利钠肽受体1抗体及使用方法与流程

利钠肽受体1抗体及使用方法


背景技术：

1.心力衰竭是一个重大的公共卫生问题，涉及世界各地超过2000万患者(orso等人,2014,expert opin pharmacother.[药理治疗专家意见]15(13):1849-1861)并与高发病率相关(ibebuogu等人,2011,circulation.heart failure[循环-心力衰竭]4(2):114-120)。利钠肽受体1(natriuretic peptide receptor 1，npr1；也称为npra)是一种受体鸟苷酸环化酶，其被心钠肽(atrial natriuretic peptide，anp)活化，导致血压和血容量降低(chen&burnett,2006,european heart journal supplements 8[欧洲心脏杂志补刊8](补刊e):e18-e25；ibebuogu等人2011,同上；mani等人2015,bioscience reports[生物科学报告]35(5):e00260)。anp结合诱导受体的二聚化和扭转，从而诱导鸟苷酸环化酶结构域的活化和gtp向cgmp的转化(misono等人,2011,the febs journal[febs杂志]278(11):1818-1829)。anp通过npr3(一种缺乏鸟苷酸环化酶结构域的利钠肽受体)清除，并被中性内肽酶(nep)降解(chen&burnett 2006,同上；schmitt等人,2003,clin sci(lond).[临床科学(伦敦)]105(2):141-160)。例如在wo 2010/065293中描述了针对npr1的某些抗体(包括抗体5591-igg)。然而，这些抗体似乎在体外在缺乏anp的情况下不具有功能活性，并且在体内不具有功能活性。
[0002]
已经表明，anp的增加可能对射血分数降低的心力衰竭(心脏向外泵血)患者有益。参见mcmurray等人,n.engl.j.med.[新英格兰医学杂志]；第371卷,第11期,第993-1004页(2014)；和nougu
é
等人,eur j heart fail.[欧洲心力衰竭杂志]2019年5月；21(5):598-605。然而，需要具有更长效的药剂，其具有可替代的作用方式以补充或替代现有疗法。


技术实现要素：

[0003]
本文证明了可以通过使用激动性抗npr1抗体或其抗原结合片段来活化npr1。此外，本披露证明存在两种类型的此类抗体。一种类型与npr1结合并与anp结合竞争(但仍活化npr1；在下文中称为“anp竞争性”抗npr1抗体)，而第二种类型则能够结合并活化npr1而不与anp竞争(在下文中称为“anp非竞争性”抗npr1抗体)。此类抗体(例如，anp非竞争性抗npr1抗体)可用于增强机体的自然系统和/或巩固现有的治疗原理。此外，已经发现在不存在anp的情况下能够活化npr1的某些npr1激动剂抗体在功能上等同于anp。
[0004]
本技术的抗体在小鼠和大鼠中均显示出体内活性。此外，已经使用晶体结构数据证明了本文所述抗体的独特表位结合。
[0005]
因此，本披露提供了抗npr1抗体(例如人单克隆抗体)或其抗原结合片段，其(i)与利钠肽受体1(npr1)结合；并且(ii)在不存在anp的情况下能够活化npr1。此类抗体是激动性抗npr1抗体。在本发明的一些实施例中，本披露还提供了抗npr1抗体或其抗原结合片段，其(i)与利钠肽受体1(npr1)结合；并且(ii)在不存在anp的情况下活化npr1。在本发明的一些实施例中，本披露还提供了抗体或其抗原结合片段，其(i)与利钠肽受体1(npr1)结合；并且(ii)在存在与不存在anp的情况下均能活化npr1。还提供了编码所述抗体的核酸，包含所述核酸的载体，包含所述核酸和/或载体的宿主细胞，以及使用所述核酸、载体和/或宿主细
胞制造所述抗体的方法。还提供了包含所述抗体、核酸、载体或宿主细胞的药物组合物和组合，以及使用所述抗体、核酸、载体、宿主细胞或药物组合物的治疗方法。本文还披露了所述抗体、核酸、载体、宿主细胞或药物组合物或组合在治疗疾病中的用途。
[0006]
因此，在本发明的一方面，本文提供了一种分离的抗体或抗原结合片段，其(i)与利钠肽受体1(npr1)结合；并且(ii)在不存在心钠肽(anp)的情况下能够活化npr1。在本发明的一些实施例中，所述分离的抗体或抗原结合片段不结合和/或不活化利钠肽受体2(npr2)和/或利钠肽受体3(npr3)。在本发明的一些实施例中，所述分离的抗体或抗原结合片段与(a)人npr1；和(b)小鼠npr1和/或大鼠npr1结合。
[0007]
在本发明的一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段与(a)人npr1；和(b)食蟹猴npr1结合。在本发明的一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段是anp非竞争性的。在本发明的一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段是anp竞争性的。在本发明的一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段能够稳定anp-npr1复合物。
[0008]
在本发明的一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段与seq id no:1的氨基酸99-133内，例如由seq id no:1的氨基酸99-133所涵盖的人npr1的区域内的表位结合。在本发明的一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段与如下表位结合，所述表位包含至少两个seq id no:1的氨基酸99-133内的氨基酸残基。在本发明的一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段与如下表位结合，所述表位包含至少3、4、5、6、7或8个seq id no:1的氨基酸99-133内的氨基酸残基。
[0009]
在本发明的一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段与seq id no:1的氨基酸99-111内的表位结合。在本发明的一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段与seq id no:1的氨基酸99-103内的表位结合。在本发明的一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段与seq id no:1的氨基酸105-111内的表位结合。在本发明的一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段与如下表位结合，所述表位包含至少2、3或4个seq id no:1的氨基酸105-111内的氨基酸残基。在本发明的一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段与人npr1的构象表位结合，并且其中所述构象表位包含(i)seq id no:1的氨基酸99-103、(ii)seq id no:1的氨基酸105-111、(iii)seq id no:1的氨基酸131-134中的每一个中的至少一个氨基酸残基，并且还与seq id no:1的氨基酸375和/或378结合。在本发明的一些实施例中，所述表位是构象表位，并且所述构象表位另外地包含选自由seq id no:1的氨基酸33、34、76、82和104组成的组的至少一个氨基酸残基。在本发明的一些实施例中，所述构象表位另外地包含选自由seq id no:1的氨基酸33、34、76、82、104、374和375组成的组的至少一个氨基酸残基。
[0010]
在本发明的一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段至少与seq id no:1的氨基酸82、102、103、105、106、109、132和375结合。在本发明的一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段至少与seq id no:1的氨基酸34、82、102、103、105、106、107、109、132、133、375和378结合。在本发明的一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段至少与seq id no:1的氨基酸79、82、99、102、103、105、106、109、131、132和375结合。
[0011]
在本发明的一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段与seq id no:1的氨基酸188-219内的表位结合。在本发明的一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段与如下表位结合，所述表位包含至少2、3、4、5、6或7个seq id no:1的氨基酸188-219内的氨基酸。在本发明的一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段与npr1内的构象表位结合，并且所述构象表
位包含(i)seq id no:1的氨基酸188-198、(ii)seq id no:1的氨基酸201-208、(iii)seq id no:1的氨基酸215-238、以及(iv)seq id no:1的氨基酸294-297中的每一个中的至少一个氨基酸残基。在本发明的一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段至少与seq id no:1的氨基酸188、192、194、197、201、208和219结合。在本发明的一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段至少与seq id no:1的氨基酸188、192、194、197、201、208、219和295结合。
[0012]
在本发明的一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含三个重链互补决定区(hcdr1、hcdr2和hcdr3)和三个轻链互补决定区(lcdr1、lcdr2和lcdr3)，其中：(a)(i)hcdr1包含如seq id no:28所示氨基酸序列或由其组成；hcdr2包含如x1ix2sx3gx4yx5x6yadsvkg(seq id no:429)所示氨基酸序列或由其组成，其中x1是a或v，x2是s或e，x3是d或k，x4是s或n，x5是i或t，并且x6是y或f；hcdr3包含如seq id no:30所示氨基酸序列或由其组成；lcdr1包含如seq id no:41所示氨基酸序列或由其组成；lcdr2包含如seq id no:42所示氨基酸序列或由其组成；并且lcdr3包含如y1qy2y3y4y5prt(seq id no:430)所示氨基酸序列或由其组成；其中y1是m或q，y2是s、e、t或i，y3是y或w，y4是e、v、r、a、t或m，并且y5是k、v、r或a；(ii)hcdr1包含如seq id no:31所示氨基酸序列或由其组成；hcdr2包含如x1ix2sx3gx4yx5x6yadsvkg(seq id no:429)所示氨基酸序列或由其组成，其中x1是a或v，x2是s或e，x3是d或k，x4是s或n，x5是i或t，并且x6是y或f；hcdr3包含如seq id no:30所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:41所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:42所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如y1qy2y3y4y5prt(seq id no:430)所示氨基酸序列或由其组成；其中y1是m或q，y2是s、e、t或i，y3是y或w，y4是e、v、r、a、t或m，并且y5是k、v、r或a；(iii)hcdr1包含如seq id no:32所示氨基酸序列或由其组成，hcdr2包含如x1sx2gx3y(seq id no:431)所示氨基酸序列或由其组成，其中x1是s或e，x2是d或k，或者x3是s或n，hcdr3包含如seq id no:30所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:44所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:45所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如y1y2y3y4pr(seq id no:432)所示氨基酸序列或由其组成；其中y1是s、e、t或i，y2是y或w，y3是e、v、r、a、t或m，并且y4是k、v、r或a；或(iv)hcdr1包含如seq id no:34所示氨基酸序列或由其组成，hcdr2包含如ix1sx2gx3yx4(seq id no:433)所示氨基酸序列或由其组成，其中x1是s或e，x2是d或k，x3是s或n，并且x4是i或t，hcdr3包含如seq id no:36所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:47所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:45所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如y1qy2y3y4y5prt(seq id no:430)所示氨基酸序列或由其组成；其中y1是m或q，y2是s、e、t或i，y3是y或w，y4是e、v、r、a、t或m，并且y5是k、v、r或a；(b)(i)hcdr1包含如seq id no:28所示氨基酸序列或由其组成；hcdr2包含如x1ix2sx3gx4yx5x6yadsvkg(seq id no:429)所示氨基酸序列或由其组成，其中x1是a或v，x2是s或e，x3是d或k，x4是s或n，x5是i或t，并且x6是y或f；hcdr3包含如seq id no:30所示氨基酸序列或由其组成；lcdr1包含如seq id no:41所示氨基酸序列或由其组成；lcdr2包含如seq id no:42所示氨基酸序列或由其组成；并且lcdr3包含如qqy1wy2y3prt(seq id no:434)所示氨基酸序列或由其组成；其中y1是s、e、t或i，y2是v、r、a、t或m，并且y3是k、v、r或a；(ii)hcdr1包含如seq id no:31所示氨基酸序列或由其组成；hcdr2包含如x1ix2sx3gx4yx5x6yadsvkg(seq id no:429)所示氨基酸序列或由其组成，其中x1是a或v，x2是s或e，x3是d或k，x4是s或n，x5是i或t，并且x6是y或f；hcdr3包含如seq id no:30所示氨基酸
序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:41所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:42所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如qqy1wy2y3prt(seq id no:434)所示氨基酸序列或由其组成；其中y1是s、e、t或i，y2是v、r、a、t或m，并且y3是k、v、r或a；(iii)hcdr1包含如seq id no:32所示氨基酸序列或由其组成，hcdr2包含如x1sx2gx3y(seq id no:431)所示氨基酸序列或由其组成，其中x1是s或e，x2是d或k，或者x3是s或n，hcdr3包含如seq id no:30所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:44所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:45所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如y1wy2y3pr(seq id no:435)所示氨基酸序列或由其组成；其中y1是s、e、t或i，y2是v、r、a、t或m，并且y3是k、v、r或a；或(iv)hcdr1包含如seq id no:34所示氨基酸序列或由其组成，hcdr2包含如ix1sx2gx3yx4(seq id no:433)所示氨基酸序列或由其组成，其中x1是s或e，x2是d或k，x3是s或n，并且x4是i或t，hcdr3包含如seq id no:36所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:47所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:45所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如qqy1wy2y3prt(seq id no:434)所示氨基酸序列或由其组成；其中y1是s、e、t或i，y2是v、r、a、t或m，并且y3是k、v、r或a；(c)(i)hcdr1包含如seq id no:28所示氨基酸序列或由其组成；hcdr2包含如seq id no:119所示氨基酸序列或由其组成；hcdr3包含如seq id no:30所示氨基酸序列或由其组成；lcdr1包含如seq id no:41所示氨基酸序列或由其组成；lcdr2包含如seq id no:42所示氨基酸序列或由其组成；并且lcdr3包含如qqy1wy2y3prt(seq id no:434)所示氨基酸序列或由其组成；其中y1是s、e、t或i，y2是v、r、a、t或m，并且y3是k、v、r或a；(ii)hcdr1包含如seq id no:31所示氨基酸序列或由其组成；hcdr2包含如seq id no:119所示氨基酸序列或由其组成；hcdr3包含如seq id no:30所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:41所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:42所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如qqy1wy2y3prt(seq id no:434)所示氨基酸序列或由其组成；其中y1是s、e、t或i，y2是v、r、a、t或m，并且y3是k、v、r或a；(iii)hcdr1包含如seq id no:32所示氨基酸序列或由其组成，hcdr2包含如seq id no:120所示氨基酸序列或由其组成，hcdr3包含如seq id no:30所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:44所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:45所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如y1wy2y3pr(seq id no:435)所示氨基酸序列或由其组成；其中y1是s、e、t或i，y2是v、r、a、t或m，并且y3是k、v、r或a；或(iv)hcdr1包含如seq id no:34所示氨基酸序列或由其组成，hcdr2包含如seq id no:121所示氨基酸序列或由其组成，hcdr3包含如seq id no:36所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:47所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:45所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如qqy1wy2y3prt(seq id no:434)所示氨基酸序列或由其组成；其中y1是s、e、t或i，y2是v、r、a、t或m，并且y3是k、v、r或a；(d)(i)hcdr1包含如gftfx1thyih(seq id no:436)所示氨基酸序列或由其组成，其中x1是n、s或q，hcdr2包含如siy1y2y3gy4y5ty6yadsvkg(seq id no:437)所示氨基酸序列或由其组成，其中y1是s或g，y2是s或g，y3是s或q，y4是s、q或g，y5是s、n或m，并且y6是y或l，hcdr3包含如seq id no:6所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:17所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:18所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如seq id no:19所示氨基酸序列或由其组成；(ii)hcdr1包含如seq id no:7所示氨基酸序列或由其组成，hcdr2包含如
siy1y2y3gy4y5ty6yadsvkg(seq id no:437)所示氨基酸序列或由其组成，其中y1是s或g，y2是s或g，y3是s或q，y4是s、q或g，y5是s、n或m，并且y6是y或l，hcdr3包含如seq id no:6所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:17所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:18所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如seq id no:19所示氨基酸序列或由其组成；(iii)hcdr1包含如gftfx1th(seq id no:438)所示氨基酸序列或由其组成，其中x1是n、s或q，hcdr2包含如y1y2y3gy4y5(seq id no:439)所示氨基酸序列或由其组成，其中y1是s或g，y2是s或g，y3是s或q，y4是s、q或g，并且y5是s、n或m，hcdr3包含如seq id no:6所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:20所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:21所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如seq id no:22所示氨基酸序列或由其组成；或(iv)hcdr1包含如gftfx1thy(seq id no:440)所示氨基酸序列或由其组成，其中x1是n、s或q，hcdr2包含如iy1y2y3gy4y5t(seq id no:441)所示氨基酸序列或由其组成，其中y1是s或g，y2是s或g，y3是s或q，y4是s、q或g，并且y5是s、n或m，hcdr3包含如seq id no:12所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:23所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:21所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如seq id no:19所示氨基酸序列或由其组成；(e)(i)hcdr1包含如gftfx1thyih(seq id no:436)所示氨基酸序列或由其组成，其中x1是n、s或q，hcdr2包含如sisy1sgy2y3tyyadsvkg(seq id no:442)所示氨基酸序列或由其组成，其中y1是s或g，y2是s或q，并且y3是s或n，hcdr3包含如seq id no:6所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:17所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:18所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如seq id no:19所示氨基酸序列或由其组成；(ii)hcdr1包含如seq id no:7所示氨基酸序列或由其组成，hcdr2包含如sisy1sgy2y3tyyadsvkg(seq id no:442)所示氨基酸序列或由其组成，其中y1是s或g，y2是s或q，并且y3是s或n，hcdr3包含如seq id no:6所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:17所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:18所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如seq id no:19所示氨基酸序列或由其组成；(iii)hcdr1包含如gftfx1th(seq id no:438)所示氨基酸序列或由其组成，其中x1是n、s或q，hcdr2包含如sy1sgy2y3(seq id no:443)所示氨基酸序列或由其组成，其中y1是s或g，y2是s或q，并且y3是s或n，hcdr3包含如seq id no:6所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:20所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:21所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如seq id no:22所示氨基酸序列或由其组成；或(iv)hcdr1包含如gftfx1thy(seq id no:440)所示氨基酸序列或由其组成，其中x1是n、s或q，hcdr2包含如isy1sgy2y3t(seq id no:444)所示氨基酸序列或由其组成，其中y1是s或g，y2是s或q，并且y3是s或n，hcdr3包含如seq id no:12所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:23所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:21所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如seq id no:19所示氨基酸序列或由其组成；(f)(i)hcdr1包含如gfx1fsx2yx3x4x5(seq id no:445)所示氨基酸序列或由其组成，其中x1是s或t，x2是s、k或r，x3是w或y，x4是i或l，并且x5是s或n，hcdr2包含如y1iy2qy3y4y5ey6y7yvesvkg(seq id no:446)所示氨基酸序列或由其组成，其中y1是s或n，y2是k或h，y3是s、q或h，y4是g或a，y5是s、h或l，y6是t或k，并且y7是y、k或r，hcdr3包含如seq id no:228所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:237所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:238所示
氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如seq id no:239所示氨基酸序列或由其组成；(ii)hcdr1包含如x1yx2x3x4(seq id no:447)所示氨基酸序列或由其组成，其中x1是s、k或r，x2是w或y，x3是i或l，并且x4是s或n，hcdr2包含如y1iy2qy3y4y5ey6y7yvesvkg(seq id no:446)所示氨基酸序列或由其组成，其中y1是s或n，y2是k或h，y3是s、q或h，y4是g或a，y5是s、h或l，y6是t或k，并且y7是y、k或r，hcdr3包含如seq id no:228所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:237所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:238所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如seq id no:239所示氨基酸序列或由其组成；(iii)hcdr1包含如gfx1fsx2y(seq id no:448)所示氨基酸序列或由其组成，其中x1是s或t，并且x2是s、k或r，hcdr2包含如y1qy2y3y4e(seq id no:449)所示氨基酸序列或由其组成，其中y1是k或h，y2是s、q或h，y3是g或a，并且y4是s、h或l，hcdr3包含如seq id no:228所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:240所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:241所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如seq id no:242所示氨基酸序列或由其组成；或(iv)hcdr1包含如gfx1fsx2yx3(seq id no:450)所示氨基酸序列或由其组成，其中x1是s或t，x2是s、k或r，并且x3是w或y，hcdr2包含如iy1qy2y3y4ey5(seq id no:451)所示氨基酸序列或由其组成，其中y1是k或h，y2是s、q或h，y3是g或a，y4是s、h或l，并且y5是t或k，hcdr3包含如seq id no:232所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:243所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:241所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如seq id no:239所示氨基酸序列或由其组成；(g)(i)hcdr1包含如gfx1fsx2yx3x4x5(seq id no:445)所示氨基酸序列或由其组成，其中x1是s或t，x2是s、k或r，x3是w或y，x4是i或l，并且x5是s或n，hcdr2包含如sihqy1y2y3ey4y5yvesvkg(seq id no:453)所示氨基酸序列或由其组成，其中y1是q或h，y2是g或a，y3是h或l，y4是t或k，并且y5是k或r，hcdr3包含如seq id no:228所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:237所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:238所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如seq id no:239所示氨基酸序列或由其组成；(ii)hcdr1包含如x1yx2x3x4(seq id no:447)所示氨基酸序列或由其组成，其中x1是s、k或r，x2是w或y，x3是i或l，并且x4是s或n，hcdr2包含如sihqy1y2y3ey4y5yvesvkg(seq id no:453)所示氨基酸序列或由其组成，其中y1是q或h，y2是g或a，y3是h或l，y4是t或k，并且y5是k或r，hcdr3包含如seq id no:228所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:237所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:238所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如seq id no:239所示氨基酸序列或由其组成；(iii)hcdr1包含如gfx1fsx2y(seq id no:448)所示氨基酸序列或由其组成，其中x1是s或t，并且x2是s、k或r，hcdr2包含如hqy1y2y3e(seq id no:456)所示氨基酸序列或由其组成，其中y1是q或h，y2是g或a，并且y3是h或l，hcdr3包含如seq id no:228所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:240所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:241所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如seq id no:242所示氨基酸序列或由其组成；或(iv)hcdr1包含如gfx1fsx2yx3(seq id no:450)所示氨基酸序列或由其组成，其中x1是s或t，x2是s、k或r，并且x3是w或y，hcdr2包含如ihqy1y2y3ey4(seq id no:458)所示氨基酸序列或由其组成，其中y1是q或h，y2是g或a，y3是h或l，并且y4是t或k，hcdr3包含如seq id no:232所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:243所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:241所示氨基酸序列或由其组成，并且
lcdr3包含如seq id no:239所示氨基酸序列或由其组成；(h)(i)hcdr1包含如gftfsx1yx2ix3(seq id no:452)所示氨基酸序列或由其组成，其中x1是s或r，x2是w或y，并且x3是s或n，hcdr2包含如y1iy2qy3y4y5ey6y7yvesvkg(seq id no:446)所示氨基酸序列或由其组成，其中y1是s或n，y2是k或h，y3是s、q或h，y4是g或a，y5是s、h或l，y6是t或k，并且y7是y、k或r，hcdr3包含如seq id no:228所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:237所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:238所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如seq id no:239所示氨基酸序列或由其组成；(ii)hcdr1包含如x1yx2ix3(seq id no:454)所示氨基酸序列或由其组成，其中x1是s或r，x2是w或y，并且x3是s或n，hcdr2包含如y1iy2qy3y4y5ey6y7yvesvkg(seq id no:446)所示氨基酸序列或由其组成，其中y1是s或n，y2是k或h，y3是s、q或h，y4是g或a，y5是s、h或l，y6是t或k，并且y7是y、k或r，hcdr3包含如seq id no:228所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:237所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:238所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如seq id no:239所示氨基酸序列或由其组成；(iii)hcdr1包含如gftfsx1y(seq id no:455)所示氨基酸序列或由其组成，其中x1是s或r，hcdr2包含如y1qy2y3y4e(seq id no:449)所示氨基酸序列或由其组成，其中y1是k或h，y2是s、q或h，y3是g或a，并且y4是s、h或l，hcdr3包含如seq id no:228所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:240所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:241所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如seq id no:242所示氨基酸序列或由其组成；或(iv)hcdr1包含如gftfsx1yx2(seq id no:457)所示氨基酸序列或由其组成，其中x1是s或r，并且x2是w或y，hcdr2包含如iy1qy2y3y4ey5(seq id no:451)所示氨基酸序列或由其组成，其中y1是k或h，y2是s、q或h，y3是g或a，y4是s、h或l，并且y5是t或k，hcdr3包含如seq id no:232所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:243所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:241所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如seq id no:239所示氨基酸序列或由其组成；或(i)(i)hcdr1包含如gftfsx1yx2ix3(seq id no:452)所示氨基酸序列或由其组成，其中x1是s或r，x2是w或y，并且x3是s或n，hcdr2包含如sihqy1y2y3ey4y5yvesvkg(seq id no:453)所示氨基酸序列或由其组成，其中y1是q或h，y2是g或a，y3是h或l，y4是t或k，并且y5是k或r，hcdr3包含如seq id no:228所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:237所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:238所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如seq id no:239所示氨基酸序列或由其组成；(ii)hcdr1包含如x1yx2ix3(seq id no:454)所示氨基酸序列或由其组成，其中x1是s或r，x2是w或y，并且x3是s或n，hcdr2包含如sihqy1y2y3ey4y5yvesvkg(seq id no:453)所示氨基酸序列或由其组成，其中y1是q或h，y2是g或a，y3是h或l，y4是t或k，并且y5是k或r，hcdr3包含如seq id no:228所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:237所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:238所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如seq id no:239所示氨基酸序列或由其组成；(iii)hcdr1包含如gftfsx1y(seq id no:455)所示氨基酸序列或由其组成，其中x1是s或r，hcdr2包含如hqy1y2y3e(seq id no:456)所示氨基酸序列或由其组成，其中y1是q或h，y2是g或a，并且y3是h或l，hcdr3包含如seq id no:228所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:240所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:241所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如seq id no:242所示氨基酸序列或由其组成；或(iv)
id no:466)所示氨基酸序列或由其组成，其中x1是s或t，x2是i或m，并且x3是s或t，hcdr2包含如y1isy2y3gy4y5y6y7yay8svkg(seq id no:465)所示氨基酸序列或由其组成，其中y1是a或s，y2是a、s或g，y3是s或h，y4是g或y，y5是s或y，y6是t或a，y7是y、r或n，并且y8是e或g，hcdr3包含如seq id no:331所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:337所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:338所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如seq id no:339所示氨基酸序列或由其组成；(iii)hcdr1包含如gftfx1x2y(seq id no:467)所示氨基酸序列或由其组成，其中x1是s或g，并且x2是s或t，hcdr2包含如sy1y2gy3y4(seq id no:468)所示氨基酸序列或由其组成，其中y1是a、s或g，y2是s或h，y3是g或y，并且y4是s或y，hcdr3包含如seq id no:331所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:340所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:341所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如seq id no:342所示氨基酸序列或由其组成；或(iv)hcdr1包含如gftfx1x2ya(seq id no:469)所示氨基酸序列或由其组成，其中x1是s或g，并且x2是s或t，hcdr2包含如isy1y2gy3y4t(seq id no:470)所示氨基酸序列或由其组成，其中y1是s或g，y2是s或h，y3是g或y，并且y4是s或y，hcdr3包含如seq id no:332所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:343所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:341所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如seq id no:339所示氨基酸序列或由其组成；或(c)(i)hcdr1包含如gftfx1x2yax3x4(seq id no:464)所示氨基酸序列或由其组成，其中x1是s或g，x2是s或t，x3是i或m，并且x4是s或t，hcdr2包含如sisy1y2gyyy3y4yay5svkg(seq id no:471)所示氨基酸序列或由其组成，其中y1是a或s，y2是s或h，y3是t或a，y4是r或n，并且y5是e或g，hcdr3包含如seq id no:331所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:337所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:338所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如seq id no:339所示氨基酸序列或由其组成；(ii)hcdr1包含如x1yax2x3(seq id no:466)所示氨基酸序列或由其组成，其中x1是s或t，x2是i或m，并且x3是s或t，hcdr2包含如sisy1y2gyyy3y4yay5svkg(seq id no:471)所示氨基酸序列或由其组成，其中y1是a或s，y2是s或h，y3是t或a，y4是r或n，并且y5是e或g，hcdr3包含如seq id no:331所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:337所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:338所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如seq id no:339所示氨基酸序列或由其组成；(iii)hcdr1包含如gftfx1x2y(seq id no:467)所示氨基酸序列或由其组成，其中x1是s或g，并且x2是s或t，hcdr2包含如sy1y2gyy(seq id no:472)所示氨基酸序列或由其组成，其中y1是a或s，并且y2是s或h，hcdr3包含如seq id no:331所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:340所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:341所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如seq id no:342所示氨基酸序列或由其组成；或(iv)hcdr1包含如gftfx1x2ya(seq id no:469)所示氨基酸序列或由其组成，其中x1是s或g，并且x2是s或t，hcdr2包含如isy1y2g(seq id no:473)所示氨基酸序列或由其组成，其中y1是a、s或g，并且y2是s或h，hcdr3包含如seq id no:332所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:343所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:341所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如seq id no:339所示氨基酸序列或由其组成。
[0014]
在本发明的一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含三个重链互补决定区(hcdr1、hcdr2和hcdr3)和三个轻链互补决定区(lcdr1、lcdr2和lcdr3)，其中：(a)(i)hcdr1
包含如seq id no:28所示氨基酸序列或由其组成，hcdr2包含如seq id no:29、119和190中任一项所示氨基酸序列或由其组成，hcdr3包含如seq id no:30所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:41所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:42所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如seq id no:43、126、134、145、172、178和184中任一项所示氨基酸序列或由其组成；(ii)hcdr1包含如seq id no:31所示氨基酸序列或由其组成，hcdr2包含如seq id no:29、119和190中任一项所示氨基酸序列或由其组成，hcdr3包含如seq id no:30所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:41所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:42所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如seq id no:43、126、134、145、172、178和184中任一项所示氨基酸序列或由其组成；(iii)hcdr1包含如seq id no:32所示氨基酸序列或由其组成，hcdr2包含如seq id no:33、120和191中任一项所示氨基酸序列或由其组成，hcdr3包含如seq id no:30所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:44所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:45所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如seq id no:46、127、135、146、173、179和185中任一项所示氨基酸序列或由其组成；或(iv)hcdr1包含如seq id no:34所示氨基酸序列或由其组成，hcdr2包含如seq id no:35、121和192中任一项所示氨基酸序列或由其组成，hcdr3包含如seq id no:36所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:47所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:45所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如seq id no:43、126、134、145、172、178和184中任一项所示氨基酸序列或由其组成；(b)(i)hcdr1包含如seq id no:4、112和165中任一项所示氨基酸序列或由其组成，hcdr2包含如seq id no:5、100和151中任一项所示氨基酸序列或由其组成，hcdr3包含如seq id no:6所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:17所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:18所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如seq id no:19所示氨基酸序列或由其组成；(ii)hcdr1包含如seq id no:7所示氨基酸序列或由其组成，hcdr2包含如seq id no:5、100和151中任一项所示氨基酸序列或由其组成，hcdr3包含如seq id no:6所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:17所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:18所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如seq id no:19所示氨基酸序列或由其组成；(iii)hcdr1包含如seq id no:8、113和166中任一项所示氨基酸序列或由其组成，hcdr2包含如seq id no:9、101和152中任一项所示氨基酸序列或由其组成，hcdr3包含如seq id no:6所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:20所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:21所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如seq id no:22所示氨基酸序列或由其组成；或(iv)hcdr1包含如seq id no:10、114和167中任一项所示氨基酸序列或由其组成，hcdr2包含如seq id no:11、102和153中任一项所示氨基酸序列或由其组成，hcdr3包含如seq id no:12所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:23所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:21所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如seq id no:19所示氨基酸序列或由其组成；或(c)(i)hcdr1包含如seq id no:226、367和378中任一项所示氨基酸序列或由其组成，hcdr2包含如seq id no:227、368和379中任一项所示氨基酸序列或由其组成，hcdr3包含如seq id no:228所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:237所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:238所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含
如seq id no:239所示氨基酸序列或由其组成；(ii)hcdr1包含如seq id no:229、369和380中任一项所示氨基酸序列或由其组成，hcdr2包含如seq id no:227、368和379中任一项所示氨基酸序列或由其组成，hcdr3包含如seq id no:228所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:237所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:238所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如seq id no:239所示氨基酸序列或由其组成；(iii)hcdr1包含如seq id no:32、370和381中任一项所示氨基酸序列或由其组成，hcdr2包含如seq id no:230、371和382中任一项所示氨基酸序列或由其组成，hcdr3包含如seq id no:228所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:240所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:241所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如seq id no:242所示氨基酸序列或由其组成；或(iv)hcdr1包含如seq id no:34、372和383中任一项所示氨基酸序列或由其组成，hcdr2包含如seq id no:231、373和384中任一项所示氨基酸序列或由其组成，hcdr3包含如seq id no:232所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:243所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:241所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如seq id no:239所示氨基酸序列或由其组成。
[0015]
