先花铃子香素A衍生物与其药物组合物及其制备方法和应用与流程

本发明属于药物技术领域，具体涉及到先花铃子香素a衍生物1-13，以其为有效成分的药物组合物，其制备方法，及该类衍生物及其药物组合物在制备α-葡萄糖苷酶抑制药物和治疗糖尿病药物或保健食品中的应用。

背景技术：

糖尿病(diabetesmellitus)是一组由遗传与环境因素相互作用而引起的常见的内分泌代谢性疾病，主要是由于胰岛素分泌的绝对或相对不足以及靶细胞对胰岛素敏感性降低而引起的糖、脂肪和蛋白质代谢紊乱。糖尿病人常会出现多尿，口渴，持续饥饿，体重减轻，视力改变和疲劳等症状。临床上以空腹时血糖浓度大于7.0mmol/l，一天中任意时间血糖值大于11.1mmol/l以及餐后2h，血糖浓度大于11.1mmol/l这三种症状作为糖尿病的判定依据。根据世界卫生组织(who)的报导，全球糖尿病病人数量呈持续上涨趋势，1980年为1.08亿到2014年已增至4.22亿，全球18岁以上成人糖尿病患病率从1980年的4.7％增加到2014年的8.5％。在2015年，糖尿病估计直接造成了160万例死亡，世界卫生组织预测2030年糖尿病将成为第七位主要死因。

糖尿病根据其病因和发病机理可以分为1型糖尿病和2型糖尿病。1型糖尿病主要与遗传、环境因素有关，加之嗜胰腺病毒感染、化学物质损害、胰岛β细胞产生自身免疫炎性反应，结果导致胰岛β细胞破坏，胰岛素分泌绝对缺乏。2型糖尿病是血糖水平增高的慢性代谢紊乱疾病。胰岛素敏感性受损，相对胰岛素不足，内源性胰岛素不足。胰岛素产生，但胰岛素作用效果差，胰岛素绝对缺乏(胰岛素缺乏和胰岛素抵抗)。

糖尿病患者需要终身服用降血糖药物来维持血糖处于正常水平，根据作用机制的不同，糖尿病药物可以分为胰岛素及其类似物，胰岛素促进剂，胰岛素增敏剂和α-葡萄糖苷酶抑制剂。α-葡萄糖苷酶是一种小肠酶，主要将碳水化合物水解为可吸收的葡萄糖和其他单糖。抑制α-葡萄糖苷酶可以减缓碳水化合物的消化控制餐后血糖。因此，α-葡萄糖苷酶抑制剂可以用来治疗或者延缓2型糖尿病。目前上市的α-葡萄糖苷酶抑制剂仅有阿卡波糖、米格列醇和伏格列波糖。但是它们会引起肝毒性，造成胃肠道不适。因此，寻找新的有效的α-葡萄糖苷酶抑制剂非常重要。长久以来，许多天然来源的化合物用于治疗多种疾病而且它们往往副作用小。因此从天然产物中寻找α-葡萄糖苷酶抑制剂是非常有意义的。

先花铃子香素a是先花铃子香的主成分，在本发明人之前的研究中发现其对α-葡萄糖苷酶有抑制作用。迄今，现有技术中没有先花铃子香素a衍生物的报道，没有先花铃子香素a及其衍生物作为药物组合物的报道，没有先花铃子香素a衍生物及其组合物作为α-葡萄糖苷酶抑制剂的报道，也没有先花铃子香素a衍生物及其组合物作为治疗糖尿病药物和保健食品的报道。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一类新的具有药用价值的先花铃子香素a衍生物1-13，以其为有效成分的药物组合物，其制备方法，及该类衍生物及其药物组合物在制备α-葡萄糖苷酶抑制药物和在制备治疗糖尿病的药物或保健食品中的应用。

为了实现本发明的上述目的，本发明提供了以下的技术方案：

结构式(i)所示的先花铃子香素a衍生物1-13，

先花铃子香素a衍生物1-13在制备α-葡萄糖苷酶抑制剂中的应用。

先花铃子香素a衍生物1-13在制备降血糖药物或保健食品中的应用。

一种药物组合物，其包括先花铃子香素a衍生物1-13中的至少一种和药学上可接受的载体或赋型剂。

所述药物组合物在制备α-葡萄糖苷酶抑制剂中的应用。

所述药物组合物在制备降血糖药物或保健食品中的应用。

制备结构式(i)所示先花铃子香素a衍生物1-13的方法，以化合物先花铃子香素a为反应原料，合成先花铃子香素a衍生物1-13。

根据所述的制备方法，

其中1e-肟-先花铃子香素b(1)的合成方法为：

称取先花铃子香素b溶于2.2ml的乙醇-水(10:1)，搅拌情况下依次加入盐酸羟胺(nh2oh·hcl,19.5mg,0.280mmol)和三水合醋酸钠(ch3coona·3h2o,19.5mg,0.280mmol)，80℃下搅拌反应至tlc检测不到原料，反应结束后冷至室温，减压回收溶剂，乙酸乙酯溶解，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗产物经硅胶柱层析，用丙酮-石油醚(10:90，v/v)洗脱得化合物1；

