基于PCR反应的多核苷酸扩增方法与流程

文档序号:23724873发布日期:2021-01-26 15:12阅读:来源:国知局

技术特征:
1.一种基于pcr反应的多核苷酸扩增方法,所述方法包括对待扩增样品进行冷冻处理的步骤,以提高多核苷酸扩增的产率和/或降低多核苷酸扩增的偏好性。2.根据权利要求1所述的方法,所述方法包括在进行pcr扩增前将待扩增样品在-60℃至-90℃的温度下冷冻2天-3个月的时间的步骤;优选地,在-70℃至-90℃的温度下进行冷冻;优选地,在-75℃至-90℃的温度下进行冷冻;优选地,在-80℃至-85℃的温度下进行冷冻;优选地,在-80℃的温度下进行冷冻;和/或优选地,将待扩增样品冷冻2天-3个月的时间;优选地,将待扩增样品冷冻2天-1个月的时间;优选地,将待扩增样品冷冻2天-20天的时间;优选地,将待扩增样品冷冻2天-10天的时间;优选地,将待扩增样品冷冻2天-7天的时间;优选地,将待扩增样品冷冻7天。3.根据权利要求1或2所述的方法,所述基于pcr反应的多核苷酸扩增方法是基于pcr反应的细胞多核苷酸扩增方法;优选地,所述基于pcr反应的细胞多核苷酸扩增方法是基于pcr反应的少量细胞或单细胞多核苷酸扩增方法;优选地,所述基于pcr反应的多核苷酸扩增方法是基于pcr反应的单细胞全基因组扩增方法;优选地,所述单细胞全基因组扩增方法还包括甲基化转化的全基因组扩增方法。4.根据权利要求1或2所述的方法,所述基于pcr反应的细胞多核苷酸扩增方法包括以下步骤:(1)用细胞裂解液对细胞进行处理获得细胞裂解物;(2)使细胞裂解物中的蛋白酶失活后,进行冷冻处理获得待扩增样品;和(3)对步骤(2)获得的待扩增样品进行pcr扩增。5.根据权利要求4所述的方法,所述基于pcr反应的多核苷酸扩增方法为基于pcr反应的单细胞全基因组扩增;优选地,所述单细胞全基因组扩增方法还包括甲基化转化的全基因组扩增方法;优选地,在进行pcr扩增前将单细胞裂解液在-70℃至-90℃的温度下进行冷冻;优选地,将单细胞裂解液在-75℃至-90℃的温度下进行冷冻;优选地,将单细胞裂解液在-80℃至-85℃的温度下进行冷冻;优选地,将单细胞裂解液在-80℃的温度下进行冷冻;和/或优选地,将单细胞裂解液冷冻2天-3个月的时间;优选地,将单细胞裂解液冷冻2天-1个月的时间;优选地,将单细胞裂解液冷冻2天-20天的时间;优选地,将单细胞裂解液冷冻2天-10天的时间;优选地,将单细胞裂解液冷冻2天-7天的时间,优选地,将单细胞裂解液冷冻7天。6.根据权利要求5所述的方法,所述基于pcr反应的单细胞多核苷酸扩增方法选自smile-seq单细胞全基因组测序,malbac单细胞全基因组测序以及pbat单细胞甲基化组测序。7.根据权利要求4所述的方法,所述细胞裂解液含有选自如下的洗涤剂:十二烷基硫酸钠,月桂基sds,sds c12,triton x-100,triton x-114,np-40,tween-20,tween-80,辛基葡糖苷,辛硫基葡糖苷,3-((3-胆酰胺基丙基)二甲氨基)-1-丙磺酸盐和十二烷基硫酸锂;和/或所述细胞裂解液含有选自如下的蛋白酶:丝氨酸蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶型蛋白酶,优选蛋白酶k、brofasin;和/或所述用细胞裂解液对细胞进行处理的时间为10分钟至20分钟,20分钟至30分钟,30分
钟至1小时,1小时至3小时,3小时至6小时,6小时至9小时,9小时至12小时,12小时至15小时,15小时至18小时,18小时至21小时,或21小时至24小时;和/或所述步骤(1)在50-75℃的温度范围内进行温育,优选地在55-65℃的温度范围内进行温育。8.根据权利要求1-7任一项所述的方法在提高多核苷酸扩增产率和/或在降低多核苷酸扩增偏好性中的应用。9.根据权利要求8所述的应用,所述多核苷酸扩增为单细胞基因组或甲基化组扩增。10.根据权利要求1-7任一项所述的方法在基因组或甲基化组测序或分析中的应用,优选地,所述基因组或甲基化组测序为单细胞基因组或甲基化组测序,;优选地,所述的基于pcr反应的多核苷酸扩增方法用于选自如下的分析:cgh,snp分型,str分型,snv分析,cnv定量或sscp分析;优选地,所述分析选自体细胞基因分型,产前筛查,肿瘤细胞基因组的异质性检测,刑侦现场痕量取证,和微生物单细胞变异检测,优选地,所述肿瘤细胞基因组的异质性检测选自检测肿瘤细胞基因组异质状态,表观遗传特性,细胞空间动态,以及肿瘤微环境;优选地,所述产前筛查选自体外受精的植入前遗传学诊断和单生殖细胞测序;优选地,所述分析为追踪造血干细胞的分化。
当前第2页1 2 3 
网友询问留言 已有0条留言
  • 还没有人留言评论。精彩留言会获得点赞!
1