1.一种用于检测呼吸道病原体核酸的质控物,其特征在于,包括以下呼吸道病原体核酸中的任意一种或多种:冠状病毒、流感病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒、鼻病毒、肺炎支原体、肺炎链球菌或/和嗜肺军团菌。
2.如权利要求1所述的质控物,其特征在于,所述冠状病毒的核酸为6个4000~5500bp核酸片段。
3.如权利要求1所述的质控物,其特征在于,所述冠状病毒包括:人冠状病毒hcov-nl63、人冠状病毒hcov-229e、人冠状病毒hcov-hku1、人冠状病毒hcov-oc43、srsa-cov、mers-cov或/和新型冠状病毒;所述流感病毒包括:甲型流感病毒h1n1、甲型流感病毒h5n1、甲型流感病毒h7n9、甲型流感病毒h9n2、乙型流感病毒(ivb)或/和副流感病毒(piv)。
4.如权利要求1~3任一项所述的质控物,其特征在于,还包括稀释液,所述稀释液包括以下组分:二甲基亚砜、乙二醇双(2-氨基乙醚)四乙酸、十二烷基硫酸钠、牛血清白蛋白、异硫氰酸胍、tris-hcl、乙二胺四乙酸和丙三醇;所述稀释液ph值为7.2~7.6。
5.如权利要求1~4任一项所述的质控物,其特征在于,所述人冠状病毒hcov-nl63的标准值为1.2×104copies/μl,人冠状病毒hcov-229e的标准值为1.9×104copies/μl,人冠状病毒hcov-hku1的标准值为1.3×104copies/μl,人冠状病毒hcov-oc43的标准值为2.0×104copies/μl,srsa-cov的标准值为2.0×104copies/μl,mers-cov的标准值为1.8×104copies/μl,新型冠状病毒的标准值为1.6×104copies/μl,甲型流感病毒h1n1的标准值为1.1×104copies/μl,甲型流感病毒h5n1的标准值为1.9×104copies/μl,甲型流感病毒h7n9的标准值为1.5×104copies/μl,甲型流感病毒h9n2的标准值为1.3×104copies/μl,乙型流感病毒的标准值为2.3×104copies/μl,呼吸道合胞病毒的标准值为2.2×104copies/μl,副流感病毒的标准值为1.5×104copies/μl,腺病毒的标准值为1.3×104copies/μl,肺炎支原体的标准值为1.9×104copies/μl,肺炎链球菌的标准值为1.3×104copies/μl,鼻病毒的标准值为2.3×104copies/μl,嗜肺军团菌的标准值为2.1×104copies/μl。
6.一种如权利要求1~4任一项所述的质控物的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
s1制备呼吸道病原体培养物,提取病原体核酸;所述呼吸道病原体包括冠状病毒、流感病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒、肺炎支原体、肺炎链球菌、鼻病毒或/和嗜肺军团菌;
s2采用荧光定量pcr方法检测步骤s1获得的核酸含量,获得每种病原体核酸的原始浓度值;
s3用所述稀释液将步骤s2呼吸道病原体稀释成所需的浓度值,获得所述含有浓度标准值的呼吸道病原体的质控物。
7.如权利要求6所述的制备方法,其特征在于,所述步骤s1具体采用以下方法实现:
(a)提取所述冠状病毒的核酸:首先,将所述冠状病毒的全长基因组序列划分为6个片段,分别与慢病毒表达载体通过无缝克隆的方法连接,获得6个表达质粒;然后,将经过鉴定序列合格的表达质粒与包装载体共转染包装细胞,获得冠状病毒液,此时,提取的冠状病毒的核酸,分别为6个含有部分基因组序列的核酸片段;
(b)提取所述流感病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒与鼻病毒的核酸:将流感病毒液、呼吸道合胞病毒液、腺病毒液和鼻病毒液分别与感染的宿主细胞混合培养后,收获病毒,提取其核酸;
(c)提取肺炎支原体、嗜肺军团菌与肺炎链球菌的核酸:分别将肺炎支原体、嗜肺军团菌与肺炎链球菌接种至培养基后,获得其培养液后,提取其核酸。
8.如权利要求7所述的制备方法,其特征在于,所述提取核酸采用磁珠法核酸提取试剂盒提取。
9.如权利要求6所述的制备方法,其特征在于,所述方法还包括以下步骤:
(1)将s3的核酸分装,对其性能进行评估分析;
(2)采用微滴式数字pcr法对步骤s3的质控物进行绝对定量检测,确定待测量值。
10.如权利要求1所述的质控物在检测呼吸道病原体中的应用。