19-甲酯先花铃子香素a(2)的合成方法为：

称取先花铃子香素a溶于重蒸的四氢呋喃(0.55ml)，氮气条件下依次加入四丁基氟化铵(tbaf,13.8mg,0.053mmol,0.1m四氢呋喃溶液)和碘甲烷(mei，7.5mg,0.053mmol,0.1m四氢呋喃溶液)，反应液在室温下搅拌反应直至通过tlc检测不到原料，减压回收溶剂，硅胶柱层析，用丙酮-石油醚(1:99,v/v)洗脱得化合物2；

15α-羟基-先花铃子香素a(3)的合成方法为：

称取先花铃子香素a溶于1.5ml的二氯甲烷，搅拌情况下依次加入二氧化硒(seo2,9.3mg,0.084mmol)和叔丁基过氧化氢(t-buooh，21.7mg,23.2μl,0.240mmol)，反应液在室温下搅拌反应2h后用饱和na2s2o3溶液淬灭，二氯甲烷萃取，回收有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，减压回收溶剂，粗产物经硅胶柱层析，丙酮-石油醚(10:90,v/v)洗脱得化合物3；

先花铃子香素e(4)的合成方法为：

称取先花铃子香素a溶于2ml甲醇-水(3:2)的混合溶液，搅拌情况下加入高碘酸钠(29.7mg,0.139mmol)和四氧化锇(35μl,2％水溶液,0.002mmol)，室温反应过夜，饱和na2s2o3溶液淬灭，乙酸乙酯萃取，回收有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，减压回收溶剂得粗产物，硅胶柱层析，丙酮-石油醚(10:90,v/v)洗脱得化合物4；

16α,17-二氢-先花铃子香素a(5)的合成方法为：

氮气环境下，10％pd/c(6mg)加入三颈瓶中，经注射器向反应瓶内注入先花铃子香素a(20mg,0.056mmol)的乙醇溶液(1.0ml)，反应瓶内置换为氢气，室温下搅拌反应过夜。反应液经硅藻土过滤，二氯甲烷洗涤。减压浓缩滤液得粗产物，硅胶柱层析，丙酮-石油醚(10:90,v/v)得化合物5；

1-丁酰基-16α,17-二氢-先花铃子香素b(6)的合成方法为：

称取16α,17-二氢-先花铃子香素b溶于干燥的吡啶(1.5ml)，搅拌情况下加入丁酸酐(0.5ml)，室温下反应过夜，反应液用乙酸乙酯稀释，依次用5％盐酸和饱和食盐水洗涤，回收有机相，无水硫酸钠干燥，抽滤，减压浓缩，粗产物经硅胶柱层析，丙酮-石油醚(4:96,v/v)的化合物6；

1-苯甲酰基-16α,17-二氢-先花铃子香素b(11)的合成方法为：

称取16α,17-二氢-先花铃子香素b溶于干燥的吡啶(1.5ml)，搅拌情况下加入苯甲酸酐(0.31mmol)，80℃反应24h，反应液用乙酸乙酯稀释，依次用5％盐酸和饱和食盐水洗涤，回收有机相，无水硫酸钠干燥，抽滤，减压浓缩，粗产物经硅胶柱层析，丙酮-石油醚(15:85)的化合物7；

先花铃子香素a衍生物7-10，12-13的合成方法为：

称取相应的酸酐溶于2.0ml无水二氯甲烷，冰浴条件下依次加入dcc(27.3mg,0.132mmol)和dmap(0.8mg,0.006mmol)，10min后，加入16α,17-二氢-先花铃子香素b，撤除冰浴，tlc监测反应进度，待反应完成，过滤反应液，二氯甲烷洗涤，浓缩滤液，粗产物经硅胶柱层析，丙酮-石油醚洗脱得化合物7-10和12-13。

本发明化合物用作药物时，可以直接使用，或者以药物组合物的形式使用。该药物组合物含有0.1-99％，优选0.5-90％的本发明化合物中的至少一种，其余为药物学上可接受的，对人和动物无毒和惰性的可药用载体和/或赋形剂。

