超声辅助双水相体系提取枳实中辛弗林、柚皮苷和新橙皮苷的方法与流程

本发明属于药用植物活性成分提取领域，涉及一种超声辅助双水相体系提取枳实中辛弗林、柚皮苷和新橙皮苷的方法。

背景技术：

枳实为芸香科植物酸橙citrusaurantiuml.及其栽培变种或甜橙c.sinensisosbeck的干燥幼果。枳实喜温暖湿润气候，主产于四川、江西、福建、江苏等地。质坚硬、气清香、味苦、微酸，性微寒，归脾、胃经，具有破气消积、化痰散痞的作用，用于积滞内停、痞满胀痛、泻痢后重、大便不通、痰滞气阻、胸痹、结胸以及脏器下垂。枳实的有效成分主要为黄酮、生物碱和挥发油三大类，具有促进肠胃蠕动、抗癌、抗氧化、抗菌、抗炎、强心、升血压以及减肥等作用。

辛弗林(synephrine)是枳实中主要的生物碱，具有提高新陈代谢、氧化脂肪、减肥的功效，也能增强心血输出量、提高左心室压力和动脉血压，在医药和食品等领域具有广泛的应用。柚皮苷(naringin)和新橙皮苷(neohesperidin)是枳实中两种主要的黄酮类成分，柚皮苷具有抗氧化、抗炎、降血脂、降血糖、抗癌等活性，新橙皮苷具有抗过敏、保护神经系统、降血脂等活性，还可作给糖尿病患者服用的矫味剂，在食品、医药等领域应用广泛。

现有技术中，主要通过热水或者是有机溶剂提取的方式来同时提取积实中的柚皮苷、新橙皮苷等总黄酮以及辛弗林，存在着提取率不高、提取效率有待提高的不足。因此，有必要开发出从枳实中辛弗林、柚皮苷和新橙皮苷的新方法，以提高提取率和提取效率，从而更充分地发挥枳实中辛弗林、柚皮苷以及新橙皮苷的价值。

技术实现要素：

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种超声辅助双水相体系提取枳实中辛弗林、柚皮苷和新橙皮苷的方法，以提高枳实中辛弗林、柚皮苷和新橙皮苷的提取率和提取效率。

为实现上述发明目的，本发明采用的技术方案如下：

超声辅助双水相体系提取枳实中辛弗林、柚皮苷和新橙皮苷的方法，步骤如下：

(1)将干燥的枳实粉碎、过40～200目筛，得到枳实粉末；

(2)按照乙醇/无机盐双水相体系与枳实粉末的质量比为(10～60):1的比例将枳实粉末与乙醇/无机盐双水相体系混合，在20～70℃超声提取10～60min，离心，收集上相，除去固体药渣，即得含辛弗林、柚皮苷和新橙皮苷的提取液；

所述乙醇/无机盐双水相体系中的无机盐为柠檬酸钠、磷酸氢二钠、硫酸铵、磷酸氢二钾或者碳酸钾，乙醇/无机盐双水相体系中无机盐的质量分数为15％～25％，乙醇的质量分数为25％～35％。

上述超声辅助双水相体系提取枳实中辛弗林、柚皮苷和新橙皮苷的方法的技术方案中，步骤(2)优选在功率为80w～150w的条件下进行提取。

上述超声辅助双水相体系提取枳实中辛弗林、柚皮苷和新橙皮苷的方法的技术方案中，所述乙醇/无机盐水相体系中，无机盐的质量分数优选为15％～21％，乙醇的质量分数优选为25％～33％。更优选地，所述乙醇/无机盐水相体系中的无机盐为碳酸钾。进一步优选地，当乙醇/无机盐水相体系中的无机盐为碳酸钾时，乙醇/无机盐水相体系中，无机盐的质量分数为19％～21％，乙醇的质量分数为27％～33％。

上述超声辅助双水相体系提取枳实中辛弗林、柚皮苷和新橙皮苷的方法的技术方案中，步骤(2)优选按照乙醇/无机盐双水相体系与枳实粉末的质量比为(20～40):1的比例将枳实粉末与乙醇/无机盐双水相体系混合。

上述超声辅助双水相体系提取枳实中辛弗林、柚皮苷和新橙皮苷的方法的技术方案中，步骤(2)优选在30～50℃超声提取20～40min。

上述超声辅助双水相体系提取枳实中辛弗林、柚皮苷和新橙皮苷的方法的技术方案中，步骤(1)优选将干燥的枳实粉碎、过100～140目筛，得到枳实粉末。

与现有技术相比，本发明产生了以下有益的技术效果：

1.本发明提供了一种超声辅助双水相体系提取枳实中辛弗林、柚皮苷和新橙皮苷的方法，该方法以乙醇、无机盐和水组成的双水相体系，可同步提取和萃取枳实中的辛弗林、柚皮苷和新橙皮苷，双水相体系可选择性分离目标化合物，且有机溶剂消耗少，将双水相体系与超声提取技术联用，利用超声空化效应和热效应破坏植物细胞，促进传质和目标化合物的溶出，有利于提高提取效率和目标化合物的提取率。相对于现有超声辅助传统溶剂提取的方式，本发明有效提高了枳实中辛弗林、柚皮苷和新橙皮苷的提取率和提取效率，且所得提取液中的杂质含量更少。

