定向诱导hiPSC分化为神经细胞体系的HS5条件培养基的制作方法

技术特征：

1.一种定向诱导hipsc分化为神经细胞体系的hs5条件培养基，其特征在于，其为含有骨髓基质细胞hs5的分泌液的诱导培养基；所述hs5为经过照射的hs5；所述照射的条件为：γ射线辐照强度75-85gy，照射时间为28-35分钟；

所述诱导培养基为包括下述组分：20-25％血清替代品、0.5-1.5mm的谷氨酰胺、8-20ng/ml表皮生长因子、8-12ng/ml脑源性神经营养因子、8-15ng/ml神经营养因子-3、0.5-1.5ng/ml转化生长因子β3、400～700ng/ml头蛋白以及2-3％b27添加剂的dmem/f12培养基，所述百分比为体积百分比。

2.如权利要求1所述的hs5条件培养基，其特征在于，所述辐照强度为80gy，所述照射时间为30分钟。

3.如权利要求1或2所述的hs5条件培养基，其特征在于，所述hs5条件培养基通过下述制备方法制得：1)将5×10⁶～2×10⁷个经照射后的hs5细胞接种到8～15ml诱导培养基中；2)连续1～8天收集培养细胞的上清；3)将所述上清与所述诱导培养基以1:1～8:1比例混合即得。

4.如权利要求3所述的hs5条件培养基，其特征在于，所述hs5条件培养基通过下述制备方法制得：1)将1×10⁷个经照射后的hs5细胞接种到10ml所述诱导培养基中；2)连续4天收集培养细胞的上清；3)将所述上清与所述诱导培养基以1:1比例混合即得。

技术总结
本发明公开了一种定向诱导hiPSC分化为神经细胞体系的HS5条件培养基。本发明方法包括分阶段培养所述hiPSC诱导其神经分化，所述阶段包括：阶段a.共培养所述hiPSC与骨髓基质细胞HS5于诱导培养基；阶段b.用HS5条件培养基连续培养所述hiPSC；阶段c.用培养神经元细胞的基础培养基继续培养所述hiPSC。本发明的方法诱导人类hiPSC细胞定向分化为神经系统细胞，同时抑制非神经系统细胞的生成，从而获得成熟、广谱的神经细胞群。该神经细胞群不仅经过体外验证为具有电冲动发放的成熟神经元，而且这类神经细胞群在小鼠体内实验中也被证实，具有有效的治疗神经系统疾病(如脑卒中、脑损伤)的作用。

技术研发人员：杨涛;隋昳
受保护的技术使用者：杨涛
技术研发日：2017.07.28
技术公布日：2020.10.20