所述的药用载体或赋形剂是一种或多种固体、半固体和液体稀释剂、填料以及药物制品辅剂。将本发明的药物组合物以单位体重服用量的形式使用。本发明的药物可经注射(静注、肌注)和口服两种形式给药。

附图说明

图1为本发明先花铃子香素a衍生物1-13的结构示意图。

具体实施方式

下面结合附图，用本发明中的实施例，对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1

实验仪器：

核磁共振谱(¹hand¹³c)在400mhz核磁共振谱仪(bruker,bremerhaven,germany)上测定，以tms(四甲基硅烷)为内标。熔点和旋光分别再在x-4b熔点仪(上海精密科学仪器有限公司)和jascomodel1020圆二色谱仪(horiba,tokyl,japan)上测定。hrms在lc/ms-it-tof质谱仪(shimadzu,kyoto,japan)上测定。所有的化合物通过硅胶柱层析进行纯化(200-300目，青岛美高集团有限公司)。所有的反应试剂和溶剂均购自于正规厂商。

衍生物的制备及表征：

1e-肟-先花铃子香素b(1)的合成方法：

称取先花铃子香素b(22.0mg,0.070mmol)溶于2.2ml的乙醇-水(10:1)，搅拌情况下依次加入盐酸羟胺(nh2oh·hcl,19.5mg,0.280mmol)和三水合醋酸钠(ch3coona·3h2o,19.5mg,0.280mmol)。80℃下搅拌反应至tlc检测不到原料。反应结束后冷至室温，减压回收溶剂，乙酸乙酯溶解，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。粗产物经硅胶柱层析，用丙酮-石油醚(10:90，v/v)洗脱得化合物1(21.1mg,收率91％)。

1e-肟-先花铃子香素b(1)结构数据：

分子式：c20h29no3

分子量：331.21

性状：白色蓬松固体

熔点：196.0～197.0℃

hresims(+)m/z:实验值332.2205([m+h]⁺)，计算值332.2196

旋光：(c0.13,meoh)

¹h-nmr和¹³c-nmr数据：¹hnmr(400mhz,cd3od)δ3.28(1h,ddd,j＝13.9hz,4.7hz,2.5hz,h-2),2.63(1h,brs,h-13),4.80(1h,brs,h-17),4.74(1h,brs,h-17),1.21(3h,s,h-18),1.25(3h,s,h-20)；¹³cnmr(100mhz,cd3od)δ164.8(c＝n,c-1),21.8(ch2,c-2),37.3(ch2,c-3),43.6(c,c-4),58.4(ch,c-5),21.6(ch2,c-6),40.8(ch2,c-7),43.8(c,c-8),45.7(ch,c-9),47.7(c,c-10),17.3(ch2,c-11),33.0(ch2,c-12),43.5(ch,c-13),39.9(ch2,c-14),48.9(ch2,c-15),155.5(c,c-16),102.2(ch2,c-17),27.4(ch3,c-18),179.7(c,c-19),14.9(ch3,c-20).

19-甲酯先花铃子香素a(2)的合成方法：

称取先花铃子香素a(16.0mg,0.044mmol)溶于重蒸的四氢呋喃(0.55ml)，氮气条件下依次加入四丁基氟化铵(tbaf,13.8mg,0.053mmol,0.1m四氢呋喃溶液)和碘甲烷(mei，7.5mg,0.053mmol,0.1m四氢呋喃溶液)。反应液在室温下搅拌反应直至通过tlc检测不到原料。减压回收溶剂，硅胶柱层析，用丙酮-石油醚(1:99,v/v)洗脱得化合物2(15.8mg,收率96％)。

19-甲酯先花铃子香素a(2)结构数据：

分子式：c23h34o4

分子量：374.25

性状：白色固体

熔点：120.0～123.0℃

hresims(+)m/z:实验值397.2349([m+na]⁺)，计算值397.2457

旋光：(c0.19,meoh)

¹h-nmr和¹³c-nmr数据：¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ4.59(1h,dd,j＝11.6hz,4.8hz,h-1),2.61(1h,brs,h-13),4.78(1h,brs,h-17),4.71(1h,brs,h-17),1.02(3h,s,h-18),1.17(3h,s,h-20),2.00(3h,s,h-2'),3.67(3h,s,-ome)；¹³cnmr(100mhz,cdcl3)δ84.4(ch,c-1),25.7(ch2,c-2),35.5(ch2,c-3),43.4(c,c-4),55.8(ch,c-5),21.5(ch2,c-6),41.8(ch2,c-7),43.6(c,c-8),54.0(ch,c-9),44.8(c,c-10),19.8(ch2,c-11),33.2(ch2,c-12),43.5(ch,c-13),40.3(ch2,c-14),48.5(ch2,c-15),155.7(c,c-16),103.0(ch2,c-17),28.5(ch3,c-18),177.4(c,c-19),11.9(ch3,c-20),170.5(c,c-1'),21.9(ch3,c-2'),51.4(-ome).