在本发明的一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含三个重链互补决定区(hcdr1、hcdr2和hcdr3)和三个轻链互补决定区(lcdr1、lcdr2和lcdr3)，其中：(a)(i)hcdr1包含如seq id no:310所示氨基酸序列或由其组成，hcdr2包含如seq id no:311所示氨基酸序列或由其组成，hcdr3包含如seq id no:312和348中任一项所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:320所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:321和354中任一项所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如seq id no:322、355和361中任一项所示氨基酸序列或由其组成；(ii)hcdr1包含如seq id no:229所示氨基酸序列或由其组成，hcdr2包含如seq id no:311所示氨基酸序列或由其组成，hcdr3包含如seq id no:312和348中任一项所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:320所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:321和354中任一项所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如seq id no:322、355和361中任一项所示氨基酸序列或由其组成；(iii)hcdr1包含如seq id no:80所示氨基酸序列或由其组成，hcdr2包含如seq id no:313所示氨基酸序列或由其组成，hcdr3包含如seq id no:312和348中任一项所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:323所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:324所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如seq id no:325、356和362中任一项所示氨基酸序列或由其组成；或(iv)hcdr1包含如seq id no:82所示氨基酸序列或由其组成，hcdr2包含如seq id no:314所示氨基酸序列或由其组成，hcdr3包含如seq id no:315和349中任一项所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:326所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:324所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如seq id no:322、355和361中任一项所示氨基酸序列或由其组成；或(b)(i)hcdr1包含如seq id no:270和407中任一项所示氨基酸序列或由其组成，hcdr2包含如seq id no:271、389和408中任一项所示氨基酸序列或由其组成，hcdr3包含如seq id no:331所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:337所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:338所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如seq id no:339所示氨基酸序列或由其组成；(ii)hcdr1包含如seq id no:273和409中任一项所示氨基酸序列或由其组成，hcdr2
包含如seq id no:271、389和408中任一项所示氨基酸序列或由其组成，hcdr3包含如seq id no:331所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:337所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:338所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如seq id no:339所示氨基酸序列或由其组成；(iii)hcdr1包含如seq id no:32和410中任一项所示氨基酸序列或由其组成，hcdr2包含如seq id no:274、390和411中任一项所示氨基酸序列或由其组成，hcdr3包含如seq id no:331所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:340所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:341所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如seq id no:342所示氨基酸序列或由其组成；或(iv)hcdr1包含如seq id no:275和412中任一项所示氨基酸序列或由其组成，hcdr2包含如seq id no:276、391和413中任一项所示氨基酸序列或由其组成，hcdr3包含如seq id no:332所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:343所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:341所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如seq id no:339所示氨基酸序列或由其组成。
[0016]
在本发明的一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含选自如下的三个重链互补决定区(hcdr1、hcdr2和hcdr3)和三个轻链互补决定区(lcdr1、lcdr2和lcdr3)：(a)(i)seq id no:28(hcdr1)、seq id no:119(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)、和seq id no:134(lcdr3)；(ii)seq id no:31(hcdr1)、seq id no:119(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)、和seq id no:134(lcdr3)；(iii)seq id no:32(hcdr1)、seq id no:120(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:44(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)、和seq id no:135(lcdr3)；或(iv)seq id no:34(hcdr1)、seq id no:121(hcdr2)、seq id no:36(hcdr3)、seq id no:47(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)、和seq id no:134(lcdr3)；(b)(i)seq id no:28(hcdr1)、seq id no:119(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)、和seq id no:126(lcdr3)；(ii)seq id no:31(hcdr1)、seq id no:119(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)、和seq id no:126(lcdr3)；(iii)seq id no:32(hcdr1)、seq id no:120(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:44(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)、和seq id no:127(lcdr3)；或(iv)seq id no:34(hcdr1)、seq id no:121(hcdr2)、seq id no:36(hcdr3)、seq id no:47(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)、和seq id no:126(lcdr3)；(c)(i)seq id no:28(hcdr1)、seq id no:119(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)、和seq id no:145(lcdr3)；(ii)seq id no:31(hcdr1)、seq id no:119(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)、和seq id no:145(lcdr3)；(iii)seq id no:32(hcdr1)、seq id no:120(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:44(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)、和seq id no:146(lcdr3)；或(iv)seq id no:34(hcdr1)、seq id no:121(hcdr2)、seq id no:36(hcdr3)、seq id no:47(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)、和seq id no:145(lcdr3)；(d)(i)seq id no:28(hcdr1)、seq id no:119(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)、和seq id no:172(lcdr3)；(ii)seq id no:31(hcdr1)、seq id no:119(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)、和seq id no:172(lcdr3)；(iii)
id no:42(lcdr2)、和seq id no:126(lcdr3)；(ii)seq id no:31(hcdr1)、seq id no:29(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)、和seq id no:126(lcdr3)；(iii)seq id no:32(hcdr1)、seq id no:33(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:44(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)、和seq id no:127(lcdr3)；或(iv)seq id no:34(hcdr1)、seq id no:35(hcdr2)、seq id no:36(hcdr3)、seq id no:47(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)、和seq id no:126(lcdr3)；(k)(i)seq id no:28(hcdr1)、seq id no:29(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)、和seq id no:134(lcdr3)；(ii)seq id no:31(hcdr1)、seq id no:29(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)、和seq id no:134(lcdr3)；(iii)seq id no:32(hcdr1)、seq id no:33(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:44(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)、和seq id no:135(lcdr3)；或(iv)seq id no:34(hcdr1)、seq id no:35(hcdr2)、seq id no:36(hcdr3)、seq id no:47(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)、和seq id no:134(lcdr3)；(l)(i)seq id no:28(hcdr1)、seq id no:29(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)、和seq id no:145(lcdr3)；(ii)seq id no:31(hcdr1)、seq id no:29(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)、和seq id no:145(lcdr3)；(iii)seq id no:32(hcdr1)、seq id no:33(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:44(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)、和seq id no:146(lcdr3)；或(iv)seq id no:34(hcdr1)、seq id no:35(hcdr2)、seq id no:36(hcdr3)、seq id no:47(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)、和seq id no:145(lcdr3)；(m)(i)seq id no:4(hcdr1)、seq id no:151(hcdr2)、seq id no:6(hcdr3)、seq id no:17(lcdr1)、seq id no:18(lcdr2)、和seq id no:19(lcdr3)；(ii)seq id no:7(hcdr1)、seq id no:151(hcdr2)、seq id no:6(hcdr3)、seq id no:17(lcdr1)、seq id no:18(lcdr2)、和seq id no:19(lcdr3)；(iii)seq id no:8(hcdr1)、seq id no:152(hcdr2)、seq id no:6(hcdr3)、seq id no:20(lcdr1)、seq id no:21(lcdr2)、和seq id no:22(lcdr3)；或(iv)seq id no:10(hcdr1)、seq id no:153(hcdr2)、seq id no:12(hcdr3)、seq id no:23(lcdr1)、seq id no:21(lcdr2)、和seq id no:19(lcdr3)；(n)(i)seq id no:112(hcdr1)、seq id no:151(hcdr2)、seq id no:6(hcdr3)、seq id no:17(lcdr1)、seq id no:18(lcdr2)、和seq id no:19(lcdr3)；(ii)seq id no:7(hcdr1)、seq id no:151(hcdr2)、seq id no:6(hcdr3)、seq id no:17(lcdr1)、seq id no:18(lcdr2)、和seq id no:19(lcdr3)；(iii)seq id no:113(hcdr1)、seq id no:152(hcdr2)、seq id no:6(hcdr3)、seq id no:20(lcdr1)、seq id no:21(lcdr2)、和seq id no:22(lcdr3)；或(iv)seq id no:114(hcdr1)、seq id no:153(hcdr2)、seq id no:12(hcdr3)、seq id no:23(lcdr1)、seq id no:21(lcdr2)、和seq id no:19(lcdr3)；(o)(i)seq id no:165(hcdr1)、seq id no:151(hcdr2)、seq id no:6(hcdr3)、seq id no:17(lcdr1)、seq id no:18(lcdr2)、和seq id no:19(lcdr3)；(ii)seq id no:7(hcdr1)、seq id no:151(hcdr2)、seq id no:6(hcdr3)、seq id no:17(lcdr1)、seq id no:18(lcdr2)、和seq id no:19(lcdr3)；(iii)seq id no:166(hcdr1)、seq id no:152(hcdr2)、seq id no:6(hcdr3)、seq id no:20(lcdr1)、seq id no:21(lcdr2)、和seq id no:22(lcdr3)；或(iv)seq id no:167(hcdr1)、seq id no:153(hcdr2)、seq id no:12(hcdr3)、
seq id no:23(lcdr1)、seq id no:21(lcdr2)、和seq id no:19(lcdr3)；(p)(i)seq id no:28(hcdr1)、seq id no:29(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)、和seq id no:172(lcdr3)；(ii)seq id no:31(hcdr1)、seq id no:29(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)、和seq id no:172(lcdr3)；(iii)seq id no:32(hcdr1)、seq id no:33(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:44(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)、和seq id no:173(lcdr3)；或(iv)seq id no:34(hcdr1)、seq id no:35(hcdr2)、seq id no:36(hcdr3)、seq id no:47(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)、和seq id no:172(lcdr3)；(q)(i)seq id no:28(hcdr1)、seq id no:29(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)、和seq id no:178(lcdr3)；(ii)seq id no:31(hcdr1)、seq id no:29(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)、和seq id no:178(lcdr3)；(iii)seq id no:32(hcdr1)、seq id no:33(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:44(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)、和seq id no:179(lcdr3)；或(iv)seq id no:34(hcdr1)、seq id no:35(hcdr2)、seq id no:36(hcdr3)、seq id no:47(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)、和seq id no:178(lcdr3)；(r)(i)seq id no:28(hcdr1)、seq id no:29(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)、和seq id no:184(lcdr3)；(ii)seq id no:31(hcdr1)、seq id no:29(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)、和seq id no:184(lcdr3)；(iii)seq id no:32(hcdr1)、seq id no:33(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:44(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)、和seq id no:185(lcdr3)；或(iv)seq id no:34(hcdr1)、seq id no:35(hcdr2)、seq id no:36(hcdr3)、seq id no:47(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)、和seq id no:184(lcdr3)；(s)(i)seq id no:28(hcdr1)、seq id no:190(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)、和seq id no:134(lcdr3)；(ii)seq id no:31(hcdr1)、seq id no:190(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)、和seq id no:134(lcdr3)；(iii)seq id no:32(hcdr1)、seq id no:191(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:44(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)、和seq id no:135(lcdr3)；或(iv)seq id no:34(hcdr1)、seq id no:192(hcdr2)、seq id no:36(hcdr3)、seq id no:47(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)、和seq id no:134(lcdr3)；(t)(i)seq id no:28(hcdr1)、seq id no:190(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)、和seq id no:172(lcdr3)；(ii)seq id no:31(hcdr1)、seq id no:190(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)、和seq id no:172(lcdr3)；(iii)seq id no:32(hcdr1)、seq id no:191(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:44(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)、和seq id no:173(lcdr3)；或(iv)seq id no:34(hcdr1)、seq id no:192(hcdr2)、seq id no:36(hcdr3)、seq id no:47(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)、和seq id no:172(lcdr3)；(u)(i)seq id no:4(hcdr1)、seq id no:5(hcdr2)、seq id no:6(hcdr3)、seq id no:17(lcdr1)、seq id no:18(lcdr2)、和seq id no:19(lcdr3)；(ii)seq id no:7(hcdr1)、seq id no:5(hcdr2)、seq id no:6(hcdr3)、seq id no:17(lcdr1)、seq id no:18(lcdr2)、和seq id no:19(lcdr3)；(iii)seq id no:8
id no:237(lcdr1)、seq id no:238(lcdr2)、和seq id no:304(lcdr3)；(ii)seq id no:294(hcdr1)、seq id no:292(hcdr2)、seq id no:293(hcdr3)、seq id no:237(lcdr1)、seq id no:238(lcdr2)、和seq id no:304(lcdr3)；(iii)seq id no:295(hcdr1)、seq id no:296(hcdr2)、seq id no:293(hcdr3)、seq id no:240(lcdr1)、seq id no:241(lcdr2)、和seq id no:305(lcdr3)；或(iv)seq id no:297(hcdr1)、seq id no:298(hcdr2)、seq id no:299(hcdr3)、seq id no:243(lcdr1)、seq id no:241(lcdr2)、和seq id no:304(lcdr3)。
[0017]
在本发明的一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含选自如下的三个重链互补决定区(hcdr1、hcdr2和hcdr3)和三个轻链互补决定区(lcdr1、lcdr2和lcdr3)：(a)(i)seq id no:52(hcdr1)、seq id no:53(hcdr2)、seq id no:54(hcdr3)、seq id no:65(lcdr1)、seq id no:66(lcdr2)和seq id no:67(lcdr3)；(ii)seq id no:55(hcdr1)、seq id no:53(hcdr2)、seq id no:54(hcdr3)、seq id no:65(lcdr1)、seq id no:66(lcdr2)和seq id no:67(lcdr3)；(iii)seq id no:56(hcdr1)、seq id no:57(hcdr2)、seq id no:54(hcdr3)、seq id no:68(lcdr1)、seq id no:69(lcdr2)和seq id no:70(lcdr3)；或(iv)seq id no:58(hcdr1)、seq id no:59(hcdr2)、seq id no:60(hcdr3)、seq id no:71(lcdr1)、seq id no:69(lcdr2)和seq id no:67(lcdr3)；(b)(i)seq id no:76(hcdr1)、seq id no:77(hcdr2)、seq id no:78(hcdr3)、seq id no:89(lcdr1)、seq id no:90(lcdr2)和seq id no:91(lcdr3)；(ii)seq id no:79(hcdr1)、seq id no:77(hcdr2)、seq id no:78(hcdr3)、seq id no:89(lcdr1)、seq id no:90(lcdr2)和seq id no:91(lcdr3)；(iii)seq id no:80(hcdr1)、seq id no:81(hcdr2)、seq id no:78(hcdr3)、seq id no:92(lcdr1)、seq id no:93(lcdr2)和seq id no:94(lcdr3)；或(iv)seq id no:82(hcdr1)、seq id no:83(hcdr2)、seq id no:84(hcdr3)、seq id no:95(lcdr1)、seq id no:93(lcdr2)和seq id no:91(lcdr3)；(c)(i)seq id no:310(hcdr1)、seq id no:311(hcdr2)、seq id no:348(hcdr3)、seq id no:320(lcdr1)、seq id no:354(lcdr2)和seq id no:361(lcdr3)；(ii)seq id no:229(hcdr1)、seq id no:311(hcdr2)、seq id no:348(hcdr3)、seq id no:320(lcdr1)、seq id no:354(lcdr2)和seq id no:361(lcdr3)；(iii)seq id no:80(hcdr1)、seq id no:313(hcdr2)、seq id no:348(hcdr3)、seq id no:323(lcdr1)、seq id no:324(lcdr2)和seq id no:362(lcdr3)；或(iv)seq id no:82(hcdr1)、seq id no:314(hcdr2)、seq id no:349(hcdr3)、seq id no:326(lcdr1)、seq id no:324(lcdr2)和seq id no:361(lcdr3)；(d)(i)seq id no:270(hcdr1)、seq id no:389(hcdr2)、seq id no:331(hcdr3)、seq id no:337(lcdr1)、seq id no:338(lcdr2)和seq id no:339(lcdr3)；(ii)seq id no:273(hcdr1)、seq id no:389(hcdr2)、seq id no:331(hcdr3)、seq id no:337(lcdr1)、seq id no:338(lcdr2)和seq id no:339(lcdr3)；(iii)seq id no:32(hcdr1)、seq id no:390(hcdr2)、seq id no:331(hcdr3)、seq id no:340(lcdr1)、seq id no:341(lcdr2)和seq id no:342(lcdr3)；或(iv)seq id no:275(hcdr1)、seq id no:391(hcdr2)、seq id no:332(hcdr3)、seq id no:343(lcdr1)、seq id no:341(lcdr2)和seq id no:339(lcdr3)；(e)(i)seq id no:407(hcdr1)、seq id no:408(hcdr2)、seq id no:331(hcdr3)、seq id no:337(lcdr1)、seq id no:338(lcdr2)和seq id no:339(lcdr3)；(ii)seq id no:409(hcdr1)、seq id no:408(hcdr2)、seq id no:331(hcdr3)、
seq id no:337(lcdr1)、seq id no:338(lcdr2)和seq id no:339(lcdr3)；(iii)seq id no:410(hcdr1)、seq id no:411(hcdr2)、seq id no:331(hcdr3)、seq id no:340(lcdr1)、seq id no:341(lcdr2)和seq id no:342(lcdr3)；或(iv)seq id no:412(hcdr1)、seq id no:413(hcdr2)、seq id no:332(hcdr3)、seq id no:343(lcdr1)、seq id no:341(lcdr2)和seq id no:339(lcdr3)；(f)(i)seq id no:310(hcdr1)、seq id no:311(hcdr2)、seq id no:312(hcdr3)、seq id no:320(lcdr1)、seq id no:321(lcdr2)和seq id no:322(lcdr3)；(ii)seq id no:229(hcdr1)、seq id no:311(hcdr2)、seq id no:312(hcdr3)、seq id no:320(lcdr1)、seq id no:321(lcdr2)和seq id no:322(lcdr3)；(iii)seq id no:80(hcdr1)、seq id no:313(hcdr2)、seq id no:312(hcdr3)、seq id no:323(lcdr1)、seq id no:324(lcdr2)和seq id no:325(lcdr3)；或(iv)seq id no:82(hcdr1)、seq id no:314(hcdr2)、seq id no:315(hcdr3)、seq id no:326(lcdr1)、seq id no:324(lcdr2)和seq id no:322(lcdr3)；(g)(i)seq id no:270(hcdr1)、seq id no:271(hcdr2)、seq id no:331(hcdr3)、seq id no:337(lcdr1)、seq id no:338(lcdr2)和seq id no:339(lcdr3)；(ii)seq id no:273(hcdr1)、seq id no:271(hcdr2)、seq id no:331(hcdr3)、seq id no:337(lcdr1)、seq id no:338(lcdr2)和seq id no:339(lcdr3)；(iii)seq id no:32(hcdr1)、seq id no:274(hcdr2)、seq id no:331(hcdr3)、seq id no:340(lcdr1)、seq id no:341(lcdr2)和seq id no:342(lcdr3)；或(iv)seq id no:275(hcdr1)、seq id no:276(hcdr2)、seq id no:332(hcdr3)、seq id no:343(lcdr1)、seq id no:341(lcdr2)和seq id no:339(lcdr3)；或(h)(i)seq id no:310(hcdr1)、seq id no:311(hcdr2)、seq id no:348(hcdr3)、seq id no:320(lcdr1)、seq id no:354(lcdr2)和seq id no:355(lcdr3)；(ii)seq id no:229(hcdr1)、seq id no:311(hcdr2)、seq id no:348(hcdr3)、seq id no:320(lcdr1)、seq id no:354(lcdr2)和seq id no:355(lcdr3)；(iii)seq id no:80(hcdr1)、seq id no:313(hcdr2)、seq id no:348(hcdr3)、seq id no:323(lcdr1)、seq id no:324(lcdr2)和seq id no:356(lcdr3)；或(iv)seq id no:82(hcdr1)、seq id no:314(hcdr2)、seq id no:349(hcdr3)、seq id no:326(lcdr1)、seq id no:324(lcdr2)和seq id no:355(lcdr3)。
[0018]
在本发明的一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含：(a)含有seq id no:201的氨基酸序列的重链可变区，以及含有seq id no:136的氨基酸序列的轻链可变区；(b)含有seq id no:122的氨基酸序列的重链可变区，以及含有seq id no:136的氨基酸序列的轻链可变区；(c)含有seq id no:201的氨基酸序列的重链可变区，以及含有seq id no:128的氨基酸序列的轻链可变区；(d)含有seq id no:122的氨基酸序列的重链可变区，以及含有seq id no:128的氨基酸序列的轻链可变区；(e)含有seq id no:201的氨基酸序列的重链可变区，以及含有seq id no:147的氨基酸序列的轻链可变区；(f)含有seq id no:122的氨基酸序列的重链可变区，以及含有seq id no:147的氨基酸序列的轻链可变区；(g)含有seq id no:201的氨基酸序列的重链可变区，以及含有seq id no:174的氨基酸序列的轻链可变区；(h)含有seq id no:122的氨基酸序列的重链可变区，以及含有seq id no:174的氨基酸序列的轻链可变区；(i)含有seq id no:201的氨基酸序列的重链可变区，以及含有seq id no:180的氨基酸序列的轻链可变区；(j)含有seq id no:122的氨基酸序列的重链可变区，以及含有seq id no:180的氨基酸序列的轻链可变区；(k)含有seq id no:201的氨基酸
序列的重链可变区，以及含有seq id no:186的氨基酸序列的轻链可变区；(l)含有seq id no:122的氨基酸序列的重链可变区，以及含有seq id no:186的氨基酸序列的轻链可变区；(m)含有seq id no:103的氨基酸序列的重链可变区，以及含有seq id no:24的氨基酸序列的轻链可变区；(n)含有seq id no:115的氨基酸序列的重链可变区，以及含有seq id no:24的氨基酸序列的轻链可变区；(o)含有seq id no:122的氨基酸序列的重链可变区，以及含有seq id no:48的氨基酸序列的轻链可变区；(p)含有seq id no:37的氨基酸序列的重链可变区，以及含有seq id no:128的氨基酸序列的轻链可变区；(q)含有seq id no:37的氨基酸序列的重链可变区，以及含有seq id no:136的氨基酸序列的轻链可变区；(r)含有seq id no:37的氨基酸序列的重链可变区，以及含有seq id no:147的氨基酸序列的轻链可变区；(s)含有seq id no:154的氨基酸序列的重链可变区，以及含有seq id no:24的氨基酸序列的轻链可变区；(t)含有seq id no:161的氨基酸序列的重链可变区，以及含有seq id no:24的氨基酸序列的轻链可变区；(u)含有seq id no:168的氨基酸序列的重链可变区，以及含有seq id no:24的氨基酸序列的轻链可变区；(v)含有seq id no:37的氨基酸序列的重链可变区，以及含有seq id no:174的氨基酸序列的轻链可变区；(w)含有seq id no:37的氨基酸序列的重链可变区，以及含有seq id no:180的氨基酸序列的轻链可变区；(x)含有seq id no:37的氨基酸序列的重链可变区，以及含有seq id no:186的氨基酸序列的轻链可变区；(y)含有seq id no:193的氨基酸序列的重链可变区，以及含有seq id no:136的氨基酸序列的轻链可变区；(z)含有seq id no:193的氨基酸序列的重链可变区，以及含有seq id no:174的氨基酸序列的轻链可变区；(aa)含有seq id no:13的氨基酸序列的重链可变区，以及含有seq id no:24的氨基酸序列的轻链可变区；(bb)含有seq id no:37的氨基酸序列的重链可变区，以及含有seq id no:48的氨基酸序列的轻链可变区；(cc)含有seq id no:374的氨基酸序列的重链可变区，以及含有seq id no:244的氨基酸序列的轻链可变区；(dd)含有seq id no:385的氨基酸序列的重链可变区，以及含有seq id no:244的氨基酸序列的轻链可变区；(ee)含有seq id no:233的氨基酸序列的重链可变区，以及含有seq id no:244的氨基酸序列的轻链可变区；(ff)含有seq id no:278的氨基酸序列的重链可变区，以及含有seq id no:287的氨基酸序列的轻链可变区；或(gg)含有seq id no:300的氨基酸序列的重链可变区，以及含有seq id no:306的氨基酸序列的轻链可变区。
[0019]
在本发明的一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含：(a)含有seq id no:61的氨基酸序列的重链可变区，以及含有seq id no:72的氨基酸序列的轻链可变区；(b)含有seq id no:85的氨基酸序列的重链可变区，以及含有seq id no:96的氨基酸序列的轻链可变区；(c)含有seq id no:350的氨基酸序列的重链可变区，以及含有seq id no:363的氨基酸序列的轻链可变区；(d)含有seq id no:392的氨基酸序列的重链可变区，以及含有seq id no:344的氨基酸序列的轻链可变区；(e)含有seq id no:414的氨基酸序列的重链可变区，以及含有seq id no:344的氨基酸序列的轻链可变区；(f)含有seq id no:316的氨基酸序列的重链可变区，以及含有seq id no:327的氨基酸序列的轻链可变区；(g)含有seq id no:333的氨基酸序列的重链可变区，以及含有seq id no:344的氨基酸序列的轻链可变区；或(h)含有seq id no:350的氨基酸序列的重链可变区，以及含有seq id no:357的氨基酸序列的轻链可变区。
[0020]
在本发明的一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含：(a)含有seq id no:
203的氨基酸序列的重链，以及含有seq id no:138的氨基酸序列的轻链；(b)含有seq id no:208的氨基酸序列的重链，以及含有seq id no:138的氨基酸序列的轻链；(c)含有seq id no:203的氨基酸序列的重链，以及含有seq id no:130的氨基酸序列的轻链；(d)含有seq id no:208的氨基酸序列的重链，以及含有seq id no:130的氨基酸序列的轻链；(e)含有seq id no:203的氨基酸序列的重链，以及含有seq id no:149的氨基酸序列的轻链；(f)含有seq id no:208的氨基酸序列的重链，以及含有seq id no:149的氨基酸序列的轻链；(g)含有seq id no:203的氨基酸序列的重链，以及含有seq id no:176的氨基酸序列的轻链；(h)含有seq id no:208的氨基酸序列的重链，以及含有seq id no:176的氨基酸序列的轻链；(i)含有seq id no:203的氨基酸序列的重链，以及含有seq id no:182的氨基酸序列的轻链；(j)含有seq id no:208的氨基酸序列的重链，以及含有seq id no:182的氨基酸序列的轻链；(k)含有seq id no:203的氨基酸序列的重链，以及含有seq id no:188的氨基酸序列的轻链；(l)含有seq id no:208的氨基酸序列的重链，以及含有seq id no:188的氨基酸序列的轻链；(m)含有seq id no:105的氨基酸序列的重链，以及含有seq id no:26的氨基酸序列的轻链；(n)含有seq id no:108的氨基酸序列的重链，以及含有seq id no:26的氨基酸序列的轻链；(o)含有seq id no:117的氨基酸序列的重链，以及含有seq id no:26的氨基酸序列的轻链；(p)含有seq id no:124的氨基酸序列的重链，以及含有seq id no:50的氨基酸序列的轻链；(q)含有seq id no:39的氨基酸序列的重链，以及含有seq id no:130的氨基酸序列的轻链；(r)含有seq id no:39的氨基酸序列的重链，以及含有seq id no:138的氨基酸序列的轻链；(s)含有seq id no:141的氨基酸序列的重链，以及含有seq id no:138的氨基酸序列的轻链；(t)含有seq id no:39的氨基酸序列的重链，以及含有seq id no:149的氨基酸序列的轻链；(u)含有seq id no:156的氨基酸序列的重链，以及含有seq id no:26的氨基酸序列的轻链；(v)含有seq id no:159的氨基酸序列的重链，以及含有seq id no:26的氨基酸序列的轻链；(w)含有seq id no:163的氨基酸序列的重链，以及含有seq id no:26的氨基酸序列的轻链；(x)含有seq id no:170的氨基酸序列的重链，以及含有seq id no:26的氨基酸序列的轻链；(y)含有seq id no:39的氨基酸序列的重链，以及含有seq id no:176的氨基酸序列的轻链；(z)含有seq id no:39的氨基酸序列的重链，以及含有seq id no:182的氨基酸序列的轻链；(aa)含有seq id no:39的氨基酸序列的重链，以及含有seq id no:188的氨基酸序列的轻链；(bb)含有seq id no:195的氨基酸序列的重链，以及含有seq id no:138的氨基酸序列的轻链；(cc)含有seq id no:195的氨基酸序列的重链，以及含有seq id no:176的氨基酸序列的轻链；(dd)含有seq id no:15的氨基酸序列的重链，以及含有seq id no:26的氨基酸序列的轻链；(ee)含有seq id no:39的氨基酸序列的重链，以及含有seq id no:50的氨基酸序列的轻链；(ff)含有seq id no:376的氨基酸序列的重链，以及含有seq id no:246的氨基酸序列的轻链；(gg)含有seq id no:387的氨基酸序列的重链，以及含有seq id no:246的氨基酸序列的轻链；(hh)含有seq id no:235的氨基酸序列的重链，以及含有seq id no:246的氨基酸序列的轻链；(ii)含有seq id no:280的氨基酸序列的重链，以及含有seq id no:289的氨基酸序列的轻链；或(jj)含有seq id no:302的氨基酸序列的重链，以及含有seq id no:308的氨基酸序列的轻链。
[0021]
在本发明的一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含：(a)含有seq id no:63的氨基酸序列的重链，以及含有seq id no:74的氨基酸序列的轻链；(b)含有seq id no:87
的氨基酸序列的重链，以及含有seq id no:98的氨基酸序列的轻链；(c)含有seq id no:352的氨基酸序列的重链，以及含有seq id no:365的氨基酸序列的轻链；(d)含有seq id no:394的氨基酸序列的重链，以及含有seq id no:346的氨基酸序列的轻链；(e)含有seq id no:416的氨基酸序列的重链，以及含有seq id no:346的氨基酸序列的轻链；(f)含有seq id no:318的氨基酸序列的重链，以及含有seq id no:329的氨基酸序列的轻链；(g)含有seq id no:335的氨基酸序列的重链，以及含有seq id no:346的氨基酸序列的轻链；或(h)含有seq id no:352的氨基酸序列的重链，以及含有seq id no:359的氨基酸序列的轻链。
[0022]
在本发明的一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段为选自由以下组成的组的抗原结合片段：fab、fab
′
、f(ab
′
)2、fv、单结构域抗体(dab)和单链可变片段(scfv)。在本发明的一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段为选自由以下组成的组的抗原结合片段：fab、fab
′
、fv、单结构域抗体(dab)和单链可变片段(scfv)。
[0023]
在本发明的一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段是单克隆的。在本发明的一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段是全人的。在本发明的一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段是igg抗体。在本发明的一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段是igg1抗体。在本发明的一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段是具有κ轻链的igg1抗体。在本发明的一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段是igg1同种型的全人抗体，并具有κ轻链。
[0024]
在本发明的一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段另外地根据卡巴特(kabat)的eu索引在fc区具有突变，其中所述突变至少包含d265a和p329a。
[0025]
在本发明的一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段另外地根据卡巴特的eu索引在fc区具有突变，其中所述突变至少包含l234a和l235a。
[0026]
在本发明的一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段是治疗性的。
[0027]
在本发明的一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段与本文定义的任何抗体或抗原结合片段或基团(例如，xx16)结合人npr1上相同的表位。在本发明的一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段与本文定义的任何抗体或抗原结合片段或基团(例如xx16)竞争与人npr1结合。
[0028]
在本发明的一方面，本文提供了一种或多种分离的核酸，其编码本文定义的任何抗体或抗原结合片段或基团的氨基酸序列。在本发明的一方面，本文提供了包含所述一种或多种分离的核酸的载体。在本发明的一方面，本文提供了包含所述一种或多种分离的核酸或载体的宿主细胞。
[0029]
在本发明的一方面，本文提供了产生本文所述的任何抗体或抗原结合片段的方法，所述方法包括在适合产生所述抗体或抗原结合片段的条件下培养本文所述的宿主细胞。在本发明的一些实施例中，所述方法另外地包括纯化所述抗体或抗原结合片段。
[0030]
在本发明的一方面，本文提供了药物组合物，其包含通过本文所述的方法产生的纯化的抗体或抗原结合片段和药学上可接受的载剂。
[0031]
在本发明的一方面，本文提供了药物组合物，其包含本文所述的任何抗体或抗原结合片段和药学上可接受的载体。
[0032]
在本发明的一方面，本文提供了一种药物组合物，其包含：a)在不存在anp的情况下结合利钠肽受体1(npr1)并活化npr1的装置；和b)药学上可接受的赋形剂。在本发明的一
些实施例中，所述用于结合和活化的装置是anp非竞争性的。在本发明的一些实施例中，所述用于结合和活化的装置是anp竞争性的。在本发明的一些实施例中，所述用于结合和活化的装置另外地能够稳定anp-npr1复合物。在本发明的一些实施例中，所述组合物进一步包含另外的治疗剂。
[0033]
在本发明的一些实施例中，另外的治疗剂选自ace(血管紧张素转化酶)抑制剂、血管紧张素受体阻滞剂(arb)、脑啡肽酶抑制剂、β阻滞剂、利尿剂、钙通道阻滞剂、强心苷、钠-葡萄糖共转运蛋白2抑制剂(sglt2i)及其组合。在本发明的一些实施例中，另外的治疗剂选自依那普利、贝那普利、卡托普利、福辛普利、赖诺普利、莫西普利、培哚普利、喹那普利、雷米普利、群多普利、缬沙坦、阿齐沙坦、坎地沙坦、依普罗沙坦、厄贝沙坦、氯沙坦、奥美沙坦、替米沙坦、沙库比曲、比索洛尔、卡维地洛、普萘洛尔、美托洛尔、酒石酸美托洛尔、琥珀酸美托洛尔、噻嗪类利尿剂、环利尿剂、保钾利尿剂、氨氯地平、氯维地平、地尔硫卓、非洛地平、伊拉地平、尼卡地平、硝苯地平、尼索地平、维拉帕米、洋地黄苷、卡格列净、达格列净、依帕列净、埃格列净、及其组合。在本发明的一些实施例中，另外的治疗剂选自氯噻嗪、氯噻酮、氢氯噻嗪、吲达帕胺、美托拉宗、布美他尼、依他尼酸、呋塞米、托拉塞米、阿米洛利、依普利酮、螺内酯、氨苯蝶啶、地高辛及其组合。在本发明的一些实施例中，另外的治疗剂是血管紧张素受体-脑啡肽酶抑制剂(arni)。
[0034]
在本发明的一些实施例中，另外的治疗剂选自皮质类固醇、白三烯修饰剂、支气管扩张剂及其组合。在本发明的一些实施例中，另外的治疗剂选自氟替卡松、布地奈德、莫米松、倍氯米松、环索奈德、糠酸氟替卡松、泼尼松、甲基强的松龙、孟鲁司特、扎鲁司特、齐留通、长效β激动剂、短效β激动剂、茶碱和异丙托铵及其组合。在本发明的一些实施例中，另外的治疗剂选自沙美特罗、福莫特罗、沙丁胺醇和左旋沙丁胺醇及其组合。
[0035]
在本发明的一些实施例中，另外的治疗剂选自β-肾上腺素受体拮抗剂、碳酸酐酶抑制剂、α2-肾上腺素受体激动剂、拟副交感神经药、前列腺素类似物、rho激酶抑制剂、及其组合、及其组合。在本发明的一些实施例中，另外的治疗剂选自噻吗洛尔、左布洛诺尔、美替洛尔、卡替洛尔、倍他洛尔、乙酰唑胺、多佐胺、布林佐胺、醋甲唑胺、溴莫尼定、阿拉可乐定、拟胆碱药、拉坦前列腺素(latanoprost)、拉坦前列素(latanoprostene bunod)、曲伏前列素、比马前列素、他氟前列腺素、奈塔舒地尔(netarsudil)和利帕舒地尔(ripasudil)、及其组合。
[0036]
在本发明的一方面，本文提供了一种在有需要的受试者中治疗与利钠肽受体活性相关的障碍或疾病的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的本文所述的任何抗体或抗原结合片段或者如本文所述的药物组合物或组合。
[0037]
在本发明的一方面，本文提供了一种在有需要的受试者中治疗心血管障碍的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的本文所述的抗体或其抗原结合片段中的任一者或者本文所述的药物组合物或组合中的任一者。
[0038]
在本发明的一些实施例中，所述心血管障碍选自：高血压、周围血管疾病、心力衰竭、冠状动脉疾病(cad)、缺血性心脏病(ihd)、二尖瓣狭窄和返流、心绞痛、肥厚性心肌病、糖尿病性心肌病、室上性和室性心律失常、心律不齐、房颤(af)、新发房颤、复发性房颤、心脏纤维化、心房扑动、有害血管重塑、斑块稳定和心肌梗死(mi)。
[0039]
在本发明的一方面，本文提供了一种在有需要的受试者中治疗心力衰竭、肥厚性
心肌病(hcm)、高血压、先兆子痫、哮喘、青光眼和/或细胞因子释放综合征的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的本文所述的抗体或其抗原结合片段中的任一者或者本文所述的药物组合物或组合中的任一者。
[0040]
在本发明的一些实施例中，所述受试者患有心力衰竭，其中所述心力衰竭选自射血分数降低的心力衰竭(hfref)、射血分数保留的心力衰竭(hfpef)、急性心肌梗死后心力衰竭或急性代偿性心力衰竭。在本发明的一些实施例中，所述受试者患有肥厚性心肌病，其中所述肥厚性心肌病是心室肥大。在本发明的一些实施例中，所述受试者患有高血压，其中所述高血压选自顽固性高血压、高血压性心脏病、肺高血压、肺动脉高血压、单纯收缩期高血压、顽固性高血压和肺动脉高血压。在本发明的一些实施例中，所述受试者患有高血压，其中所述高血压选自顽固性高血压或高血压性心脏病。
[0041]
在本发明的一方面，本文提供了一种在有需要的受试者中治疗肾障碍的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的本文所述的抗体或其抗原结合片段中的任一者或者本文所述的药物组合物或组合中的任一者。在本发明的一些实施例中，所述肾障碍选自：糖尿病肾功能不全、非糖尿病肾功能不全、肾衰竭、糖尿病肾病、非糖尿病肾病、急性肾损伤、造影剂诱发的肾病、肾病综合征、肾小球肾炎、硬皮病、肾小球硬化、原发性肾病蛋白尿、肾血管性高血压、糖尿病视网膜病变和终末期肾脏疾病(esrd)、内皮功能障碍、舒张功能障碍、肾纤维化和多囊肾疾病(pkd)。
