限于这些。优选为二价金属离子。

对上述二价金属离子没有特别限定，例如可列举：钙离子、镁离子、钡离子、锶离子、锌离子等，优选为钙离子。

对上述包含钙离子的溶液没有特别限定，例如可列举：氯化钙水溶液、碳酸钙水溶液、葡萄糖酸钙水溶液等的水溶液，优选为氯化钙水溶液。

优选的是，海藻酸凝胶纤维可在形成该凝胶纤维后的早期阶段浸润于培养液中开始培养。更优选的是，可提供不会使芯层中所含的抗体产生细胞坏死的、芯层的直径大的凝胶纤维。即，利用海藻酸凝胶纤维，可容易地得到具有包含某一定数量抗体产生细胞的芯层的凝胶纤维。

由于包覆芯层的壳层，而无法得到充分的机械强度，因此可有在包覆芯层的阶段壳层崩塌的情况或毁坏的情况。然而，本发明人发现了：通过在包覆芯层的壳层中使用海藻酸(例如来自天然的海藻酸)，利用钙离子使其交联、固化，可得到具有足以包覆芯层的强度、且可供给培养液(营养源)和氧的海藻酸凝胶纤维。在优选方案中，形成壳层的海藻酸凝胶成为具有较芯层高的机械强度的海藻酸凝胶。

因此，海藻酸凝胶纤维是将包含抗体产生细胞和基材的芯层用包含具有高机械强度的海藻酸凝胶的壳层进行包覆而形成的海藻酸凝胶纤维。另外，这里有时还将该海藻酸凝胶纤维称为“将包含抗体产生细胞和基材的芯层用包含钙离子交联海藻酸凝胶的壳层进行包覆而形成的海藻酸凝胶纤维”。

这里，“具有较芯层高的机械强度的海藻酸凝胶”是指，通过在海藻酸凝胶纤维的壳层中使用具有与形成被包覆的芯层的基材(例如选自胶原溶液、胶原凝胶、培养基(或培养液)、海藻酸溶液(例如海藻酸钠溶液)、海藻酸凝胶、和它们的混合物等的基材)相比实质上相同或更高的机械强度的凝胶(例如可列举海藻酸凝胶或琼脂糖凝胶，但并不限于这些)，在包覆芯层的阶段壳层坍塌或毁坏的担心少的海藻酸凝胶。

作为形成壳层的凝胶，优选使用具有在钙离子等金属离子的存在下进行凝胶化的性质的海藻酸凝胶(例如钙离子交联海藻酸凝胶)，从而还可得到具有较芯层高的机械强度的海藻酸凝胶纤维。

关于凝胶的机械强度，可按照本领域技术人员所周知的方法，利用在水中使用拉伸试验机的方法等测定拉伸强度或载荷强度等。

另外，通过比较形成壳层的凝胶和形成芯层的基材的杨氏模量，可确认壳层具有较芯层高的机械强度。例如，作为壳层之一的海藻酸的杨氏模量在1质量%海藻酸中为3.6kpa，在2质量%海藻酸中为6.0kpa(实施例中使用的海藻酸为1.5质量%，可推测为3.6kpa～6.0kpa之间的值)，作为芯层的基材之一的胶原的杨氏模量为0.13kpa，因此在壳层为海藻酸凝胶、形成芯层的基材为胶原溶液或胶原凝胶的海藻酸凝胶纤维中，壳层具有较芯层高的机械强度。

杨氏模量(也称为纵弹性系数或纵弹性模量)是指以通过材料的拉伸试验得到的应力应变线性图中的弹性区(的线性部分)的斜率定义的值，可作为机械强度的指标。作为杨氏模量，例如已知关于以下的各材料的值。1%海藻酸：3.6kpa、2质量%海藻酸：6.0kpa、0.2质量%琼脂糖：0.7kpa、0.5质量%琼脂糖：2.4kpa、1质量%琼脂糖：3.6kpa、2质量%琼脂糖：10.6kpa、5质量%peg-da(聚乙二醇二丙烯酸酯)：0.5kpa、10质量%peg-da：1.1kpa、pdms(聚二甲基硅氧烷)：1783kpa、胶原：0.13kpa(参照annalsofbiomedicalengineering,36(7),第1254-1267页,2008年或labchip,16,第1757-1776页,2016年)。