15α-羟基-先花铃子香素a(3)的合成方法：

称取先花铃子香素a(20mg,0.056mmol)溶于1.5ml的二氯甲烷，搅拌情况下依次加入二氧化硒(seo2,9.3mg,0.084mmol)和叔丁基过氧化氢(t-buooh，21.7mg,23.2μl,0.240mmol)。反应液在室温下搅拌反应2h后用饱和na2s2o3溶液淬灭。二氯甲烷萃取，回收有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，减压回收溶剂。粗产物经硅胶柱层析，丙酮-石油醚(10:90,v/v)洗脱得化合物3(26.8mg,收率85％)。

15α-羟基-先花铃子香素a(3)结构数据：

分子式：c22h32o5

分子量：376.22

性状：白色固体

熔点：271.0～274.0℃

hresims(-)m/z:实验值375.2132([m-h]^－)，计算值375.2118

旋光：(c0.12,meoh)

¹h-nmr和¹³c-nmr数据：¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ4.62(1h,dd,j＝11.6hz,4.8hz,h-1),2.74(1h,brs,h-13),3.84(1h,s,h-15),5.19(1h,s,h-17),5.06(1h,s,h-17),1.26(3h,s,h-18),1.16(3h,s,h-20),2.01(3h,s,h-2')；¹³cnmr(100mhz,cdcl3)δ84.3(ch,c-1),25.7(ch2,c-2),35.1(ch2,c-3),43.3(c,c-4),55.7(ch,c-5),20.5(ch2,c-6),35.5(ch2,c-7),48.4(c,c-8),52.5(ch,c-9),44.0(c,c-10),19.7(ch2,c-11),32.6(ch2,c-12),42.1(ch,c-13),37.0(ch2,c-14),82.0(ch,c-15),160.2(c,c-16),108.3(ch2,c-17),28.8(ch3,c-18),183.1(c,c-19),12.3(ch3,c-20),170.4(c,c-1'),21.8(ch3,c-2').

先花铃子香素e(4)的合成方法：

称取先花铃子香素a(20mg,0.056mmol)溶于2ml甲醇-水(3:2)的混合溶液，搅拌情况下加入高碘酸钠(29.7mg,0.139mmol)和四氧化锇(35μl,2％水溶液,0.002mmol)。室温反应过夜，饱和na2s2o3溶液淬灭，乙酸乙酯萃取。回收有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，减压回收溶剂得粗产物，硅胶柱层析，丙酮-石油醚(10:90,v/v)洗脱得化合物4(13.8mg,收率68％)。

先花铃子香素e(4)结构数据：

分子式：c21h30o5

分子量：362.21

性状：白色固体

熔点：232.3～235.3℃

hresims(-)m/z:实验值361.1966([m-h]^－)，计算值361.1962

旋光：(c0.13,meoh)

¹h-nmr和¹³c-nmr数据：¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ4.63(1h,dd,j＝11.6hz,4.8hz,h-1),2.40(1h,brs,h-13),1.28(3h,s,h-18),1.22(3h,s,h-20),2.02(3h,s,h-2')；¹³cnmr(100mhz,cdcl3)δ84.1(ch,c-1),25.5(ch2,c-2),35.1(ch2,c-3),42.9(c,c-4),55.5(ch,c-5),20.2(ch2,c-6),41.5(ch2,c-7),43.3(c,c-8),52.9(ch,c-9),43.9(c,c-10),20.2(ch2,c-11),29.4(ch2,c-12),47.4(ch,c-13),37.8(ch2,c-14),54.4(ch2,c-15),221.8(c,c-16),28.8(ch3,c-18),182.9(c,c-19),12.6(ch3,c-20),170.3(c,c-1'),21.8(ch3,c-2').