2.本发明提供的超声辅助双水相体系提取枳实中辛弗林、柚皮苷和新橙皮苷的方法的工艺简单，提取时间短，有机溶剂易回收利用，提取条件温和，有利于在实践中推广应用。

附图说明

图1为不同提取方法所得样品中目标产物的hplc图，其中(a)图为各样品中辛弗林(synephrine)的hplc，(b)图为各样品中柚皮苷(naringin)和新橙皮苷(neohesperidin)的hplc图。

图2为不同提取方法所得样品中目标产物的提取率。

具体实施方式

以下通过实施例对本发明提供的超声辅助双水相体系提取枳实中辛弗林、柚皮苷和新橙皮苷的方法作进一步说明。有必要指出，以下实施例只用于对本发明作进一步说明，不能理解为对本发明保护范围的限制，所属领域技术人员根据上述发明内容，对本发明做出一些非本质的改进和调整进行具体实施，仍属于发明保护的范围。

以下各实施例和对比例中，采用的枳实为酸橙的干燥幼果。目标产物的提取率(mg/g)＝上相中目标产物的质量(mg)/枳实粉末的质量(g)。

对比例1

本对比例中，采用95％乙醇超声提取枳实中的辛弗林、柚皮苷和新橙皮苷，步骤如下：

(1)将干燥的枳实粉碎、过120目筛，得到枳实粉末。

(2)按照95％乙醇与枳实粉末的质量比为45:1的比例将枳实粉末加入到95％的乙醇中，充分混合，置于49℃的水浴中在80w的功率下超声提取30min，以3000rpm的转速离心15min，收集95％乙醇提取液，除去固体药渣，即得含辛弗林、柚皮苷和新橙皮苷的提取液。

通过hplc检测提取液中辛弗林、柚皮苷和新橙皮苷含量，对应的hplc图谱和目标产物的提取率如图1～2所示，结果表明：辛弗林提取率为6.46mg/g，柚皮苷提取率为3.71mg/g，新橙皮苷提取率为3.36mg/g，三个目标产物的总提取率为13.54mg/g。

对比例2

本对比例中，采用50％乙醇超声提取枳实中的辛弗林、柚皮苷和新橙皮苷，步骤如下：

(1)将干燥的枳实粉碎、过120目筛，得到枳实粉末。

(2)按照50％乙醇与枳实粉末的质量比为45:1的比例将枳实粉末加入到50％的乙醇中，充分混合，置于49℃的水浴中在80w的功率下超声提取30min，以3000rpm的转速离心15min，收集50％乙醇提取液，除去固体药渣，即得含辛弗林、柚皮苷和新橙皮苷的提取液。

通过hplc检测提取液中辛弗林、柚皮苷和新橙皮苷含量，对应的hplc图谱和目标产物的提取率如图1～2所示，结果表明：辛弗林提取率为13.55mg/g，柚皮苷提取率为8.51mg/g，新橙皮苷提取率为9.32mg/g，三个目标产物的总提取率为31.38mg/g。

对比例3

本对比例中，采用去离子水超声提取枳实中的辛弗林、柚皮苷和新橙皮苷，步骤如下：

(1)将干燥的枳实粉碎、过120目筛，得到枳实粉末。

(2)按照去离子水与枳实粉末的质量比为45:1的比例将枳实粉末加入到去离子水中，充分混合，置于49℃的水浴中在80w的功率下超声提取30min，以3000rpm的转速离心15min，收集水提液，除去固体药渣，即得含辛弗林、柚皮苷和新橙皮苷的提取液。

通过hplc检测提取液中辛弗林、柚皮苷和新橙皮苷含量，对应的hplc图谱和目标产物的提取率如图1～2所示，结果表明：辛弗林提取率为10.68mg/g，柚皮苷提取率为2.82mg/g，新橙皮苷提取率为2.38mg/g，三个目标产物的总提取率为15.88mg/g。

实施例1

本实施例中，提供超声辅助双水相体系(atps)提取枳实中辛弗林、柚皮苷和新橙皮苷的方法，该方法的步骤如下：

(1)将干燥的枳实粉碎、过120目筛，得到枳实粉末。

(2)按照乙醇/k2co3双水相体系与枳实粉末的质量比为45:1的比例将枳实粉末与乙醇/k2co3双水相体系混合，置于49℃的水浴中在80w的功率下超声提取30min，以3000rpm的转速离心15min，收集上相(即醇富集相)，除去固体药渣，即得含辛弗林、柚皮苷和新橙皮苷的提取液；