海藻酸凝胶纤维可以是其两端用海藻酸凝胶等密封而得到的凝胶纤维。通过密封凝胶纤维的两端，牵涉到在培养期间防止芯层漏出到海藻酸凝胶纤维外。

[海藻酸凝胶纤维的制造方法]

这里，提供将包含抗体产生细胞和基材的芯层用包含海藻酸凝胶的壳层进行包覆而形成的海藻酸凝胶纤维的制造方法，该方法包括使用微流体装置。

以下，对将包含抗体产生细胞和基材的芯层用包含海藻酸凝胶的壳层进行包覆而形成的海藻酸凝胶纤维的制作方法进行说明。

对上述海藻酸凝胶纤维的制作方法没有特别限定，使用微流体装置来进行。这里的微流体装置是制作海藻酸凝胶纤维而优选使用的装置。具体而言，微流体装置是用于制作3个导入口、1个出口的微细流路的装置，若以适当的速度向第1导入口流入第1液、向第2导入口流入第2液、和向第3导入口流入第3液，则在第1液与第2液交叉成为一条的流路中，第1液与第2液不会混合，形成2层完美的层流，而且，在其下游与第3液交叉的3种液体形成一条的流路中，第1液、第2液与第3液不会混合，形成3层完美的层流。作为微流体装置，例如可列举如图2所示的双同轴微流体装置(coaxialmicrofluidicdevice)10。

可将2种流体以形成同轴的方式分开射出至芯部和壳部的微流体装置10例如可列举：wonjejeong等人,hydrodynamicmicrofabricationvia“onthefly”photopolymerizationofmicroscalefibersandtubes,labchip,2004,4,第576-580页的图1或例如日本特开2016-77229号公报(申请人：国立大学法人东京大学)的图1或图2中具体记载的装置。在若干个方案中，可使用这些之中记载的微流体装置10的具体例或与其同样的装置，按照同样的制作条件，制造海藻酸凝胶纤维。

如图2所示，微流体装置10包括：导入管40、导入管40的导入口1、位于导入口1的下游的导入管40的导入口2、位于导入口2的下游的导入管40的导入口3、和位于导入口2的下游的导入管40的出口50。

图2是说明海藻酸凝胶纤维的制造过程的1个方案的示意图。作为一个例子，对在芯层的基材中使用胶原溶液、在壳部的基材中使用海藻酸钠溶液的制作方法进行说明。

海藻酸凝胶纤维例如可通过包括下述步骤(1)～(4)的方法来制造。

步骤(1)，从导入口1导入抗体产生细胞6和基材并进行射出，在导入管40内形成抗体产生细胞6和基材的第1层流；

步骤(2)，从导入口2导入海藻酸钠溶液并进行射出，形成覆盖第1层流的外周的海藻酸钠溶液的第2层流；

步骤(3)，从导入口3导入包含二价金属离子的溶液并进行射出，形成覆盖第2层流的外周的包含二价金属离子的溶液的第3层流；以及

步骤(4)，得到将从出口50射出的包含抗体产生细胞和基材的芯层用包含海藻酸凝胶的壳层进行包覆而形成的海藻酸凝胶纤维。

通过进行步骤(1)～(4)，壳层的海藻酸钠溶液进行凝胶化，可制造壳层4中包含钙交联海藻酸凝胶、且芯层5中包含抗体产生细胞6和基材的海藻酸凝胶纤维20。

另外，可将通过上述方法得到的海藻酸凝胶纤维在例如37℃左右下加热数分钟(例如2～5分钟)～约1小时左右，由此可使芯层5的包含抗体产生细胞6的胶原溶液发生凝胶化。

对导入口2和3的溶液的射出速度没有特别限定，在微流体装置10的导入口1的口径为50μm～2mm左右的情况下，例如可以是10～500μl/分钟左右。通过调节导入口2和3的溶液的射出速度，可适当调节芯层的直径和壳层的包覆厚度。例如，若加大导入口2和3的溶液的射出速度，则芯层的直径和壳层的包覆厚度减小，另一方面，若降低射出速度，则芯层的直径和壳层的包覆厚度增大。