[0042]
在本发明的一方面，本文提供了本文所述的抗体或其抗原结合片段中的任一者或者本文所述的药物组合物或组合中的任一者用于制备在需要这种治疗的受试者中用于治疗与利钠肽受体活性有关的障碍或疾病的药物的用途。
[0043]
在本发明的一方面，本文提供了本文所述的抗体或其抗原结合片段中的任一者或本文所述的药物组合物或组合中的任一者用于制备在需要这种治疗的受试者中用于治疗心血管障碍的药物的用途。
[0044]
在本发明的一些实施例中，所述心血管障碍选自：高血压、周围血管疾病、心力衰竭、冠状动脉疾病(cad)、缺血性心脏病(ihd)、二尖瓣狭窄和返流、心绞痛、肥厚性心肌病、糖尿病性心肌病、室上性和室性心律失常、心律不齐、房颤(af)、新发房颤、复发性房颤、心脏纤维化、心房扑动、有害血管重塑、斑块稳定和心肌梗死(mi)。
[0045]
在本发明的一方面，本文提供了本文所述的抗体或其抗原结合片段中的任一者或本文所述的药物组合物或组合中的任一者用于制备在需要这种治疗的受试者中用于治疗心力衰竭、肥厚性心肌病(hcm)、高血压、先兆子痫、哮喘、青光眼和/或细胞因子释放综合征的药物的用途。
[0046]
在本发明的一些实施例中，所述受试者患有心力衰竭，并且所述心力衰竭选自射血分数降低的心力衰竭(hfref)、射血分数保留的心力衰竭(hfpef)、急性心肌梗死后心力衰竭或急性代偿性心力衰竭。在本发明的一些实施例中，所述受试者患有肥厚性心肌病，其中所述肥厚性心肌病是心室肥大。在本发明的一些实施例中，所述受试者患有高血压，其中所述高血压选自顽固性高血压、高血压性心脏病、肺高血压、肺动脉高血压、单纯收缩期高血压、顽固性高血压和肺动脉高血压。在本发明的一些实施例中，所述受试者患有高血压，其中所述高血压选自顽固性高血压或高血压性心脏病。
[0047]
在本发明的一方面，本文提供了本文所述的抗体或其抗原结合片段中的任一者或
本文所述的药物组合物或组合中的任一者用于制备在需要这种治疗的受试者中用于治疗肾障碍的药物的用途。在本发明的一些实施例中，所述肾障碍选自：糖尿病肾功能不全、非糖尿病肾功能不全、肾衰竭、糖尿病肾病、非糖尿病肾病、急性肾损伤、造影剂诱发的肾病、肾病综合征、肾小球肾炎、硬皮病、肾小球硬化、原发性肾病蛋白尿、肾血管性高血压、糖尿病视网膜病变和终末期肾脏疾病(esrd)、内皮功能障碍、舒张功能障碍、肾纤维化和多囊肾疾病(pkd)。
[0048]
在本发明的一方面，本文提供了本文所述的抗体或其抗原结合片段或者本文所述的药物组合物或组合中的任一者，用于在需要这种治疗的受试者中治疗与利钠肽受体活性有关的障碍或疾病。
[0049]
在本发明的一方面，本文提供了本文所述的抗体或其抗原结合片段或者本文所述的药物组合物或组合中的任一者，用于在需要这种治疗的受试者中治疗心血管障碍。
[0050]
在本发明的一些实施例中，所述心血管障碍选自：高血压、周围血管疾病、心力衰竭、冠状动脉疾病(cad)、缺血性心脏病(ihd)、二尖瓣狭窄和返流、心绞痛、肥厚性心肌病、糖尿病性心肌病、室上性和室性心律失常、心律不齐、房颤(af)、新发房颤、复发性房颤、心脏纤维化、心房扑动、有害血管重塑、斑块稳定和心肌梗死(mi)。
[0051]
在本发明的一方面，本文提供了本文所述的抗体或其抗原结合片段或者本文所述的药物组合物或组合中的任一者，用于在需要这种治疗的受试者中治疗心力衰竭、肥厚性心肌病(hcm)、高血压、先兆子痫、哮喘、青光眼和/或细胞因子释放综合征。
[0052]
在本发明的一些实施例中，所述受试者患有心力衰竭，并且所述心力衰竭选自射血分数降低的心力衰竭(hfref)、射血分数保留的心力衰竭(hfpef)、急性心肌梗死后心力衰竭或急性代偿性心力衰竭。在本发明的一些实施例中，所述受试者患有肥厚性心肌病，其中所述肥厚性心肌病是心室肥大。在本发明的一些实施例中，所述受试者患有高血压，其中所述高血压选自顽固性高血压、高血压性心脏病、肺高血压、肺动脉高血压、单纯收缩期高血压、顽固性高血压和肺动脉高血压。在本发明的一些实施例中，所述受试者患有高血压，其中所述高血压选自顽固性高血压或高血压性心脏病。
[0053]
在本发明的一方面，本文提供了本文所述的抗体或其抗原结合片段或者本文所述的药物组合物或组合中的任一者，用于在需要这种治疗的受试者中治疗肾障碍。在本发明的一些实施例中，所述肾障碍选自：糖尿病肾功能不全、非糖尿病肾功能不全、肾衰竭、糖尿病肾病、非糖尿病肾病、急性肾损伤、造影剂诱发的肾病、肾病综合征、肾小球肾炎、硬皮病、肾小球硬化、原发性肾病蛋白尿、肾血管性高血压、糖尿病视网膜病变和终末期肾脏疾病(esrd)、内皮功能障碍、舒张功能障碍、肾纤维化和多囊肾疾病(pkd)。
[0054]
在本发明的一方面，本文提供了一种在有需要的受试者中治疗与利钠肽受体活性有关的障碍或疾病的方法，所述方法包括施用药物组合物，所述药物组合物包含：在不存在anp的情况下结合利钠肽受体1(npr1)并活化npr1的装置；和药学上可接受的赋形剂。
[0055]
在本发明的一方面，本文提供了一种在有需要的受试者中治疗心血管障碍的方法，所述方法包括施用药物组合物，所述药物组合物包含：在不存在anp的情况下结合利钠肽受体1(npr1)并活化npr1的装置；和药学上可接受的赋形剂。在本发明的一些实施例中，所述心血管障碍选自：高血压、周围血管疾病、心力衰竭、冠状动脉疾病(cad)、缺血性心脏病(ihd)、二尖瓣狭窄和返流、心绞痛、肥厚性心肌病、糖尿病性心肌病、室上性和室性心律
失常、心律不齐、房颤(af)、新发房颤、复发性房颤、心脏纤维化、心房扑动、有害血管重塑、斑块稳定和心肌梗死(mi)。
[0056]
在本发明的一方面，本文提供了一种在有需要的受试者中治疗心力衰竭、肥厚性心肌病(hcm)、高血压、先兆子痫、哮喘、青光眼和/或细胞因子释放综合征的方法，所述方法包括施用药物组合物，所述药物组合物包含：在不存在anp的情况下结合利钠肽受体1(npr1)并活化npr1的装置；和药学上可接受的赋形剂。在本发明的一些实施例中，所述受试者患有心力衰竭，其中所述心力衰竭选自射血分数降低的心力衰竭(hfref)、射血分数保留的心力衰竭(hfpef)、急性心肌梗死后心力衰竭或急性代偿性心力衰竭。在本发明的一些实施例中，所述受试者患有肥厚性心肌病，其中所述肥厚性心肌病是心室肥大。在本发明的一些实施例中，所述受试者患有高血压，其中所述高血压选自顽固性高血压、高血压性心脏病、肺高血压、肺动脉高血压、单纯收缩期高血压、顽固性高血压和肺动脉高血压。在本发明的一些实施例中，所述受试者患有高血压，其中所述高血压选自顽固性高血压或高血压性心脏病。
[0057]
在本发明的一方面，本文提供了一种在有需要的受试者中治疗肾障碍的方法，所述方法包括施用药物组合物，所述药物组合物包含：在不存在anp的情况下结合利钠肽受体1(npr1)并活化npr1的装置；和药学上可接受的赋形剂。在本发明的一些实施例中，所述肾障碍选自：糖尿病肾功能不全、非糖尿病肾功能不全、肾衰竭、糖尿病肾病、非糖尿病肾病、急性肾损伤、造影剂诱发的肾病、肾病综合征、肾小球肾炎、硬皮病、肾小球硬化、原发性肾病蛋白尿、肾血管性高血压、糖尿病视网膜病变和终末期肾脏疾病(esrd)、内皮功能障碍、舒张功能障碍、肾纤维化和多囊肾疾病(pkd)。在本发明的一些实施例中，所述用于结合和活化的装置是anp非竞争性的。在本发明的一些实施例中，所述用于结合和活化的装置是anp竞争性的。在本发明的一些实施例中，所述用于结合和活化的装置另外地能够稳定anp-npr1复合物。
附图说明
[0058]
图1是一组显示在不存在和存在250倍摩尔过量的anp的情况下，抗体候选物ww01、ww02、ww03、ww04和ww06与以下抗原结合的结果的图(elisa分析)：人npr1、组成型活性人npr1突变体(w74r)、大鼠npr1和人npr3(反向靶标)。
[0059]
图2是一组图，显示了针对与在不存在和存在饱和浓度的anp的情况下的表达人npr1的cho-k1细胞的结合和在亲本cho-k1细胞上的结合，抗体候选物ww01、ww02、ww03、ww04和ww06的流式细胞仪分析结果。
[0060]
图3是基于荧光共振能量转移(fret)的测定的图示，其中npr1特异性抗体与anp竞争与npr1的结合。在此基于fret的测定中，使用eu标记的链霉亲和素(用于测量igg)或eu标记的抗hfc抗体(用于测量fabcys)作为能量供体，而cy5标记的anp用作受体。
[0061]
图4是一组图，显示了使用图3中所示的基于fret的测定对候选物ww01、ww02、ww03、ww04和ww06进行anp竞争分析的结果。
[0062]
图5是一组图，描述了在使用表达人npr1的cho-k1细胞的细胞cgmp产生测定中候选物ww01、ww02、ww03、ww04和ww06的功能活性分析结果。结果代表在不存在或存在0.075nm anp的情况下cgmp[nm]的细胞产生。
[0063]
图6是一组图，描述了在使用表达人npr1的cho-k1细胞的细胞cgmp产生测定中igg或fabcys形式的候选物ww06的功能活性分析结果。结果代表在不存在或存在0.075nm anp的情况下cgmp[nm]的细胞产生。
[0064]
图7显示的82个基于亲本抗体hcdr2或lcdr3唯一改善的衍生物的set筛选(hnpr1亲和力)结果。
[0065]
图8显示的82个基于亲本抗体hcdr2或lcdr3唯一改善的衍生物的set筛选(hnpr1-anp复合物亲和力)结果。
[0066]
图9是一组显示在不存在或存在250倍摩尔过量的anp的情况下，抗体候选物xx01-xx08、xx10和xx12与以下抗原结合的结果的图(elisa分析)：人npr1、组成型活性人npr1突变体(w74r)、大鼠npr1和人npr3(反向靶标)。
[0067]
图10是一组图，显示了针对与在不存在或存在饱和浓度的anp的情况下的表达人npr1的cho-k1细胞的结合和在亲本cho-k1细胞上的结合，抗体候选物xx01-xx08、xx10和xx12的流式细胞仪分析结果。
[0068]
图11是一组图，显示了使用图3中所示的基于fret的测定对候选物xx01-xx07、xx10和xx12进行anp竞争分析的结果。
[0069]
图12是一组图，描述了在使用表达人npr1的cho-k1细胞的细胞cgmp产生测定中候选物xx01-xx08、xx10和xx12的功能活性分析结果。结果代表在不存在或存在0.075nm anp的情况下cgmp[nm]的细胞产生。
[0070]
图13是一组图，描述了在使用表达人npr1的cho-k1细胞的细胞cgmp产生测定中候选物xx06和xx16和天然配体anp的功能活性分析结果。结果代表在不存在或存在0.075nm anp的情况下cgmp[nm]的细胞产生。
[0071]
图14是如下图，其描述了在使用表达人npr1的cho-k1细胞的细胞cgmp产生测定中候选物xx16和天然配体anp的功能活性分析结果。结果代表了cgmp[nm]的细胞产生为anp或xx16的函数。
[0072]
图15是与hnpr1胞外结构域复合的fab06(fab形式的ww06抗体)的晶体结构的图示。
[0073]
图16是hnpr1胞外结构域的构象的图示，就像与fab06复合一样。从该图示中除去fab06以更清楚地揭示由fab结合诱导的hnpr1的构象。w74r以空间填充表示。
[0074]
图17是与anp复合的hnpr1胞外结构域的晶体结构(左)和与hnpr1胞外结构域复合物的fab16(fab形式的xx16抗体)的晶体结构(右)的图示，其中w74以空间填充表示。
[0075]
图18是一组图，其描绘了与wt hnpr1(图b)进行比较时，当在表达hnpr1 w74r/c232t(组成型活性突变体；图a)的cho-k1细胞上测试时，在细胞cgmp产生测定中候选物ww06的功能活性分析结果。
[0076]
图19是一组显示在不存在或存在250倍摩尔过量的anp的情况下抗体候选物yy01-yy07与以下抗原结合的结果的图(elisa分析)：人npr1、组成型活性人npr1突变体(w74r)、大鼠npr1和人npr3(反向靶标)。
[0077]
图20是一组图，显示了针对与在不存在或存在饱和浓度的anp的情况下的表达人npr1的cho-k1细胞的结合和在亲本cho k1细胞上的结合，抗体候选物yy01-yy07的流式细胞仪分析结果。
[0078]
图21是一组图，显示了使用图3中所示的基于fret的测定对候选物yy01-yy07进行anp竞争分析的结果。
[0079]
图22是一组图，描述了在使用表达人npr1的cho-k1细胞的细胞cgmp产生测定中候选物yy01-yy07的功能活性分析结果。结果代表在不存在或存在0.075nm anp的情况下cgmp[nm]的细胞产生。
[0080]
图23是一组图，描述了在使用表达人npr1的cho-k1细胞的细胞cgmp产生测定中igg或fabcys形式的候选物yy05和yy07的功能活性分析结果。结果代表在不存在或存在0.075nm anp的情况下cgmp[nm]的细胞产生。
[0081]
图24显示的112个基于亲本抗体hcdr1/2或lcdr3唯一改善的衍生物的set筛选(hnpr1亲和力)结果。
[0082]
图25显示的112个基于亲本抗体hcdr1/2或lcdr3唯一改善的衍生物的set筛选(hnpr1-anp复合物亲和力)结果。
[0083]
图26是一组图，表示在hnpr1 tg小鼠中血浆cgmp(nm)浓度随时间的变化，所述小鼠经静脉内注射1mg/kg、3mg/kg或10mg/kg的ww06 fab。
[0084]
图27是如下图，表示在hnpr1 tg小鼠中抗体浓度随时间的变化，所述小鼠经静脉内注射1mg/kg、3mg/kg或10mg/kg的ww06 fab。
[0085]
图28是一组图，显示了在野生型或anp敲除(anp ko)小鼠中每两周皮下施用媒介物、0.3mg/kg xx16或3mg/kg xx16一次，有关心脏重量/体重比(左)和血浆nt-probnp水平(pg/ml；右)的结果。第二次施用后两周进行测量。
[0086]
图29是一组图，显示了在高血压大鼠(易卒中型自发性高血压大鼠，shrsp)中单次静脉内施用媒介物、0.3mg/kg xx16或1mg/kg xx16，有关血压(平均动脉压；左)和尿流率(右)的结果。静脉内施用后三小时进行测量。
[0087]
图30是一组图，显示了在遥测植入的正常大鼠中单次皮下施用0.1、0.3、1、3、10或30mg/kg xx16，有关平均动脉压(map；上图)和血浆cgmp(下图)随时间变化的结果。
[0088]
图31是一组图，描述了在使用表达人npr1的cho-k1细胞或表达大鼠npr1的大鼠细胞的细胞cgmp产生测定中候选物ww03和对比物抗体(来自pct申请号wo 2010/065293 a1的抗体5591-igg)的功能活性分析结果。结果代表在不存在或存在0.075nm anp(人或大鼠)的情况下cgmp[nm]的细胞产生。
[0089]
通用定义
[0090]
为了可以更容易地理解本披露，首先定义某些术语。根据需要，另外的定义在整个具体实施方式中陈述。
[0091]
在本说明书的整个说明书和权利要求书中，词语“包含(comprise)”和“含有”及其变体，例如“包含(comprising和comprises)”，意指“包括但不限于”，并且不排除其他组分、整数或步骤。此外，单数包含复数，除非上下文另有要求：特别地，在使用不定冠词的情况下，除非上下文另外要求，否则说明书应被理解为涵盖了复数以及单数。
[0092]
如本文所用，“npr1”和“npr1蛋白”是指利钠肽受体1。该蛋白也称为心钠肽受体a型(anp-a，anpr-a或npr-a)和鸟苷酸环化酶a(gc-a)。在一些实施例中，所提及的npr1是人npr1。在一些实施例中，人npr1具有uniprot登录号p16066或genbank登录号eaw53284.1(seq id no:1)。在一些实施例中，所提及的npr1是小鼠(小家鼠)npr1。在一些实施例中，小
鼠npr1具有ncbi参考序列号np_032753.5(seq id no:2)。在一些实施例中，所提及的npr1是大鼠(褐家鼠)npr1。在一些实施例中，大鼠npr1具有ncbi参考序列号np_036745.1(seq id no:3)。示例性npr1蛋白在表1中示出。在本文讨论组成性活性或w74r突变体的情况下，该突变体是指成熟人npr1蛋白第74位氨基酸处的trp，也可以称为seq id no:1中所示的hnpr1蛋白第106位氨基酸处的trp。
[0093]
表1.npr1蛋白序列
[0094]
[0095][0096]
在各种实施例中，本文披露的抗npr1抗体和抗原结合片段能够在不存在anp的情况下结合npr1并活化npr1。凭借这种活性，所披露的抗npr1抗体和抗原结合片段可用于治疗不希望的病症、疾病和障碍，包括心血管障碍(例如高血压、周围血管疾病、心力衰竭(包括但不限于射血分数降低的心力衰竭(hfref)、射血分数保留的心力衰竭(hfpef)、急性心肌梗死后心力衰竭或急性代偿性心力衰竭)、冠心病(cad)、缺血性心脏病(ihd)、二尖瓣狭窄和反流、心绞痛、肥厚性心肌病(例如，心室肥大)、糖尿病性心肌病、室上性和室性心律失常、心律不齐、房颤(af)、新发房颤、复发性房颤、心脏纤维化、心房扑动、有害血管重塑、斑块稳定或心肌梗死(mi))、高血压(顽固性高血压、高血压性心脏病、肺高血压、肺动脉高血压、单纯收缩期高血压、顽固性高血压或肺动脉高血压)、先兆子痫、哮喘、青光眼、细胞因子释放综合征和/或肾障碍(例如，糖尿病肾功能不全、非糖尿病肾功能不全、肾衰竭、糖尿病肾病、非糖尿病肾病、急性肾损伤、造影剂诱发的肾病、肾病综合征、肾小球肾炎、硬皮病、肾小球硬化、原发性肾病蛋白尿、肾血管性高血压、糖尿病视网膜病变和终末期肾脏疾病(esrd)、内皮功能障碍、舒张功能障碍、肾纤维化和多囊肾疾病(pkd))。
[0097]
如本文所用，术语“抗体”是指全抗体或其抗原结合片段。全抗体是包含由二硫键互相连接的至少两条重(h)链和两条轻(l)链的糖蛋白。每条重链由重链可变区(本文中缩
写为vh)和重链恒定区组成。重链恒定区由三个结构域，即ch1、ch2和ch3组成。每条轻链由轻链可变区(本文中缩写为vl)和轻链恒定区组成。轻链恒定区由一个结构域，即cl组成。vh和vl区可进一步细分为高变区，称为互补性决定区(cdr)，其间穿插有称为框架区(fr)的较保守区。每个vh和vl由从氨基末端排到羧基末端按以下顺序排列的三个cdr和四个fr构成：fr1、cdr1、fr2、cdr2、fr3、cdr3、fr4。重链和轻链的可变区含有与抗原相互作用的结合结构域。抗体的恒定区可以介导免疫球蛋白与宿主组织或因子(包括免疫系统的各种细胞(例如，效应细胞)以及经典补体系统的第一组分(clq))的结合。术语“抗体”包括但不限于单克隆抗体、人抗体、人源化抗体、骆驼源化(camelised)抗体、和嵌合抗体。抗体可以属于任何同种型/类别(例如，igg、ige、igm、igd、iga和igy)或亚类(例如igg1、igg2、igg3、igg4、iga1和iga2)。
[0098]
术语“抗原结合片段”是指完整抗体的片段，其保留特异性结合给定抗原(例如npr1)和/或提供完整抗体功能的能力。此类片段包括fab片段、fab
′
片段，其是由vl、vh、cl和ch1结构域组成的单价片段；f(ab
′
)2片段，其是包含在铰链区通过二硫桥连接的两个fab片段的二价片段；fd片段，其由vh和ch1结构域组成；fv片段，其由vl和vh结构域组成，单链fv片段(scfv)，其由通过接头序列连接的vl和vh结构域组成；以及单结构域抗体(dab)片段，其由vh结构域或vl结构域组成(ward等人,1989nature[自然]341:544-546)。
[0099]
术语“单链抗体”、“单链fv”或“scfv”意指包含由接头连接的抗体重链可变结构域(或区；vh)和抗体轻链可变结构域(或区；vl)的分子。此类scfv分子可以具有通用结构：nh2-vl-接头-vh-cooh或nh2-vh-接头-vl-cooh。可以使用任何合适的接头。可以在此类单链抗体中使用的一组非限制性接头描述于以下文献：holliger等人(1993),proc.natl.acad.sci.usa[美国国家科学院院刊]90:6444-6448,alfthan等人(1995),protein eng.[蛋白质工程]8:725-731,choi等人(2001),eur.j.immunol.[欧洲免疫学杂志]31:94-106,hu等人(1996),cancer res.[癌症研究]56:3055-3061,kipriyanov等人(1999),j.mol.biol.[分子生物学杂志]293:41-56和roovers等人(2001),cancer immunol[癌症免疫学]；将其各自的内容特此通过引用并入本文。术语抗体的“抗原结合片段”也意在涵盖此类单链抗体。这些抗体片段是使用本领域技术人员已知的技术获得的，并且以与完整抗体相同的方式针对效用来筛选这些片段。没有限制，可以通过本领域已知的任何合适方法产生抗原结合片段。例如，本文所述的各种抗原结合片段可通过完整抗体的酶促或化学修饰产生，使用重组dna方法(例如单链fv)从头合成，或使用噬菌体展示文库鉴定(参见例如pini和bracci,curr protein pept sci[当前蛋白质和肽科学]2000；1(2):155-69，将其内容特此通过引用并入本文)。以与完整抗体相同的方式筛选抗原结合片段的效用(例如，结合亲和力、活性)。
[0100]
抗原结合片段还可以掺入到单结构域抗体、大型抗体(maxibody)、微型抗体(minibody)、胞内抗体、双体抗体、三体抗体、四体抗体、v-nar和bis-scfv中(参见例如，hollinger和hudson,2005,nature biotechnology[自然生物技术],23,9,1126-1136，将其内容特此通过引用并入本文)。可以基于多肽诸如iii型纤连蛋白(fn3)将抗体的抗原结合部分移植到支架中(参见例如美国专利号6,703,199，其描述了纤连蛋白多肽单体，将其内容特此通过引用并入本文)。
[0101]
抗原结合片段可以掺入包含一对串联fv区段(vh-ch1-vh-ch1)的单链分子中，该
单链分子与互补轻链多肽共同形成一对抗原结合区(参见zapata等人,1995protein eng.[蛋白质工程]8(10):1057-1062；和美国专利号5,641,870；将其各自的内容特此通过引用并入本文)。
[0102]
在整个说明书中，术语“分离的”是指免疫球蛋白、抗体或多核苷酸(视情况而定)存在于与自然环境中不同的物理环境中。例如，不分离存在于活生物体中的天然存在的多核苷酸或多肽，而是分离从活生物体中的一些或所有共存材料中分出的相同多核苷酸或多肽。
[0103]
如本文所用，术语“分离的抗体”是指已鉴定并与其来源环境中的一种或多种(例如大部分)组分(按重量计)分开的抗体，例如与杂交瘤细胞培养物或用于其生产的不同细胞培养物的组分分开(例如，生产细胞，包括但不限于本文所述的重组表达抗体的示例性宿主细胞)。进行分开使得其充分除去可能以其他方式干扰抗体对所需应用(例如，针对抗npr1抗体的治疗用途)的适合性的组分。制备分离的抗体的方法是本领域已知的，并且包括蛋白a色谱、阴离子交换色谱、阳离子交换色谱、病毒保留过滤和超滤。
[0104]
在整个说明书中，互补决定区(“cdr”)是根据卡巴特定义来定义的，除非指明cdr是根据另一定义来定义的。可以使用许多众所周知的方案中的任何一种来确定给定cdr的精确氨基酸序列边界，这些方案包括以下描述的那些：kabat等人(1991),“sequences of proteins of immunological interest[免疫学感兴趣的蛋白质序列]”,第5版.public health service[公共卫生服务],美国国立卫生研究院(national institutes of health),贝塞斯达(bethesda),马里兰州(md)(“卡巴特”编号方案)；al-lazikani等人,(1997)jmb 273,927-948(“乔西亚(chothia)”编号方案)以及immunogentics(imgt)编号(lefranc,m.-p.,the immunologist[免疫学家],7,132-136(1999)；lefranc,m.-p.等人,dev.comp.immunol.[发育与比较免疫学],27,55-77(2003)(“imgt”编号方案)；将其各自的内容特此通过引用并入本文。例如，对于经典形式，根据卡巴特，重链可变结构域(vh)中的cdr氨基酸残基编号为31-35(hcdr1)、50-65(hcdr2)和95-102(hcdr3)；轻链可变结构域(vl)中的cdr氨基酸残基编号为24-34(lcdr1)、50-56(lcdr2)和89-97(lcdr3)。根据乔西亚，将vh中的cdr氨基酸编号为26-32(hcdr1)、52-56(hcdr2)和95-102(hcdr3)；并且将vl中的氨基酸残基编号为26-32(lcdr1)、50-52(lcdr2)和91-96(lcdr3)。通过结合卡巴特和乔西亚二者的cdr定义，cdr由人vh中的氨基酸残基26-35(hcdr1)、50-65(hcdr2)和95-102(hcdr3)和人vl中的氨基酸残基24-34(lcdr1)、50-56(lcdr2)和89-97(lcdr3)组成。根据imgt，vh中的cdr氨基酸残基编号为大约26-35(cdr1)、51-57(cdr2)和93-102(cdr3)，并且vl中的cdr氨基酸残基编号为大约27-32(cdr1)、50-52(cdr2)和89-97(cdr3)(根据“卡巴特”编号)。在imgt下，可以使用程序imgt/domaingap align确定抗体的cdr区。
[0105]
按照惯例，重链中的cdr区通常称为hcdr1、hcdr2和hcdr3，轻链中的cdr区通常称为lcdr1、lcdr2和lcdr3。它们在从氨基末端到羧基末端的方向上顺序编号。
[0106]
如本文所用，术语“抗体框架”是指可变结构域的一部分，即vl或vh，其充当该可变结构域的抗原结合环(cdr)的支架。本质上，它是没有cdr的可变结构域。
[0107]
术语“恒定区”或“恒定结构域”是指轻链和重链的羧基末端部分，其不直接参与抗体与抗原的结合，但表现出多种效应子功能，例如与fc受体的相互作用。所述术语是指免疫球蛋白分子的一部分，相对于免疫球蛋白的另一部分，即可变结构域，具有更保守的氨基酸
序列，并且包含抗原结合位点。恒定结构域包含重链的ch1、ch2和ch3结构域，以及轻链的chl结构域。
[0108]
术语“表位”或“抗原决定簇”是指抗原上免疫球蛋白或抗体特异性结合的位点(例如靶分子上的特定位点)。表位典型地包括至少3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个呈独特空间构象的保守或非保守氨基酸。参见例如,epitope mapping protocols in methods in molecular biology[分子生物学方法中的表位作图方案],第66卷,g.e.morris编辑(1996)，将其内容特此通过引用并入本文。另外，如本文所用，表位可包含抗体特异性结合的多糖的一个或多个单糖单元。在特定方面，表位可以是构象表位。参见例如,thompson等人,2009,j.of biol.chem.[生物化学杂志]51:35621-35631，将其内容特此通过引用并入本文。
[0109]
如本文所用，术语“单克隆抗体”或“单克隆抗体组合物”是指从由特定细胞或细胞系产生的基本上均质的抗体群体中获得的抗体，其中包含所述群体的各个抗体在序列上基本上相同，除了可能少量存在的可能天然存在的突变。单克隆抗体制剂展示出对特定表位的单一结合特异性和亲和力。相反，常规的(多克隆)抗体制剂通常包括针对不同表位或对其具有特异性的多种抗体。修饰语“单克隆”表示从基本上均质的抗体群体获得的抗体的特征，而不应解释为要求通过任何特定方法生产抗体。单克隆抗体(mab)可以通过多种技术来产生，这些技术包括常规方法，例如kohler和milstein(nature[自然]1975；256(5517):495-7，将其内容特此通过引用并入本文)的标准体细胞杂交技术。单克隆抗体也可以从其他合适的方法获得，包括噬菌体展示技术，例如在以下文献中描述的那些：clackson等人(nature[自然]1991；352(6336):624-8)或marks等人(j mol biol[分子生物学杂志]1991；222(3):581-97)，将其各自的内容特此通过引用并入本文。术语“单克隆抗体”也不限于来自特定来源物种或来自一个单一来源物种的抗体序列。因此，术语“单克隆抗体”的含义涵盖嵌合单克隆抗体，例如人源化单克隆抗体。
[0110]
如本文所用，术语“嵌合抗体”是指如下抗体，其中(a)恒定区被改变、替换或交换，使得抗原结合位点(可变区)连接至类别、效应子功能和/或种类不同或改变的恒定区；或(b)将可变区或其部分与具有不同或改变的抗原特异性的可变区或其部分进行改变、替换或交换。为了产生嵌合抗体，可以使用本领域已知的方法将来自非人供体抗体(例如，小鼠、兔或大鼠供体抗体)的可变区序列连接至人恒定区(参见例如，美国专利号4,816,567(cabilly等人)，将其内容特此通过引用并入本文)。例如，可以通过用来自人免疫球蛋白的恒定区替代其恒定区来修饰小鼠抗npr1抗体。由于被人恒定区置换，所述嵌合抗体可以保留其识别人npr1的特异性，同时与原始小鼠抗体相比在人体中具有降低的免疫原性。
[0111]
如本文所用，术语“人源化抗体”是指包含至少一些人序列和至少一些非人序列的抗体形式。通常，抗体包含赋予靶抗原结合特异性的人序列和一小部分的非人序列。此类抗体是嵌合抗体，其包含衍生自非人免疫球蛋白的最小序列并保留非人抗体的反应性，同时在人中的免疫原性较低。通常，人源化抗体是通过将人受体抗体的高变区序列替换为与目标抗原(例如npr1)结合的非人供体抗体(例如小鼠、兔或大鼠供体抗体)来产生。在一些情况下，受体抗体的框架区序列也可以用供体抗体的相应序列代替(例如经由亲和力成熟)。除了衍生自供体和受体抗体的序列外，人源化抗体还可以通过在框架区和/或置换的非人残基内进行残基取代来修饰，以改善和优化如本文所述的抗体特异性、亲和力和/或活性。
产生人源化抗体的方法是本领域已知的。参见例如riechmann等人(nature[自然]1988；332(6162):323-7)；jones等人(nature[自然]1986；321(6069):522-5)；美国专利号5,225,539(winter)；以及美国专利号5,530,101、5,585,089、5,693,762和6,180,370(queen等人)，将其各自的内容特此通过引用并入本文。
[0112]
如本文所用，术语“人抗体”旨在包括具有可变区的抗体，其中框架区和cdr区两者均衍生自人来源的序列。此外，如果抗体含有恒定区，则恒定区也源自此类人序列，例如人种系序列，或人种系序列的突变形式或含有衍生自人框架序列分析的共有框架序列的抗体，例如，如knappik等人,(2000),j mol biol[分子生物学杂志]；296:57-86所述，将其内容特此通过引用并入本文。人抗体可以包括不是由人序列编码的氨基酸残基(例如，通过在体外随机诱变或位点特异性诱变或通过在体内体细胞突变来引入的突变)。
[0113]
本披露的抗体或抗原结合片段可以包括并非由人序列编码的氨基酸残基(例如，在体外通过随机或位点特异性诱变引入的突变或在体内通过体细胞突变引入的突变)。然而，如本文所用的，所述术语“人抗体”不旨在包括其中衍生自另一种哺乳动物物种(例如小鼠)种系的cdr序列已被移植到人类框架序列中的抗体。
[0114]
术语“肽”、“多肽”和“蛋白质”在本文中可互换使用来指氨基酸残基的聚合物。所述术语涵盖氨基酸聚合物，其中一个或多个氨基酸残基是相应天然存在的氨基酸的人工化学模拟物，以及适用于天然存在的氨基酸聚合物和非天然存在的氨基酸聚合物。除非另外指示，否则特定的多肽序列还隐含地涵盖其经保守修饰的变体。
[0115]
术语“经保守修饰的变体”适用于氨基酸和核酸序列两者。对于核酸序列，经保守修饰的变体是指编码相同或基本上相同的氨基酸序列的那些核酸，或者在所述核酸不编码氨基酸序列的情况下，是指基本上相同的序列。由于遗传密码的简并性，大量功能上相同的核酸编码任何给定的蛋白质。例如，密码子gca、gcc、gcg和gcu均编码氨基酸丙氨酸。因此，在由密码子指定丙氨酸的每个位置，所述密码子可以改变为任何所述的相应密码子而不改变编码的多肽。此类核酸变异是“沉默变异”，所述变异是保守修饰变异中的一种。本文中编码多肽的每个核酸序列也描述了核酸的每种可能沉默变异。技术人员应认识到，核酸中的每个密码子(除了通常是甲硫氨酸的唯一密码子的aug和通常是色氨酸的唯一密码子的tgg)均可以经修饰以产生功能上相同的分子。因此，在每个所述序列中均隐含了编码多肽的核酸的每种沉默变异。对于多肽序列，“经保守修饰的变体”包括对多肽序列的单个取代、缺失或添加，从而使某个氨基酸取代为化学上类似的氨基酸。提供功能上类似的氨基酸的保守取代表是本领域中熟知的。以下8组含有互为保守取代的氨基酸：
[0116]
1)丙氨酸(a)、甘氨酸(g)；
[0117]
2)天冬氨酸(d)、谷氨酸(e)；
[0118]
3)天冬酰胺(n)、谷氨酰胺(q)；
[0119]
4)精氨酸(r)、赖氨酸(k)；
[0120]
5)异亮氨酸(i)、亮氨酸(l)、甲硫氨酸(m)、缬氨酸(v)；
[0121]
6)苯丙氨酸(f)、酪氨酸(y)、色氨酸(w)；
[0122]
7)丝氨酸(s)、苏氨酸(t)；以及
[0123]
8)半胱氨酸(c)、甲硫氨酸(m)。
[0124]
术语“同一性”或“同源性”是指通过比较序列确定的两个或更多个多肽的序列之
间的关系。“同一性”还指多肽之间的序列相关性程度，其由两个或更多个氨基酸残基的串之间的匹配数目决定。两个序列之间的同一性百分比是序列共用的相同位置数量的函数(即，同一性百分比等于相同位置数量/位置总数x 100)，将缺口数量和每个缺口的长度考虑在内，需要引入它们以便最佳比对两个序列。两个序列之间的序列比较和百分比同一性确定可以使用数学算法来完成。对于序列比较，典型地一个序列充当参考序列，将测试序列与所述参考序列比较。当使用序列比较算法时，将测试序列和参考序列输入到计算机中，必要时指定子序列坐标，并且指定序列算法程序参数。可以使用默认程序参数，或者可以指定替代参数。然后，序列比较算法将基于程序参数计算测试序列相对于参考序列的序列同一性百分比。另外或可替代地，本披露的蛋白质序列可进一步用作“查询序列”以在公共数据库中进行搜索，从而例如鉴定相关序列。例如，可以使用altschul等人(j mol biol[分子生物学杂志]1990；215(3):403-10，将其内容特此通过引用并入本文)的blast程序执行此类搜索。
[0125]
当在比较窗口或指定区域内进行比较和比对以在使用以下序列比较算法之一或通过手动比对和目视检查测量时获得最大对应时，如果两个序列具有规定百分比的相同的氨基酸残基或核苷酸(例如，在规定区域上或在没有规定时在整个序列上，60％同一性、65％同一性、70％同一性、75％同一性、80％同一性、85％同一性、90％同一性、95％同一性或99％同一性)，则所述两个序列是“基本上相同的”。任选地，所述同一性存在于长度为至少约50个核苷酸(或10个氨基酸)的区域上，或者存在于长度为100至500或1000或更多个核苷酸(或20、50、200或更多个氨基酸)的区域上。
[0126]
结合“亲和力”是指抗体和抗原在单个抗原位点处的相互作用强度。在每个抗原位点内，抗体“臂”的可变区通过弱非共价力在许多位点处与抗原相互作用。一般来说，相互作用越多，亲和力越强。通常，可以使用基于细胞的测定进行此类确定。
[0127]
如本文所用，术语“kassoc”或“ka”意在是指特定结合分子-抗原相互作用的缔合速率，而如本文所使用的术语“kdis”或“kd”意在是指特定结合分子-抗原相互作用的解离速率。如本文所用，术语“k
d”旨在指平衡解离常数，其由kd与ka的比(即kd/ka)获得并表示为摩尔浓度(m)。可以使用本领域良好建立的方法确定抗体的kd值。确定抗体的kd的方法是通过使用表面等离子体共振(如系统或溶液平衡滴定(set))来进行(参见friguet等人(1985)j.immunol.methods[免疫学方法杂志]；77(2):305-319；和hanel等人(2005)anal.biochem.[分析生物化学]；339(1):182-184，将其各自的内容特此通过引用并入本文)。
[0128]
如本文所用，术语“特异性”、“特异性结合(specifically binds)”和“特异性结合(binds specifically)”是指蛋白质和其他生物制品的均质种群中抗体或抗原结合片段(例如，抗npr1抗体)与靶抗原(例如，npr1)之间的结合反应。通过在一组给定的条件下比较与适当抗原的结合和与无关抗原或抗原混合物的结合，可以测试抗体的结合特异性。如果抗体以比不相关的抗原或抗原混合物高至少2、5、7，优选10或更多倍的亲和力结合适当的抗原，则认为是特异性的。“特异性抗体”或“靶特异性抗体”是仅结合靶抗原(例如，npr1)但不结合其他抗原的抗体(或表现出与其最小结合)。在某些实施例中，特异性结合靶抗原(例如，npr1)的抗体或抗原结合片段的kd小于1x10-6
m、小于1x10-7
m、小于1x10-8
m、小于1x10-9
m、小于1x10-10
m、小于1x10-11
m、小于1x10-12
m或小于1x10-13
m。在某些实施例中，kd为约1pm至约
600pm。在某些实施例中，kd在600pm至1μm、1μm至100nm或100mm至10nm(包括端值)之间。
[0129]
在一些实施例中，抗体或其抗原结合片段充当非竞争性激动剂。“非竞争性激动剂”是指在远离其天然配体的结合位点的位点处结合酶或受体的分子。非竞争性或变构激动剂通常独立于酶或受体的天然配体的缔合或浓度。这样的非竞争性激动剂可以例如提供可以基本上独立于天然配体的活化水平。在一个具体的实施例中，本文所述的抗npr1抗体或抗原结合片段是anp非竞争性的，意味着所述抗体或抗原结合片段充当激动剂，其在远离npr1的anp结合位点的位点处结合并影响激动活性，而不管npr1是否与anp结合。
[0130]
在一些实施例中，抗体或其抗原结合片段充当竞争性激动剂。“竞争性激动剂”是指干扰天然配体或与其竞争其在酶或受体上的结合位点的激动剂。在一个具体的实施例中，本文所述的抗npr1抗体或抗原结合片段是anp竞争性的，意味着所述抗体或抗原结合片段充当激动剂，其在npr1的anp结合位点与anp竞争。
[0131]
在一些实施例中，抗体或抗原结合片段对npr1的活化可以通过任何合适的测定来确定。用于确定npr1活化的示例性测定是由表达hnpr1的哺乳动物细胞(例如cho细胞或人细胞系)产生cgmp。
[0132]
在一些实施例中，可以通过任何合适的测定确定anp-npr1复合物的稳定化。用于确定anp-npr1复合物的稳定性的示例性测定是本文所述的fret测定(参见例如图3)。
[0133]
关于数值x的术语“约”意指例如x
±
10％。
[0134]
本披露的抗体
[0135]
以下披露了本披露的某些特定的抗npr1抗体序列。如本文所用，术语“抗npr1抗体”或“结合npr1的抗体”是指与npr1特异性结合的任何形式的抗体或抗原结合片段，例如，以小于1x10-8
m的kd结合的那些，如通过例如表面等离子共振(spr)光谱测定(使用biacore
tm
)或溶液平衡滴定(set)确定的。所述术语包括单克隆抗体(包括完整的单克隆抗体)、多克隆抗体和具有生物学功能的抗原结合片段，只要它们特异性结合npr1。
[0136]
表2列出了本披露的示例性抗npr1抗体的氨基酸和核酸序列。在一些实施例中，抗体具有表2中描述的任何抗体的重链和轻链cdr、vh和vl序列和/或重链和轻链序列。在一些实施例中，抗npr1抗体是四链抗体(也称为完整抗体)，其包含两个重链和两个轻链。在一些实施例中，抗npr1抗体是完整抗体的抗原结合片段，例如选自表2所列的那些的完整抗体的功能片段，其保留结合npr1和/或提供完整抗体功能的能力(例如，在不存在anp的情况下活化npr1)。在一些实施例中，抗npr1抗体是具有表2中所示的任何重链可变区和轻链可变区对的cdr的抗体。在一些实施例中，抗npr1抗体是具有表2中所示的任何重链和轻链对的cdr的抗体。
[0137]
表2.示例性抗npr1抗体序列
[0138]
[0139]
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[0221]
[0222][0223]
例如，ww01_lala可定义为具有选自如下的三个重链互补决定区(hcdr1、hcdr2和hcdr3)和三个轻链互补决定区(lcdr1、lcdr2和lcdr3)：(i)seq id no:4(hcdr1)、seq id no:5(hcdr2)、seq id no:6(hcdr3)、seq id no:17(lcdr1)、seq id no:18(lcdr2)和seq id no:19(lcdr3)；(ii)seq id no:7(hcdr1)、seq id no:5(hcdr2)、seq id no:6(hcdr3)、seq id no:17(lcdr1)、seq id no:18(lcdr2)和seq id no:19(lcdr3)；(iii)seq id no:8(hcdr1)、seq id no:9(hcdr2)、seq id no:6(hcdr3)、seq id no:20(lcdr1)、seq id no:21(lcdr2)和seq id no:22(lcdr3)；或(iv)seq id no:10(hcdr1)、seq id no:11(hcdr2)、seq id no:12(hcdr3)、seq id no:23(lcdr1)、seq id no:21(lcdr2)和seq id no:19(lcdr3)。在一些实施例中，ww01_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:4(hcdr1)、seq id no:5(hcdr2)、seq id no:6(hcdr3)、seq id no:17(lcdr1)、seq id no:18(lcdr2)、和seq id no:19(lcdr3)。在一些实施例中，ww01_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:7(hcdr1)、seq id no:5(hcdr2)、seq id no:6(hcdr3)、
seq id no:17(lcdr1)、seq id no:18(lcdr2)、和seq id no:19(lcdr3)。在一些实施例中，ww01_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:8(hcdr1)、seq id no:9(hcdr2)、seq id no:6(hcdr3)、seq id no:20(lcdr1)、seq id no:21(lcdr2)、和seq id no:22(lcdr3)。在一些实施例中，ww01_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:10(hcdr1)、seq id no:11(hcdr2)、seq id no:12(hcdr3)、seq id no:23(lcdr1)、seq id no:21(lcdr2)、和seq id no:19(lcdr3)。在一些实施例中，ww01_lala可以被定义为包含或具有重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含或具有seq id no:13的氨基酸序列，所述轻链可变区包含或具有seq id no:24的氨基酸序列。在一些实施例中，ww01_lala可以被定义为包含或具有重链和轻链，所述重链包含或具有seq id no:15的氨基酸序列，所述轻链包含或具有seq id no:26的氨基酸序列。
[0224]
例如，ww03_lala可以定义为具有选自如下的三个重链互补决定区(hcdr1、hcdr2和hcdr3)和三个轻链互补决定区(lcdr1、lcdr2和lcdr3)：(i)seq id no:28(hcdr1)、seq id no:29(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)和seq id no:43(lcdr3)；(ii)seq id no:31(hcdr1)、seq id no:29(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)和seq id no:43(lcdr3)；(iii)seq id no:32(hcdr1)、seq id no:33(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:44(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)和seq id no:46(lcdr3)；或(iv)seq id no:34(hcdr1)、seq id no:35(hcdr2)、seq id no:36(hcdr3)、seq id no:47(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)和seq id no:43(lcdr3)。在一些实施例中，ww03_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:28(hcdr1)、seq id no:29(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)、和seq id no:43(lcdr3)。在一些实施例中，ww03_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:31(hcdr1)、seq id no:29(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)、和seq id no:43(lcdr3)。在一些实施例中，ww03_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:32(hcdr1)、seq id no:33(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:44(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)、和seq id no:46(lcdr3)。在一些实施例中，ww03_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:34(hcdr1)、seq id no:35(hcdr2)、seq id no:36(hcdr3)、seq id no:47(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)、和seq id no:43(lcdr3)。在一些实施例中，ww03_lala可以被定义为包含或具有重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含或具有seq id no:37的氨基酸序列，所述轻链可变区包含或具有seq id no:48的氨基酸序列。在一些实施例中，ww03_lala可以被定义为包含或具有重链和轻链，所述重链包含或具有seq id no:39的氨基酸序列，所述轻链包含或具有seq id no:50的氨基酸序列。
[0225]
例如，ww05_lala可以定义为具有选自如下的三个重链互补决定区(hcdr1、hcdr2和hcdr3)和三个轻链互补决定区(lcdr1、lcdr2和lcdr3)：(i)seq id no:52(hcdr1)、seq id no:53(hcdr2)、seq id no:54(hcdr3)、seq id no:65(lcdr1)、seq id no:66(lcdr2)和seq id no:67(lcdr3)；(ii)seq id no:55(hcdr1)、seq id no:53(hcdr2)、seq id no:54(hcdr3)、seq id no:65(lcdr1)、seq id no:66(lcdr2)和seq id no:67(lcdr3)；(iii)seq id no:56(hcdr1)、seq id no:57(hcdr2)、seq id no:54(hcdr3)、seq id no:68(lcdr1)、seq id no:69(lcdr2)和seq id no:70(lcdr3)；或(iv)seq id no:58(hcdr1)、seq id no:
no:100(hcdr2)、seq id no:6(hcdr3)、seq id no:17(lcdr1)、seq id no:18(lcdr2)和seq id no:19(lcdr3)；(ii)seq id no:7(hcdr1)、seq id no:100(hcdr2)、seq id no:6(hcdr3)、seq id no:17(lcdr1)、seq id no:18(lcdr2)和seq id no:19(lcdr3)；(iii)seq id no:8(hcdr1)、seq id no:101(hcdr2)、seq id no:6(hcdr3)、seq id no:20(lcdr1)、seq id no:21(lcdr2)和seq id no:22(lcdr3)；或(iv)seq id no:10(hcdr1)、seq id no:102(hcdr2)、seq id no:12(hcdr3)、seq id no:23(lcdr1)、seq id no:21(lcdr2)和seq id no:19(lcdr3)。在一些实施例中，xx01_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:4(hcdr1)、seq id no:100(hcdr2)、seq id no:6(hcdr3)、seq id no:17(lcdr1)、seq id no:18(lcdr2)、和seq id no:19(lcdr3)。在一些实施例中，xx01_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:7(hcdr1)、seq id no:100(hcdr2)、seq id no:6(hcdr3)、seq id no:17(lcdr1)、seq id no:18(lcdr2)、和seq id no:19(lcdr3)。在一些实施例中，xx01_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:8(hcdr1)、seq id no:101(hcdr2)、seq id no:6(hcdr3)、seq id no:20(lcdr1)、seq id no:21(lcdr2)、和seq id no:22(lcdr3)。在一些实施例中，xx01_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:10(hcdr1)、seq id no:102(hcdr2)、seq id no:12(hcdr3)、seq id no:23(lcdr1)、seq id no:21(lcdr2)、和seq id no:19(lcdr3)。在一些实施例中，xx01_lala可以被定义为包含或具有重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含或具有seq id no:103的氨基酸序列，所述轻链可变区包含或具有seq id no:24的氨基酸序列。在一些实施例中，xx01_lala可以被定义为包含或具有重链和轻链，所述重链包含或具有seq id no:105的氨基酸序列，所述轻链包含或具有seq id no:26的氨基酸序列。
[0228]
例如，xx01_dapa可以定义为具有选自如下的三个重链互补决定区(hcdr1、hcdr2和hcdr3)和三个轻链互补决定区(lcdr1、lcdr2和lcdr3)：(i)seq id no:4(hcdr1)、seq id no:100(hcdr2)、seq id no:6(hcdr3)、seq id no:17(lcdr1)、seq id no:18(lcdr2)和seq id no:19(lcdr3)；(ii)seq id no:7(hcdr1)、seq id no:100(hcdr2)、seq id no:6(hcdr3)、seq id no:17(lcdr1)、seq id no:18(lcdr2)和seq id no:19(lcdr3)；(iii)seq id no:8(hcdr1)、seq id no:101(hcdr2)、seq id no:6(hcdr3)、seq id no:20(lcdr1)、seq id no:21(lcdr2)和seq id no:22(lcdr3)；或(iv)seq id no:10(hcdr1)、seq id no:102(hcdr2)、seq id no:12(hcdr3)、seq id no:23(lcdr1)、seq id no:21(lcdr2)和seq id no:19(lcdr3)。在一些实施例中，xx01_dapa可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:4(hcdr1)、seq id no:100(hcdr2)、seq id no:6(hcdr3)、seq id no:17(lcdr1)、seq id no:18(lcdr2)、和seq id no:19(lcdr3)。在一些实施例中，xx01_dapa可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:7(hcdr1)、seq id no:100(hcdr2)、seq id no:6(hcdr3)、seq id no:17(lcdr1)、seq id no:18(lcdr2)、和seq id no:19(lcdr3)。在一些实施例中，xx01_dapa可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:8(hcdr1)、seq id no:101(hcdr2)、seq id no:6(hcdr3)、seq id no:20(lcdr1)、seq id no:21(lcdr2)、和seq id no:22(lcdr3)。在一些实施例中，xx01_dapa可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:10(hcdr1)、seq id no:102(hcdr2)、seq id no:12(hcdr3)、seq id no:23(lcdr1)、seq id no:21(lcdr2)、和seq id no:19(lcdr3)。在一些实施例中，xx01_dapa可以被定义为包含或具有重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区
id no:43(lcdr3)。在一些实施例中，xx03_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:32(hcdr1)、seq id no:120(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:44(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)、和seq id no:46(lcdr3)。在一些实施例中，xx03_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:34(hcdr1)、seq id no:121(hcdr2)、seq id no:36(hcdr3)、seq id no:47(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)、和seq id no:43(lcdr3)。在一些实施例中，xx03_lala可以被定义为包含或具有重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含或具有seq id no:122的氨基酸序列，所述轻链可变区包含或具有seq id no:48的氨基酸序列。在一些实施例中，xx03_lala可以被定义为包含或具有重链和轻链，所述重链包含或具有seq id no:124的氨基酸序列，所述轻链包含或具有seq id no:50的氨基酸序列。