16α,17-二氢-先花铃子香素a(5)的合成方法：

氮气环境下，10％pd/c(6mg)加入三颈瓶中，经注射器向反应瓶内注入先花铃子香素a(20mg,0.056mmol)的乙醇溶液(1.0ml)。反应瓶内置换为氢气，室温下搅拌反应过夜。反应液经硅藻土过滤，二氯甲烷洗涤。减压浓缩滤液得粗产物，硅胶柱层析，丙酮-石油醚(10:90,v/v)得化合物5(18.0mg,收率89％)。

16α,17-二氢-先花铃子香素a(5)结构数据：

分子式：c22h34o4

分子量：362.25

性状：白色固体

熔点：188.8～189.0℃

hresims(-)m/z:实验值361.2334([m-h]^－)，计算值361.2384

旋光：(c0.11,meoh)

¹h-nmr和¹³c-nmr数据：¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ4.60(1h,dd,j＝11.6hz,4.8hz,h-1),0.97(3h,d,j＝7.2hz,h-17),1.23(3h,s,h-18),1.14(3h,s,h-20),2.03(3h,s,h-2')；¹³cnmr(100mhz,cdcl3)δ84.4(ch,c-1),25.6(ch2,c-2),35.2(ch2,c-3),43.3(c,c-4),55.7(ch,c-5),21.7(ch2,c-6),42.6(ch2,c-7),45.4(c,c-8),55.4(ch,c-9),43.8(c,c-10),20.1(ch2,c-11),26.1(ch2,c-12),39.6(ch,c-13),41.5(ch2,c-14),48.2(ch2,c-15),34.5(ch,c-16),15.6(ch3,c-17),28.7(ch3,c-18),183.3(c,c-19),12.1(ch3,c-20),170.6(c,c-1'),21.9(ch3,c-2').

1-丁酰基-16α,17-二氢-先花铃子香素b(6)的合成方法：

称取16α,17-二氢-先花铃子香素b(20mg,0.063mmol)溶于干燥的吡啶(1.5ml)，搅拌情况下加入丁酸酐(0.5ml)，室温下反应过夜。反应液用乙酸乙酯稀释，依次用5％盐酸和饱和食盐水洗涤，回收有机相，无水硫酸钠干燥，抽滤，减压浓缩。粗产物经硅胶柱层析，丙酮-石油醚(4:96,v/v)的化合物6(10.6mg,收率43％)。

1-丁酰基-16α,17-二氢-先花铃子香素b(6)结构数据：

分子式：c24h38o4

分子量：390.28

性状：白色固体

熔点：123.5～126.0℃

hresims(-)m/z:实验值389.2655([m-h]^－)，计算值389.2850

旋光：(c0.12,meoh)

¹h-nmr和¹³c-nmr数据：¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ4.61(1h,dd,j＝11.5hz,4.9hz,h-1),0.96(3h,m,h-17),1.23(3h,s,h-18),1.14(3h,s,h-20),1.25(3h,s,h-4')；¹³cnmr(100mhz,cdcl3)δ84.0(ch,c-1),25.6(ch2,c-2),35.2(ch2,c-3),43.2(c,c-4),55.7(ch,c-5),21.7(ch2,c-6),42.6(ch2,c-7),45.4(c,c-8),55.5(ch,c-9),43.8(c,c-10),20.2(ch2,c-11),26.1(ch2,c-12),39.7(ch,c-13),41.4(ch2,c-14),48.2(ch2,c-15),34.5(ch,c-16),15.6(ch3,c-17),28.8(ch3,c-18),183.2(c,c-19),12.3(ch3,c-20),173.0(c,c-1'),37.1(ch2,c-2'),18.3(ch2,c-3'),13.7(ch3,c-4').

1-苯甲酰基-16α,17-二氢-先花铃子香素b(11)的合成方法：

称取16α,17-二氢-先花铃子香素b(20mg,0.063mmol)溶于干燥的吡啶(1.5ml)，搅拌情况下加入苯甲酸酐(0.31mmol)，80℃反应24h。反应液用乙酸乙酯稀释，依次用5％盐酸和饱和食盐水洗涤，回收有机相，无水硫酸钠干燥，抽滤，减压浓缩。粗产物经硅胶柱层析，丙酮-石油醚(15:85)的化合物7(10.6mg,收率51％)。

1-苯甲酰基-16α,17-二氢-先花铃子香素b(11)结构数据：

分子式：c27h36o4

分子量：390.28

性状：白色固体

熔点：199.2～203.5℃

hresims(-)m/z:实验值423.2487([m-h]^－)，计算值423.2541

旋光：(c0.12,meoh)

¹h-nmr和¹³c-nmr数据：¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ4.88(1h,dd,j＝11.2hz,4.8hz,h-1),0.90(3h,d,j＝7.1hz,h-17),1.33(3h,s,h-18),1.28(3h,s,h-20),8.03(2h,m,h-3',7'),7.56(1h,t,j＝7.2hz,h-5'),7.44(2h,m,h-4',6'),；¹³cnmr(100hz,cdcl3)δ84.7(ch,c-1),25.7(ch2,c-2),35.2(ch2,c-3),43.3(c,c-4),55.8(ch,c-5),21.8(ch2,c-6),42.6(ch2,c-7),45.5(c,c-8),55.7(ch,c-9),44.2(c,c-10),20.3(ch2,c-11),26.0(ch2,c-12),39.7(ch,c-13),41.4(ch2,c-14),48.2(ch2,c-15),34.6(ch,c-16),15.5(ch3,c-17),28.8(ch3,c-18),183.7(c,c-19),12.7(ch3,c-20),165.7(c,c-1'),131.0(c,c-2'),129.6(ch,c-3',7'),128.4(ch,c-4',6'),132.8(ch,c-5').