从导入口1射出的包含抗体产生细胞6的胶原溶液如下调制。

将由hbss、hepes、nahco3构成的缓冲液以4：1添加在胶原酸性溶液i-pc(株式会社高研、cat#.ipc-50)中，将胶原浓度调制成4mg/ml。之后，以1：1与用培养基调制成规定浓度的细胞悬浮液混合，调制胶原终浓度为2mg/ml(0.2%)的包含抗体产生细胞6的胶原溶液。

对从微流体装置10的导入口1射出的抗体产生细胞6和基材的流速(射出速度)没有特别限定，例如在微流体装置10的口径为50μm～2000μm左右的情况下，可以是10～500μl/分钟左右。

从导入口2射出的海藻酸钠溶液如下调制：例如，使用表1所记载的海藻酸钠，添加培养液(例如cho培养培养基)，调制规定浓度(例如1.5质量%(w/w%))的海藻酸钠溶液。

对从微流体装置10的导入口2射出的海藻酸钠溶液的流速没有特别限定，例如在微流体装置10的口径为50μm～2000μm左右的情况下，可以是10～500μl/分钟左右的范围。

从导入口3射出的包含二价金属离子的溶液如下调制：例如，使用氯化钙，添加milliq水，调制规定浓度(例如100mm)的氯化钙水溶液。

对从微流体装置10的导入口3射出的包含二价金属离子的溶液的流速没有特别限定，例如可以是1～10ml/分钟左右的范围。

对制作的海藻酸凝胶纤维20的外径没有特别限定，如上所述，例如可以是0.2μm～2000μm的范围、或50μm～1000μm的范围，优选为300μm。对中空微纤维200的长度没有特别限定，如上所述，例如可以是数mm～数m左右。作为细胞纤维200的截面形状，如上所述，例如可列举：圆形、椭圆形、四边形或五边形等的多边形等。

在若干个方案中，通过在培养液中培养海藻酸凝胶纤维，可培养抗体产生细胞，产生抗体。海藻酸凝胶纤维通过适当地交换培养液，可连续几个月培养抗体。

[抗体产生细胞的培养方法]

这里，提供抗体的制造方法，该方法包括：使用将包含抗体产生细胞和基材的芯层用包含海藻酸凝胶的壳层进行包覆而形成的海藻酸凝胶纤维。以下，有时将“抗体的制造方法”称为“抗体产生细胞的培养方法”。

根据优选方案的抗体产生细胞的培养方法，在制造将包含抗体产生细胞和基材的芯层用包含海藻酸凝胶的壳层进行包覆而形成的海藻酸凝胶纤维后，立即开始抗体产生细胞的培养。由此，如图3所示，可立即向芯层供给培养液(营养源)和氧。在特别优选的方案中，可在充分防止芯层中的抗体产生细胞的坏死的同时，产生抗体。

以下，对抗体产生细胞的培养方法的一个例子进行具体说明，但并不限于此。将芯层中包含抗体产生细胞的海藻酸凝胶纤维装入125ml聚碳酸酯制三角烧瓶中，添加30ml作为下述表3的组成的培养基，使凝胶纤维浸渍，之后在37℃、5%co2培养箱内边以125rpm振荡边进行培养。关于传代，在培养期间完全没有进行培养基的交换，但每2～3天抽出1.8ml培养基一次，添加1.8mlfeed(irvine公司制造、jxfeed003、含有高浓度的细胞培养中所消耗的葡萄糖或谷氨酰胺等必需营养成分的培养基)，将培养基的总量保持在30ml。