[0231]
例如，xx04_lala可以定义为具有选自如下的三个重链互补决定区(hcdr1、hcdr2和hcdr3)和三个轻链互补决定区(lcdr1、lcdr2和lcdr3)：(i)seq id no:28(hcdr1)、seq id no:29(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)和seq id no:126(lcdr3)；(ii)seq id no:31(hcdr1)、seq id no:29(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)和seq id no:126(lcdr3)；(iii)seq id no:32(hcdr1)、seq id no:33(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:44(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)和seq id no:127(lcdr3)；或(iv)seq id no:34(hcdr1)、seq id no:35(hcdr2)、seq id no:36(hcdr3)、seq id no:47(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)和seq id no:126(lcdr3)。在一些实施例中，xx04_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:28(hcdr1)、seq id no:29(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)、和seq id no:126(lcdr3)。在一些实施例中，xx04_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:31(hcdr1)、seq id no:29(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)、和seq id no:126(lcdr3)。在一些实施例中，xx04_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:32(hcdr1)、seq id no:33(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:44(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)、和seq id no:127(lcdr3)。在一些实施例中，xx04_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:34(hcdr1)、seq id no:35(hcdr2)、seq id no:36(hcdr3)、seq id no:47(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)、和seq id no:126(lcdr3)。在一些实施例中，xx04_lala可以被定义为包含或具有重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含或具有seq id no:37的氨基酸序列，所述轻链可变区包含或具有seq id no:128的氨基酸序列。在一些实施例中，xx04_lala可以被定义为包含或具有重链和轻链，所述重链包含或具有seq id no:39的氨基酸序列，所述轻链包含或具有seq id no:130的氨基酸序列。
[0232]
例如，xx06_lala可以定义为具有选自如下的三个重链互补决定区(hcdr1、hcdr2和hcdr3)和三个轻链互补决定区(lcdr1、lcdr2和lcdr3)：(i)seq id no:28(hcdr1)、seq id no:29(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)和seq id no:134(lcdr3)；(ii)seq id no:31(hcdr1)、seq id no:29(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)和seq id no:134(lcdr3)；(iii)seq id no:32(hcdr1)、seq id no:33(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:44
(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)和seq id no:135(lcdr3)；或(iv)seq id no:34(hcdr1)、seq id no:35(hcdr2)、seq id no:36(hcdr3)、seq id no:47(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)和seq id no:134(lcdr3)。在一些实施例中，xx06_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:28(hcdr1)、seq id no:29(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)、和seq id no:134(lcdr3)。在一些实施例中，xx06_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:31(hcdr1)、seq id no:29(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)、和seq id no:134(lcdr3)。在一些实施例中，xx06_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:32(hcdr1)、seq id no:33(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:44(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)、和seq id no:135(lcdr3)。在一些实施例中，xx06_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:34(hcdr1)、seq id no:35(hcdr2)、seq id no:36(hcdr3)、seq id no:47(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)、和seq id no:134(lcdr3)。在一些实施例中，xx06_lala可以被定义为包含或具有重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含或具有seq id no:37的氨基酸序列，所述轻链可变区包含或具有seq id no:136的氨基酸序列。在一些实施例中，xx06_lala可以被定义为包含或具有重链和轻链，所述重链包含或具有seq id no:39的氨基酸序列，所述轻链包含或具有seq id no:138的氨基酸序列。
[0233]
例如，xx06_dapa可以定义为具有选自如下的三个重链互补决定区(hcdr1、hcdr2和hcdr3)和三个轻链互补决定区(lcdr1、lcdr2和lcdr3)：(i)seq id no:28(hcdr1)、seq id no:29(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)和seq id no:134(lcdr3)；(ii)seq id no:31(hcdr1)、seq id no:29(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)和seq id no:134(lcdr3)；(iii)seq id no:32(hcdr1)、seq id no:33(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:44(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)和seq id no:135(lcdr3)；或(iv)seq id no:34(hcdr1)、seq id no:35(hcdr2)、seq id no:36(hcdr3)、seq id no:47(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)和seq id no:134(lcdr3)。在一些实施例中，xx06_dapa可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:28(hcdr1)、seq id no:29(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)、和seq id no:134(lcdr3)。在一些实施例中，xx06_dapa可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:31(hcdr1)、seq id no:29(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)、和seq id no:134(lcdr3)。在一些实施例中，xx06_dapa可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:32(hcdr1)、seq id no:33(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:44(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)、和seq id no:135(lcdr3)。在一些实施例中，xx06_dapa可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:34(hcdr1)、seq id no:35(hcdr2)、seq id no:36(hcdr3)、seq id no:47(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)、和seq id no:134(lcdr3)。在一些实施例中，xx06_dapa可以被定义为包含或具有重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含或具有seq id no:37的氨基酸序列，所述轻链可变区包含或具有seq id no:136的氨基酸序列。在一些实施例中，xx06_dapa可以被定义为包含或具有重链和轻链，所述重链包含或具有seq id no:141的氨基酸序列，所述轻链包含或具有seq id no:
id no:21(lcdr2)、和seq id no:22(lcdr3)。在一些实施例中，xx08_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:10(hcdr1)、seq id no:153(hcdr2)、seq id no:12(hcdr3)、seq id no:23(lcdr1)、seq id no:21(lcdr2)、和seq id no:19(lcdr3)。在一些实施例中，xx08_lala可以被定义为包含或具有重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含或具有seq id no:154的氨基酸序列，所述轻链可变区包含或具有seq id no:24的氨基酸序列。在一些实施例中，xx08_lala可以被定义为包含或具有重链和轻链，所述重链包含或具有seq id no:156的氨基酸序列，所述轻链包含或具有seq id no:26的氨基酸序列。
[0236]
例如，xx08_dapa可以定义为具有选自如下的三个重链互补决定区(hcdr1、hcdr2和hcdr3)和三个轻链互补决定区(lcdr1、lcdr2和lcdr3)：(i)seq id no:4(hcdr1)、seq id no:151(hcdr2)、seq id no:6(hcdr3)、seq id no:17(lcdr1)、seq id no:18(lcdr2)和seq id no:19(lcdr3)；(ii)seq id no:7(hcdr1)、seq id no:151(hcdr2)、seq id no:6(hcdr3)、seq id no:17(lcdr1)、seq id no:18(lcdr2)和seq id no:19(lcdr3)；(iii)seq id no:8(hcdr1)、seq id no:152(hcdr2)、seq id no:6(hcdr3)、seq id no:20(lcdr1)、seq id no:21(lcdr2)和seq id no:22(lcdr3)；或(iv)seq id no:10(hcdr1)、seq id no:153(hcdr2)、seq id no:12(hcdr3)、seq id no:23(lcdr1)、seq id no:21(lcdr2)和seq id no:19(lcdr3)。在一些实施例中，xx08_dapa可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:4(hcdr1)、seq id no:151(hcdr2)、seq id no:6(hcdr3)、seq id no:17(lcdr1)、seq id no:18(lcdr2)、和seq id no:19(lcdr3)。在一些实施例中，xx08_dapa可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:7(hcdr1)、seq id no:151(hcdr2)、seq id no:6(hcdr3)、seq id no:17(lcdr1)、seq id no:18(lcdr2)、和seq id no:19(lcdr3)。在一些实施例中，xx08_dapa可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:8(hcdr1)、seq id no:152(hcdr2)、seq id no:6(hcdr3)、seq id no:20(lcdr1)、seq id no:21(lcdr2)、和seq id no:22(lcdr3)。在一些实施例中，xx08_dapa可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:10(hcdr1)、seq id no:153(hcdr2)、seq id no:12(hcdr3)、seq id no:23(lcdr1)、seq id no:21(lcdr2)、和seq id no:19(lcdr3)。在一些实施例中，xx08_dapa可以被定义为包含或具有重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含或具有seq id no:154的氨基酸序列，所述轻链可变区包含或具有seq id no:24的氨基酸序列。在一些实施例中，xx08_dapa可以被定义为包含或具有重链和轻链，所述重链包含或具有seq id no:159的氨基酸序列，所述轻链包含或具有seq id no:26的氨基酸序列。
[0237]
例如，xx08_n30s_dapa可以定义为具有选自如下的三个重链互补决定区(hcdr1、hcdr2和hcdr3)和三个轻链互补决定区(lcdr1、lcdr2和lcdr3)：(i)seq id no:112(hcdr1)、seq id no:151(hcdr2)、seq id no:6(hcdr3)、seq id no:17(lcdr1)、seq id no:18(lcdr2)和seq id no:19(lcdr3)；(ii)seq id no:7(hcdr1)、seq id no:151(hcdr2)、seq id no:6(hcdr3)、seq id no:17(lcdr1)、seq id no:18(lcdr2)和seq id no:19(lcdr3)；(iii)seq id no:113(hcdr1)、seq id no:152(hcdr2)、seq id no:6(hcdr3)、seq id no:20(lcdr1)、seq id no:21(lcdr2)和seq id no:22(lcdr3)；或(iv)seq id no:114(hcdr1)、seq id no:153(hcdr2)、seq id no:12(hcdr3)、seq id no:23(lcdr1)、seq id no:21(lcdr2)和seq id no:19(lcdr3)。在一些实施例中，xx08_n30s_dapa可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:112(hcdr1)、seq id no:151
(hcdr2)、seq id no:6(hcdr3)、seq id no:17(lcdr1)、seq id no:18(lcdr2)、和seq id no:19(lcdr3)。在一些实施例中，xx08_n30s_dapa可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:7(hcdr1)、seq id no:151(hcdr2)、seq id no:6(hcdr3)、seq id no:17(lcdr1)、seq id no:18(lcdr2)、和seq id no:19(lcdr3)。在一些实施例中，xx08_n30s_dapa可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:113(hcdr1)、seq id no:152(hcdr2)、seq id no:6(hcdr3)、seq id no:20(lcdr1)、seq id no:21(lcdr2)、和seq id no:22(lcdr3)。在一些实施例中，xx08_n30s_dapa可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:114(hcdr1)、seq id no:153(hcdr2)、seq id no:12(hcdr3)、seq id no:23(lcdr1)、seq id no:21(lcdr2)、和seq id no:19(lcdr3)。在一些实施例中，xx08_n30s_dapa可以被定义为包含或具有重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含或具有seq id no:161的氨基酸序列，所述轻链可变区包含或具有seq id no:24的氨基酸序列。在一些实施例中，xx08_n30s_dapa可以被定义为包含或具有重链和轻链，所述重链包含或具有seq id no:163的氨基酸序列，所述轻链包含或具有seq id no:26的氨基酸序列。
[0238]
例如，xx08_n30q_dapa可以定义为具有选自如下的三个重链互补决定区(hcdr1、hcdr2和hcdr3)和三个轻链互补决定区(lcdr1、lcdr2和lcdr3)：(i)seq id no:165(hcdr1)、seq id no:151(hcdr2)、seq id no:6(hcdr3)、seq id no:17(lcdr1)、seq id no:18(lcdr2)和seq id no:19(lcdr3)；(ii)seq id no:7(hcdr1)、seq id no:151(hcdr2)、seq id no:6(hcdr3)、seq id no:17(lcdr1)、seq id no:18(lcdr2)和seq id no:19(lcdr3)；(iii)seq id no:166(hcdr1)、seq id no:152(hcdr2)、seq id no:6(hcdr3)、seq id no:20(lcdr1)、seq id no:21(lcdr2)和seq id no:22(lcdr3)；或(iv)seq id no:167(hcdr1)、seq id no:153(hcdr2)、seq id no:12(hcdr3)、seq id no:23(lcdr1)、seq id no:21(lcdr2)和seq id no:19(lcdr3)。在一些实施例中，xx08_n30q_dapa可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:165(hcdr1)、seq id no:151(hcdr2)、seq id no:6(hcdr3)、seq id no:17(lcdr1)、seq id no:18(lcdr2)、和seq id no:19(lcdr3)。在一些实施例中，xx08_n30q_dapa可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:7(hcdr1)、seq id no:151(hcdr2)、seq id no:6(hcdr3)、seq id no:17(lcdr1)、seq id no:18(lcdr2)、和seq id no:19(lcdr3)。在一些实施例中，xx08_n30q_dapa可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:166(hcdr1)、seq id no:152(hcdr2)、seq id no:6(hcdr3)、seq id no:20(lcdr1)、seq id no:21(lcdr2)、和seq id no:22(lcdr3)。在一些实施例中，xx08_n30q_dapa可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:167(hcdr1)、seq id no:153(hcdr2)、seq id no:12(hcdr3)、seq id no:23(lcdr1)、seq id no:21(lcdr2)、和seq id no:19(lcdr3)。在一些实施例中，xx08_n30q_dapa可以被定义为包含或具有重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含或具有seq id no:168的氨基酸序列，所述轻链可变区包含或具有seq id no:24的氨基酸序列。在一些实施例中，xx08_n30q_dapa可以被定义为包含或具有重链和轻链，所述重链包含或具有seq id no:170的氨基酸序列，所述轻链包含或具有seq id no:26的氨基酸序列。
[0239]
例如，xx09_lala可以定义为具有选自如下的三个重链互补决定区(hcdr1、hcdr2和hcdr3)和三个轻链互补决定区(lcdr1、lcdr2和lcdr3)：(i)seq id no:28(hcdr1)、seq id no:29(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)和
seq id no:172(lcdr3)；(ii)seq id no:31(hcdr1)、seq id no:29(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)和seq id no:172(lcdr3)；(iii)seq id no:32(hcdr1)、seq id no:33(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:44(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)和seq id no:173(lcdr3)；或(iv)seq id no:34(hcdr1)、seq id no:35(hcdr2)、seq id no:36(hcdr3)、seq id no:47(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)和seq id no:172(lcdr3)。在一些实施例中，xx09_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:28(hcdr1)、seq id no:29(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)、和seq id no:172(lcdr3)。在一些实施例中，xx09_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:31(hcdr1)、seq id no:29(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)、和seq id no:172(lcdr3)。在一些实施例中，xx09_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:32(hcdr1)、seq id no:33(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:44(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)、和seq id no:173(lcdr3)。在一些实施例中，xx09_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:34(hcdr1)、seq id no:35(hcdr2)、seq id no:36(hcdr3)、seq id no:47(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)、和seq id no:172(lcdr3)。在一些实施例中，xx09_lala可以被定义为包含或具有重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含或具有seq id no:37的氨基酸序列，所述轻链可变区包含或具有seq id no:174的氨基酸序列。在一些实施例中，xx09_lala可以被定义为包含或具有重链和轻链，所述重链包含或具有seq id no:39的氨基酸序列，所述轻链包含或具有seq id no:176的氨基酸序列。
[0240]
例如，xx11_lala可以定义为具有选自如下的三个重链互补决定区(hcdr1、hcdr2和hcdr3)和三个轻链互补决定区(lcdr1、lcdr2和lcdr3)：(i)seq id no:28(hcdr1)、seq id no:29(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)和seq id no:178(lcdr3)；(ii)seq id no:31(hcdr1)、seq id no:29(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)和seq id no:178(lcdr3)；(iii)seq id no:32(hcdr1)、seq id no:33(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:44(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)和seq id no:179(lcdr3)；或(iv)seq id no:34(hcdr1)、seq id no:35(hcdr2)、seq id no:36(hcdr3)、seq id no:47(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)和seq id no:178(lcdr3)。在一些实施例中，xx11_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:28(hcdr1)、seq id no:29(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)、和seq id no:178(lcdr3)。在一些实施例中，xx11_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:31(hcdr1)、seq id no:29(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)、和seq id no:178(lcdr3)。在一些实施例中，xx11_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:32(hcdr1)、seq id no:33(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:44(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)、和seq id no:179(lcdr3)。在一些实施例中，xx11_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:34(hcdr1)、seq id no:35(hcdr2)、seq id no:36(hcdr3)、seq id no:47(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)、和seq id no:178(lcdr3)。在一些实施例中，xx11_lala可以被定义为包含或具有重链可变区和轻链可变区，
所述重链可变区包含或具有seq id no:37的氨基酸序列，所述轻链可变区包含或具有seq id no:180的氨基酸序列。在一些实施例中，xx11_lala可以被定义为包含或具有重链和轻链，所述重链包含或具有seq id no:39的氨基酸序列，所述轻链包含或具有seq id no:182的氨基酸序列。
[0241]
例如，xx12_lala可以定义为具有选自如下的三个重链互补决定区(hcdr1、hcdr2和hcdr3)和三个轻链互补决定区(lcdr1、lcdr2和lcdr3)：(i)seq id no:28(hcdr1)、seq id no:29(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)和seq id no:184(lcdr3)；(ii)seq id no:31(hcdr1)、seq id no:29(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)和seq id no:184(lcdr3)；(iii)seq id no:32(hcdr1)、seq id no:33(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:44(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)和seq id no:185(lcdr3)；或(iv)seq id no:34(hcdr1)、seq id no:35(hcdr2)、seq id no:36(hcdr3)、seq id no:47(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)和seq id no:184(lcdr3)。在一些实施例中，xx12_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:28(hcdr1)、seq id no:29(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)、和seq id no:184(lcdr3)。在一些实施例中，xx12_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:31(hcdr1)、seq id no:29(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)、和seq id no:184(lcdr3)。在一些实施例中，xx12_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:32(hcdr1)、seq id no:33(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:44(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)、和seq id no:185(lcdr3)。在一些实施例中，xx12_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:34(hcdr1)、seq id no:35(hcdr2)、seq id no:36(hcdr3)、seq id no:47(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)、和seq id no:184(lcdr3)。在一些实施例中，xx12_lala可以被定义为包含或具有重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含或具有seq id no:37的氨基酸序列，所述轻链可变区包含或具有seq id no:186的氨基酸序列。在一些实施例中，xx12_lala可以被定义为包含或具有重链和轻链，所述重链包含或具有seq id no:39的氨基酸序列，所述轻链包含或具有seq id no:188的氨基酸序列。
[0242]
例如，xx13_lala可以定义为具有选自如下的三个重链互补决定区(hcdr1、hcdr2和hcdr3)和三个轻链互补决定区(lcdr1、lcdr2和lcdr3)：(i)seq id no:28(hcdr1)、seq id no:190(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)和seq id no:134(lcdr3)；(ii)seq id no:31(hcdr1)、seq id no:190(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)和seq id no:134(lcdr3)；(iii)seq id no:32(hcdr1)、seq id no:191(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:44(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)和seq id no:135(lcdr3)；或(iv)seq id no:34(hcdr1)、seq id no:192(hcdr2)、seq id no:36(hcdr3)、seq id no:47(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)和seq id no:134(lcdr3)。在一些实施例中，xx13_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:28(hcdr1)、seq id no:190(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)、和seq id no:134(lcdr3)。在一些实施例中，xx13_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:31(hcdr1)、
seq id no:190(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)、和seq id no:134(lcdr3)。在一些实施例中，xx13_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:32(hcdr1)、seq id no:191(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:44(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)、和seq id no:135(lcdr3)。在一些实施例中，xx13_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:34(hcdr1)、seq id no:192(hcdr2)、seq id no:36(hcdr3)、seq id no:47(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)、和seq id no:134(lcdr3)。在一些实施例中，xx13_lala可以被定义为包含或具有重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含或具有seq id no:193的氨基酸序列，所述轻链可变区包含或具有seq id no:136的氨基酸序列。在一些实施例中，xx13_lala可以被定义为包含或具有重链和轻链，所述重链包含或具有seq id no:195的氨基酸序列，所述轻链包含或具有seq id no:138的氨基酸序列。
[0243]
例如，xx14_lala可以定义为具有选自如下的三个重链互补决定区(hcdr1、hcdr2和hcdr3)和三个轻链互补决定区(lcdr1、lcdr2和lcdr3)：(i)seq id no:28(hcdr1)、seq id no:190(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)和seq id no:172(lcdr3)；(ii)seq id no:31(hcdr1)、seq id no:190(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)和seq id no:172(lcdr3)；(iii)seq id no:32(hcdr1)、seq id no:191(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:44(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)和seq id no:173(lcdr3)；或(iv)seq id no:34(hcdr1)、seq id no:192(hcdr2)、seq id no:36(hcdr3)、seq id no:47(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)和seq id no:172(lcdr3)。在一些实施例中，xx14_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:28(hcdr1)、seq id no:190(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)、和seq id no:172(lcdr3)。在一些实施例中，xx14_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:31(hcdr1)、seq id no:190(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)、和seq id no:172(lcdr3)。在一些实施例中，xx14_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:32(hcdr1)、seq id no:191(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:44(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)、和seq id no:173(lcdr3)。在一些实施例中，xx14_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:34(hcdr1)、seq id no:192(hcdr2)、seq id no:36(hcdr3)、seq id no:47(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)、和seq id no:172(lcdr3)。在一些实施例中，xx14_lala可以被定义为包含或具有重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含或具有seq id no:193的氨基酸序列，所述轻链可变区包含或具有seq id no:174的氨基酸序列。在一些实施例中，xx14_lala可以被定义为包含或具有重链和轻链，所述重链包含或具有seq id no:195的氨基酸序列，所述轻链包含或具有seq id no:176的氨基酸序列。
[0244]
例如，xx15_lala可以定义为具有选自如下的三个重链互补决定区(hcdr1、hcdr2和hcdr3)和三个轻链互补决定区(lcdr1、lcdr2和lcdr3)：(i)seq id no:28(hcdr1)、seq id no:119(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)和seq id no:126(lcdr3)；(ii)seq id no:31(hcdr1)、seq id no:119(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)和seq id no:126(lcdr3)；
(iii)seq id no:32(hcdr1)、seq id no:120(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:44(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)和seq id no:127(lcdr3)；或(iv)seq id no:34(hcdr1)、seq id no:121(hcdr2)、seq id no:36(hcdr3)、seq id no:47(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)和seq id no:126(lcdr3)。在一些实施例中，xx15_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:28(hcdr1)、seq id no:119(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)、和seq id no:126(lcdr3)。在一些实施例中，xx15_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:31(hcdr1)、seq id no:119(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)、和seq id no:126(lcdr3)。在一些实施例中，xx15_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:32(hcdr1)、seq id no:120(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:44(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)、和seq id no:127(lcdr3)。在一些实施例中，xx15_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:34(hcdr1)、seq id no:121(hcdr2)、seq id no:36(hcdr3)、seq id no:47(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)、和seq id no:126(lcdr3)。在一些实施例中，xx15_lala可以被定义为包含或具有重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含或具有seq id no:201的氨基酸序列，所述轻链可变区包含或具有seq id no:128的氨基酸序列。在一些实施例中，xx15_lala可以被定义为包含或具有重链和轻链，所述重链包含或具有seq id no:203的氨基酸序列，所述轻链包含或具有seq id no:130的氨基酸序列。
[0245]
例如，xx15_dapa可以定义为具有选自如下的三个重链互补决定区(hcdr1、hcdr2和hcdr3)和三个轻链互补决定区(lcdr1、lcdr2和lcdr3)：(i)seq id no:28(hcdr1)、seq id no:119(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)和seq id no:126(lcdr3)；(ii)seq id no:31(hcdr1)、seq id no:119(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)和seq id no:126(lcdr3)；(iii)seq id no:32(hcdr1)、seq id no:120(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:44(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)和seq id no:127(lcdr3)；或(iv)seq id no:34(hcdr1)、seq id no:121(hcdr2)、seq id no:36(hcdr3)、seq id no:47(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)和seq id no:126(lcdr3)。在一些实施例中，xx15_dapa可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:28(hcdr1)、seq id no:119(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)、和seq id no:126(lcdr3)。在一些实施例中，xx15_dapa可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:31(hcdr1)、seq id no:119(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)、和seq id no:126(lcdr3)。在一些实施例中，xx15_dapa可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:32(hcdr1)、seq id no:120(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:44(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)、和seq id no:127(lcdr3)。在一些实施例中，xx15_dapa可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:34(hcdr1)、seq id no:121(hcdr2)、seq id no:36(hcdr3)、seq id no:47(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)、和seq id no:126(lcdr3)。在一些实施例中，xx15_dapa可以被定义为包含或具有重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含或具有seq id no:122的氨基酸序列，所述轻链可变区包含或具有seq id no:128的氨基酸序列。在一些实施例中，xx15_dapa可以被定义为包含
或具有重链和轻链，所述重链包含或具有seq id no:208的氨基酸序列，所述轻链包含或具有seq id no:130的氨基酸序列。
[0246]
例如，xx16_lala可以定义为具有选自如下的三个重链互补决定区(hcdr1、hcdr2和hcdr3)和三个轻链互补决定区(lcdr1、lcdr2和lcdr3)：(i)seq id no:28(hcdr1)、seq id no:119(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)和seq id no:134(lcdr3)；(ii)seq id no:31(hcdr1)、seq id no:119(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)和seq id no:134(lcdr3)；(iii)seq id no:32(hcdr1)、seq id no:120(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:44(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)和seq id no:135(lcdr3)；或(iv)seq id no:34(hcdr1)、seq id no:121(hcdr2)、seq id no:36(hcdr3)、seq id no:47(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)和seq id no:134(lcdr3)。在一些实施例中，xx16_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:28(hcdr1)、seq id no:119(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)、和seq id no:134(lcdr3)。在一些实施例中，xx16_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:31(hcdr1)、seq id no:119(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)、和seq id no:134(lcdr3)。在一些实施例中，xx16_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:32(hcdr1)、seq id no:120(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:44(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)、和seq id no:135(lcdr3)。在一些实施例中，xx16_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:34(hcdr1)、seq id no:121(hcdr2)、seq id no:36(hcdr3)、seq id no:47(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)、和seq id no:134(lcdr3)。在一些实施例中，xx16_lala可以被定义为包含或具有重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含或具有seq id no:201的氨基酸序列，所述轻链可变区包含或具有seq id no:136的氨基酸序列。在一些实施例中，xx16_lala可以被定义为包含或具有重链和轻链，所述重链包含或具有seq id no:203的氨基酸序列，所述轻链包含或具有seq id no:138的氨基酸序列。
[0247]
例如，xx16_dapa可以定义为具有选自如下的三个重链互补决定区(hcdr1、hcdr2和hcdr3)和三个轻链互补决定区(lcdr1、lcdr2和lcdr3)：(i)seq id no:28(hcdr1)、seq id no:119(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)和seq id no:134(lcdr3)；(ii)seq id no:31(hcdr1)、seq id no:119(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)和seq id no:134(lcdr3)；(iii)seq id no:32(hcdr1)、seq id no:120(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:44(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)和seq id no:135(lcdr3)；或(iv)seq id no:34(hcdr1)、seq id no:121(hcdr2)、seq id no:36(hcdr3)、seq id no:47(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)和seq id no:134(lcdr3)。在一些实施例中，xx16_dapa可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:28(hcdr1)、seq id no:119(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)、和seq id no:134(lcdr3)。在一些实施例中，xx16_dapa可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:31(hcdr1)、seq id no:119(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)、和seq id no:134(lcdr3)。在一些实施例中，xx16_dapa可以定义为包含或具有以