化合物7-10，12-13的合成方法：

称取相应的酸酐溶于2.0ml无水二氯甲烷，冰浴条件下依次加入dcc(27.3mg,0.132mmol)和dmap(0.8mg,0.006mmol)。10min后，加入16α,17-二氢-先花铃子香素b(20mg,0.063mmol)。撤除冰浴，tlc监测反应进度，待反应完成，过滤反应液，二氯甲烷洗涤，浓缩滤液。粗产物经硅胶柱层析，丙酮-石油醚洗脱得化合物7-10和12-13。

1-辛酰基-16α,17-二氢-先花铃子香素b(7)结构数据：

分子式：c28h46o4

分子量：446.34

性状：白色固体

熔点：70.1～73.9℃

hresims(+)m/z:实验值469.3290([m+na]⁺)，计算值469.3289

旋光：(c0.29,meoh)

收率：80％

¹h-nmr和¹³c-nmr数据：¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ4.61(1h,dd,j＝11.4hz,4.9hz,h-1),0.97(3h,d,j＝7.1hz,h-17),1.23(3h,s,h-18),1.14(3h,s,h-20),0.88(3h,m,h-8')；¹³cnmr(100mhz,cdcl3)δ84.0(ch,c-1),25.6(ch2,c-2),35.2(ch2,c-3),43.3(c,c-4),55.7(ch,c-5),21.7(ch2,c-6),42.6(ch2,c-7),45.4(c,c-8),55.5(ch,c-9),43.8(c,c-10),20.3(ch2,c-11),26.1(ch2,c-12),39.7(ch,c-13),41.4(ch2,c-14),48.2(ch2,c-15),34.5(ch,c-16),15.6(ch3,c-17),28.8(ch3,c-18),183.6(c,c-19),12.2(ch3,c-20),173.2(c,c-1'),35.2(ch2,c-2'),31.7,29.1,29.0,24.8,22.6(ch2×5,c-3'～c-7'),14.1(ch3,c-8').

1-硬脂酰基-16α,17-二氢-先花铃子香素b(8)结构数据：

分子式：c38h66o4

分子量：586.50

性状：白色固体

熔点：72.3～74.5℃

hresims(+)m/z:实验值609.4851([m+na]⁺)，计算值609.4853

旋光：(c0.45,chcl3)

收率：74％

¹h-nmr和¹³c-nmr数据：¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ4.61(1h,dd,j＝11.4hz,4.8hz,h-1),0.97(3h,d,j＝6.8hz,h-17),1.25(3h,s,h-18),1.14(3h,s,h-20),0.88(3h,m,h-18')；¹³cnmr(100mhz,cdcl3)δ84.0(ch,c-1),25.6(ch2,c-2),35.2(ch2,c-3),43.3(c,c-4),55.7(ch,c-5),21.7(ch2,c-6),42.6(ch2,c-7),45.4(c,c-8),55.5(ch,c-9),43.8(c,c-10),20.3(ch2,c-11),26.1(ch2,c-12),39.7(ch,c-13),41.4(ch2,c-14),48.2(ch2,c-15),34.5(ch,c-16),15.6(ch3,c-17),28.8(ch3,c-18),183.7(c,c-19),12.3(ch3,c-20),173.2(c,c-1'),35.2(ch2,c-2'),31.9-29.3,24.8,22.7(ch2×15,c-3'～c-17'),14.1(ch3,c-18').

1-(e-2'-硬脂酰基)-16α,17-二氢-先花铃子香素b(9)结构数据：

分子式：c28h44o4

分子量：444.32

性状：白色固体

熔点：89.0～92.5℃

hresims(-)m/z:实验值443.3114([m-h]^－)，计算值443.3167

旋光：(c0.14,chcl3)