另外，在使用优选方案的海藻酸凝胶纤维的抗体的制造技术中，芯层中所含的抗体产生细胞不会增殖到某一定数量以上，由此对细胞的物理应激少，因此在所封入的抗体产生细胞有可能长期持续产生抗体方面优异。

在特别优选的方案中，有可能使抗体的生产/纯化效率飞跃性地提高(例如，通过使用优选方案的微凝胶纤维，不同于需要大规模的培养罐的悬浮培养，还可利用小规模的生产设备培养抗体)，可期待作为还适合制造少量/多个品种的抗体药物(具体是指抗体药物等)的下一代抗体药物的连续生产技术。

通过培养产生的抗体(例如托珠单抗)可存储在海藻酸凝胶纤维的芯层，优选透过海藻酸凝胶纤维的壳层，存储在海藻酸凝胶纤维外的培养液中。尚需说明的是，抗体的回收/纯化可参照后述记载来进行。

在优选方案中，如图3所示，芯层内产生的抗体透过壳层，依次释放到海藻酸凝胶纤维外，可形成可进行抗体的连续培养的循环。尚需说明的是，此时，代谢物和废物也可释放到海藻酸凝胶纤维外。

实际上，在后述的实施例中，在作为壳层原料的海藻酸钠中使用上述表1中的a-2和b-2的情况下，可确认到所产生的抗体(托珠单抗)存储在芯层和培养液中。

作为培养将包含抗体产生细胞的芯层用海藻酸凝胶进行包覆而形成的海藻酸凝胶纤维的培养容器，例如可列举：三角烧瓶、t-烧瓶、旋转烧瓶等。优选为三角烧瓶，更优选为聚碳酸酯制三角烧瓶。

抗体根据恒定区的结构上的差异，分类为如下述表2所示的类别(同种型)或亚类。

人ig的分类

[表2]

对利用若干个方案的抗体的制造方法通过培养抗体产生细胞而在海藻酸凝胶纤维的芯层内产生且可透过壳层的抗体没有特别限定，例如可列举：具有选自igg、iga、igm、igd、ige等的类别(同种型)的抗体。通过培养抗体产生细胞而在海藻酸凝胶纤维的芯层内产生且可透过壳层的抗体优选为igg或ige的类别(同种型)的抗体，更优选为igg的类别(同种型)的抗体。

对利用若干个方案的抗体的制造方法通过培养抗体产生细胞而在海藻酸凝胶纤维的芯层内产生且可透过壳层的抗体的分子量没有特别限定，例如为处于45,000～900,000的范围的抗体。利用若干个方案的抗体的制造方法在海藻酸凝胶纤维的芯层内产生且可透过壳层的抗体的分子量优选为45,000～160,000的范围，更优选为140,000～150,000的范围。

本说明书中，在使用上述记载的各抗体产生cho细胞按照上述记载的抗体的制造方法进行培养的情况下，产生与使用的抗体产生cho细胞对应的抗体。例如，在使用莫罗单抗-cd3产生cho细胞的情况下，产生莫罗单抗-cd3作为抗体。