下的氨基酸序列：seq id no:32(hcdr1)、seq id no:120(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:44(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)、和seq id no:135(lcdr3)。在一些实施例中，xx16_dapa可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:34(hcdr1)、seq id no:121(hcdr2)、seq id no:36(hcdr3)、seq id no:47(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)、和seq id no:134(lcdr3)。在一些实施例中，xx16_dapa可以被定义为包含或具有重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含或具有seq id no:122的氨基酸序列，所述轻链可变区包含或具有seq id no:136的氨基酸序列。在一些实施例中，xx16_dapa可以被定义为包含或具有重链和轻链，所述重链包含或具有seq id no:208的氨基酸序列，所述轻链包含或具有seq id no:138的氨基酸序列。
[0248]
例如，xx17_lala可以定义为具有选自如下的三个重链互补决定区(hcdr1、hcdr2和hcdr3)和三个轻链互补决定区(lcdr1、lcdr2和lcdr3)：(i)seq id no:28(hcdr1)、seq id no:119(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)和seq id no:145(lcdr3)；(ii)seq id no:31(hcdr1)、seq id no:119(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)和seq id no:145(lcdr3)；(iii)seq id no:32(hcdr1)、seq id no:120(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:44(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)和seq id no:146(lcdr3)；或(iv)seq id no:34(hcdr1)、seq id no:121(hcdr2)、seq id no:36(hcdr3)、seq id no:47(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)和seq id no:145(lcdr3)。在一些实施例中，xx17_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:28(hcdr1)、seq id no:119(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)、和seq id no:145(lcdr3)。在一些实施例中，xx17_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:31(hcdr1)、seq id no:119(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)、和seq id no:145(lcdr3)。在一些实施例中，xx17_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:32(hcdr1)、seq id no:120(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:44(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)、和seq id no:146(lcdr3)。在一些实施例中，xx17_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:34(hcdr1)、seq id no:121(hcdr2)、seq id no:36(hcdr3)、seq id no:47(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)、和seq id no:145(lcdr3)。在一些实施例中，xx17_lala可以被定义为包含或具有重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含或具有seq id no:201的氨基酸序列，所述轻链可变区包含或具有seq id no:147的氨基酸序列。在一些实施例中，xx17_lala可以被定义为包含或具有重链和轻链，所述重链包含或具有seq id no:203的氨基酸序列，所述轻链包含或具有seq id no:149的氨基酸序列。
[0249]
例如，xx17_dapa可以定义为具有选自如下的三个重链互补决定区(hcdr1、hcdr2和hcdr3)和三个轻链互补决定区(lcdr1、lcdr2和lcdr3)：(i)seq id no:28(hcdr1)、seq id no:119(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)和seq id no:145(lcdr3)；(ii)seq id no:31(hcdr1)、seq id no:119(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)和seq id no:145(lcdr3)；(iii)seq id no:32(hcdr1)、seq id no:120(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:44(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)和seq id no:146(lcdr3)；或(iv)seq id no:34
(hcdr1)、seq id no:121(hcdr2)、seq id no:36(hcdr3)、seq id no:47(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)和seq id no:145(lcdr3)。在一些实施例中，xx17_dapa可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:28(hcdr1)、seq id no:119(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)、和seq id no:145(lcdr3)。在一些实施例中，xx17_dapa可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:31(hcdr1)、seq id no:119(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)、和seq id no:145(lcdr3)。在一些实施例中，xx17_dapa可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:32(hcdr1)、seq id no:120(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:44(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)、和seq id no:146(lcdr3)。在一些实施例中，xx17_dapa可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：(iv)seq id no:34(hcdr1)、seq id no:121(hcdr2)、seq id no:36(hcdr3)、seq id no:47(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)、和seq id no:145(lcdr3)。在一些实施例中，xx17_dapa可以被定义为包含或具有重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含或具有seq id no:122的氨基酸序列，所述轻链可变区包含或具有seq id no:147的氨基酸序列。在一些实施例中，xx17_dapa可以被定义为包含或具有重链和轻链，所述重链包含或具有seq id no:208的氨基酸序列，所述轻链包含或具有seq id no:149的氨基酸序列。
[0250]
例如，xx18_lala可以定义为具有选自如下的三个重链互补决定区(hcdr1、hcdr2和hcdr3)和三个轻链互补决定区(lcdr1、lcdr2和lcdr3)：(i)seq id no:28(hcdr1)、seq id no:119(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)和seq id no:172(lcdr3)；(ii)seq id no:31(hcdr1)、seq id no:119(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)和seq id no:172(lcdr3)；(iii)seq id no:32(hcdr1)、seq id no:120(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:44(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)和seq id no:173(lcdr3)；或(iv)seq id no:34(hcdr1)、seq id no:121(hcdr2)、seq id no:36(hcdr3)、seq id no:47(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)和seq id no:172(lcdr3)。在一些实施例中，xx18_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:28(hcdr1)、seq id no:119(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)、和seq id no:172(lcdr3)。在一些实施例中，xx18_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:31(hcdr1)、seq id no:119(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)、和seq id no:172(lcdr3)。在一些实施例中，xx18_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:32(hcdr1)、seq id no:120(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:44(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)、和seq id no:173(lcdr3)。在一些实施例中，xx18_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:34(hcdr1)、seq id no:121(hcdr2)、seq id no:36(hcdr3)、seq id no:47(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)、和seq id no:172(lcdr3)。在一些实施例中，xx18_lala可以被定义为包含或具有重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含或具有seq id no:201的氨基酸序列，所述轻链可变区包含或具有seq id no:174的氨基酸序列。在一些实施例中，xx18_lala可以被定义为包含或具有重链和轻链，所述重链包含或具有seq id no:203的氨基酸序列，所述轻链包含或具有seq id no:176的氨基酸序列。
[0251]
例如，xx18_dapa可以定义为具有选自如下的三个重链互补决定区(hcdr1、hcdr2和hcdr3)和三个轻链互补决定区(lcdr1、lcdr2和lcdr3)：(i)seq id no:28(hcdr1)、seq id no:119(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)和seq id no:172(lcdr3)；(ii)seq id no:31(hcdr1)、seq id no:119(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)和seq id no:172(lcdr3)；(iii)seq id no:32(hcdr1)、seq id no:120(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:44(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)和seq id no:173(lcdr3)；或(iv)seq id no:34(hcdr1)、seq id no:121(hcdr2)、seq id no:36(hcdr3)、seq id no:47(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)和seq id no:172(lcdr3)。在一些实施例中，xx18_dapa可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:28(hcdr1)、seq id no:119(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)、和seq id no:172(lcdr3)。在一些实施例中，xx18_dapa可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:31(hcdr1)、seq id no:119(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)、和seq id no:172(lcdr3)。在一些实施例中，xx18_dapa可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:32(hcdr1)、seq id no:120(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:44(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)、和seq id no:173(lcdr3)。在一些实施例中，xx18_dapa可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:34(hcdr1)、seq id no:121(hcdr2)、seq id no:36(hcdr3)、seq id no:47(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)、和seq id no:172(lcdr3)。在一些实施例中，xx18_dapa可以被定义为包含或具有重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含或具有seq id no:122的氨基酸序列，所述轻链可变区包含或具有seq id no:174的氨基酸序列。在一些实施例中，xx18_dapa可以被定义为包含或具有重链和轻链，所述重链包含或具有seq id no:208的氨基酸序列，所述轻链包含或具有seq id no:176的氨基酸序列。
[0252]
例如，xx19_lala可以定义为具有选自如下的三个重链互补决定区(hcdr1、hcdr2和hcdr3)和三个轻链互补决定区(lcdr1、lcdr2和lcdr3)：(i)seq id no:28(hcdr1)、seq id no:119(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)和seq id no:178(lcdr3)；(ii)seq id no:31(hcdr1)、seq id no:119(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)和seq id no:178(lcdr3)；(iii)seq id no:32(hcdr1)、seq id no:120(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:44(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)和seq id no:179(lcdr3)；或(iv)seq id no:34(hcdr1)、seq id no:121(hcdr2)、seq id no:36(hcdr3)、seq id no:47(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)和seq id no:178(lcdr3)。在一些实施例中，xx19_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:28(hcdr1)、seq id no:119(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)、和seq id no:178(lcdr3)。在一些实施例中，xx19_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:31(hcdr1)、seq id no:119(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)、和seq id no:178(lcdr3)。在一些实施例中，xx19_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:32(hcdr1)、seq id no:120(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:44(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)、和seq id no:179(lcdr3)。在一些实施例
中，xx19_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:34(hcdr1)、seq id no:121(hcdr2)、seq id no:36(hcdr3)、seq id no:47(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)、和seq id no:178(lcdr3)。在一些实施例中，xx19_lala可以被定义为包含或具有重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含或具有seq id no:201的氨基酸序列，所述轻链可变区包含或具有seq id no:180的氨基酸序列。在一些实施例中，xx19_lala可以被定义为包含或具有重链和轻链，所述重链包含或具有seq id no:203的氨基酸序列，所述轻链包含或具有seq id no:182的氨基酸序列。
[0253]
例如，xx19_dapa可以定义为具有选自如下的三个重链互补决定区(hcdr1、hcdr2和hcdr3)和三个轻链互补决定区(lcdr1、lcdr2和lcdr3)：(i)seq id no:28(hcdr1)、seq id no:119(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)和seq id no:178(lcdr3)；(ii)seq id no:31(hcdr1)、seq id no:119(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)和seq id no:178(lcdr3)；(iii)seq id no:32(hcdr1)、seq id no:120(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:44(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)和seq id no:179(lcdr3)；或(iv)seq id no:34(hcdr1)、seq id no:121(hcdr2)、seq id no:36(hcdr3)、seq id no:47(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)和seq id no:178(lcdr3)。在一些实施例中，xx19_dapa可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:28(hcdr1)、seq id no:119(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)、和seq id no:178(lcdr3)。在一些实施例中，xx19_dapa可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:31(hcdr1)、seq id no:119(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)、和seq id no:178(lcdr3)。在一些实施例中，xx19_dapa可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:32(hcdr1)、seq id no:120(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:44(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)、和seq id no:179(lcdr3)。在一些实施例中，xx19_dapa可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:34(hcdr1)、seq id no:121(hcdr2)、seq id no:36(hcdr3)、seq id no:47(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)、和seq id no:178(lcdr3)。在一些实施例中，xx19_dapa可以被定义为包含或具有重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含或具有seq id no:122的氨基酸序列，所述轻链可变区包含或具有seq id no:180的氨基酸序列。在一些实施例中，xx19_dapa可以被定义为包含或具有重链和轻链，所述重链包含或具有seq id no:208的氨基酸序列，所述轻链包含或具有seq id no:182的氨基酸序列。
[0254]
例如，xx20_lala可以定义为具有选自如下的三个重链互补决定区(hcdr1、hcdr2和hcdr3)和三个轻链互补决定区(lcdr1、lcdr2和lcdr3)：(i)seq id no:28(hcdr1)、seq id no:119(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)和seq id no:184(lcdr3)；(ii)seq id no:31(hcdr1)、seq id no:119(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)和seq id no:184(lcdr3)；(iii)seq id no:32(hcdr1)、seq id no:120(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:44(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)和seq id no:185(lcdr3)；或(iv)seq id no:34(hcdr1)、seq id no:121(hcdr2)、seq id no:36(hcdr3)、seq id no:47(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)和seq id no:184(lcdr3)。在一些实施例中，xx20_lala可以定义为包含或具
id no:227(hcdr2)、seq id no:228(hcdr3)、seq id no:237(lcdr1)、seq id no:238(lcdr2)和seq id no:239(lcdr3)；(ii)seq id no:229(hcdr1)、seq id no:227(hcdr2)、seq id no:228(hcdr3)、seq id no:237(lcdr1)、seq id no:238(lcdr2)和seq id no:239(lcdr3)；(iii)seq id no:32(hcdr1)、seq id no:230(hcdr2)、seq id no:228(hcdr3)、seq id no:240(lcdr1)、seq id no:241(lcdr2)和seq id no:242(lcdr3)；或(iv)seq id no:34(hcdr1)、seq id no:231(hcdr2)、seq id no:232(hcdr3)、seq id no:243(lcdr1)、seq id no:241(lcdr2)和seq id no:239(lcdr3)。在一些实施例中，yy01_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:226(hcdr1)、seq id no:227(hcdr2)、seq id no:228(hcdr3)、seq id no:237(lcdr1)、seq id no:238(lcdr2)、和seq id no:239(lcdr3)。在一些实施例中，yy01_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:229(hcdr1)、seq id no:227(hcdr2)、seq id no:228(hcdr3)、seq id no:237(lcdr1)、seq id no:238(lcdr2)、和seq id no:239(lcdr3)。在一些实施例中，yy01_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:32(hcdr1)、seq id no:230(hcdr2)、seq id no:228(hcdr3)、seq id no:240(lcdr1)、seq id no:241(lcdr2)、和seq id no:242(lcdr3)。在一些实施例中，yy01_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:34(hcdr1)、seq id no:231(hcdr2)、seq id no:232(hcdr3)、seq id no:243(lcdr1)、seq id no:241(lcdr2)、和seq id no:239(lcdr3)。在一些实施例中，yy01_lala可以被定义为包含或具有重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含或具有seq id no:233的氨基酸序列，所述轻链可变区包含或具有seq id no:244的氨基酸序列。在一些实施例中，yy01_lala可以被定义为包含或具有重链和轻链，所述重链包含或具有seq id no:235的氨基酸序列，所述轻链包含或具有seq id no:246的氨基酸序列。
[0257]
例如，yy02_lala可以定义为具有选自如下的三个重链互补决定区(hcdr1、hcdr2和hcdr3)和三个轻链互补决定区(lcdr1、lcdr2和lcdr3)：(i)seq id no:248(hcdr1)、seq id no:249(hcdr2)、seq id no:250(hcdr3)、seq id no:260(lcdr1)、seq id no:261(lcdr2)和seq id no:262(lcdr3)；(ii)seq id no:251(hcdr1)、seq id no:249(hcdr2)、seq id no:250(hcdr3)、seq id no:260(lcdr1)、seq id no:261(lcdr2)和seq id no:262(lcdr3)；(iii)seq id no:32(hcdr1)、seq id no:252(hcdr2)、seq id no:250(hcdr3)、seq id no:263(lcdr1)、seq id no:241(lcdr2)和seq id no:264(lcdr3)；或(iv)seq id no:253(hcdr1)、seq id no:254(hcdr2)、seq id no:255(hcdr3)、seq id no:265(lcdr1)、seq id no:241(lcdr2)和seq id no:262(lcdr3)。在一些实施例中，yy02_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:248(hcdr1)、seq id no:249(hcdr2)、seq id no:250(hcdr3)、seq id no:260(lcdr1)、seq id no:261(lcdr2)、和seq id no:262(lcdr3)。在一些实施例中，yy02_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:251(hcdr1)、seq id no:249(hcdr2)、seq id no:250(hcdr3)、seq id no:260(lcdr1)、seq id no:261(lcdr2)、和seq id no:262(lcdr3)。在一些实施例中，yy02_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:32(hcdr1)、seq id no:252(hcdr2)、seq id no:250(hcdr3)、seq id no:263(lcdr1)、seq id no:241(lcdr2)、和seq id no:264(lcdr3)。在一些实施例中，yy02_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:253(hcdr1)、seq id no:254(hcdr2)、seq id no:255(hcdr3)、seq id no:265(lcdr1)、
seq id no:241(lcdr2)、和seq id no:262(lcdr3)。在一些实施例中，yy02_lala可以被定义为包含或具有重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含或具有seq id no:256的氨基酸序列，所述轻链可变区包含或具有seq id no:266的氨基酸序列。在一些实施例中，yy02_lala可以被定义为包含或具有重链和轻链，所述重链包含或具有seq id no:258的氨基酸序列，所述轻链包含或具有seq id no:268的氨基酸序列。
[0258]
例如，yy03_lala可以定义为具有选自如下的三个重链互补决定区(hcdr1、hcdr2和hcdr3)和三个轻链互补决定区(lcdr1、lcdr2和lcdr3)：(i)seq id no:270(hcdr1)、seq id no:271(hcdr2)、seq id no:272(hcdr3)、seq id no:282(lcdr1)、seq id no:261(lcdr2)和seq id no:283(lcdr3)；(ii)seq id no:273(hcdr1)、seq id no:271(hcdr2)、seq id no:272(hcdr3)、seq id no:282(lcdr1)、seq id no:261(lcdr2)和seq id no:283(lcdr3)；(iii)seq id no:32(hcdr1)、seq id no:274(hcdr2)、seq id no:272(hcdr3)、seq id no:284(lcdr1)、seq id no:241(lcdr2)和seq id no:285(lcdr3)；或(iv)seq id no:275(hcdr1)、seq id no:276(hcdr2)、seq id no:277(hcdr3)、seq id no:286(lcdr1)、seq id no:241(lcdr2)和seq id no:283(lcdr3)。在一些实施例中，yy03_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:270(hcdr1)、seq id no:271(hcdr2)、seq id no:272(hcdr3)、seq id no:282(lcdr1)、seq id no:261(lcdr2)、和seq id no:283(lcdr3)。在一些实施例中，yy03_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:273(hcdr1)、seq id no:271(hcdr2)、seq id no:272(hcdr3)、seq id no:282(lcdr1)、seq id no:261(lcdr2)、和seq id no:283(lcdr3)。在一些实施例中，yy03_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:32(hcdr1)、seq id no:274(hcdr2)、seq id no:272(hcdr3)、seq id no:284(lcdr1)、seq id no:241(lcdr2)、和seq id no:285(lcdr3)。在一些实施例中，yy03_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:275(hcdr1)、seq id no:276(hcdr2)、seq id no:277(hcdr3)、seq id no:286(lcdr1)、seq id no:241(lcdr2)、和seq id no:283(lcdr3)。在一些实施例中，yy03_lala可以被定义为包含或具有重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含或具有seq id no:278的氨基酸序列，所述轻链可变区包含或具有seq id no:287的氨基酸序列。在一些实施例中，yy03_lala可以被定义为包含或具有重链和轻链，所述重链包含或具有seq id no:280的氨基酸序列，所述轻链包含或具有seq id no:289的氨基酸序列。
[0259]
例如，yy04_lala可以定义为具有选自如下的三个重链互补决定区(hcdr1、hcdr2和hcdr3)和三个轻链互补决定区(lcdr1、lcdr2和lcdr3)：(i)seq id no:291(hcdr1)、seq id no:292(hcdr2)、seq id no:293(hcdr3)、seq id no:237(lcdr1)、seq id no:238(lcdr2)和seq id no:304(lcdr3)；(ii)seq id no:294(hcdr1)、seq id no:292(hcdr2)、seq id no:293(hcdr3)、seq id no:237(lcdr1)、seq id no:238(lcdr2)和seq id no:304(lcdr3)；(iii)seq id no:295(hcdr1)、seq id no:296(hcdr2)、seq id no:293(hcdr3)、seq id no:240(lcdr1)、seq id no:241(lcdr2)和seq id no:305(lcdr3)；或(iv)seq id no:297(hcdr1)、seq id no:298(hcdr2)、seq id no:299(hcdr3)、seq id no:243(lcdr1)、seq id no:241(lcdr2)和seq id no:304(lcdr3)。在一些实施例中，yy04_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:291(hcdr1)、seq id no:292(hcdr2)、seq id no:293(hcdr3)、seq id no:237(lcdr1)、seq id no:238(lcdr2)、和seq id no:304
(lcdr3)。在一些实施例中，yy04_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:294(hcdr1)、seq id no:292(hcdr2)、seq id no:293(hcdr3)、seq id no:237(lcdr1)、seq id no:238(lcdr2)、和seq id no:304(lcdr3)。在一些实施例中，yy04_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:295(hcdr1)、seq id no:296(hcdr2)、seq id no:293(hcdr3)、seq id no:240(lcdr1)、seq id no:241(lcdr2)、和seq id no:305(lcdr3)。在一些实施例中，yy04_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:297(hcdr1)、seq id no:298(hcdr2)、seq id no:299(hcdr3)、seq id no:243(lcdr1)、seq id no:241(lcdr2)、和seq id no:304(lcdr3)。在一些实施例中，yy04_lala可以被定义为包含或具有重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含或具有seq id no:300的氨基酸序列，所述轻链可变区包含或具有seq id no:306的氨基酸序列。在一些实施例中，yy04_lala可以被定义为包含或具有重链和轻链，所述重链包含或具有seq id no:302的氨基酸序列，所述轻链包含或具有seq id no:308的氨基酸序列。
[0260]
例如，yy05_lala可以定义为具有选自如下的三个重链互补决定区(hcdr1、hcdr2和hcdr3)和三个轻链互补决定区(lcdr1、lcdr2和lcdr3)：(i)seq id no:310(hcdr1)、seq id no:311(hcdr2)、seq id no:312(hcdr3)、seq id no:320(lcdr1)、seq id no:321(lcdr2)和seq id no:322(lcdr3)；(ii)seq id no:229(hcdr1)、seq id no:311(hcdr2)、seq id no:312(hcdr3)、seq id no:320(lcdr1)、seq id no:321(lcdr2)和seq id no:322(lcdr3)；(iii)seq id no:80(hcdr1)、seq id no:313(hcdr2)、seq id no:312(hcdr3)、seq id no:323(lcdr1)、seq id no:324(lcdr2)和seq id no:325(lcdr3)；或(iv)seq id no:82(hcdr1)、seq id no:314(hcdr2)、seq id no:315(hcdr3)、seq id no:326(lcdr1)、seq id no:324(lcdr2)和seq id no:322(lcdr3)。在一些实施例中，yy05_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:310(hcdr1)、seq id no:311(hcdr2)、seq id no:312(hcdr3)、seq id no:320(lcdr1)、seq id no:321(lcdr2)、和seq id no:322(lcdr3)。在一些实施例中，yy05_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:229(hcdr1)、seq id no:311(hcdr2)、seq id no:312(hcdr3)、seq id no:320(lcdr1)、seq id no:321(lcdr2)、和seq id no:322(lcdr3)。在一些实施例中，yy05_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:80(hcdr1)、seq id no:313(hcdr2)、seq id no:312(hcdr3)、seq id no:323(lcdr1)、seq id no:324(lcdr2)、和seq id no:325(lcdr3)。在一些实施例中，yy05_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:82(hcdr1)、seq id no:314(hcdr2)、seq id no:315(hcdr3)、seq id no:326(lcdr1)、seq id no:324(lcdr2)、和seq id no:322(lcdr3)。在一些实施例中，yy05_lala可以被定义为包含或具有重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含或具有seq id no:316的氨基酸序列，所述轻链可变区包含或具有seq id no:327的氨基酸序列。在一些实施例中，yy05_lala可以被定义为包含或具有重链和轻链，所述重链包含或具有seq id no:318的氨基酸序列，所述轻链包含或具有seq id no:329的氨基酸序列。
[0261]
例如，yy06_lala可以定义为具有选自如下的三个重链互补决定区(hcdr1、hcdr2和hcdr3)和三个轻链互补决定区(lcdr1、lcdr2和lcdr3)：(i)seq id no:270(hcdr1)、seq id no:271(hcdr2)、seq id no:331(hcdr3)、seq id no:337(lcdr1)、seq id no:338(lcdr2)和seq id no:339(lcdr3)；(ii)seq id no:273(hcdr1)、seq id no:271(hcdr2)、
seq id no:331(hcdr3)、seq id no:337(lcdr1)、seq id no:338(lcdr2)和seq id no:339(lcdr3)；(iii)seq id no:32(hcdr1)、seq id no:274(hcdr2)、seq id no:331(hcdr3)、seq id no:340(lcdr1)、seq id no:341(lcdr2)和seq id no:342(lcdr3)；或(iv)seq id no:275(hcdr1)、seq id no:276(hcdr2)、seq id no:332(hcdr3)、seq id no:343(lcdr1)、seq id no:341(lcdr2)和seq id no:339(lcdr3)。在一些实施例中，yy06_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:270(hcdr1)、seq id no:271(hcdr2)、seq id no:331(hcdr3)、seq id no:337(lcdr1)、seq id no:338(lcdr2)、和seq id no:339(lcdr3)。在一些实施例中，yy06_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:273(hcdr1)、seq id no:271(hcdr2)、seq id no:331(hcdr3)、seq id no:337(lcdr1)、seq id no:338(lcdr2)、和seq id no:339(lcdr3)。在一些实施例中，yy06_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:32(hcdr1)、seq id no:274(hcdr2)、seq id no:331(hcdr3)、seq id no:340(lcdr1)、seq id no:341(lcdr2)、和seq id no:342(lcdr3)。在一些实施例中，yy06_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:275(hcdr1)、seq id no:276(hcdr2)、seq id no:332(hcdr3)、seq id no:343(lcdr1)、seq id no:341(lcdr2)、和seq id no:339(lcdr3)。在一些实施例中，yy06_lala可以被定义为包含或具有重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含或具有seq id no:333的氨基酸序列，所述轻链可变区包含或具有seq id no:344的氨基酸序列。在一些实施例中，yy06_lala可以被定义为包含或具有重链和轻链，所述重链包含或具有seq id no:335的氨基酸序列，所述轻链包含或具有seq id no:346的氨基酸序列。
[0262]
例如，yy07_lala可以定义为具有选自如下的三个重链互补决定区(hcdr1、hcdr2和hcdr3)和三个轻链互补决定区(lcdr1、lcdr2和lcdr3)：(i)seq id no:310(hcdr1)、seq id no:311(hcdr2)、seq id no:348(hcdr3)、seq id no:320(lcdr1)、seq id no:354(lcdr2)和seq id no:355(lcdr3)；(ii)seq id no:229(hcdr1)、seq id no:311(hcdr2)、seq id no:348(hcdr3)、seq id no:320(lcdr1)、seq id no:354(lcdr2)和seq id no:355(lcdr3)；(iii)seq id no:80(hcdr1)、seq id no:313(hcdr2)、seq id no:348(hcdr3)、seq id no:323(lcdr1)、seq id no:324(lcdr2)和seq id no:356(lcdr3)；或(iv)seq id no:82(hcdr1)、seq id no:314(hcdr2)、seq id no:349(hcdr3)、seq id no:326(lcdr1)、seq id no:324(lcdr2)和seq id no:355(lcdr3)。在一些实施例中，yy07_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:310(hcdr1)、seq id no:311(hcdr2)、seq id no:348(hcdr3)、seq id no:320(lcdr1)、seq id no:354(lcdr2)、和seq id no:355(lcdr3)。在一些实施例中，yy07_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:229(hcdr1)、seq id no:311(hcdr2)、seq id no:348(hcdr3)、seq id no:320(lcdr1)、seq id no:354(lcdr2)、和seq id no:355(lcdr3)。在一些实施例中，yy07_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:80(hcdr1)、seq id no:313(hcdr2)、seq id no:348(hcdr3)、seq id no:323(lcdr1)、seq id no:324(lcdr2)、和seq id no:356(lcdr3)。在一些实施例中，yy07_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:82(hcdr1)、seq id no:314(hcdr2)、seq id no:349(hcdr3)、seq id no:326(lcdr1)、seq id no:324(lcdr2)、和seq id no:355(lcdr3)。在一些实施例中，yy07_lala可以被定义为包含或具有重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含或具有seq id no:350的
氨基酸序列，所述轻链可变区包含或具有seq id no:357的氨基酸序列。在一些实施例中，yy07_lala可以被定义为包含或具有重链和轻链，所述重链包含或具有seq id no:352的氨基酸序列，所述轻链包含或具有seq id no:359的氨基酸序列。
[0263]
例如，zz05_lala可以定义为具有选自如下的三个重链互补决定区(hcdr1、hcdr2和hcdr3)和三个轻链互补决定区(lcdr1、lcdr2和lcdr3)：(i)seq id no:310(hcdr1)、seq id no:311(hcdr2)、seq id no:348(hcdr3)、seq id no:320(lcdr1)、seq id no:354(lcdr2)和seq id no:361(lcdr3)；(ii)seq id no:229(hcdr1)、seq id no:311(hcdr2)、seq id no:348(hcdr3)、seq id no:320(lcdr1)、seq id no:354(lcdr2)和seq id no:361(lcdr3)；(iii)seq id no:80(hcdr1)、seq id no:313(hcdr2)、seq id no:348(hcdr3)、seq id no:323(lcdr1)、seq id no:324(lcdr2)和seq id no:362(lcdr3)；或(iv)seq id no:82(hcdr1)、seq id no:314(hcdr2)、seq id no:349(hcdr3)、seq id no:326(lcdr1)、seq id no:324(lcdr2)和seq id no:361(lcdr3)。在一些实施例中，zz05_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:310(hcdr1)、seq id no:311(hcdr2)、seq id no:348(hcdr3)、seq id no:320(lcdr1)、seq id no:354(lcdr2)、和seq id no:361(lcdr3)。在一些实施例中，zz05_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:229(hcdr1)、seq id no:311(hcdr2)、seq id no:348(hcdr3)、seq id no:320(lcdr1)、seq id no:354(lcdr2)、和seq id no:361(lcdr3)。在一些实施例中，zz05_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:80(hcdr1)、seq id no:313(hcdr2)、seq id no:348(hcdr3)、seq id no:323(lcdr1)、seq id no:324(lcdr2)、和seq id no:362(lcdr3)。在一些实施例中，zz05_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:82(hcdr1)、seq id no:314(hcdr2)、seq id no:349(hcdr3)、seq id no:326(lcdr1)、seq id no:324(lcdr2)、和seq id no:361(lcdr3)。在一些实施例中，zz05_lala可以被定义为包含或具有重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含或具有seq id no:350的氨基酸序列，所述轻链可变区包含或具有seq id no:363的氨基酸序列。在一些实施例中，zz05_lala可以被定义为包含或具有重链和轻链，所述重链包含或具有seq id no:352的氨基酸序列，所述轻链包含或具有seq id no:365的氨基酸序列。
[0264]
例如，zz12_lala可以定义为具有选自如下的三个重链互补决定区(hcdr1、hcdr2和hcdr3)和三个轻链互补决定区(lcdr1、lcdr2和lcdr3)：(i)seq id no:367(hcdr1)、seq id no:368(hcdr2)、seq id no:228(hcdr3)、seq id no:237(lcdr1)、seq id no:238(lcdr2)和seq id no:239(lcdr3)；(ii)seq id no:369(hcdr1)、seq id no:368(hcdr2)、seq id no:228(hcdr3)、seq id no:237(lcdr1)、seq id no:238(lcdr2)和seq id no:239(lcdr3)；(iii)seq id no:370(hcdr1)、seq id no:371(hcdr2)、seq id no:228(hcdr3)、seq id no:240(lcdr1)、seq id no:241(lcdr2)和seq id no:242(lcdr3)；或(iv)seq id no:372(hcdr1)、seq id no:373(hcdr2)、seq id no:232(hcdr3)、seq id no:243(lcdr1)、seq id no:241(lcdr2)和seq id no:239(lcdr3)。在一些实施例中，zz12_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:367(hcdr1)、seq id no:368(hcdr2)、seq id no:228(hcdr3)、seq id no:237(lcdr1)、seq id no:238(lcdr2)、和seq id no:239(lcdr3)。在一些实施例中，zz12_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:369(hcdr1)、seq id no:368(hcdr2)、seq id no:228(hcdr3)、seq id no:237(lcdr1)、