收率：86％

¹h-nmr和¹³c-nmr数据：¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ4.66(1h,dd,j＝11.5hz,5.0hz,h-1),0.96(3h,d,j＝6.9hz,h-17),1.24(3h,s,h-18),1.18(3h,s,h-20),5.80(1h,d,j＝15.1hz,h-2'),6.92(1h,dt,j＝15.1hz,6.9hzh-3'),0.90(3h,m,h-8')；¹³cnmr(100mhz,cdcl3)δ83.9(ch,c-1),25.6(ch2,c-2),35.2(ch2,c-3),43.3(c,c-4),55.7(ch,c-5),21.7(ch2,c-6),42.6(ch2,c-7),45.4(c,c-8),55.6(ch,c-9),44.0(c,c-10),20.2(ch2,c-11),26.1(ch2,c-12),39.7(ch,c-13),41.4(ch2,c-14),48.2(ch2,c-15),34.6(ch,c-16),15.6(ch3,c-17),28.8(ch3,c-18),183.8(c,c-19),12.4(ch3,c-20),166.1(c,c-1'),121.9(ch,c-2'),149.6(ch,c-3'),32.2(ch2,c-4'),27.7(ch2,c-5'),31.3(ch2,c-6'),22.4(ch2,c-7'),14.0(ch3,c-8').

1-环己甲酰基-16α,17-二氢-先花铃子香素b(10)结构数据：

分子式：c27h42o4

分子量：430.31

性状：白色固体

熔点：185.3～187.7℃

hresims(-)m/z:实验值429.3000([m-h]^－)，计算值429.3010

旋光：

收率：74％

¹h-nmr和¹³c-nmr数据：¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ4.61(1h,dd,j＝11.4hz,4.9hz,h-1),0.97(3h,d,j＝7.0hz,h-17),1.23(3h,s,h-18),1.15(3h,s,h-20)；¹³cnmr(100mhz,cdcl3)δ83.6(ch,c-1),25.8(ch2,c-2),35.2(ch2,c-3),43.3(c,c-4),55.7(ch,c-5),21.8(ch2,c-6),42.6(ch2,c-7),45.4(c,c-8),55.7(ch,c-9),43.9(c,c-10),20.3(ch2,c-11),26.0(ch2,c-12),39.7(ch,c-13),41.4(ch2,c-14),48.2(ch2,c-15),34.6(ch,c-16),15.6(ch3,c-17),28.8(ch3,c-18),183.6(c,c-19),12.5(ch3,c-20),175.3(c,c-1'),43.8(ch,c-2'),29.0(ch2,c-3'),25.6(ch2,c-4'),25.4(ch2,c-5'),25.6(ch2,c-6'),28.6(ch2,c-7').

1-肉桂酰基-16α,17-二氢-先花铃子香素b(12)结构数据：

分子式：c29h38o4

分子量：450.28

性状：白色固体

熔点：105.2～107.3℃

hresims(-)m/z:实验值449.2688([m-h]^－)，计算值449.2697

旋光：(c0.17,meoh)

收率：74％

¹h-nmr和¹³c-nmr数据：¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ4.76(1h,dd,j＝11.5hz,4.9hz,h-1),0.94(3h,d,j＝7.0hz,h-17),1.24(3h,s,h-18),1.26(3h,s,h-20),6.43(1h,d,j＝16.0hz,h-2'),7.66(1h,d,j＝16.0hz,h-3'),7.54(2h,m,h-5',h-9'),7.39(3h,m,h-6',h-7',h-8')；¹³cnmr(100mhz,cdcl3)δ84.4(ch,c-1),25.8(ch2,c-2),35.3(ch2,c-3),43.3(c,c-4),55.7(ch,c-5),21.8(ch2,c-6),42.6(ch2,c-7),45.5(c,c-8),55.6(ch,c-9),44.1(c,c-10),20.3(ch2,c-11),26.1(ch2,c-12),39.7(ch,c-13),41.5(ch2,c-14),48.2(ch2,c-15),34.6(ch,c-16),15.6(ch3,c-17),28.8(ch3,c-18),183.6(c,c-19),12.4(ch3,c-20),166.4(c,c-1'),118.9(ch,c-2'),144.7(ch,c-3'),134.4(c,c-4'),128.1(ch,c-5',c-9'),130.3(ch,c-6',c-8'),128.9(ch,c-7').

1-烟酰基-16α,17-二氢-先花铃子香素b(13)结构数据：

分子式：c26h35no4

分子量：425.26

性状：白色固体

熔点：99.0～106.0℃

hresims(+)m/z:实验值426.2667([m+h]⁺)，计算值426.2679

旋光：(c0.05,meoh)