作为产生的抗体，例如可列举：使用莫罗单抗-cd3产生cho细胞时为莫罗单抗-cd3(igg；150,000)，使用曲妥珠单抗产生cho细胞时为曲妥珠单抗(igg；148,000)，使用利妥昔单抗产生cho细胞时为利妥昔单抗(igg；144,510)，使用帕利珠单抗产生cho细胞时为帕利珠单抗(igg；“147,700”)，使用英夫利昔单抗产生cho细胞时为英夫利昔单抗(igg；“149,000”)，使用巴利昔单抗产生cho细胞时为巴利昔单抗(igg；147,000)，使用托珠单抗产生cho细胞时为托珠单抗(igg；148,000)，使用吉妥珠单抗奥佐米星产生cho细胞时为吉妥珠单抗奥佐米星(igg；“153,000”)，使用贝伐珠单抗产生cho细胞时为贝伐珠单抗(igg；149,000)，使用替伊莫单抗产生cho细胞时为替伊莫单抗(igg；148,000)，使用阿达木单抗产生cho细胞时为阿达木单抗(igg；148,000)，使用西妥昔单抗产生cho细胞时为西妥昔单抗(igg；151,800)，使用兰尼单抗产生cho细胞时为兰尼单抗(igg；48,000)，使用奥马珠单抗产生cho细胞时为奥马珠单抗(ige；149,000)，使用依库珠单抗产生cho细胞时为依库珠单抗(igg；145,235)，使用帕尼单抗产生cho细胞时为帕尼单抗(igg；147,000)，使用乌司奴单抗产生cho细胞时为乌司奴单抗(igg；148,079～149,690)，使用戈利木单抗产生cho细胞时为戈利木单抗(igg；149,802～151,064)，使用卡那单抗产生cho细胞时为卡那单抗(igg；148,000)，使用地诺单抗产生cho细胞时为地诺单抗(igg；150,000)，使用莫格利珠单抗产生cho细胞时为莫格利珠单抗(igg；149,000)，使用赛妥珠单抗产生cho细胞时为赛妥珠单抗(igg；90,000)，使用奥法木单抗产生cho细胞时为奥法木单抗(igg；149,000)，使用帕妥珠单抗产生cho细胞时为帕妥珠单抗(igg；148,000)，使用曲妥珠单抗-美坦新偶联物产生cho细胞时为曲妥珠单抗-美坦新偶联物(igg；151,000)，使用贝伦妥单抗-维多汀产生cho细胞时为贝伦妥单抗-维多汀(igg；153,000)，使用那他珠单抗产生cho细胞时为那他珠单抗(igg；146,178)，使用纳武单抗产生cho细胞时为纳武单抗(igg；145,000)，使用阿仑珠单抗产生cho细胞时为阿仑珠单抗(igg；150,000)，使用苏金单抗产生cho细胞时为苏金单抗(igg；151,000)，使用雷莫芦单抗产生cho细胞时为雷莫芦单抗(igg；147,000)，使用伊匹木单抗产生cho细胞时为伊匹木单抗(igg；148,000)，使用依洛尤单抗产生cho细胞时为依洛尤单抗(igg；141,789)，使用美泊利单抗产生cho细胞时为美泊利单抗(igg；149,000)，使用阿利珠单抗产生cho细胞时为阿利珠单抗(igg；145892.049.)，使用依奇珠单抗产生cho细胞时为依奇珠单抗(igg；149,000)，使用柏达鲁单抗产生cho细胞时为柏达鲁单抗(igg；147,000)，使用依达赛珠单抗产生cho细胞时为依达赛珠单抗(igg；47,782)，使用埃罗妥珠单抗产生cho细胞时为埃罗妥珠单抗(igg；148,000)，使用帕博利珠单抗产生cho细胞时为帕博利珠单抗(igg；149,000)，使用沙利鲁单抗产生cho细胞时为沙利鲁单抗(igg；150,000)，使用贝洛托舒单抗产生cho细胞时为贝洛托舒单抗(igg；148,000)，使用贝利木单抗产生cho细胞时为贝利木单抗(igg；147,000)，使用达雷木单抗产生cho细胞时为达雷木单抗(igg；148,000)，使用阿维鲁单抗产生cho细胞时为阿维鲁单抗(igg；147,000)，使用度匹鲁单抗产生cho细胞时为度匹鲁单抗(igg；152,000)，使用阿替利珠单抗产生cho细胞时为阿替利珠单抗(igg；144,611)，使用贝那利珠单抗产生cho细胞时为贝那利珠单抗(igg；148,000)，使用伊珠单抗-奥佐米星产生cho细胞时为伊珠单抗-奥佐米星(igg；159,000)，使用艾美赛珠单抗产生cho细胞时为艾美赛珠单抗(igg；148,000)，使用古塞库单抗产生cho细胞时为古塞库单抗(igg；146,000)，使用度伐利尤单抗产生cho细胞时为度伐利尤单抗(igg；149,000)，使用奥比妥珠单抗产生cho细胞时为奥比妥珠单抗(igg；148,000～150,000)，或者使用维多珠单抗产生cho细胞时为维多珠单抗(igg；150,000)(抗体名称后的括号内显示该抗体的类别(同种型)和分子量)。

