一种aac-(6’)-Ib-cr基因检测试剂盒的制作方法

文档序号:24487671发布日期:2021-03-30 21:12阅读:305来源:国知局
技术特征:

1.一种aac-(6’)-ib-cr基因检测试剂盒,其特征在于:包括捕获探针、k+、exoiii和tht;其中,

捕获探针,其5’端具有一第一序列,其3’端具有与aac-(6’)-ib-cr基因完全互补的一第二序列,第一序列与第二序列通过一缓冲序列相连;第一序列与第二序列形成部分间断互补双链,以使得捕获探针呈发卡结构,且在游离情况下,第一序列能够在k+的作用下形成g-四链体;

其反应具体包括:反应的ph为7.3-7.5,当检测样品中存在aac-(6’)-ib-cr基因时,aac-(6’)-ib-cr基因竞争结合第二序列形成双链结构,第一序列脱离捕获探针的3’端,该双链结构被exoiii剪切以释放aac-(6’)-ib-cr基因,缓冲序列防止exoiii剪切第一序列,第一序列处于游离状态,并在k+的作用下形成g-四链体,该g-四链体与tht结合后,增强tht的荧光。

2.如权利要求1所述的一种aac-(6’)-ib-cr基因检测试剂盒,其特征在于:所述第一序列如seqidno.01所示。

3.如权利要求1所述的一种aac-(6’)-ib-cr基因检测试剂盒,其特征在于:所述第二序列如seqidno.02所示。

4.如权利要求1所述的一种aac-(6’)-ib-cr基因检测试剂盒,其特征在于:所述缓冲序列如seqidno.03所示。

5.如权利要求1所述的一种aac-(6’)-ib-cr基因检测试剂盒,其特征在于:所述捕获探针的序列如seqidno.04所示。

6.如权利要求1至5中任一权利要求所述的一种aac-(6’)-ib-cr基因检测试剂盒,其特征在于:所述反应的温度为25-41℃。

7.如权利要求1至5中任一权利要求所述的一种aac-(6’)-ib-cr基因检测试剂盒,其特征在于:所述反应的时间为10-40min。

8.如权利要求1至5中任一权利要求所述的一种aac-(6’)-ib-cr基因检测试剂盒,其特征在于:所述tht在所述反应的体系中的浓度为2-6μm。

9.如权利要求1至5中任一权利要求所述的一种aac-(6’)-ib-cr基因检测试剂盒,其特征在于:所述exoiii在20μl的所述反应的体系中的用量为1-2.5u。

10.如权利要求1至5中任一权利要求所述的一种aac-(6’)-ib-cr基因检测试剂盒,其特征在于:所述反应的温度为37℃,时间为30min,tht在所述反应的体系中的浓度为5μm,exoiii在20μl的所述反应的体系中的用量为2u。


技术总结
本发明公开了一种aac‑(6’)‑Ib‑cr基因检测试剂盒,包括捕获探针、K+、Exo III和ThT。本发明中的捕获探针为含有G‑四链体序列的发夹结构,在目的基因存在的情况下,目的基因可以和发夹探针构成更稳定的双链结构,从而展露第一序列;Exo III剪切发夹探针中与目的基因互补的第二序列从而释放目的基因和第一序列,从而放大信号;第一序列在K+作用下可折叠为G‑四链体;在加入ThT后,G‑四链体可增强ThT的荧光信号,能够实现对aac‑(6’)‑Ib‑cr基因的简单、快速、灵敏度高、特异性好的检测,在临床耐药基因的检测上有望被广泛应用。

技术研发人员:明德松;王梦鹤
受保护的技术使用者:明德松
技术研发日:2020.08.24
技术公布日:2021.03.30
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