收率：56％

¹h-nmr和¹³c-nmr数据：¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ4.95(1h,dd,j＝11.1hz,5.0hz,h-1),0.90(3h,d,j＝7.1hz,h-17),1.29(3h,s,h-18),1.46(3h,s,h-20),9.13(1h,d,j＝2.0hz,h-3'),8.77(1h,m,h-4'),7.51(1h,dd,j＝8.0hz,4.9hz,h-5'),8.44(1h,dd,j＝8.0hz,2.0hz,h-6')；¹³cnmr(100mhz,cdcl3)δ86.0(ch,c-1),25.8(ch2,c-2),35.5(ch2,c-3),43.1(c,c-4),56.2(ch,c-5),21.9(ch2,c-6),42.6(ch2,c-7),45.5(c,c-8),55.5(ch,c-9),44.3(c,c-10),20.5(ch2,c-11),25.9(ch2,c-12),39.7(ch,c-13),41.3(ch2,c-14),48.2(ch2,c-15),34.5(ch,c-16),15.5(ch3,c-17),28.5(ch3,c-18),180.8(c,c-19),12.7(ch3,c-20),163.9(c,c-1'),127.7(c,c-2'),149.2(ch,c-3'),151.6(ch,c-4'),124.0(ch,c-5'),138.6(ch,c-6').

活性测试：

先花铃子香素a衍生物1-13对α-葡萄糖苷酶的抑制活性

1材料和方法

1.1材料

α-葡萄糖苷酶(sigmaaldrich,美国)；对硝基苯基-α-d-吡喃葡萄糖(源叶生物，上海)；阿卡波糖(拜耳医药，北京)；磷酸盐缓冲液(pb,na2hpo4和nah2po4·2h2o，大连美仑生物有限公司)，碳酸钠(大连美仑生物有限公司)。

1.2仪器

flexstation3台式多功能酶标仪(bio-rad680,美国)；分析天平(ag135,metlertoledo,中国)；恒温箱(dhp-9082,上海)。

1.3实验步骤

α-葡萄糖苷酶抑制活性根据文献报道的方法进行测试。阳性对照阿卡波糖和底物对硝基苯基-α-d-吡喃葡萄糖苷(p-npg，2.5mm)用磷酸盐缓冲溶液(pb,0.1mm,ph＝6.8)溶解。待测样品用甲醇-pb(1:1，v/v)溶解，α-葡萄糖苷酶用pb溶解(0.2u/ml)，分别取30μl和20μl加入到96孔板中于37℃孵育5min。然后加入20μlα-葡萄糖苷酶，孵育15min，最后加入40μl碳酸钠终止反应。孵育5min后，用酶标仪测试405nm处的吸光值。空白组用pb代替样品，背景用pb代替α-葡萄糖苷酶。α-葡萄糖苷酶抑制率＝[(δod空白-δod空白背景)-(δod样品-δod样品背景)]/(δod空白-δod空白背景)。使用graphpadprism5软件处理数据，做出样品和酶之间的浓度依数关系曲线，计算ic50值。

2实验结果

化合物在500μm浓度下对α-葡萄糖苷酶的抑制率及ic50值如表1所示。

表1先花铃子香素a衍生物对α-葡萄糖苷酶的抑制活性^a

^a活性数据表示为三次实验的平均值±sd(n＝3)；^b抑制率于500μm浓度下测试

3结论

实验结果显示化合物1-13在500μm浓度下对α-葡萄糖苷酶均具有抑制活性，特别是化合物6-13具有明显活性，ic50值为16.1～71.4μm,活性优于阳性药物阿卡波糖(ic50为130.3μm)。与原化合物先花铃子香素a(ic50为274.5±12.5μm)相比，化合物9、10和12的ic50的值分别为16.9±3.4、16.1±1.2和17.1±0.6μm，活性提高约17倍。

实施例2：

制剂实施例：

1、按实施例1的方法得到化合物1-13，用少量的dmso溶解后，按常规加注射用水，精滤，灌封灭菌制成注射液。

2、按实施例1的方法得到化合物1-13，用少量的dmso溶解后，将其溶于无菌注射用水中，搅拌使溶解，用无菌抽滤漏斗过滤，再无菌精滤，分装于安中，低温冷冻干燥后无菌熔封得粉针剂。

3、按实施例1的方法得到化合物1-13，按其与赋形剂重量比为9：1的比例加入赋形剂，制成粉剂。

4、按实施例1的方法得到化合物1-13，按其与赋形剂重量比为5：1的比例加入赋形剂，制成压片。

5、按实施例1的方法得到化合物1-13，按常规口服液制法制成口服液。

6、按实施例1的方法得到化合物1-13，按其与赋形剂重量比为5：1的比例加入赋形剂，制成胶囊。

7、按实施例1的方法得到化合物1-13，按其与赋形剂重量比为3：1的比例加入赋形剂，制成胶囊。

8、按实施例1的方法得到化合物1-13，按其与赋形剂重量比为5：1的比例加入赋形剂，制成颗粒剂。