所述乙醇/k2co3双水相体系中，k2co3的质量分数为20.6％，乙醇的质量分数为27％，以100g双水相体系为例，其配置方法为：将20.6gk2co3加入52.4g水中溶解，然后加入27g无水乙醇即得。

通过hplc检测提取液中辛弗林、柚皮苷和新橙皮苷含量，对应的hplc图谱和目标产物的提取率如图1～2所示，结果表明：辛弗林提取率为11.17mg/g，柚皮苷提取率为7.39mg/g，新橙皮苷提取率为89.27mg/g，三个目标产物的总提取率为107.83mg/g。

结合对比例1～3和实施例1可知，在相同的液固比、提取温度、提取时间和超声功率条件下，本发明采用乙醇/k2co3双水相体系同时提取枳实中辛弗林、柚皮苷和新橙皮苷，可显著提高枳实中辛弗林、柚皮苷和新橙皮苷的总提取率，枳实中辛弗林、柚皮苷和新橙皮苷的总提取率由对比例1～3中的13.54～31.38mg/g提升至了107.83mg/g。

实施例2

本实施例中，提供超声辅助双水相体系提取枳实中辛弗林、柚皮苷和新橙皮苷的方法，该方法的步骤如下：

(1)将干燥的枳实粉碎、过120目筛，得到枳实粉末。

(2)按照乙醇/k2co3双水相体系与枳实粉末的质量比为40:1的比例将枳实粉末与乙醇/k2co3双水相体系混合，置于30℃的水浴中在80w的功率下超声提取20min，以3000rpm的转速离心15min，收集上相(即醇富集相)，除去固体药渣，即得含辛弗林、柚皮苷和新橙皮苷的提取液；

所述乙醇/k2co3双水相体系中，k2co3的质量分数为19％，乙醇的质量分数为33％，以100g双水相体系为例，其配置方法为：将19gk2co3加入48g水中溶解，然后加入33g无水乙醇即得。

通过hplc检测提取液中辛弗林、柚皮苷和新橙皮苷含量，结果表明：辛弗林提取率为4.93mg/g，柚皮苷提取率为4.66mg/g，新橙皮苷提取率为55.53mg/g，三个目标产物的总提取率为65.12mg/g。

实施例3

本实施例中，提供超声辅助双水相体系提取枳实中辛弗林、柚皮苷和新橙皮苷的方法，该方法的步骤如下：

(1)将干燥的枳实粉碎、过120目筛，得到枳实粉末。

(2)按照乙醇/k2co3双水相体系与枳实粉末的质量比为40:1的比例将枳实粉末与乙醇/k2co3双水相体系混合，置于50℃的水浴中在80w的功率下超声提取20min，以3000rpm的转速离心15min，收集上相(即醇富集相)，除去固体药渣，即得含辛弗林、柚皮苷和新橙皮苷的提取液；

所述乙醇/k2co3双水相体系中，k2co3的质量分数为19％，乙醇的质量分数为33％，以100g双水相体系为例，其配置方法为：将19gk2co3加入48g水中溶解，然后加入33g无水乙醇即得。

通过hplc检测提取液中辛弗林、柚皮苷和新橙皮苷含量，结果表明：辛弗林提取率为8.77mg/g，柚皮苷提取率为5.74mg/g，新橙皮苷提取率为74.98mg/g，三个目标产物的总提取率为89.49mg/g。

实施例4

本实施例中，提供超声辅助双水相体系提取枳实中辛弗林、柚皮苷和新橙皮苷的方法，该方法的步骤如下：

(1)将干燥的枳实粉碎、过120目筛，得到枳实粉末。

(2)按照乙醇/k2co3双水相体系与枳实粉末的质量比为40:1的比例将枳实粉末与乙醇/k2co3双水相体系混合，置于50℃的水浴中在80w的功率下超声提取30min，以3000rpm的转速离心15min，收集上相(即醇富集相)，除去固体药渣，即得含辛弗林、柚皮苷和新橙皮苷的提取液；

所述乙醇/k2co3双水相体系中，k2co3的质量分数为19％，乙醇的质量分数为33％，以100g双水相体系为例，其配置方法为：将19gk2co3加入48g水中溶解，然后加入33g无水乙醇即得。

通过hplc检测提取液中辛弗林、柚皮苷和新橙皮苷含量，结果表明：辛弗林提取率为11.21mg/g，柚皮苷提取率为6.96mg/g，新橙皮苷提取率为85.93mg/g，三个目标产物的总提取率为104.1mg/g。