所产生的抗体例如经过下述的3个步骤进行纯化。

[步骤1]利用离心分离法或滤器进行过滤等，以大致除去培养基中所含的除抗体以外的蛋白质和固态物。

[步骤2]例如通过使用了蛋白a或蛋白g的亲和层析、或离子交换层析等层析取出目标抗体。

[步骤3]进行凝胶过滤层析以去除步骤2中混入的杂质，对目标抗体进行高纯度的纯化。

使用了蛋白a或蛋白g的亲和层析：

作为igg的纯化方法，例如已知使用了蛋白a或蛋白g的抗体的纯化方法。作为使用了蛋白a的抗体的纯化方法，可列举下述方法作为一个例子。(1)使用填充了固定有蛋白a的珠粒的柱，过滤在通过上述[步骤1]的方法得到的溶液中添加血清而得到的溶液，从而使igg与柱中的珠粒结合，其他血清成分流出柱外。(2)之后，通过使酸性溶液通过柱，用尽与珠粒结合的igg，将其洗脱到柱外，得到igg。尚需说明的是，由于ig与蛋白a和蛋白g的结合力根据动物种或亚类而不同，所以可根据目的分开使用蛋白a或蛋白g。

离子交换层析：

其是利用蛋白质所具有的电性质(电荷)来分离蛋白质的方法。显示正电荷的碱性蛋白质与带负电荷的阳离子交换体(载体)进行离子结合，显示负电荷的酸性蛋白质与带正电荷的阴离子交换体结合，因此通过使包含蛋白质的样品通过填充有离子交换体的柱，蛋白质与离子交换体结合。之后，通过使通过柱的溶剂的盐浓度达到高浓度，蛋白质与离子交换体的离子结合减弱，自结合力弱的蛋白质起依次从离子交换体上脱离，流出柱外。阳离子交换体或阴离子交换体的选择是从用作样品的蛋白质的电荷中选择。

凝胶过滤层析：

其是利用蛋白质的分子量的不同来分离蛋白质的方法。通过使样品流过填充有带小孔的载体的柱，分子量小的蛋白质边进入上述小孔边流出，分子量大的蛋白质不进入上述小孔而流出，因此在通过柱的时间上分子量小的蛋白质慢、而分子量大的蛋白质快，由此可根据时间差分离蛋白质。

尚需说明的是，本说明书中引用的所有文献和公开公报、专利公报、其他专利文献均作为参照而纳入本说明书。本说明书包含作为本申请的优先权主张的基础的日本专利申请即日本特愿2018-151574号(2018年8月10日申请)的权利要求书、说明书和附图的公开内容。

实施例

以下，通过实施例来说明本发明，但本发明并不限于以下的实施例。

[实施例1]海藻酸凝胶纤维a的制法

按照图2中示意性地显示的制造过程，与日本特开2016-77229号公报(申请人：国立大学法人东京大学)中记载的海藻酸凝胶纤维的制作条件同样地操作，制作了海藻酸凝胶纤维a。细胞使用托珠单抗产生cho细胞。从微流体装置10的导入口1导入包含细胞浓度为1×10⁶个细胞/ml(2×10⁵个细胞/1根25m的纤维)的细胞的0.2质量%胶原溶液(5mg胶原酸性溶液i-pc、ph3.0、无菌atelocollag(株式会社高研、cat#.ipc-50)溶剂)，从导入口2导入1.5质量%(w/w%)海藻酸钠(a-2持田制药)溶液(溶剂：作为下述表3的组成的培养基)，从导入口3导入100mm的氯化钙水溶液并进行射出，从而得到了芯层直径为约100μm、外径为约300μm、全长为25m的海藻酸凝胶纤维a。