seq id no:238(lcdr2)、和seq id no:239(lcdr3)。在一些实施例中，zz12_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:370(hcdr1)、seq id no:371(hcdr2)、seq id no:228(hcdr3)、seq id no:240(lcdr1)、seq id no:241(lcdr2)、和seq id no:242(lcdr3)。在一些实施例中，zz12_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:372(hcdr1)、seq id no:373(hcdr2)、seq id no:232(hcdr3)、seq id no:243(lcdr1)、seq id no:241(lcdr2)、和seq id no:239(lcdr3)。在一些实施例中，zz12_lala可以被定义为包含或具有重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含或具有seq id no:374的氨基酸序列，所述轻链可变区包含或具有seq id no:244的氨基酸序列。在一些实施例中，zz12_lala可以被定义为包含或具有重链和轻链，所述重链包含或具有seq id no:376的氨基酸序列，所述轻链包含或具有seq id no:246的氨基酸序列。
[0265]
例如，zz13_lala可以定义为具有选自如下的三个重链互补决定区(hcdr1、hcdr2和hcdr3)和三个轻链互补决定区(lcdr1、lcdr2和lcdr3)：(i)seq id no:378(hcdr1)、seq id no:379(hcdr2)、seq id no:228(hcdr3)、seq id no:237(lcdr1)、seq id no:238(lcdr2)和seq id no:239(lcdr3)；(ii)seq id no:380(hcdr1)、seq id no:379(hcdr2)、seq id no:228(hcdr3)、seq id no:237(lcdr1)、seq id no:238(lcdr2)和seq id no:239(lcdr3)；(iii)seq id no:381(hcdr1)、seq id no:382(hcdr2)、seq id no:228(hcdr3)、seq id no:240(lcdr1)、seq id no:241(lcdr2)和seq id no:242(lcdr3)；或(iv)seq id no:383(hcdr1)、seq id no:384(hcdr2)、seq id no:232(hcdr3)、seq id no:243(lcdr1)、seq id no:241(lcdr2)和seq id no:239(lcdr3)。在一些实施例中，zz13_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:378(hcdr1)、seq id no:379(hcdr2)、seq id no:228(hcdr3)、seq id no:237(lcdr1)、seq id no:238(lcdr2)、和seq id no:239(lcdr3)。在一些实施例中，zz13_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:380(hcdr1)、seq id no:379(hcdr2)、seq id no:228(hcdr3)、seq id no:237(lcdr1)、seq id no:238(lcdr2)、和seq id no:239(lcdr3)。在一些实施例中，zz13_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:381(hcdr1)、seq id no:382(hcdr2)、seq id no:228(hcdr3)、seq id no:240(lcdr1)、seq id no:241(lcdr2)、和seq id no:242(lcdr3)。在一些实施例中，zz13_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：(iv)seq id no:383(hcdr1)、seq id no:384(hcdr2)、seq id no:232(hcdr3)、seq id no:243(lcdr1)、seq id no:241(lcdr2)、和seq id no:239(lcdr3)。在一些实施例中，zz13_lala可以被定义为包含或具有重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含或具有seq id no:385的氨基酸序列，所述轻链可变区包含或具有seq id no:244的氨基酸序列。在一些实施例中，zz13_lala可以被定义为包含或具有重链和轻链，所述重链包含或具有seq id no:387的氨基酸序列，所述轻链包含或具有seq id no:246的氨基酸序列。
[0266]
例如，zz14_lala可以定义为具有选自如下的三个重链互补决定区(hcdr1、hcdr2和hcdr3)和三个轻链互补决定区(lcdr1、lcdr2和lcdr3)：(i)seq id no:270(hcdr1)、seq id no:389(hcdr2)、seq id no:331(hcdr3)、seq id no:337(lcdr1)、seq id no:338(lcdr2)和seq id no:339(lcdr3)；(ii)seq id no:273(hcdr1)、seq id no:389(hcdr2)、seq id no:331(hcdr3)、seq id no:337(lcdr1)、seq id no:338(lcdr2)和seq id no:339(lcdr3)；(iii)seq id no:32(hcdr1)、seq id no:390(hcdr2)、seq id no:331(hcdr3)、
seq id no:340(lcdr1)、seq id no:341(lcdr2)和seq id no:342(lcdr3)；或(iv)seq id no:275(hcdr1)、seq id no:391(hcdr2)、seq id no:332(hcdr3)、seq id no:343(lcdr1)、seq id no:341(lcdr2)和seq id no:339(lcdr3)。在一些实施例中，zz14_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:270(hcdr1)、seq id no:389(hcdr2)、seq id no:331(hcdr3)、seq id no:337(lcdr1)、seq id no:338(lcdr2)、和seq id no:339(lcdr3)。在一些实施例中，zz14_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:273(hcdr1)、seq id no:389(hcdr2)、seq id no:331(hcdr3)、seq id no:337(lcdr1)、seq id no:338(lcdr2)、和seq id no:339(lcdr3)。在一些实施例中，zz14_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:32(hcdr1)、seq id no:390(hcdr2)、seq id no:331(hcdr3)、seq id no:340(lcdr1)、seq id no:341(lcdr2)、和seq id no:342(lcdr3)。在一些实施例中，zz14_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:275(hcdr1)、seq id no:391(hcdr2)、seq id no:332(hcdr3)、seq id no:343(lcdr1)、seq id no:341(lcdr2)、和seq id no:339(lcdr3)。在一些实施例中，zz14_lala可以被定义为包含或具有重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含或具有seq id no:392的氨基酸序列，所述轻链可变区包含或具有seq id no:344的氨基酸序列。在一些实施例中，zz14_lala可以被定义为包含或具有重链和轻链，所述重链包含或具有seq id no:394的氨基酸序列，所述轻链包含或具有seq id no:346的氨基酸序列。
[0267]
例如，zz15_lala可以定义为具有选自如下的三个重链互补决定区(hcdr1、hcdr2和hcdr3)和三个轻链互补决定区(lcdr1、lcdr2和lcdr3)：(i)seq id no:396(hcdr1)、seq id no:397(hcdr2)、seq id no:331(hcdr3)、seq id no:337(lcdr1)、seq id no:338(lcdr2)和seq id no:339(lcdr3)；(ii)seq id no:398(hcdr1)、seq id no:397(hcdr2)、seq id no:331(hcdr3)、seq id no:337(lcdr1)、seq id no:338(lcdr2)和seq id no:339(lcdr3)；(iii)seq id no:399(hcdr1)、seq id no:400(hcdr2)、seq id no:331(hcdr3)、seq id no:340(lcdr1)、seq id no:341(lcdr2)和seq id no:342(lcdr3)；或(iv)seq id no:401(hcdr1)、seq id no:402(hcdr2)、seq id no:332(hcdr3)、seq id no:343(lcdr1)、seq id no:341(lcdr2)和seq id no:339(lcdr3)。在一些实施例中，zz15_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:396(hcdr1)、seq id no:397(hcdr2)、seq id no:331(hcdr3)、seq id no:337(lcdr1)、seq id no:338(lcdr2)、和seq id no:339(lcdr3)。在一些实施例中，zz15_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:398(hcdr1)、seq id no:397(hcdr2)、seq id no:331(hcdr3)、seq id no:337(lcdr1)、seq id no:338(lcdr2)、和seq id no:339(lcdr3)。在一些实施例中，zz15_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:399(hcdr1)、seq id no:400(hcdr2)、seq id no:331(hcdr3)、seq id no:340(lcdr1)、seq id no:341(lcdr2)、和seq id no:342(lcdr3)。在一些实施例中，zz15_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:401(hcdr1)、seq id no:402(hcdr2)、seq id no:332(hcdr3)、seq id no:343(lcdr1)、seq id no:341(lcdr2)、和seq id no:339(lcdr3)。在一些实施例中，zz15_lala可以被定义为包含或具有重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含或具有seq id no:403的氨基酸序列，所述轻链可变区包含或具有seq id no:344的氨基酸序列。在一些实施例中，zz15_lala可以被定义为包含或具有重链和轻链，所述重链包含或具有seq id no:405的氨
no:331(hcdr3)、seq id no:340(lcdr1)、seq id no:341(lcdr2)、和seq id no:342(lcdr3)。在一些实施例中，zz17_lala可以定义为包含或具有以下的氨基酸序列：seq id no:423(hcdr1)、seq id no:424(hcdr2)、seq id no:332(hcdr3)、seq id no:343(lcdr1)、seq id no:341(lcdr2)、和seq id no:339(lcdr3)。在一些实施例中，zz17_lala可以被定义为包含或具有重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含或具有seq id no:425的氨基酸序列，所述轻链可变区包含或具有seq id no:344的氨基酸序列。在一些实施例中，zz17_lala可以被定义为包含或具有重链和轻链，所述重链包含或具有seq id no:427的氨基酸序列，所述轻链包含或具有seq id no:346的氨基酸序列。
[0270]
在一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含或具有seq id no:13的氨基酸序列或与seq id no:13具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，所述轻链可变区包含或具有seq id no:24的氨基酸序列或与seq id no:24具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。在一些其他实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含重链和轻链，所述重链包含或具有seq id no:15的氨基酸序列或与seq id no:15具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，所述轻链包含或具有seq id no:26的氨基酸序列或与seq id no:26具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。
[0271]
在一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含或具有seq id no:37的氨基酸序列或与seq id no:37具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，所述轻链可变区包含或具有seq id no:48的氨基酸序列或与seq id no:48具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。在一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含重链和轻链，所述重链包含或具有seq id no:39的氨基酸序列或与seq id no:39具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，所述轻链包含或具有seq id no:50的氨基酸序列或与seq id no:50具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。
[0272]
在一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含或具有seq id no:61的氨基酸序列或与seq id no:61具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，所述轻链可变区包含或具有seq id no:72的氨基酸序列或与seq id no:72具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。在一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含重链和轻链，所述重链包含或具有seq id no:63的氨基酸序列或与seq id no:63具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，所述轻链包含或具有seq id no:74的氨基酸序列或与seq id no:74具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。
[0273]
在一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含或具有seq id no:85的氨基酸序列或与seq id no:85具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，所述轻链可变区包含或具有seq id no:96的氨基酸序列或与seq id no:96具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。在一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含重链和轻链，所述重链包含或具有seq id no:87的氨基酸序列或与seq id no:87具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，所述轻链包含或具有seq id no:98的氨基酸序列或与seq id no:98具有至少95％、96％、97％、
98％或99％同一性的序列。
[0274]
在一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含或具有seq id no:103的氨基酸序列或与seq id no:103具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，所述轻链可变区包含或具有seq id no:24的氨基酸序列或与seq id no:24具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。在一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含重链和轻链，所述重链包含或具有seq id no:105的氨基酸序列或与seq id no:105具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，所述轻链包含或具有seq id no:26的氨基酸序列或与seq id no:26具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。
[0275]
在一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含或具有seq id no:103的氨基酸序列或与seq id no:103具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，所述轻链可变区包含或具有seq id no:24的氨基酸序列或与seq id no:24具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。在一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含重链和轻链，所述重链包含或具有seq id no:108的氨基酸序列或与seq id no:108具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，所述轻链包含或具有seq id no:26的氨基酸序列或与seq id no:26具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。
[0276]
在一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含或具有seq id no:115的氨基酸序列或与seq id no:115具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，所述轻链可变区包含或具有seq id no:24的氨基酸序列或与seq id no:24具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。在一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含重链和轻链，所述重链包含或具有seq id no:117的氨基酸序列或与seq id no:117具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，所述轻链包含或具有seq id no:26的氨基酸序列或与seq id no:26具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。
[0277]
在一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含或具有seq id no:122的氨基酸序列或与seq id no:122具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，所述轻链可变区包含或具有seq id no:48的氨基酸序列或与seq id no:48具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。在一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含重链和轻链，所述重链包含或具有seq id no:124的氨基酸序列或与seq id no:124具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，所述轻链包含或具有seq id no:50的氨基酸序列或与seq id no:50具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。
[0278]
在一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含或具有seq id no:37的氨基酸序列或与seq id no:37具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，所述轻链可变区包含或具有seq id no:128的氨基酸序列或与seq id no:128具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。在一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含重链和轻链，所述重链包含或具有seq id no:39的氨基酸序列或与seq id no:39具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，所述
轻链包含或具有seq id no:130的氨基酸序列或与seq id no:130具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。
[0279]
在一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含或具有seq id no:37的氨基酸序列或与seq id no:37具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，所述轻链可变区包含或具有seq id no:136的氨基酸序列或与seq id no:136具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。在一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含重链和轻链，所述重链包含或具有seq id no:39的氨基酸序列或与seq id no:39具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，所述轻链包含或具有seq id no:138的氨基酸序列或与seq id no:138具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。
[0280]
在一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含或具有seq id no:37的氨基酸序列或与seq id no:37具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，所述轻链可变区包含或具有seq id no:136的氨基酸序列或与seq id no:136具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。在一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含重链和轻链，所述重链包含或具有seq id no:141的氨基酸序列或与seq id no:141具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，所述轻链包含或具有seq id no:138的氨基酸序列或与seq id no:138具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。
[0281]
在一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含或具有seq id no:37的氨基酸序列或与seq id no:37具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，所述轻链可变区包含或具有seq id no:147的氨基酸序列或与seq id no:147具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。在一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含重链和轻链，所述重链包含或具有seq id no:39的氨基酸序列或与seq id no:39具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，所述轻链包含或具有seq id no:149的氨基酸序列或与seq id no:149具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。
[0282]
在一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含或具有seq id no:154的氨基酸序列或与seq id no:154具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，所述轻链可变区包含或具有seq id no:24的氨基酸序列或与seq id no:24具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。在一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含重链和轻链，所述重链包含或具有seq id no:156的氨基酸序列或与seq id no:156具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，所述轻链包含或具有seq id no:26的氨基酸序列或与seq id no:26具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。
[0283]
在一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含或具有seq id no:154的氨基酸序列或与seq id no:154具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，所述轻链可变区包含或具有seq id no:24的氨基酸序列或与seq id no:24具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。在一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含重链和轻链，所述重链包含或具有seq id no:159的氨
基酸序列或与seq id no:159具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，所述轻链包含或具有seq id no:26的氨基酸序列或与seq id no:26具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。
[0284]
在一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含或具有seq id no:161的氨基酸序列或与seq id no:161具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，所述轻链可变区包含或具有seq id no:24的氨基酸序列或与seq id no:24具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。在一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含重链和轻链，所述重链包含或具有seq id no:163的氨基酸序列或与seq id no:163具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，所述轻链包含或具有seq id no:26的氨基酸序列或与seq id no:26具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。
[0285]
在一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含或具有seq id no:168的氨基酸序列或与seq id no:168具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，所述轻链可变区包含或具有seq id no:24的氨基酸序列或与seq id no:24具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。在一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含重链和轻链，所述重链包含或具有seq id no:170的氨基酸序列或与seq id no:170具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，所述轻链包含或具有seq id no:26的氨基酸序列或与seq id no:26具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。
[0286]
在一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含或具有seq id no:37的氨基酸序列或与seq id no:37具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，所述轻链可变区包含或具有seq id no:174的氨基酸序列或与seq id no:174具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。在一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含重链和轻链，所述重链包含或具有seq id no:39的氨基酸序列或与seq id no:39具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，所述轻链包含或具有seq id no:176的氨基酸序列或与seq id no:176具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。
[0287]
在一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含或具有seq id no:37的氨基酸序列或与seq id no:37具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，所述轻链可变区包含或具有seq id no:180的氨基酸序列或与seq id no:180具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。在一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含重链和轻链，所述重链包含或具有seq id no:39的氨基酸序列或与seq id no:39具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，所述轻链包含或具有seq id no:182的氨基酸序列或与seq id no:182具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。
[0288]
在一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含或具有seq id no:37的氨基酸序列或与seq id no:37具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，所述轻链可变区包含或具有seq id no:186的氨基酸序列或与seq id no:186具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。在一些实
施例中，所述抗体或抗原结合片段包含重链和轻链，所述重链包含或具有seq id no:39的氨基酸序列或与seq id no:39具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，所述轻链包含或具有seq id no:188的氨基酸序列或与seq id no:188具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。
[0289]
在一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含或具有seq id no:193的氨基酸序列或与seq id no:193具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，所述轻链可变区包含或具有seq id no:136的氨基酸序列或与seq id no:136具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。在一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含重链和轻链，所述重链包含或具有seq id no:195的氨基酸序列或与seq id no:195具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，所述轻链包含或具有seq id no:138的氨基酸序列或与seq id no:138具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。
[0290]
在一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含或具有seq id no:193的氨基酸序列或与seq id no:193具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，所述轻链可变区包含或具有seq id no:174的氨基酸序列或与seq id no:174具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。在一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含重链和轻链，所述重链包含或具有seq id no:195的氨基酸序列或与seq id no:195具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，所述轻链包含或具有seq id no:176的氨基酸序列或与seq id no:176具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。
[0291]
在一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含或具有seq id no:201的氨基酸序列或与seq id no:201具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，所述轻链可变区包含或具有seq id no:128的氨基酸序列或与seq id no:128具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。在一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含重链和轻链，所述重链包含或具有seq id no:203的氨基酸序列或与seq id no:203具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，所述轻链包含或具有seq id no:130的氨基酸序列或与seq id no:130具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。
[0292]
在一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含或具有seq id no:122的氨基酸序列或与seq id no:122具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，所述轻链可变区包含或具有seq id no:128的氨基酸序列或与seq id no:128具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。在一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含重链和轻链，所述重链包含或具有seq id no:208的氨基酸序列或与seq id no:208具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，所述轻链包含或具有seq id no:130的氨基酸序列或与seq id no:130具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。
[0293]
在一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含或具有seq id no:201的氨基酸序列或与seq id no:201具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，所述轻链可变区包含或具有seq id no:136的氨基
酸序列或与seq id no:136具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。在一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含重链和轻链，所述重链包含或具有seq id no:203的氨基酸序列或与seq id no:203具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，所述轻链包含或具有seq id no:138的氨基酸序列或与seq id no:138具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。
[0294]
在一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含或具有seq id no:122的氨基酸序列或与seq id no:122具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，所述轻链可变区包含或具有seq id no:136的氨基酸序列或与seq id no:136具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。在一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含重链和轻链，所述重链包含或具有seq id no:208的氨基酸序列或与seq id no:208具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，所述轻链包含或具有seq id no:138的氨基酸序列或与seq id no:138具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。
[0295]
在一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含或具有seq id no:201的氨基酸序列或与seq id no:201具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，所述轻链可变区包含或具有seq id no:147的氨基酸序列或与seq id no:147具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。在一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含重链和轻链，所述重链包含或具有seq id no:203的氨基酸序列或与seq id no:203具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，所述轻链包含或具有seq id no:149的氨基酸序列或与seq id no:149具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。
[0296]
在一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含或具有seq id no:122的氨基酸序列或与seq id no:122具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，所述轻链可变区包含或具有seq id no:147的氨基酸序列或与seq id no:147具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。在一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含重链和轻链，所述重链包含或具有seq id no:208的氨基酸序列或与seq id no:208具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，所述轻链包含或具有seq id no:149的氨基酸序列或与seq id no:149具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。
[0297]
在一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含或具有seq id no:201的氨基酸序列或与seq id no:201具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，所述轻链可变区包含或具有seq id no:174的氨基酸序列或与seq id no:174具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。在一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含重链和轻链，所述重链包含或具有seq id no:203的氨基酸序列或与seq id no:203具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，所述轻链包含或具有seq id no:176的氨基酸序列或与seq id no:176具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。
[0298]
在一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含或具有seq id no:122的氨基酸序列或与seq id no:122具有至少95％、
96％、97％、98％或99％同一性的序列，所述轻链可变区包含或具有seq id no:174的氨基酸序列或与seq id no:174具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。在一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含重链和轻链，所述重链包含或具有seq id no:208的氨基酸序列或与seq id no:208具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，所述轻链包含或具有seq id no:176的氨基酸序列或与seq id no:176具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。
[0299]
在一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含或具有seq id no:201的氨基酸序列或与seq id no:201具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，所述轻链可变区包含或具有seq id no:180的氨基酸序列或与seq id no:180具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。在一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含重链和轻链，所述重链包含或具有seq id no:203的氨基酸序列或与seq id no:203具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，所述轻链包含或具有seq id no:182的氨基酸序列或与seq id no:182具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。
[0300]
在一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含或具有seq id no:122的氨基酸序列或与seq id no:122具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，所述轻链可变区包含或具有seq id no:180的氨基酸序列或与seq id no:180具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。在一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含重链和轻链，所述重链包含或具有seq id no:208的氨基酸序列或与seq id no:208具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，所述轻链包含或具有seq id no:182的氨基酸序列或与seq id no:182具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。
[0301]
在一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含或具有seq id no:201的氨基酸序列或与seq id no:201具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，所述轻链可变区包含或具有seq id no:186的氨基酸序列或与seq id no:186具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。在一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含重链和轻链，所述重链包含或具有seq id no:203的氨基酸序列或与seq id no:203具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，所述轻链包含或具有seq id no:188的氨基酸序列或与seq id no:188具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。
[0302]
在一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含或具有seq id no:122的氨基酸序列或与seq id no:122具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，所述轻链可变区包含或具有seq id no:186的氨基酸序列或与seq id no:186具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。在一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含重链和轻链，所述重链包含或具有seq id no:208的氨基酸序列或与seq id no:208具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，所述轻链包含或具有seq id no:188的氨基酸序列或与seq id no:188具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。
[0303]
在一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，所述
重链可变区包含或具有seq id no:233的氨基酸序列或与seq id no:233具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，所述轻链可变区包含或具有seq id no:244的氨基酸序列或与seq id no:244具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。在一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含重链和轻链，所述重链包含或具有seq id no:235的氨基酸序列或与seq id no:235具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，所述轻链包含或具有seq id no:246的氨基酸序列或与seq id no:246具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。
[0304]
在一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含或具有seq id no:256的氨基酸序列或与seq id no:256具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，所述轻链可变区包含或具有seq id no:266的氨基酸序列或与seq id no:266具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。在一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含重链和轻链，所述重链包含或具有seq id no:258的氨基酸序列或与seq id no:258具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，所述轻链包含或具有seq id no:268的氨基酸序列或与seq id no:268具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。
[0305]
在一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含或具有seq id no:278的氨基酸序列或与seq id no:278具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，所述轻链可变区包含或具有seq id no:287的氨基酸序列或与seq id no:287具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。在一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含重链和轻链，所述重链包含或具有seq id no:280的氨基酸序列或与seq id no:280具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，所述轻链包含或具有seq id no:289的氨基酸序列或与seq id no:289具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。
[0306]
在一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含或具有seq id no:300的氨基酸序列或与seq id no:300具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，所述轻链可变区包含或具有seq id no:306的氨基酸序列或与seq id no:306具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。在一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含重链和轻链，所述重链包含或具有seq id no:302的氨基酸序列或与seq id no:302具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，所述轻链包含或具有seq id no:308的氨基酸序列或与seq id no:308具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。
[0307]
在一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含或具有seq id no:316的氨基酸序列或与seq id no:316具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，所述轻链可变区包含或具有seq id no:327的氨基酸序列或与seq id no:327具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。在一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含重链和轻链，所述重链包含或具有seq id no:318的氨基酸序列或与seq id no:318具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，所述轻链包含或具有seq id no:329的氨基酸序列或与seq id no:329具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。
[0308]
在一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含或具有seq id no:333的氨基酸序列或与seq id no:333具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，所述轻链可变区包含或具有seq id no:344的氨基酸序列或与seq id no:344具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。在一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含重链和轻链，所述重链包含或具有seq id no:335的氨基酸序列或与seq id no:335具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，所述轻链包含或具有seq id no:346的氨基酸序列或与seq id no:346具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。
[0309]
在一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含或具有seq id no:350的氨基酸序列或与seq id no:350具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，所述轻链可变区包含或具有seq id no:357的氨基酸序列或与seq id no:357具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。在一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含重链和轻链，所述重链包含或具有seq id no:352的氨基酸序列或与seq id no:352具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，所述轻链包含或具有seq id no:359的氨基酸序列或与seq id no:359具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。
[0310]
在一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含或具有seq id no:350的氨基酸序列或与seq id no:350具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，所述轻链可变区包含或具有seq id no:363的氨基酸序列或与seq id no:363具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。在一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含重链和轻链，所述重链包含或具有seq id no:352的氨基酸序列或与seq id no:352具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，所述轻链包含或具有seq id no:365的氨基酸序列或与seq id no:365具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。
[0311]
在一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含或具有seq id no:374的氨基酸序列或与seq id no:374具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，所述轻链可变区包含或具有seq id no:244的氨基酸序列或与seq id no:244具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。在一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含重链和轻链，所述重链包含或具有seq id no:376的氨基酸序列或与seq id no:376具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，所述轻链包含或具有seq id no:246的氨基酸序列或与seq id no:246具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。
[0312]
在一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含或具有seq id no:385的氨基酸序列或与seq id no:385具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，所述轻链可变区包含或具有seq id no:244的氨基酸序列或与seq id no:244具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。在一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含重链和轻链，所述重链包含或具有seq id no:387的氨基酸序列或与seq id no:387具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，所述轻链包含或具有seq id no:246的氨基酸序列或与seq id no:246具有至少95％、96％、
97％、98％或99％同一性的序列。
[0313]
在一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含或具有seq id no:392的氨基酸序列或与seq id no:392具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，所述轻链可变区包含或具有seq id no:344的氨基酸序列或与seq id no:344具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。在一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含重链和轻链，所述重链包含或具有seq id no:394的氨基酸序列或与seq id no:394具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，所述轻链包含或具有seq id no:346的氨基酸序列或与seq id no:346具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。
[0314]
在一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含或具有seq id no:403的氨基酸序列或与seq id no:403具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，所述轻链可变区包含或具有seq id no:344的氨基酸序列或与seq id no:344具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。在一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含重链和轻链，所述重链包含或具有seq id no:405的氨基酸序列或与seq id no:405具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，所述轻链包含或具有seq id no:346的氨基酸序列或与seq id no:346具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。
[0315]
在一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含或具有seq id no:414的氨基酸序列或与seq id no:414具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，所述轻链可变区包含或具有seq id no:344的氨基酸序列或与seq id no:344具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。在一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含重链和轻链，所述重链包含或具有seq id no:416的氨基酸序列或与seq id no:416具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，所述轻链包含或具有seq id no:346的氨基酸序列或与seq id no:346具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。
[0316]
在一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含或具有seq id no:425的氨基酸序列或与seq id no:425具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，所述轻链可变区包含或具有seq id no:344的氨基酸序列或与seq id no:344具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。在一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段包含重链和轻链，所述重链包含或具有seq id no:427的氨基酸序列或与seq id no:427具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，所述轻链包含或具有seq id no:346的氨基酸序列或与seq id no:346具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。
[0317]
表3或表4中根据cdr(即，这些表中的数值代表序列标识符，如此“28”代表“seq id no:28”)或氨基酸共有序列列出了多组本披露的示例性抗npr1抗体。当表3中显示多个数值时，它们可用于该cdr的替代方案(即，当seq id no:29、119和190列为hcdr2时，它们可用于该cdr的替代方案)。在表4中，用括号括起来并用斜杠隔开的那些氨基酸表示该位置的替代氨基酸(例如，“(a/v)”表示所述氨基酸可以是丙氨酸或缬氨酸的位置)。在一些实施例中，抗体具有表3或表4中描述的任何抗体的重链和轻链cdr。在一些实施例中，抗npr1抗体是四
链抗体(也称为完整抗体)，其包含两个重链和两个轻链。在一些实施例中，抗npr1抗体是完整抗体的抗原结合片段，例如选自表3或表4所列的那些的完整抗体的功能片段，其保留结合npr1和/或提供完整抗体功能的能力(例如，在不存在anp的情况下活化npr1)。
[0318]
表3.根据cdr的示例性抗npr1抗体组
[0319]
[0320]
[0321]
[0322]
[0323][0324]
表4.根据共有序列的示例性抗npr1抗体组
[0325]
[0326]
[0327]
[0328]
[0329][0330]
在一些实施例中，如本文提供的抗体或其抗原结合片段与(a)人npr1；以及(b)小鼠npr1和/或大鼠npr1结合。
[0331]
在一些实施例中，如本文提供的抗体或其抗原结合片段与(a)人npr1；以及(b)食蟹猴npr1结合。在一些实施例中，所述抗体或其抗原结合片段是治疗性的。如本文所定义，治疗性抗体是有效且稳定的抗体。
[0332]
与本披露的抗npr1抗体结合相同表位的抗体
[0333]
在另一个实施例中，本披露提供与本文所述的一种或多种抗npr1抗体(例如，ww06)结合相同表位的抗体或其抗原结合片段。此类抗体：
[0334]
(i)结合npr1；
[0335]
(ii)是npr1的激动剂；
[0336]
(iii)是anp竞争性的；以及
[0337]
与抗体ww06结合npr1中相同的表位。
[0338]
在另一个实施例中，本披露提供与本文所述的一种或多种抗npr1抗体(例如，xx16)结合相同表位的抗体或其抗原结合片段。此类抗体：
[0339]
(i)结合npr1；
[0340]
(ii)是npr1的激动剂；
[0341]
(iii)是anp非竞争性的；以及
[0342]
与xx16结合npr1中相同的表位。
[0343]
在另一个实施例中，本披露提供与本文所述的一种或多种抗npr1抗体(例如，ww03)结合相同表位的抗体或其抗原结合片段。此类抗体：
[0344]
(i)结合npr1；
[0345]
(ii)是npr1的激动剂；
[0346]
(iii)是anp非竞争性的；以及
[0347]
与ww03结合npr1中相同的表位。
[0348]
在结晶和结构确定之后，已经更清楚地定义了本披露的优选抗体的结合区。这种结合在本文中定义为包括共价键和非共价键。
[0349]
因此，本披露提供了与ww06结合相同的表位的anp竞争性抗体。在一些实施例中，本披露提供了与包含氨基酸188、192、194、197、201、208和219的人npr1蛋白(登录号p16066；seq id no:1)的表位结合的抗体。在一些实施例中，本披露提供了与包含氨基酸188、192、194、197、201、208、219和295的人npr1蛋白(登录号p16066；seq id no:1)的表位结合的抗体。在一些实施例中，本披露提供了与seq id no:1的氨基酸编号188-198内的表位结合的抗体。在一些实施例中，本披露提供了与seq id no:1的氨基酸编号188-198内的至少2、3或4个氨基酸残基结合的抗体。在一些实施例中，本披露提供了与seq id no:1的氨基酸编号201-208内的表位结合的抗体。在一些实施例中，本披露提供了与seq id no:1的氨基酸编号201-208内的至少2个氨基酸结合的抗体。在一些实施例中，本披露提供了与seq id no:1的氨基酸编号188-198内的至少2、3或4个氨基酸残基结合并与seq id no:1的氨基酸编号201-208内的至少2个氨基酸结合的抗体。在一些实施例中，本披露提供了与以下表位结合的抗体，所述表位包含(i)seq id no:1的氨基酸188-198、(ii)seq id no:1的氨基酸201-208、(iii)seq id no:1的氨基酸215-238、以及(iv)seq id no:1的氨基酸294-297中的每一个中的至少一个氨基酸残基。
[0350]
本披露提供了与ww03结合相同的表位的anp非竞争性抗体。在一些实施例中，本披
露提供了与包含氨基酸82、102、103、105、106、109、132和375的人npr1蛋白(登录号p16066；seq id no:1)的表位结合的抗体。在一些实施例中，本披露提供了与包含氨基酸79、82、99、102、103、105、106、109、131、132和375的人npr1蛋白(登录号p16066；seq id no:1)的表位结合的抗体。在一些实施例中，本披露提供了与seq id no:1的氨基酸编号99-111内的表位结合的抗体。在一些实施例中，本披露提供了与seq id no:1的氨基酸编号99-111内的至少2、3、4、5或6个氨基酸结合的抗体。在一些实施例中，本披露提供了与seq id no:1的氨基酸编号99-133内的至少2、3、4、5、6、7或8个氨基酸残基结合的抗体。在一些实施例中，本披露提供了与seq id no:1的氨基酸编号131-134内的表位结合的抗体。在一些实施例中，本披露提供了与seq id no:1的氨基酸编号131-134内的至少2个氨基酸结合的抗体。在一些实施例中，本披露提供了与seq id no:1的氨基酸编号99-111内的至少2、3、4、5或6个氨基酸结合并与seq id no:1的氨基酸编号131-134内的至少2个氨基酸结合的抗体。在一些实施例中，本披露提供了与以下表位结合的抗体，所述表位包含(i)seq id no:1的氨基酸99-111、(ii)seq id no:1的氨基酸131-134、以及(iii)seq id no:1的氨基酸374-375中的每一个中的至少一个氨基酸残基。任选地，抗体可以另外与seq id no:1的氨基酸79和/或82结合。
[0351]
本披露另外提供了与xx16结合相同的表位的anp非竞争性抗体。在一些实施例中，本披露提供了与包含氨基酸82、102、103、105、106、109、132和375的人npr1蛋白(登录号p16066；seq id no:1)的表位结合的抗体。在一些实施例中，本披露提供了与包含氨基酸34、82、102、103、105、106、107、109、132、133、375和378的人npr1蛋白(登录号p16066；seq id no:1)的表位结合的抗体。在一些实施例中，本披露提供了与seq id no:1的氨基酸编号102-111内的表位结合的抗体。在一些实施例中，本披露提供了与seq id no:1的氨基酸编号102-111内的至少2、3、4、5或6个氨基酸结合的抗体。在一些实施例中，本披露提供了与seq id no:1的氨基酸编号131-134内的表位结合的抗体。在一些实施例中，本披露提供了与seq id no:1的氨基酸编号131-134内的至少2个氨基酸结合的抗体。在一些实施例中，本披露提供了与seq id no:1的氨基酸编号102-111内的至少2、3、4、5或6个氨基酸结合并与seq id no:1的氨基酸编号131-134内的至少2个氨基酸结合的抗体。在一些实施例中，本披露提供了与以下表位结合的抗体，所述表位包含(i)seq id no:1的氨基酸102-111、(ii)seq id no:1的氨基酸131-134、以及(iii)seq id no:1的氨基酸374-378中的每一个中的至少一个氨基酸残基。任选地，抗体可以另外与seq id no:1的氨基酸34、76和/或82结合。
[0352]
另外的抗体可以基于其在标准npr1结合测定中与本披露的其他抗体(例如xx16、ww06或ww03)交叉竞争(例如，以统计学上显著的方式竞争性抑制本披露的其他抗体的结合)的能力加以鉴定。测试抗体抑制本披露的抗体与人npr1结合的能力证明该测试抗体可以与该抗体竞争结合人npr1；根据非限制性理论，这种抗体可以与其所竞争的抗体结合至人npr1上的相同或相关(例如，结构上类似或空间上接近)的表位。在某个实施例中，与本披露的抗体结合人npr1上相同的表位的抗体是人抗体(例如人单克隆抗体或其抗原结合片段)。可如本文所述那样制备和分离此类抗体。
[0353]
工程化和修饰的抗体
[0354]
本披露的抗体可以使用具有一种或多种本文所示的vh和/或vl序列的抗体作为起始材料来制备，以将修饰的抗体工程化，该修饰的抗体可以具有与起始抗体相比改变的特
性。可以通过修饰一个或两个可变区(即vh和/或vl)内例如在一个或多个cdr区内和/或在一个或多个框架区内的一个或多个残基将抗体工程化。另外或可替代地，可以通过修饰一个或多个恒定区内的残基将抗体工程化，例如从而改变抗体的一个或多个效应子功能。
[0355]
可以进行的一种类型的可变区工程化是抗体结合区/互补位或cdr移植。由于互补位序列负责大多数抗体-抗原相互作用，因此可以通过构建表达载体来表达模拟特定天然存在的抗体的特性的重组抗体，这些表达载体包括移植到来自具有不同特性的不同抗体的框架序列上的来自特定天然存在的抗体的cdr/互补位序列(参见例如，riechmann,l.等人,1998nature[自然]332:323-327；jones,p.等人,1986nature[自然]321:522-525；queen,c.等人,1989proc.natl.acad.sci.u.s.a.[美国国家科学院院刊]86:10029-10033；us 5,225,539，和美国专利号5,530,101、5,585,089、5,693,762和6,180,370；将其各自的内容特此通过引用并入本文)。
[0356]
因此，本披露的另一个实施例涉及分离的抗npr1抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含其抗原结合部分，所述抗原结合部分包含重链可变区，所述重链可变区包含如表2、表3或表4所示的抗体或抗体组的cdr序列。因此，此类抗体含有单克隆抗体的vh和v
l cdr序列，还可以含有来自这些抗体的不同框架序列。
[0357]
此类框架序列可以从包括种系抗体基因序列的公共dna数据库或公开参考文献获得。例如，人重链和轻链可变区基因的种系dna序列可以在“vbase”人种系序列数据库(可从因特网www[dot]mrc-cpe[dot]cam[dot]ac[dot]uk/vbase获得)中找到，以及在卡巴特,e.a.,等人,1991sequences of proteins of immunological interest[免疫学相关蛋白质序列],第五版,美国卫生与公众服务部(u.s.department of health and human services),nih公开号91-3242；tomlinson,i.m.等人,1992j.fol.biol.[分子生物学杂志]227:776-798；和cox,j.p.l.等人,1994eur.j immunol.[欧洲免疫学杂志]24:827-836中找到；将其各自的内容特此通过引用并入本文。
[0358]
用于本披露的抗体或抗原结合片段的框架序列的实例是结构上类似于本披露的所选抗体使用的框架序列的那些，例如本披露的抗体或抗原结合片段使用的共有序列和/或框架序列。可以将v
h cdr1、2和3序列以及v
l cdr1、2和3序列移植到与在衍生出框架序列的种系免疫球蛋白基因中发现的框架区具有相同序列的框架区上，或者可以将cdr序列移植到如与种系序列相比含有一个或多个突变的框架区上。例如，已经发现在某些情况下使框架区内的残基突变以维持或增强抗体的抗原结合能力是有益的(参见例如，美国专利号5,530,101、5,585,089、5,693,762和6,180,370；将其各自的内容特此通过引用并入本文)。
[0359]
另一种类型的可变区修饰是使vh和/或v
l cdr1、cdr2和/或cdr3区内的氨基酸残基突变，从而改良感兴趣的抗体的一种或多种结合特性(例如，亲和力)，被称作“亲和力成熟”。可以进行定点诱变或pcr介导的诱变以引入一个或多个突变，并且可以在如本文所述的体外或体内测定中评价对抗体结合或其他感兴趣的功能特性的影响。还可以引入保守修饰(如上文所讨论)。所述突变可以是氨基酸取代、添加或缺失。此外，典型地cdr区内不超过一个、两个、三个、四个或五个残基被改变。
[0360]
将抗原结合结构域移植到替代性框架或支架中
[0361]
可以使用多种抗体/免疫球蛋白框架或支架，只要所得多肽包含至少一个特异性结合npr1的结合区即可。此类框架或支架包括5种主要独特型的人免疫球蛋白或其片段(如
本文其他地方所披露的那些)，并且包括其他动物物种的免疫球蛋白，优选地具有人源化方面。就这点而言，单重链抗体(如在骆驼科动物中鉴定的那些抗体)特别令人感兴趣。本领域技术人员仍在继续发现和开发新颖框架、支架和片段。
[0362]
在一个方面，本披露涉及使用非免疫球蛋白支架生成基于非免疫球蛋白的抗体，在所述非免疫球蛋白支架上可以移植本披露的cdr。可以使用已知或未来的非免疫球蛋白框架和支架，只要它们包含对npr1具有特异性的结合区，例如，如针对本文所述的抗体公开的那些，包括但不限于xx16、ww03或ww06。此类化合物在本文中称作“包含靶标特异性结合区的多肽”。非免疫球蛋白框架的实例进一步描述于以下章节中(骆驼科动物抗体和非抗体支架)。
[0363]
骆驼科动物抗体
[0364]
从包括新的世界成员如美洲驼物种(lama paccos、大羊驼和瘦驼)在内的骆驼和单峰骆驼(双峰骆驼和calelus dromaderius)家族成员获得的抗体蛋白质已经关于大小、结构复杂性和对于人类受试者的抗原性进行了表征。如在自然界中发现的来自这个哺乳动物家族的某些igg抗体缺少轻链，并且因此在结构上与来自其他动物的抗体的具有两条重链和两条轻链的典型四链四级结构不同，参见wo 94/04678，将其内容特此通过引用并入本文。
[0365]
通过基因工程化获得骆驼科动物抗体的区域(它是被鉴定为vhh的小的单个可变结构域)以产生对靶标具有高亲和力的小蛋白质，从而产生称为“骆驼科动物纳米抗体”的低分子量抗体衍生蛋白。参见us5,759,808；还参见stijlemans,b.等人,2004j biol chem[生物化学杂志]279:1256-1261；dumoulin,m.等人,2003nature[自然]424:783-788；pleschberger,m.等人,2003bioconjugate chem[生物缀合化学]14:440-448；cortez-retamozo,v.等人,2002int j cancer[国际癌症杂志]89:456-62；和lauwereys,m.等人,1998embo j[欧洲分子生物学组织杂志]17:3512-3520；将其各自的内容特此通过引用并入本文。骆驼科动物抗体和抗体片段的工程化文库可例如从比利时根特的埃博灵克斯公司(ablynx)商购获得。与非人来源的其他抗体一样，可以重组改变骆驼科动物抗体的氨基酸序列以获得更接近地类似于人序列的序列，即纳米抗体可以是“人源化的”。因此，可以进一步降低骆驼科动物抗体对人的天然低抗原性。
[0366]
骆驼科动物纳米抗体的分子量为人igg分子的约十分之一，并且所述蛋白质的物理直径仅为几纳米。小尺寸的一个结果是骆驼科动物纳米抗体结合抗原位点的能力，所述抗原位点对于较大的抗体蛋白质是功能上不可见的，即，骆驼科动物纳米抗体可用作检测对于使用经典免疫学技术而言隐蔽的抗原的试剂，以及可用作可能的治疗剂。因此，小尺寸的又另一个结果是骆驼科动物纳米抗体可以由于结合至靶蛋白的沟或窄缝中的特异性位点而抑制，因此可以具有与经典抗体相比更接近地类似于经典低分子量药物的功能的能力。
[0367]
低分子量和紧凑的尺寸还导致骆驼科动物纳米抗体极其热稳定、对极端ph和蛋白水解消化稳定，并且抗原性差。另一个结果是骆驼科动物纳米抗体容易从循环系统移动到组织中，甚至穿过血脑屏障并且可以治疗影响神经组织的障碍。纳米抗体可以进一步促进药物跨血脑屏障的运输，参见us 2004/0161738，将其内容特此通过引用并入本文。这些特征与对人的低抗原性相结合显示了巨大的治疗潜力。此外，这些分子可以在原核细胞如大
肠杆菌中完全表达，并且可以表达为具有噬菌体的融合蛋白。
[0368]
因此，本披露的特征是对npr1具有高亲和力的骆驼科动物抗体或纳米抗体。在一个实施例中，骆驼科动物抗体或纳米抗体通过将本披露的人抗体的重链或轻链的cdr序列移植到纳米抗体或单结构域抗体框架序列中而获得，如例如wo 94/04678(将其内容特此通过引用并入本文)中所述。
[0369]
框架或fc工程化
[0370]
本披露的工程化抗体包括如下那些：其中已对vh和/或vl内的框架残基进行了修饰，例如以改善抗体的一种或多种特性。典型地，进行此类框架修饰以降低抗体的免疫原性。本披露的抗体可以一种或多种方式修饰，包括本文所述的每种方式。
[0371]
例如，一种方法是将一个或多个框架残基“回复突变”为对应的种系序列。更确切地，已经历体细胞突变的抗体可以含有与衍生抗体的种系序列不同的框架残基。可以通过将抗体框架序列与衍生抗体的种系序列进行比较来鉴定此类残基。为了使框架区序列恢复为其种系构型，可以通过例如定点诱变或pcr介导的诱变将体细胞突变“回复突变”为种系序列。此类“回复突变的”抗体和本文所述的另外的修饰也旨在为本披露所涵盖。
[0372]
另一种类型的框架修饰包括使框架区内或甚至一个或多个cdr区内的一个或多个残基突变以去除t细胞表位，从而降低抗体的潜在免疫原性。该方法也被称为“去免疫化”，并且在us 2003/0153043中被更详细地描述，将其内容特此通过引用并入本文。
[0373]
除了在框架或cdr区内进行的修饰之外或作为在框架或cdr区内进行的修饰的替代方案，可以将本披露的抗体工程化以包含fc区内的修饰，通常是为了改变抗体的一种或多种功能特性，如血清半衰期、补体结合、fc受体结合和/或抗原依赖性细胞毒性。此外，本披露的抗体可以经化学修饰(例如，一个或多个化学部分可以附接至抗体)或经修饰以改变其糖基化，从而再次改变抗体的一种或多种功能特性。以下更详细地描述了这些实施例中的每一个。fc区中残基的编号是卡巴特的eu索引的编号。
[0374]
在一个实施例中，修饰ch1的铰链区，使得铰链区中半胱氨酸残基的数目改变，例如增加或减少。该方法被进一步描述于us5,677,425中，将其内容特此通过引用并入本文。改变ch1铰链区中的半胱氨酸残基数，以例如促进轻链和重链的组装或者增加或降低抗体的稳定性。
[0375]
在另一个实施例中，使抗体的fc铰链区突变以缩短抗体的生物半衰期。更具体地，将一个或多个氨基酸突变引入fc-铰链片段的ch2-ch3结构域界面区域中，使得抗体具有相对于天然fc-铰链结构域spa结合而言受损的葡萄球菌蛋白质a(spa)结合。该方法在us 6,165,745中被更详细地描述，将其内容特此通过引用并入本文。
[0376]
在另一个实施例中，修饰抗体以增加其生物半衰期。可以采用各种方法。例如，可以引入以下突变中的一种或多种：t252l、t254s、t256f，如us 6,277,375中所述，将其内容特此通过引用并入本文。替代性地，为了延长生物半衰期，抗体可以在ch1或cl区域内改变以含有取自igg的fc区中ch2结构域的两个环的补救受体结合表位，如us 5,869,046和us 6,121,022中所述，将其各自的内容特此通过引用并入本文。
[0377]
在又其他实施例中，通过用不同的氨基酸残基替代至少一个氨基酸残基来改变fc区，以改变抗体的效应子功能。例如，可以用不同的氨基酸残基置换一个或多个氨基酸，使得抗体对效应配体具有改变的亲和力，但保留亲本抗体的抗原结合能力。改变亲和力的效
应配体可以是例如fc受体或补体的c1组分。该方法在us 5,624,821和us 5,648,260中被更详细地描述，将其各自的内容特此通过引用并入本文。
[0378]
为了使抗体的adcc活性最小化，fc区内的特定突变产生了与效应子细胞具有最小相互作用的“fc沉默”抗体。从总体上看，“igg fc区”用来定义免疫球蛋白重链的c端区域，包括天然序列fc区和变体fc区。人igg重链fc区通常上定义为包含igg抗体的从位置c226或从位置p230至羧基端的氨基酸残基。fc区中残基的编号是卡巴特的eu索引的编号。例如，在抗体的产生或纯化期间可以移除fc区的c端赖氨酸(残基k447)。
[0379]
沉默的效应子功能可以通过抗体fc区的突变获得。参见例如lala和n297a(strohl,w.,2009,curr.opin.biotechnol.[当前生物技术观点]第20(6)卷:685-691)；和d265a(baudino等人,2008,j.immunol.[免疫学杂志]181:6664-69)还参见heusser等人,wo 2012065950；将其各自的内容特此通过引用并入本文。特别地，残基234和/或235可以被突变，任选地突变为丙氨酸。因此，在一个实施例中，根据本披露的抗体在氨基酸234和235之一或两者处的fc区中具有突变。氨基酸234和235二者的这种取代导致adcc活性降低。这种突变的一个实例是lala突变体，所述突变体在iggl fc氨基酸序列中包含l234a和l235a突变。沉默iggl抗体的另一个实例是dapa(d265a，p329a)突变(us 6,737,056，将其内容特此通过引用并入本文)。另一个沉默iggl抗体包含n297a突变，所述突变导致无糖基化/非糖基化的抗体。fc沉默抗体产生无或低adcc活性，这意味着fc沉默抗体表现出的adcc活性低于50％的特定细胞裂解。无adcc活性意指fc沉默抗体表现出低于1％的adcc活性(特异性细胞裂解)。
[0380]
在另一个实施例中，选自氨基酸残基的一个或多个氨基酸可以用不同的氨基酸残基置换，使得抗体具有改变的c1q结合和/或降低或消除的补体依赖性细胞毒性(cdc)。该方法在us6,194,551中被更详细地描述，将其内容特此通过引用并入本文。
[0381]
在另一个实施例中，改变一个或多个氨基酸残基，从而改变抗体固定补体的能力。该方法被进一步描述于wo 94/29351中，将其内容特此通过引用并入本文。
[0382]
在另一个实施例中，修饰fc区以增加抗体介导抗体依赖性细胞毒性(adcc)的能力和/或通过修饰一个或多个氨基酸来增加抗体对fcγ受体的亲和力。该方法被进一步描述于wo 00/42072中，将其内容特此通过引用并入本文。此外，已经定位了人igg1上的fcγrl、fcγrii、fcγriii和fcrn的结合位点并且已经描述了具有改良的结合的变体(参见shields,r.l.等人,2001j.biol.chen.[生物化学杂志]276:6591-6604，将其内容特此通过引用并入本文)。
[0383]
在还另一个实施例中，修饰抗体的糖基化。例如，可以制备非糖基化的抗体(即，抗体缺乏糖基化)。可以改变糖基化以例如增加抗体对“抗原”的亲和力。此类碳水化合物修饰可以通过例如改变抗体序列内的一个或多个糖基化位点来实现。例如，可以进行一个或多个氨基酸取代，这消除了一个或多个可变区框架糖基化位点，从而消除了所述位点的糖基化。此种无糖基化可以增加抗体对于抗原的亲和力。这样的方法在us 5,714,350和us 6,350,861中被更详细地描述，将其各自的内容特此通过引用并入本文。
[0384]
另外或可替代地，可以制备具有改变的糖基化类型的抗体，如具有减少量的岩藻糖基残基的低岩藻糖基化抗体或具有增加的二等分glcnac结构的抗体。已经证明这类改变的糖基化模式增加了抗体的adcc能力。这种碳水化合物修饰可以通过例如在具有改变的糖
基化机制的宿主细胞中表达抗体来实现。具有改变的糖基化机制的细胞已在本领域中描述，并且可用作宿主细胞，在所述宿主细胞中表达本披露的重组抗体，从而产生具有改变的糖基化的抗体。例如，ep 1,176,195(将其内容特此通过引用并入本文)描述了具有功能破坏的fut8基因的细胞系，其编码岩藻糖基转移酶，使得在这种细胞系中表达的抗体显示出低岩藻糖基化。wo 03/035835描述了变体cho细胞系lecl3细胞，其将岩藻糖附接至asn(297)连接的碳水化合物的能力降低，还导致在所述宿主细胞中表达的抗体的低岩藻糖基化(还参见shields,r.l.等人,2002j.biol.chem.[生物化学杂志]277:26733-26740)。wo 99/54342描述了如下细胞系，该细胞系被工程化以表达糖蛋白修饰糖基转移酶(例如，β(1,4)-n乙酰基葡糖胺基转移酶iii(gntiii))，使得在工程化细胞系中表达的抗体显示出增加的二等分glcnac结构，该二等分glcnac结构导致抗体的adcc活性增加(还参见umana等人,1999nat.biotech.[自然生物技术]17:176-180)。将前述申请和参考文献各自的内容特此通过引用并入本文。
[0385]
本披露考虑的本文抗体的另一种修饰是聚乙二醇化。可以将抗体聚乙二醇化以例如增加抗体的生物学(例如血清)半衰期。为了使抗体聚乙二醇化，通常在一个或多个peg基团附接至该抗体或抗体片段的条件下使所述抗体或其片段与聚乙二醇(peg)(如peg的反应性酯或醛衍生物)反应。聚乙二醇化可以通过酰化反应或烷基化反应采用反应性peg分子(或类似的反应性水溶性聚合物)来进行。如本文所用，术语“聚乙二醇”旨在涵盖已用于衍生化其他蛋白质的任何形式的peg，如单(c1-c10)烷氧基-或芳氧基-聚乙二醇或聚乙二醇-马来酰亚胺。在某些实施例中，待聚乙二醇化的抗体是无糖基化抗体。使蛋白质聚乙二醇化的方法是本领域已知的并且可以应用于本披露的抗体。参见例如，ep 0154316和ep 0401384，将其各自的内容特此通过引用并入本文。
[0386]
本披露考虑的抗体的另一种修饰是至少本披露的抗体的抗原结合区与血清蛋白(例如人血清白蛋白或其片段)的缀合物或蛋白融合物以增加所得分子的半衰期。这样的方法被描述于例如ep 0322094中，将其内容特此通过引用并入本文。
[0387]
另一种可能性是本披露的抗体的至少抗原结合区与能够结合至血清蛋白(如人血清白蛋白)的蛋白质的融合，以延长所得分子的半衰期。这样的方法被描述于例如ep 0486525中，将其内容特此通过引用并入本文。
[0388]
编码本披露抗体的核酸分子
[0389]
本披露的另一方面涉及编码本披露的抗体的核酸分子。术语“核酸”在本文中可与术语“多核苷酸”互换使用，并且是指呈单链或双链形式的脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸以及其聚合物。所述术语涵盖含有已知核苷酸类似物或经修饰的骨架残基或连接的核酸，所述核酸是合成的、天然存在的和非天然存在的，具有与参考核酸类似的结合特性，并且以类似于参考核苷酸的方式代谢。此类类似物的实例包括但不限于硫代磷酸酯、氨基磷酸酯、甲基膦酸酯、手性-甲基膦酸酯、2-o-甲基核糖核苷酸、肽-核酸(pna)。在一些实施例中，核酸可以是mrna。
[0390]
除非另外说明，否则特定的核酸序列还隐含地涵盖其经保守修饰的变体(例如，简并密码子取代)和互补序列以及明确指示的序列。具体地，简并密码子取代可以通过产生如下序列而获得，在这些序列中，一个或多个所选的(或全部)密码子的第三位被混合碱基和/或脱氧肌苷残基取代(参见：batzer等人,nucleic acids res[核酸研究]1991；25(19):
5081；ohtsuka等人,j biol chem[生物化学杂志]1985；260(5):2605-8；rossolini等人,mol cell probes[分子和细胞探针]1994；8(2):91-8；将其各自的内容特此通过引用并入本文。
[0391]
本文提供了抗npr1抗体的示例性全长重链和轻链核苷酸序列。在一些实施例中，核酸分子是表2中鉴定的核酸分子中的一种或多种，例如，编码抗npr1抗体或其抗原结合片段的核酸分子。在一些其他实施例中，本文所述的核酸分子包含与表2中鉴定的那些核酸分子的核苷酸序列基本上相同(例如，至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％)的核苷酸序列。当从适当的表达载体表达时，由这些多核苷酸编码的多肽能够结合npr1蛋白(例如人npr1)。
[0392]
本文还提供了如下多核苷酸，其编码来自本披露的抗npr1抗体或抗原结合片段的重链和/或轻链的至少一个cdr区和通常所有三个cdr区。本文进一步提供了如下多核苷酸，其编码本披露的示例性抗npr1抗体或抗原结合片段的重链和/或轻链的所有或基本上所有的可变区序列。由于遗传密码的简并性，多种核酸序列将编码免疫球蛋白氨基酸序列中的每一种。
[0393]
在一些实施例中，本文披露的核酸分子编码抗体的可变区和恒定区。在一些实施例中，本文披露的核酸分子包含编码与本文所述抗体之一的重链序列(包括表2中的那些序列)基本上相同(例如，至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％)的全长重链序列的核苷酸。在一些实施例中，本文披露的核酸分子包含编码与本文所述抗体之一的轻链序列(包括表2中的那些序列)基本上相同(例如，至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％)的全长轻链序列的核苷酸。
[0394]
这些核酸可以存在于完整细胞中，存在于细胞裂解物中，或者可以是呈部分纯化或基本上纯的形式的核酸。在通过标准技术从其他细胞组分或其他污染物(例如，其他细胞核酸或蛋白质)纯化时，核酸是“分离的”或“变得基本上纯的”，这些标准技术包括碱/sds处理、cscl条带法、柱色谱、琼脂糖凝胶电泳和本领域中熟知的其他技术。参见f.ausubel等人(编辑),1987current protocols in molecular biology[分子生物学实验指南],greene publishing and wiley interscience[格林出版和韦利跨科学公司],纽约，将其内容特此通过引用并入本文。本披露的核酸可以是例如dna或rna，并且可以包含或可以不包含内含子序列。在一个实施例中，核酸是cdna分子。核酸可以存在于载体例如噬菌体展示载体中，或存在于重组质粒载体中。
[0395]
本披露的核酸可以使用标准分子生物学技术来获得。对于杂交瘤(例如，从携带人免疫球蛋白基因的转基因小鼠制备的杂交瘤，如本文进一步描述)表达的抗体，可以通过标准pcr扩增或cdna克隆技术获得编码由杂交瘤产生的抗体的轻链和重链的cdna。对于从免疫球蛋白基因文库(例如，使用噬菌体展示技术)获得的抗体，可以从作为文库成员的多种噬菌体克隆中回收编码抗体的核酸。
[0396]
多核苷酸序列可以通过从头固相dna合成或通过pcr诱变现有序列(例如，如本文所述的例如表2中的序列)来产生。核酸的直接化学合成可以通过本领域已知的方法完成，例如narang等人,1979,meth.enzymol.[酶学方法]68:90；brown等人,meth.enzymol.[酶学方法]68:109,1979的磷酸二酯方法；beaucage等人,tetra.lett.[四面体快报],22:1859,1981的二乙基亚磷酰胺方法；和美国专利号4,458,066的固体支持方法(将其各自的内容特
此通过引用并入本文)。通过pcr向多核苷酸序列引入突变可以如以下文献中所述进行，例如pcr technology:principles and applications for dna amplification[pcr技术：用于dna扩增的原理和应用],h.a.erlich(编辑),弗里曼出版社，纽约，纽约州(freeman press,ny,n.y.),1992；pcr protocols:a guide to methods and applications[pcr方案：方法和应用指南],innis等人,(编辑),学术出版社,圣地亚哥,加利福尼亚州(academic press,san diego,calif),1990；mattila等人,nucleic acids res.[核酸研究]19:967,1991；以及eckert等人,pcr methods and applications[pcr方法和应用]1:17,1991。
[0397]
一旦获得编码vh和vl区段的dna片段，可以通过标准重组dna技术进一步操作这些dna片段，例如以将可变区基因转化为全长抗体链基因、转化为fab片段基因或转化为scfv基因。在这些操作中，编码vl或vh的dna片段可操作地连接至另一种dna分子，或可操作地连接至编码另一种蛋白质(如抗体恒定区或柔性接头)的片段。如在此上下文中所用，术语“可操作地连接”意图意指，两个dna片段以功能性方式接合，例如使得这两个dna片段编码的氨基酸序列保持在框内，或使得蛋白质在所需启动子的控制下表达。
[0398]
可以通过将编码vh的dna可操作地连接至编码重链恒定区(ch1、ch2和ch3)的另一种dna分子而将编码vh区的分离的dna转化为全长重链基因。人重链恒定区基因的序列是本领域中已知的(参见例如，kabat,e.a.等人,1991sequences of proteins of immunological interest[免疫相关蛋白序列],第五版,美国卫生与福利部,nih公开号91-3242，将其内容特此通过引用并入本文)，并且涵盖这些区域的dna片段可以通过标准pcr扩增来获得。重链恒定区可以是igg1、igg2、igg3、igg4、iga、ige、igm或igd恒定区。在一些实施例中，重链恒定区是igg1同种型。对于fab片段重链基因，可以将编码vh的dna可操作地连接至仅编码重链ch1恒定区的另一种dna分子。
[0399]
可以通过将编码vl的dna可操作地连接至编码轻链恒定区cl的另一种dna分子而将编码vl区的分离的dna转化为全长轻链基因(以及转化为fab轻链基因)。人轻链恒定区基因的序列是本领域中已知的(参见例如，kabat,e.a.等人,1991sequences of proteins of immunological interest[免疫相关蛋白序列],第五版,美国卫生与福利部,nih公开号91-3242，将其内容特此通过引用并入本文)，并且涵盖这些区域的dna片段可以通过标准pcr扩增来获得。轻链恒定区可以是κ或λ恒定区。
[0400]
为产生scfv基因，所述vh和vl编码dna片段可操作地连接至编码柔性接头的另一片段，使得所述vh和vl序列可作为连续单链蛋白质(其vl和vh区通过柔性接头连接)进行表达(参见例如，bird等人,1988,science[科学]242:423-426；huston等人,1988proc.natl.acad.sci.usa[美国国家科学院院刊]85:5879-5883；mccafferty等人,1990,nature[自然]348:552-554；将其各自的内容特此通过引用并入本文)。
[0401]
载体
[0402]
可以使用各种表达载体来表达编码本披露的抗体或其抗原结合片段的多核苷酸。基于病毒和非病毒表达载体均可用于在哺乳动物宿主细胞中产生抗体。非病毒载体和系统包括质粒、附加型载体(典型地具有用于表达蛋白质或rna的表达盒)以及人类人工染色体(参见例如，harrington等人,nat genet.[自然遗传学]15:345,1997，将其内容特此通过引用并入本文)。例如，可用于在哺乳动物(例如，人)细胞中表达本披露的多特异性抗体或其结构域的多核苷酸和多肽的非病毒载体包括pthiohis a、pthiohis b和pthiohis c，
pcdna3.1/his，pebvhis a、pebvhis b和pebvhis c(加利福尼亚州圣地亚哥市英杰公司(invitrogen,san diego,calif.))，mps v载体和本领域中已知用于表达其他蛋白质的多种其他载体。有用的病毒载体包括基于逆转录病毒、腺病毒、腺相关病毒、疱疹病毒的载体，基于sv40、乳头瘤病毒、hbp eb病毒、牛痘病毒载体和塞姆利基森林病毒(semliki forest virus)(sfv)的载体。参见，brent等人,同上；smith,annu.rev.microbiol.[微生物学年度评论]49:807,1995；以及rosenfeld等人,cell[细胞]68:143,1992，将其各自的内容特此通过引用并入本文。
[0403]
表达载体的选择取决于要表达所述载体的预期宿主细胞。哺乳动物宿主细胞的表达载体可包括表达控制序列如复制的起点、启动子和增强子(参见，例如，queen等人,immunol.rev.[免疫学评论]89:49-68,1986，将其内容特此通过引用并入本文)和必要的处理信息位点如核糖体结合位点、rna剪接位点、聚腺苷酸化位点和转录终止子序列。这些表达载体通常含有源自哺乳动物基因或源自哺乳动物病毒的启动子。合适的启动子可以是组成型的、细胞类型特异性的、阶段特异性的和/或可调控的或可调节的。有用的启动子包括但不限于金属硫蛋白启动子、组成型腺病毒主要晚期启动子、地塞米松诱导型mmtv启动子、sv40启动子、mrp poiiii启动子、组成型mps v启动子、四环素诱导型cmv启动子(如人类即早期cmv启动子)、组成型cmv启动子和已知的启动子-增强子组合。
[0404]
可以在非诱导条件下、而不在偏向宿主细胞更好耐受其表达产物的编码序列的群体的情况下扩大经转化的生物体的培养。除了启动子之外，还可能需要或期望其他调节元件以高效表达本披露的抗体或其片段。这些元件典型地包括atg起始密码子和相邻的核糖体结合位点或其他序列。此外，通过包含适合于使用中的细胞系统的增强子，可以提高表达效率(参见例如，scharf等人,results probl.cell differ.[细胞分化中的结果和问题]20:125,1994；和bittner等人,meth.enzymol.[酶学方法],153:516,1987；将其各自的内容特此通过引用并入本文)。例如，sv40增强子或cmv增强子可以用来增加哺乳动物宿主细胞中的表达。
[0405]
因此，本披露提供了包含表2中所示抗体的核酸序列中的一个或多个的克隆或表达载体。此外，本披露提供了克隆或表达载体，其包含编码表2所示的核苷酸序列中的一个或多个的核酸。
[0406]
宿主细胞
[0407]
对于轻链和重链的表达，可以通过标准技术将编码重链和轻链的一种或多种表达载体转移至宿主细胞中。
[0408]
用于引入含有目的多核苷酸序列的表达载体的方法根据细胞宿主的类型而变化。例如，氯化钙转染通常用于原核细胞，而磷酸钙处理或电穿孔可用于其他细胞宿主。(通常参见sambrook等人，同上，将其内容特此通过引用并入本文)。其他方法包括例如电穿孔、磷酸钙处理、脂质体介导的转化、注射和显微注射、冲击法、病毒体、免疫脂质体、聚阳离子核酸缀合物、裸dna、人工病毒粒子、与疱疹病毒结构蛋白vp22的融合物(elliot和o'hare,cell[细胞]88:223,1997，将其内容特此通过引用并入本文)、药剂增强的dna摄取和离体转导。
[0409]
在原核或真核宿主细胞中表达本披露的抗体在理论上是可能的。讨论了抗体在真核细胞中(特别是在哺乳动物宿主细胞中)的表达，因为此类真核细胞(并且特别是哺乳动
物细胞)比原核细胞更有可能组装并分泌适当折叠且具免疫活性的抗体。已经报道抗体基因的原核表达对于以高产率产生活性抗体是无效的(boss,m.a.和wood,c.r.,1985immunology today[今日免疫学]6:12-13，将其内容特此通过引用并入本文)。
[0410]
对于重组蛋白的长期高产量生产，通常期望稳定的表达。例如，可以使用含有病毒复制起点或内源性表达元件和选择性标记基因的本披露表达载体来制备稳定表达本披露的抗体或其抗原结合片段的细胞系。在引入载体后，可以使细胞在富集培养基中生长1-2天，然后将它们转换为选择性培养基。选择性标记的目的是赋予选择抗性，并且它的存在允许在选择性培养基中成功地表达引入的序列的细胞生长。可以使用适合于细胞类型的组织培养技术来增殖抗性、稳定转染的细胞。因此，本披露提供了产生本披露的抗体或抗原结合片段的方法，其中所述方法包括培养包含编码所述抗体或抗原结合片段的核酸的宿主细胞的步骤。
[0411]
在一些实施例中，使用哺乳动物宿主细胞表达和产生本披露的抗npr1抗体或抗原结合片段。例如，它们可以是表达内源免疫球蛋白基因的杂交瘤细胞系或含有外源表达载体的哺乳动物细胞系。这些包括任何正常非永生的或正常或异常的永生动物或人细胞。例如，已经开发了许多能够分泌完整免疫球蛋白的合适宿主细胞系，包括cho细胞系、各种cos细胞系、hela细胞、骨髓瘤细胞系、转化的b细胞和杂交瘤。示例性宿主细胞包括但不限于中国仓鼠卵巢(cho)细胞、人胚肾(hek)细胞(例如hek293、hek293t、hek293f)、猴肾(cos)细胞(例如cos-1、cos-7)、幼仓鼠肾脏(bhk)细胞(例如bhk-21)、非洲绿猴肾细胞(例如bsc-1)、hela细胞、人肝细胞癌细胞(例如hep g2)、骨髓瘤细胞(例如ns0、653、sp2/0)、淋巴瘤细胞、卵母细胞和来自转基因动物的细胞(例如乳腺上皮细胞)或其任何衍生的、永生化或转化的细胞。特别地，为了与ns0骨髓瘤细胞一起使用，另一种表达系统是wo 87/04462、wo 89/01036和ep 0338841中所示的gs基因表达系统，将其各自的内容特此通过引用并入本文。在将编码抗体核酸的重组表达载体引入哺乳动物宿主细胞中时，通过将宿主细胞培养足以允许在宿主细胞中表达该抗体或将该抗体分泌到其中生长宿主细胞的培养基中的时间段来产生抗体。可以使用标准蛋白质纯化方法从培养基中回收抗体。本披露的此类纯化抗体可用于任何目的，包括但不限于本文所述的方法和用途，和/或作为如本文所述的药物组合物的一部分。
[0412]
在另外的替代方案中，宿主细胞可以是针对哺乳动物样糖基化模式工程化的酵母或丝状真菌，并且能够产生缺乏作为糖基化模式的岩藻糖的抗体(参见例如ep 1297172，将其内容特此通过引用并入本文)。
[0413]
因此，本披露提供了如下宿主细胞，其包含上述本披露的载体或核酸序列中的一个或多个。
[0414]
本披露的单克隆抗体的生成
[0415]
单克隆抗体(mab)可以通过多种技术来产生，这些技术包括常规单克隆抗体方法，例如kohler和milstein,1975nature[自然]256:495(将其内容特此通过引用并入本文)的体细胞杂交技术。可以使用许多产生单克隆抗体的技术，例如，b淋巴细胞的病毒性或致癌性转化。
[0416]
杂交瘤可以使用例如鼠系统来制备。可以根据任何合适的程序进行免疫方案和免疫脾细胞的分离以进行融合。可以基于如本文所述制备的鼠单克隆抗体的序列来制备嵌合