[实施例2]海藻酸凝胶纤维b的制法

按照图2中示意性地显示的制造过程，与日本特开2016-77229号公报(申请人：国立大学法人东京大学)中记载的海藻酸凝胶纤维的制作条件同样地操作，制作了海藻酸凝胶纤维b。细胞使用托珠单抗产生cho细胞。从微流体装置10的导入口1导入包含细胞浓度为5×10⁶个细胞/ml(1×10⁶个细胞/1根25m的纤维)的细胞的0.2%胶原溶液(5mg胶原酸性溶液i-pc、ph3.0、无菌atelocollag(株式会社高研、cat#.ipc-50)溶剂)，从导入口2导入1.5质量%(w/w%)海藻酸钠(b-2持田制药)溶液(溶剂：作为下述表3的组成的培养基)，从导入口3导入100mm的氯化钙水溶液并进行射出，从而制作了芯层直径为约100μm、外径为约300μm、全长为25m的海藻酸凝胶纤维b。

[实施例3]海藻酸凝胶纤维a中的托珠单抗产生cho细胞的培养

在125ml聚碳酸酯制三角烧瓶中装入实施例1中得到的海藻酸凝胶纤维a(外径300μm×长度25m、纤维体积(外形部分)约1.8ml)，添加30ml作为下述表3的组成的培养基，使纤维浸渍。在37℃、5%co2培养箱内边以125rpm振荡边实施12天的培养。通过进行12天的培养，确认到产生抗体(托珠单抗)，并释放到纤维外液中。所产生的抗体为托珠单抗可通过使用了人il-6受体a(peprotech,cat#200-06rc)的elisa测定进行确认。另外，由本实验结果发现了：所产生的抗体可透过至纤维外。培养12天后的海藻酸凝胶纤维的显微镜照片见图4。

培养基组成：在g016培养基中加入下表的各种添加物，将总量调制成1000ml。

[表3]

[实施例4]海藻酸凝胶纤维b中的托珠单抗产生cho细胞的培养

在125ml聚碳酸酯制三角烧瓶中装入实施例2中得到的海藻酸凝胶纤维b(外径300μm×长度25m、纤维体积(外形部分)约1.8ml)，添加30ml作为上述表3的组成的培养基，使纤维浸渍。在37℃、5%co2培养箱内边以125rpm振荡边实施28天的培养。通过进行28天的培养，产生4.77mg抗体(托珠单抗)。所产生的抗体为托珠单抗通过使用了人il-6受体a(peprotech,cat#200-06rc)的elisa测定进行确认。另外，由本实验结果发现了：所产生的抗体可透过至纤维外。培养28天后的海藻酸凝胶纤维的显微镜照片见图5。

产业实用性

这里，提供在芯层中包含抗体产生细胞的抗体生产用的海藻酸凝胶纤维(海藻酸中空微纤维)。另外，还可提供该海藻酸凝胶纤维的制造方法、和使用了该海藻酸凝胶纤维的抗体的培养方法。

符号说明

a：海藻酸凝胶纤维的芯层(中空部)的直径；

b：海藻酸凝胶纤维的壳层的厚度；

c：海藻酸凝胶纤维的外径；

4：壳层；

5：芯层；

6：抗体产生细胞；

10：微流体装置；

1：包含抗体产生细胞6的基材的导入口；

2：海藻酸钠溶液的导入口；

3：氯化钙溶液的导入口；

20：海藻酸凝胶纤维；

40：导入管；

50：出口。