抗体或人源化抗体。编码重链和轻链免疫球蛋白的dna可以从感兴趣的鼠杂交瘤获得，并使用标准分子生物学技术工程化以含有非鼠(例如，人)免疫球蛋白序列。例如，为了产生嵌合抗体，可以使用任何已知的方法将鼠可变区与人恒定区连接(参见例如us 4,816,567，将其内容特此通过引用并入本文)。为产生人源化抗体，可以使用任何已知的方法将鼠cdr区域插入人框架中。参见例如，us 5225539和美国专利号5530101、5585089、5693762和6180370，将其各自的内容特此通过引用并入本文。
[0417]
也可以使用携带部分人免疫系统而不是小鼠系统的转基因或转染色体小鼠产生人单克隆抗体。这些转基因和转染色体小鼠包括在本文中分别称为humab和km小鼠，并且在本文中统称为“人ig小鼠”的小鼠。
[0418]
humab(梅达瑞克斯公司(medarex,inc.))包含编码未重排的人重链(μ和γ)和k轻链免疫球蛋白序列的人免疫球蛋白基因小基因座(miniloci)，以及使内源μ和k链基因座失活的靶向突变(参见，例如，lonberg等人,1994nature[自然]368(6474):856-859，将其内容特此通过引用并入本文)。因此，小鼠显示出小鼠igm或k降低的表达，并且响应于免疫，引入的人重链和轻链转基因经历类别转换和体细胞突变以生成高亲和力人iggk单克隆(lonberg,n.等人,1994同上；在lonberg,n.,1994handbook of experimental pharmacology[实验药理学手册]113:49-101；lonberg,n.和huszar,d.,1995intern.rev.immunol.[国际免疫学评论]13:65-93以及harding,f.和lonberg,n.,1995ann.n.y.acad.sci.[纽约科学学术年报]764:536-546中综述，将其各自的内容特此通过引用并入本文)。humab的制备和用途以及由此类小鼠进行的基因组修饰被进一步描述于以下文献中：taylor,l.等人,1992nucleic acids research[核酸研究]20:6287-6295；chen,j.等人,1993international immunology[国际免疫学]5:647-656；tuaillon等人,1993proc.natl.acad.sci.usa[美国国家科学院院刊]94:3720-3724；choi等人,1993nature genetics[自然遗传学]4:117-123；chen,j.等人,1993embo j.[欧洲分子生物学学会杂志]12:821-830；tuaillon等人,1994j.immunol.[免疫学杂志]152:2912-2920；taylor,l.等人,1994international immunology[国际免疫学]579-591；以及fishwild,d.等人,1996nature biotechnology[自然生物技术]14:845-851，将其各自的内容特此通过引用并入本文。另外参见，美国专利号5,545,806、5,569,825、5,625,126、5,633,425、5,789,650、5,877,397、5,661,016、5,814,318、5,874,299、和5,770,429，us 5,545,807，wo 92/103918，wo 93/12227，wo 94/25585，wo 97/113852，wo 98/24884和wo 99/45962，以及wo 01/14424；将其各自的内容特此通过引用并入本文。
[0419]
在另一个实施例中，人抗体可以使用在转基因和转染色体上携带人免疫球蛋白序列的小鼠，如携带人重链转基因和人轻链转染色体的小鼠中产生。这样的小鼠，在本文中称为“km小鼠”，在wo 02/43478中有详细描述，将其内容特此通过引用并入本文。
[0420]
仍进一步，表达人免疫球蛋白基因的替代性转基因动物系统可在本领域中获得并且可以用于产生本披露的抗体。例如，可以使用称为xenomouse(安根尼克斯公司(abgenix,inc.))的替代转基因系统。这样的小鼠描述于例如，美国专利号5,939,598、6,075,181、6,114,598、6,150,584和6,162,963中，将其各自的内容特此通过引用并入本文。
[0421]
此外，表达人免疫球蛋白基因的备选转基因动物系统是本领域可获得的，并且可
用于产生本披露的抗体。例如，可以使用携带人重链转染色体和人轻链转染色体的被称为“tc小鼠”的小鼠；此类小鼠描述于tomizuka等人,2000proc.natl.acad.sci.usa[美国国家科学院院刊]97:722-727中，将其内容特此通过引用并入本文。此外，本领域已经描述了携带人重链和轻链转染色体的牛(kuroiwa等人,2002nature biotechnology[自然生物技术]20:889-894，将其内容特此通过引用并入本文)，并且可以用于产生本披露的抗体。
[0422]
还可以使用针对筛选人免疫球蛋白基因文库的噬菌体展示方法来制备本披露的人单克隆抗体。用于分离人抗体的此类噬菌体展示方法在本领域中已确立或者描述于以下实例中。参见例如：美国专利号5,223,409、5,403,484、和5,571,698，美国专利号5,427,908和5,580,717，美国专利号5,969,108和6,172,197，和美国专利号5,885,793、6,521,404、6,544,731、6,555,313、6,582,915和6,593,081中，将其各自的内容特此通过引用并入本文。
[0423]
本披露的人抗体或抗原结合片段也可以使用scid小鼠制备，人免疫细胞已经重建至该scid小鼠中，使得免疫时可以产生人抗体应答。例如在美国专利号5,476,996和5,698,767中描述了这种小鼠，将其各自的内容特此通过引用并入本文。
[0424]
可以通过本文所述的任何方法来制备本披露的抗体。
[0425]
产生本披露的抗体或抗原结合片段的杂交瘤的生成
[0426]
为了生成产生本披露的抗体或抗原结合片段的杂交瘤，可以分离来自经免疫小鼠的脾细胞和/或淋巴结细胞并与适当的永生化细胞系(如小鼠骨髓瘤细胞系)融合。可以针对抗原特异性抗体的产生筛选所得杂交瘤。例如，可以用50％peg将来自经免疫小鼠的脾淋巴细胞的单细胞悬浮液与六分之一数目的p3x63-ag8.653非分泌小鼠骨髓瘤细胞(atcc，crl 1580)融合。将细胞以大约2x 145铺板于平底微量滴定板中，之后在含有20％胎克隆血清、18％“653”条件化培养基、5％三甲氧唑辛(origen)(igen)、4mm l-谷氨酰胺、1mm丙酮酸钠、5mm hepes、0.055mm 2-巯基乙醇、50单位/ml青霉素、50mg/ml链霉素、50mg/ml庆大霉素和1x hat(西格玛公司(sigma)；hat是在融合后24小时时添加的)的选择培养基中孵育两周。在大约两周后，可以在用ht替代hat的培养基中培养细胞。然后可以通过elisa针对人单克隆igm和igg抗体筛选个别孔。一旦发生广泛杂交瘤生长，通常可以在10-14天后观察培养基。可以将分泌抗体的杂交瘤重新铺板，再次筛选，并且如果仍对人igg呈阳性，则可以通过有限稀释将这些单克隆抗体亚克隆至少两次。然后可以在体外培养稳定的亚克隆以在组织培养基中生成少量抗体以供表征。
[0427]
为了纯化抗体或其抗原结合片段，可以将所选的杂交瘤在两升旋转烧瓶中生长用于抗体纯化。可以将上清液过滤并浓缩，之后用蛋白质a-琼脂糖(法玛西亚公司(pharmacia)，新泽西州皮斯卡塔韦(piscataway,n.j.))进行亲和色谱。可以通过凝胶电泳和高效液相色谱检查所洗脱的igg以确保纯度。可以将缓冲溶液更换为pbs，并且可以通过od
280
使用1.43消光系数来确定浓度。可以将抗体或抗原结合片段等分并储存在-80℃。
[0428]
产生本披露的抗体或抗原结合片段的杂交瘤可以例如使用本文所述的方法产生。
[0429]
产生本披露的抗体或抗原结合片段的转染瘤的生成
[0430]
还可以使用例如合适的重组dna技术和基因转染方法的组合在宿主细胞转染瘤中产生本披露的抗体或抗原结合片段(例如morrison,s.(1985)science[科学]229:1202，将其各自的内容特此通过引用并入本文)。
[0431]
例如，为了表达抗体或其抗原结合片段，可以通过标准分子生物学技术(例如，使
用表达感兴趣的抗体的杂交瘤的pcr扩增或cdna克隆)获得编码部分或全长轻链和重链的dna，并且可以将这些dna插入表达载体中，使得将基因可操作地连接至转录和翻译控制序列。在该上下文中，术语“可操作地连接”旨在指，将抗体基因连接至载体中，使得载体内的转录和翻译控制序列发挥其调节抗体基因的转录和翻译的预期功能。表达载体和表达控制序列经选择以与所用的表达宿主细胞相容。可以将抗体轻链基因和抗体重链基因插入单独的载体中，或者可以将两种基因都插入同一表达载体中。通过标准方法将抗体基因插入表达载体中(例如，连接抗体基因片段和载体上的互补限制位点，或如果不存在限制位点则进行钝端连接)。本文所述抗体的轻链和重链可变区可以通过以下方式用于产生任何抗体同种型的全长抗体基因：将这些轻链和重链可变区插入已经编码所需同种型的重链恒定区和轻链恒定区的表达载体中，使得vh区段可操作地连接至载体内的一个或多个ch区段，并且v
l
区段可操作地连接至载体内的cl区段。另外或替代性地，重组表达载体可以编码促进从宿主细胞分泌抗体链的信号肽。可以将抗体链基因克隆至载体中，使得信号肽框内连接至抗体链基因的氨基末端。所述信号肽可以是免疫球蛋白信号肽或异源信号肽(即，来自非免疫球蛋白的信号肽)。
[0432]
除了抗体链基因以外，本披露的重组表达载体携带控制抗体链基因在宿主细胞中的表达的调节序列。术语“调节序列”旨在包括启动子、增强子和控制抗体链基因的转录或翻译的其他表达控制元件(例如，多聚腺苷酸化信号)。这样的调节序列在例如goeddel(gene expression technology[基因表达技术]；methods in enzymology[酶学方法]185,academic press[学术出版社],加利福尼亚州圣地亚哥市1990，将其各自的内容特此通过引用并入本文)中描述。本领域技术人员应了解，表达载体的设计(包括调控序列的选择)可以取决于诸如以下等因素：要转化的宿主细胞的选择、所需蛋白质的表达水平等。用于哺乳动物宿主细胞表达的调节序列包括引导哺乳动物细胞中高水平蛋白质表达的病毒元件，诸如源自巨细胞病毒(cmv)、猿猴病毒40(sv40)、腺病毒(例如，腺病毒主要晚期启动子(admlp))和多瘤的启动子和/或增强子。可替代地，可以使用非病毒调节序列，诸如泛素启动子或p-球蛋白启动子。仍进一步，调控元件由来自不同来源的序列构成，如sra启动子系统，其含有来自sv40早期启动子的序列以及人t细胞白血病病毒1型的长末端重复序列(takebe,y.等人,1988mol.cell.biol.[分子细胞生物学]8:466-472，将其各自的内容特此通过引用并入本文)。
[0433]
除了抗体链基因和调控序列以外，本披露的重组表达载体可以携带另外的序列，如调控载体在宿主细胞中的复制的序列(例如，复制起点)和选择性标记基因。选择性标记基因促进对已经引入载体的宿主细胞的选择(参见例如，美国专利号4,399,216、4,634,665和5,179,017，将其各自的内容特此通过引用并入本文)。例如，典型地，选择性标记基因为已经引入载体的宿主细胞赋予对药物诸如g418、潮霉素或甲氨蝶呤的抗性。选择性标记基因包括二氢叶酸还原酶(dhfr)基因(用于进行甲氨蝶呤选择/扩增的dhfr-宿主细胞中)和neo基因(用于g418选择)。
[0434]
对于轻链和重链的表达，通过标准技术将编码重链和轻链的一个或多个表达载体转染到宿主细胞。不同形式的术语“转染”旨在涵盖多种通常用于将外源dna引入原核或真核宿主细胞的技术，例如电穿孔、磷酸钙沉淀、deae-葡聚糖转染等。在原核或真核宿主细胞中表达本披露的抗体在理论上是可能的。讨论了抗体在真核细胞中(特别是在哺乳动物宿
主细胞中)的表达，因为此类真核细胞(并且特别是哺乳动物细胞)比原核细胞更有可能组装并分泌适当折叠且具免疫活性的抗体。已经报道抗体基因的原核表达对于以高产率产生活性抗体是无效的(boss,m.a.和wood,c.r.,1985immunology today[今日免疫学]6:12-13，将其内容特此通过引用并入本文)。
[0435]
本文其他地方描述了用于表达本披露的抗体的哺乳动物宿主细胞。在将编码抗体基因的重组表达载体引入哺乳动物宿主细胞中时，通过将宿主细胞培养足以允许在宿主细胞中表达该抗体或将该抗体分泌到其中生长宿主细胞的培养基中的时间段来产生抗体。可以使用标准蛋白质纯化方法从培养基中回收抗体。因此，本披露提供了用于产生本披露的抗npr1抗体或其抗原结合片段的方法，所述方法包括培养本披露的宿主细胞并分离抗体或其抗原结合片段。
[0436]
治疗的用途和方法
[0437]
治疗方法
[0438]
本文提供了通过使用本文披露的抗npr1抗体或其抗原结合片段(例如，如表2、表3或表4中定义的抗体或抗体组)来治疗与npr1功能丧失有关的疾病的方法。在一些实施例中，所述抗体或其抗原结合片段可以选自ww01_lala、ww03_lala、ww05_lala、ww06_lala、xx01_lala、xx01_dapa、xx01_n30s_dapa、xx03_lala、xx04_lala、xx06_lala、xx06_dapa、xx07_lala、xx08_lala、xx08_dapa、xx08_n30s_dapa、xx08_n30q_dapa、xx09_lala、xx11_lala、xx12_lala、xx13_lala、xx14_lala、xx15_lala、xx15_dapa、xx16_lala、xx16_dapa、xx17_lala、xx17_dapa、xx18_lala、xx18_dapa、xx19_lala、xx19_dapa、xx20_lala、xx20_dapa、yy01_lala、yy02_lala、yy03_lala、yy04_lala、yy05_lala、yy06_lala、yy07_lala、zz05_lala、zz12_lala、zz13_lala、zz14_lala、zz15_lala、zz16_lala和zz17_lala。
[0439]
在一些实施例中，所述抗体或其抗原结合片段可以选自ww01_lala、ww03_lala、xx01_lala、xx01_dapa、xx01_n30s_dapa、xx03_lala、xx04_lala、xx06_lala、xx06_dapa、xx07_lala、xx08_lala、xx08_dapa、xx08_n30s_dapa、xx08_n30q_dapa、xx09_lala、xx11_lala、xx12_lala、xx13_lala、xx14_lala、xx15_lala、xx15_dapa、xx16_lala、xx16_dapa、xx17_lala、xx17_dapa、xx18_lala、xx18_dapa、xx19_lala、xx19_dapa、xx20_lala、xx20_dapa、yy01_lala、yy03_lala、yy04_lala、zz12_lala和zz13_lala。在一些实施例中，所述抗体或其抗原结合片段可以选自ww05_lala、ww06_lala、yy05_lala、yy06_lala、yy07_lala、zz05_lala、zz14_lala和zz16_lala。在一些实施例中，所述抗体或其抗原结合片段可以是xx16_dapa。在一些实施例中，所述抗体或其抗原结合片段可以是xx16_lala。
[0440]
在一些实施例中，与npr1功能丧失有关的疾病是心血管障碍。在一些实施例中，所述心血管障碍选自：高血压、周围血管疾病、心力衰竭、冠状动脉疾病(cad)、缺血性心脏病(ihd)、二尖瓣狭窄和返流、心绞痛、肥厚性心肌病、糖尿病性心肌病、室上性和室性心律失常、心律不齐、房颤(af)、新发房颤、复发性房颤、心脏纤维化、心房扑动、有害血管重塑、斑块稳定和心肌梗死(mi)。在一些实施例中，与npr1功能丧失有关的疾病是心力衰竭、肥厚性心肌病(hcm)、高血压、先兆子痫、哮喘、青光眼或细胞因子释放综合征。在一些实施例中，所述心力衰竭选自射血分数降低的心力衰竭(hfref)、射血分数保留的心力衰竭(hfpef)、急性心肌梗死后心力衰竭或急性代偿性心力衰竭。在一些实施例中，所述肥厚性心肌病是心室肥大。在一些实施例中，所述高血压选自顽固性高血压、高血压性心脏病、肺高血压、肺动
脉高血压、单纯收缩期高血压、顽固性高血压和肺动脉高血压。在一些实施例中，所述高血压选自顽固性高血压和高血压性心脏病。
[0441]
在一些实施例中，与npr1功能丧失有关的疾病是肾障碍。在一些实施例中，所述肾障碍选自：糖尿病肾功能不全、非糖尿病肾功能不全、肾衰竭、糖尿病肾病、非糖尿病肾病、急性肾损伤、造影剂诱发的肾病、肾病综合征、肾小球肾炎、硬皮病、肾小球硬化、原发性肾病蛋白尿、肾血管性高血压、糖尿病视网膜病变和终末期肾脏疾病(esrd)、内皮功能障碍、舒张功能障碍、肾纤维化和多囊肾疾病(pkd)。
[0442]
npr1相关障碍还包括与异常npr1活性和/或表达直接或间接相关的任何其他障碍。本文还提供了通过使用本文披露的抗npr1抗体或抗原结合片段(例如，来自表2、表3或表4，例如xx16_dapa或xx16_lala)治疗与异常npr1活性和/或表达直接或间接相关的npr1相关障碍的方法。
[0443]
在一些实施例中，本披露提供了在有需要的受试者中治疗与利钠肽受体活性相关的不希望的病症、疾病或障碍的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的本文披露的抗体或抗原结合片段。在一些实施例中，本披露提供了本文披露的抗体或抗原结合片段在有需要的受试者中治疗与利钠肽受体活性相关的不希望的病症、疾病或障碍的用途。在一些实施例中，本披露提供了本文披露的抗体或抗原结合片段，其用于在治疗与利钠肽受体活性相关的不希望的病症、疾病或障碍的方法中使用。在一些实施例中，本披露提供了本文披露的抗体或抗原结合片段，其用于在制造用于治疗与利钠肽受体活性相关的不希望的病症、疾病或障碍的药物中使用。此类病症、疾病和障碍包括但不限于心血管障碍(例如高血压、周围血管疾病、心力衰竭(包括但不限于射血分数降低的心力衰竭(hfref)、射血分数保留的心力衰竭(hfpef)、急性心肌梗死后心力衰竭或急性代偿性心力衰竭)、冠心病(cad)、缺血性心脏病(ihd)、二尖瓣狭窄和反流、心绞痛、肥厚性心肌病(例如，心室肥大)、糖尿病性心肌病、室上性和室性心律失常、心律不齐、房颤(af)、新发房颤、复发性房颤、心脏纤维化、心房扑动、有害血管重塑、斑块稳定或心肌梗死(mi))、高血压(顽固性高血压、高血压性心脏病、肺高血压、肺动脉高血压、单纯收缩期高血压、顽固性高血压或肺动脉高血压)、先兆子痫、哮喘、青光眼、细胞因子释放综合征和/或肾障碍(例如，糖尿病肾功能不全、非糖尿病肾功能不全、肾衰竭、糖尿病肾病、非糖尿病肾病、急性肾损伤、造影剂诱发的肾病、肾病综合征、肾小球肾炎、硬皮病、肾小球硬化、原发性肾病蛋白尿、肾血管性高血压、糖尿病视网膜病变和终末期肾脏疾病(esrd)、内皮功能障碍、舒张功能障碍、肾纤维化和多囊肾疾病(pkd))。
[0444]
在一些实施例中，此类方法包括向需要治疗的受试者施用治疗有效量的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段与本文所述抗体之一特异性结合相同的表位。例如，此类方法包括向需要治疗的受试者施用治疗有效量的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段与xx16特异性结合相同的表位。在另一个实施例中，此类方法包括向需要治疗的受试者施用治疗有效量的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段与ww03特异性结合相同的表位。在另一个实施例中，此类方法包括向需要治疗的受试者施用治疗有效量的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段与ww06特异性结合相同的表位。
[0445]
根据本发明的保护和治疗方法的所有前述实施例均同样适用于
[0446]
·
如本文所述的抗体或抗原结合片段中的任一者在制备用于根据本发明使用的药物中的用途，
[0447]
·
根据本发明的本文所述的抗体或抗原结合片段中的任一者的用途，
[0448]
·
根据本发明使用的本文所述的抗体或抗原结合片段中的任一者，
[0449]
·
包含根据本发明使用的本文所述的抗体或抗原结合片段中的任一者的药物组合物，
[0450]
·
包含根据本发明的本文所述的抗体或抗原结合片段中的任一者的药物组合物的用途，以及
[0451]
·
包含本文所述的抗体或抗原结合片段中的任一者的药物组合物在制备用于根据本发明使用的药物中的用途。
[0452]
组合疗法
[0453]
上述各种治疗可以与其他治疗配偶物(partner)或治疗剂组合，例如与npr1功能丧失相关的疾病的当前护理标准，例如，本文所讨论的疾病或障碍中的一种或多种的当前护理标准。例如，本文所述的npr1抗体或其抗原结合片段可以与ace(血管紧张素转化酶)抑制剂、血管紧张素受体阻滞剂(arb)、脑啡肽酶抑制剂、β阻滞剂、利尿剂、钙通道阻滞剂、强心苷、钠-葡萄糖共转运蛋白2抑制剂(sglt2i)或其组合中的一种或多种组合。作为非限制性实例，可以将npr1抗体或抗原结合形式与选自以下的另外的治疗剂组合：依那普利、贝那普利、卡托普利、福辛普利、赖诺普利、莫西普利、培哚普利、喹那普利、雷米普利、群多普利、缬沙坦、阿齐沙坦、坎地沙坦、依普罗沙坦、厄贝沙坦、氯沙坦、奥美沙坦、替米沙坦、沙库比曲、比索洛尔、卡维地洛、普萘洛尔、美托洛尔、酒石酸美托洛尔、琥珀酸美托洛尔、噻嗪类利尿剂、环利尿剂、保钾利尿剂、氨氯地平、氯维地平、地尔硫卓、非洛地平、伊拉地平、尼卡地平、硝苯地平、尼索地平、维拉帕米、洋地黄苷、卡格列净、达格列净、依帕列净、埃格列净、及其组合。示例性利尿剂和洋地黄苷包括但不限于氯噻嗪、氯噻酮、氢氯噻嗪、吲达帕胺、美托拉宗、布美他尼、依他尼酸、呋塞米、托拉塞米、阿米洛利、依普利酮、螺内酯、氨苯蝶啶、地高辛及其组合。在一些实施例中，本文所述的npr1抗体或其抗原结合片段可以与血管紧张素受体-脑啡肽酶抑制剂(arni)组合，诸如沙库比曲和缬沙坦的组合(例如)。在一些实施例中，本文所述的npr1抗体或其抗原结合片段可以与皮质类固醇(例如，吸入型皮质类固醇，如氟替卡松、布地奈德、莫米松、倍氯米松、环索奈德或糠酸氟替卡松；或者口服或静脉注射皮质类固醇，如泼尼松或甲基强的松龙)、白三烯修饰剂(例如孟鲁司特、扎鲁司特或齐留通)、支气管扩张剂(例如长效β激动剂(如沙美特罗或福莫特罗)、短效β激动剂(如沙丁胺醇或左旋沙丁胺醇)、茶碱或异丙托铵)、或其组合(例如氟替卡松和沙美特罗的组合、布地奈德和福莫特罗的组合、或福莫特罗和莫米松的组合)中的一种或多种组合。在一些实施例中，本文所述的npr1抗体或其抗原结合片段可以与β-肾上腺素受体拮抗剂(例如，噻吗洛尔、左布洛诺尔、美替洛尔、卡替洛尔或倍他洛尔)、碳酸酐酶抑制剂(例如，乙酰唑胺、多佐胺、布林佐胺或醋甲唑胺)、α2-肾上腺素受体激动剂(例如溴莫尼定或阿拉可乐定)、拟副交感神经药(例如拟胆碱药，如毛果芸香碱)、前列腺素类似物(例如拉坦前列腺素(latanoprost)、拉坦前列素(latanoprostene bunod)、曲伏前列素、比马前列素、他氟前列腺素)、rho激酶抑制剂(例如奈塔舒地尔或利帕舒地尔)、或其组合(例如rho激酶抑制剂和拉坦前列素的组合)中的一种或多种组合。
[0454]
因此，本文所述的治疗与npr1功能丧失相关的疾病的方法可以进一步包括向需要治疗的受试者施用第二药剂。
[0455]
术语“组合”是指呈一个剂量单位形式的固定组合；或组合施用，其中本文所述的抗npr1抗体或其抗原结合片段与组合配偶物(例如下文所解释的另一种药物，也称为“治疗剂”或“共药剂(co-agent)”)可以在同一时间独立地施用或在时间间隔内分开地施用，特别是在这些时间间隔允许组合配偶物显示协作(例如协同)效应的情况下。单个组分可以包装在一个药盒中或分开包装。可在施用之前将一种或两种组分(例如粉末或液体)重构或稀释至所需剂量。如本文所用，术语“共同施用”或“组合施用”等意指涵盖向有需要的单个受试者(例如患者)施用所选择的组合配偶物，并且旨在包括其中药剂不一定通过相同的施用途径施用和/或同时施用的治疗方案。如本文所用，术语“药物组合”意指由多于一种治疗剂的混合或组合所产生的产品，并且包括治疗剂的固定和非固定组合两者。术语“固定组合”意指治疗剂(例如，本发明化合物和组合配偶物)以单一实体或剂量的形式同时地向患者施用。术语“非固定组合”意指治疗剂(例如，本发明的化合物和组合配偶物)作为分开的实体同时地、并行地或依序地向患者施用(没有特定的时间限制)，其中这种施用在患者体内提供治疗有效水平的两种化合物。后者也适用于混合物疗法，例如三种或更多种治疗剂的施用。
[0456]
如本文所用的，术语“药物组合”是指在一个剂量单位形式中的固定组合、或用于组合施用的非固定组合或成套药盒，其中两种或更多种治疗剂可以在同一时间独立地施用或在时间间隔内分别施用，特别地其中这些时间间隔允许组合配偶物显示合作性例如协同效应。
[0457]
术语“组合疗法”是指施用两种或更多种治疗剂以治疗在本披露中描述的所治疗的病症或障碍。这种施用涵盖以基本上同时的方式共同施用这些治疗剂，如以具有固定比率的活性成分的单个胶囊施用。可替代地，这种施用涵盖以对于每种活性成分的多个或分开的容器(例如，片剂、胶囊、粉末和液体)共同施用。可以在施用之前将粉末和/或液体重构或稀释至所需剂量。此外，这种施用也涵盖在大致相同的时间或在不同的时间以依序方式使用每种类型的治疗剂。在任何一种情况下，治疗方案将在治疗本文所述的病症或障碍方面提供药物组合的有益效果。
[0458]
药物组合物、剂量和施用方法
[0459]
本文还提供了用于治疗npr1相关疾病的组合物，例如药物组合物。这样的组合物包括一种或多种如本文所述的抗npr1抗体或其抗原结合片段，并且可包括药学上可接受的载剂。此类组合物可以进一步包含另一种药剂，例如针对待治疗疾病的当前护理标准。
[0460]
药物组合物典型地包含药学上可接受的载剂。如本文所用，术语“药学上可接受的载剂”是指不会对受试者造成明显刺激并且不会消除所施用的抗npr1抗体或抗原结合片段和/或所述组合物中任何另外的治疗剂的生物活性和特性的载剂或稀释剂。药学上可接受的载剂可增强或稳定所述组合物，或可用于促进组合物的制备。药学上可接受的载剂可包括药物施用相容的盐水、溶剂、分散介质、包衣、抗细菌和抗真菌剂、等渗剂和吸收延迟剂等。佐剂也可以包含在任何这些配制品中。典型地，药物组合物配被制成与预期的施用途径相容。施用途径的实例包括肠胃外(例如，静脉内、动脉内、腹膜内)、口服、颅内、鞘内或鼻内(例如吸入)、真皮内、皮下或透粘膜施用。在一些实施例中，配制药物组合物以递送抗npr1
抗体或其抗原结合片段以穿过血脑屏障。短语“生理学上可接受的载剂”和“药学上可接受的载剂”可以互换使用。
[0461]
如本文所用，术语“赋形剂”是指添加到药物组合物中以进一步促进活性成分施用的惰性物质。用于肠胃外施用的配制品可以例如含有赋形剂，如无菌水或盐水、聚亚烷基二醇(如聚乙二醇)、植物油或氢化萘。其他示例性赋形剂包括但不限于碳酸氢钙，磷酸钙，各种糖和各种类型的淀粉、纤维素衍生物、明胶、乙烯-乙酸乙烯酯共聚物颗粒，以及表面活性剂，包括例如聚山梨酯20。
[0462]
本披露的药物组合物可通过本领域已知的各种方法施用。施用途径和/或模式可以根据所希望的结果而变化。在一些实施例中，施用是玻璃体内、静脉内、肌内、腹膜内或皮下施用。药学上可接受的载剂应适合于玻璃体内、静脉内、肌肉内、皮下、肠胃外、脊柱或表皮施用(例如，通过注射或输注)。根据施用途径，所述一种或多种活性化合物(即抗npr1抗体或抗原结合片段，以及任选地另外的治疗剂)可以包被在材料中以保护所述一种或多种化合物免受酸和可能使所述一种或多种化合物失活的其他自然条件的作用。
[0463]
通常，治疗有效(effective或efficacious)剂量的抗npr1抗体或抗原结合片段用于本披露的药物组合物中。通过本领域技术人员已知的常规方法可以将抗npr1抗体或抗原结合片段配制成药学上可接受的剂型。
[0464]
配制适合的药物组合物的方法在本领域中是已知的，参见，例如，remington:the science and practice of pharmacy.[雷明顿：药物科学与实践]第21版.,2005；以及在drugs and the pharmaceutical sciences:a series of textbooks and monographs[药物与药物科学：一系列教科书和专著](dekker(德克尔公司),纽约)系列中的书籍，将其各自的内容特此通过引用并入本文。例如，用于肠胃外、真皮内或皮下应用的溶液或悬浮液可以包括以下组分：无菌稀释剂，如注射用水、盐水溶液、固定油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其他合成溶剂；抗细菌剂，如苯甲醇或对羟基苯甲酸甲酯；抗氧化剂，如抗坏血酸或亚硫酸氢钠；螯合剂，如乙二胺四乙酸；缓冲剂，如乙酸盐、柠檬酸盐或磷酸盐；以及用于调节张力的试剂，如氯化钠或葡萄糖。可用酸或碱调节ph，如盐酸或氢氧化钠。可以将肠胃外制剂封装在由玻璃或塑料制成的安瓿、一次性注射器或多剂量小瓶中。
[0465]
可以调整抗npr1抗体和抗原结合片段在有或没有另外的治疗剂的情况下的给药方案，以提供最佳的所需应答(例如治疗应答)。例如，如由治疗情况的紧急状态所指示的，可以一次性施用单次推注的一种或两种药剂，可以在预定的时间段内施用若干个分次剂量，或可以按比例减少或增加一种或两种药剂的剂量。对于任何特定的受试者，可以根据个体的需要以及治疗临床医生的专业判断随时间调整特定的剂量方案。肠胃外组合物可以配制成剂量单位形式，以便于施用和实现剂量均匀性。如本文所使用，单位剂型是指适合作为单一剂量用于待治疗受试者的物理上离散单位；每个单位含有经计算产生期望治疗作用的预定量的活性化合物以及所需药物载剂。
[0466]“有效量”是足以实现有益或所希望的结果的量。例如，治疗量为达到所需治疗效果的量。所述量可与预防性有效量相同或不同，所述预防性有效量是预防疾病或疾病症状的发作所需的量。可以将有效量以一次或多次施用、应用或给药来施用。治疗化合物的治疗有效量(即，有效剂量)取决于所选择的治疗化合物。本领域技术人员(例如医生)将理解，某些因素可能影响有效治疗受试者所需的剂量和定时，这些因素包括但不限于，疾病或障碍
的严重程度、先前的治疗、受试者的一般健康状况和/或年龄、以及存在的其他疾病。此外，用治疗有效量的本文所述的治疗化合物对受试者进行的治疗可以包括单一治疗或一系列治疗。
[0467]
治疗化合物的剂量、毒性与治疗功效可以通过在细胞培养物或实验动物中的标准药学程序来确定，例如以确定ld50(50％群体的致死剂量)以及ed50(在50％群体中治疗有效的剂量)。在毒性和治疗效果之间的剂量比是治疗指数，并且它可以表示为比率ld50/ed50。表现出高治疗指数的化合物是优选的。尽管可以使用表现出毒副作用的化合物，但是应小心设计将此类化合物靶向至受累组织的位点的递送系统，从而将对未感染的细胞的潜在损伤最小化，并且由此减少副作用。
[0468]
可以调整抗npr1抗体和抗原结合片段(单独地或与另外的治疗剂组合)的给药方案，以提供最佳的所需应答(例如治疗应答)。例如，如由治疗情况的紧急状态所指示的，可以一次性施用单次推注的一种或两种药剂，可以在预定的时间段内施用若干个分次剂量，或可以按比例减少或增加一种或两种药剂的剂量。对于任何特定的受试者，可以根据个体的需要以及治疗临床医生的专业判断随时间调整特定的剂量方案。肠胃外组合物可以配制成剂量单位形式，以便于施用和实现剂量均匀性。如本文所使用，单位剂型是指适合作为单一剂量用于待治疗受试者的物理上离散单位；每个单位含有经计算产生期望治疗作用的预定量的活性化合物以及所需药物载剂。
[0469]
可以基于一种或多种活性化合物的独特特性和待实现的特定治疗效果来选择包含抗npr1抗体或抗原结合片段和/或任何一种或多种另外的治疗剂的组合物的剂量值。医生或兽医可以以低于达到期望治疗效果所需的水平开始药物组合物中使用的本披露的抗体的剂量，并逐渐增加剂量直至达到期望效果。通常，用于治疗本文所述的肥胖或另一种疾病的本披露的组合物的有效剂量可以根据许多不同因素而变化，包括施用方式、靶位点、患者的生理状态、患者是人还是人动物、施用的其他药物以及治疗是预防性的还是治疗性的。所选的剂量水平也可以取决于多种药代动力学因素，包括所用的本披露的特定组合物或其酯、盐或酰胺的活性、施用途径、给药时间、正在使用的特定化合物的排泄速率、治疗的持续时间、与所用特定组合物组合使用的其他药物、化合物和/或材料、正在治疗的患者的年龄、性别、体重、状况、总体健康和既往病史。可以滴定治疗剂量以优化安全性和功效。
[0470]
试剂盒
[0471]
本文还提供了如下试剂盒，其包含本文提供的组合物中的一种或多种(例如，表2、表3或表4中所述的抗体或其抗原结合片段)和使用说明。使用说明可以包括诊断或治疗npr1相关疾病的说明。如本文提供的试剂盒可以根据本文所述的任何方法使用。本领域技术人员将意识到本文提供的试剂盒的其他合适用途，并且将能够使用所述试剂盒用于此类用途。本文提供的试剂盒还可以包括邮寄物(例如，邮资支付信封或邮寄包)，其可以用于将用于分析的样品返回到例如实验室。试剂盒可以包括一个或多个用于样品的容器，或样品可以在标准血液收集小瓶中。试剂盒还可以包括以下的一种或多种：知情同意书、测试申请表和关于如何在本文所述方法中使用试剂盒的说明书。本文还包括使用此类试剂盒的方法。可以对一个或多个表格(例如，测试申请表)和装有样品的容器例如用条形码(用于鉴定提供样品的受试者)进行编码。
[0472]
通过以下实例和权利要求书进一步说明本披露，所述实例和权利要求书是示例性
的，并不意味着进一步限制。本领域技术人员将认识到与本文所述的方法和材料类似或等同的许多方法和材料可以用于所述组合物和方法的实践中。此类等效物在本披露和权利要求书的范围内。在本技术全文中引用的所有参考文献的内容，包括已发布的专利和公开的专利申请，均通过引用并入本文。
实施例
[0473]
更详细地，本披露提供以下实施例：
[0474]
实施例1.一种分离的抗体或抗原结合片段，其(i)与利钠肽受体1(npr1)结合；并且(ii)在不存在心钠肽(anp)的情况下能够活化npr1。
[0475]
实施例2.一种分离的抗npr1抗体或抗原结合片段；或者如实施例1所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其不结合和/或不活化利钠肽受体2(npr2)和/或利钠肽受体3(npr3)。
[0476]
实施例3.一种分离的抗npr1抗体或抗原结合片段；或者如实施例1或实施例2所述的分离的抗体或抗原结合片段，其与(a)人npr1；以及(b)小鼠npr1和/或大鼠npr1结合。
[0477]
实施例4.一种分离的抗npr1抗体或抗原结合片段；或者如实施例1或实施例2所述的分离的抗体或抗原结合片段，其与(a)人npr1；以及(b)食蟹猴npr1结合。
[0478]
实施例5.一种分离的抗npr1抗体或抗原结合片段；或者如实施例1-4中任一项所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其是anp非竞争性的。
[0479]
实施例6.一种分离的抗npr1抗体或抗原结合片段；或者如实施例1、2或4中任一项所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其是anp竞争性的。
[0480]
实施例7.一种分离的抗npr1抗体或抗原结合片段；或者如实施例1-5中任一项所述的分离的抗体或抗原结合片段，其能够稳定anp-npr1复合物。
[0481]
实施例8.一种分离的抗npr1抗体或抗原结合片段；或者如实施例1-5或7中任一项所述的分离的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段与seq id no:1的氨基酸99-133内的表位结合。
[0482]
实施例9.一种分离的抗npr1抗体或抗原结合片段；或者如实施例1-5、7或8中任一项所述的分离的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段与包含seq id no:1的氨基酸99-133内的至少两个氨基酸残基的表位结合。
[0483]
实施例10.一种分离的抗npr1抗体或抗原结合片段；或者如实施例1-5或7-9中任一项所述的分离的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段与包含seq id no:1的氨基酸99-133内的至少3、4、5、6、7或8个氨基酸残基的表位结合。
[0484]
实施例11.一种分离的抗npr1抗体或抗原结合片段；或者如实施例1-5或7-10中任一项所述的分离的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段与seq id no:1的氨基酸99-111内的表位结合。
[0485]
实施例12.一种分离的抗npr1抗体或抗原结合片段；或者如实施例1-5或7-11中任一项所述的分离的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段与seq id no:1的氨基酸99-103内的表位结合。
[0486]
实施例13.一种分离的抗npr1抗体或抗原结合片段；或者如实施例1-5或7-12中任一项所述的分离的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段与seq id no:1
的氨基酸105-111内的表位结合。
[0487]
实施例14.一种分离的抗npr1抗体或抗原结合片段；或者如实施例1-5或7-13中任一项所述的分离的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段与包含seq id no:1的氨基酸105-111内的至少2、3或4个氨基酸残基的表位结合。
[0488]
实施例15.一种分离的抗npr1抗体或抗原结合片段；或者如实施例1-5或7-14中任一项所述的分离的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段与人npr1的构象表位结合，并且其中所述构象表位包含(i)seq id no:1的氨基酸99-103、(ii)seq id no:1的氨基酸105-111、(iii)seq id no:1的氨基酸131-134中的每一个中的至少一个氨基酸残基，并且还与seq id no:1的氨基酸375和/或378结合。
[0489]
实施例16.一种分离的抗npr1抗体或抗原结合片段；或者如实施例8-14中任一项所述的分离的抗体或抗原结合片段，其中所述表位是构象表位，并且其中所述构象表位另外地包含选自由seq id no:1的氨基酸33、34、76、82和104组成的组的至少一个氨基酸残基。
[0490]
实施例17.一种分离的抗npr1抗体或抗原结合片段；或者如实施例15所述的分离的抗体或抗原结合片段，其中所述构象表位另外地包含选自由seq id no:1的氨基酸33、34、76、82、104、374和375组成的组的至少一个氨基酸残基。
[0491]
实施例18.一种分离的抗npr1抗体或抗原结合片段；或者如实施例1-5或7-17中任一项所述的分离的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段至少与seq id no:1的氨基酸82、102、103、105、106、109、132和375结合。
[0492]
实施例19.一种分离的抗npr1抗体或抗原结合片段；或者如实施例1-5或7-18中任一项所述的分离的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段至少与seq id no:1的氨基酸34、82、102、103、105、106、107、109、132、133、375和378结合。
[0493]
实施例20.一种分离的抗npr1抗体或抗原结合片段；或者如实施例1-5或7-18中任一项所述的分离的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段至少与seq id no:1的氨基酸79、82、99、102、103、105、106、109、131、132和375结合。
[0494]
实施例21.一种分离的抗npr1抗体或抗原结合片段；或者如实施例1、2、4或6中任一项所述的分离的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段与seq id no:1的氨基酸188-219内的表位结合。
[0495]
实施例22.一种分离的抗npr1抗体或抗原结合片段；或者如实施例1、2、4、6或21中任一项所述的分离的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段与包含seq id no:1的氨基酸188-219内的至少2、3、4、5、6或7个氨基酸的表位结合。
[0496]
实施例23.一种分离的抗npr1抗体或抗原结合片段；或者如实施例1、2、4、6、21或22中任一项所述的分离的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段与npr1内的构象表位结合，并且其中所述构象表位包含(i)seq id no:1的氨基酸188-198、(ii)seq id no:1的氨基酸201-208、(iii)seq id no:1的氨基酸215-238、以及(iv)seq id no:1的氨基酸294-297中的每一个中的至少一个氨基酸残基。
[0497]
实施例24.一种分离的抗npr1抗体或抗原结合片段；或者如实施例1、2、4、6或21-23中任一项所述的分离的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段至少与seq id no:1的氨基酸188、192、194、197、201、208和219结合。
[0498]
实施例25.一种分离的抗npr1抗体或抗原结合片段；或者如实施例1、2、4、6或21-24中任一项所述的分离的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段至少与seq id no:1的氨基酸188、192、194、197、201、208、219和295结合。
[0499]
实施例26.一种分离的抗npr1抗体或抗原结合片段；或者如实施例1-5或7-20中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段包含三个重链互补决定区(hcdr1、hcdr2和hcdr3)和三个轻链互补决定区(lcdr1、lcdr2和lcdr3)，并且其中所述抗体或抗原结合片段包含表3或表4中所述的anp非竞争性组之一的cdr。
[0500]
实施例27.一种分离的抗npr1抗体或抗原结合片段；或者如实施例1、2、4、6或21-25中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段包含三个重链互补决定区(hcdr1、hcdr2和hcdr3)和三个轻链互补决定区(lcdr1、lcdr2和lcdr3)，并且其中所述抗体或抗原结合片段包含表3或表4中所述的anp竞争性组之一的cdr。
[0501]
实施例28.一种分离的抗npr1抗体或抗原结合片段；或者如实施例1-5、7-20或26中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段是ww01_lala、ww03_lala、xx01_lala、xx01_dapa、xx01_n30s_dapa、xx03_lala、xx04_lala、xx06_lala、xx06_dapa、xx07_lala、xx08_lala、xx08_dapa、xx08_n30s_dapa、xx08_n30q_dapa、xx09_lala、xx11_lala、xx12_lala、xx13_lala、xx14_lala、xx15_lala、xx15_dapa、xx16_lala、xx16_dapa、xx17_lala、xx17_dapa、xx18_lala、xx18_dapa、xx19_lala、xx19_dapa、xx20_lala、xx20_dapa、yy01_lala、yy03_lala、yy04_lala、zz12_lala和zz13_lala。
[0502]
实施例29.一种分离的抗npr1抗体或抗原结合片段；或者如实施例1、2、4、6、21-25或27中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段是ww05_lala、ww06_lala、yy05_lala、yy06_lala、yy07_lala、zz05_lala、zz14_lala和zz16_lala。
[0503]
实施例30.一种分离的抗npr1抗体或抗原结合片段；或者如实施例1-5、7-20、26或28中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段包含三个重链互补决定区(hcdr1、hcdr2和hcdr3)和三个轻链互补决定区(lcdr1、lcdr2和lcdr3)，并且其中：
[0504]
(a)(i)hcdr1包含如seq id no:28所示氨基酸序列或由其组成；hcdr2包含如x1ix2sx3gx4yx5x6yadsvkg(seq id no:429)所示氨基酸序列或由其组成，其中x1是a或v，x2是s或e，x3是d或k，x4是s或n，x5是i或t，并且x6是y或f；hcdr3包含如seq id no:30所示氨基酸序列或由其组成；lcdr1包含如seq id no:41所示氨基酸序列或由其组成；lcdr2包含如seq id no:42所示氨基酸序列或由其组成；并且lcdr3包含如y1qy2y3y4y5prt(seq id no:430)所示氨基酸序列或由其组成；其中y1是m或q，y2是s、e、t或i，y3是y或w，y4是e、v、r、a、t或m，并且y5是k、v、r或a；
[0505]
(ii)hcdr1包含如seq id no:31所示氨基酸序列或由其组成；hcdr2包含如x1ix2sx3gx4yx5x6yadsvkg(seq id no:429)所示氨基酸序列或由其组成，其中x1是a或v，x2是s或e，x3是d或k，x4是s或n，x5是i或t，并且x6是y或f；hcdr3包含如seq id no:30所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:41所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:42所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如y1qy2y3y4y5prt(seq id no:430)所示氨基酸序列或由其组成；其中y1是m或q，y2是s、e、t或i，y3是y或w，y4是e、v、r、a、t或m，并且y5是k、v、r或a；
[0506]
(iii)hcdr1包含如seq id no:32所示氨基酸序列或由其组成，hcdr2包含如
x1sx2gx3y(seq id no:431)所示氨基酸序列或由其组成，其中x1是s或e，x2是d或k，或者x3是s或n，hcdr3包含如seq id no:30所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:44所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:45所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如y1y2y3y4pr(seq id no:432)所示氨基酸序列或由其组成；其中y1是s、e、t或i，y2是y或w，y3是e、v、r、a、t或m，并且y4是k、v、r或a；或
[0507]
(iv)hcdr1包含如seq id no:34所示氨基酸序列或由其组成，hcdr2包含如ix1sx2gx3yx4(seq id no:433)所示氨基酸序列或由其组成，其中x1是s或e，x2是d或k，x3是s或n，并且x4是i或t，hcdr3包含如seq id no:36所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:47所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:45所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如y1qy2y3y4y5prt(seq id no:430)所示氨基酸序列或由其组成；其中y1是m或q，y2是s、e、t或i，y3是y或w，y4是e、v、r、a、t或m，并且y5是k、v、r或a；
[0508]
(b)(i)hcdr1包含如seq id no:28所示氨基酸序列或由其组成；hcdr2包含如x1ix2sx3gx4yx5x6yadsvkg(seq id no:429)所示氨基酸序列或由其组成，其中x1是a或v，x2是s或e，x3是d或k，x4是s或n，x5是i或t，并且x6是y或f；hcdr3包含如seq id no:30所示氨基酸序列或由其组成；lcdr1包含如seq id no:41所示氨基酸序列或由其组成；lcdr2包含如seq id no:42所示氨基酸序列或由其组成；并且lcdr3包含如qqy1wy2y3prt(seq id no:434)所示氨基酸序列或由其组成；其中y1是s、e、t或i，y2是v、r、a、t或m，并且y3是k、v、r或a；
[0509]
(ii)hcdr1包含如seq id no:31所示氨基酸序列或由其组成；hcdr2包含如x1ix2sx3gx4yx5x6yadsvkg(seq id no:429)所示氨基酸序列或由其组成，其中x1是a或v，x2是s或e，x3是d或k，x4是s或n，x5是i或t，并且x6是y或f；hcdr3包含如seq id no:30所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:41所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:42所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如qqy1wy2y3prt(seq id no:434)所示氨基酸序列或由其组成；其中y1是s、e、t或i，y2是v、r、a、t或m，并且y3是k、v、r或a；
[0510]
(iii)hcdr1包含如seq id no:32所示氨基酸序列或由其组成，hcdr2包含如x1sx2gx3y(seq id no:431)所示氨基酸序列或由其组成，其中x1是s或e，x2是d或k，或者x3是s或n，hcdr3包含如seq id no:30所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:44所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:45所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如y1wy2y3pr(seq id no:435)所示氨基酸序列或由其组成；其中y1是s、e、t或i，y2是v、r、a、t或m，并且y3是k、v、r或a；或
[0511]
(iv)hcdr1包含如seq id no:34所示氨基酸序列或由其组成，hcdr2包含如ix1sx2gx3yx4(seq id no:433)所示氨基酸序列或由其组成，其中x1是s或e，x2是d或k，x3是s或n，并且x4是i或t，hcdr3包含如seq id no:36所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:47所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:45所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如qqy1wy2y3prt(seq id no:434)所示氨基酸序列或由其组成；其中y1是s、e、t或i，y2是v、r、a、t或m，并且y3是k、v、r或a；
[0512]
(c)(i)hcdr1包含如seq id no:28所示氨基酸序列或由其组成；hcdr2包含如seq id no:119所示氨基酸序列或由其组成；hcdr3包含如seq id no:30所示氨基酸序列或由其组成；lcdr1包含如seq id no:41所示氨基酸序列或由其组成；lcdr2包含如seq id no:42所示氨基酸序列或由其组成；并且lcdr3包含如qqy1wy2y3prt(seq id no:434)所示氨基酸
序列或由其组成；其中y1是s、e、t或i，y2是v、r、a、t或m，并且y3是k、v、r或a；
[0513]
(ii)hcdr1包含如seq id no:31所示氨基酸序列或由其组成；hcdr2包含如seq id no:119所示氨基酸序列或由其组成；hcdr3包含如seq id no:30所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:41所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:42所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如qqy1wy2y3prt(seq id no:434)所示氨基酸序列或由其组成；其中y1是s、e、t或i，y2是v、r、a、t或m，并且y3是k、v、r或a；
[0514]
(iii)hcdr1包含如seq id no:32所示氨基酸序列或由其组成，hcdr2包含如seq id no:120所示氨基酸序列或由其组成，hcdr3包含如seq id no:30所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:44所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:45所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如y1wy2y3pr(seq id no:435)所示氨基酸序列或由其组成；其中y1是s、e、t或i，y2是v、r、a、t或m，并且y3是k、v、r或a；或
[0515]
(iv)hcdr1包含如seq id no:34所示氨基酸序列或由其组成，hcdr2包含如seq id no:121所示氨基酸序列或由其组成，hcdr3包含如seq id no:36所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:47所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:45所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如qqy1wy2y3prt(seq id no:434)所示氨基酸序列或由其组成；其中y1是s、e、t或i，y2是v、r、a、t或m，并且y3是k、v、r或a；
[0516]
(d)(i)hcdr1包含如gftfx1thyih(seq id no:436)所示氨基酸序列或由其组成，其中x1是n、s或q，hcdr2包含如siy1y2y3gy4y5ty6yadsvkg(seq id no:437)所示氨基酸序列或由其组成，其中y1是s或g，y2是s或g，y3是s或q，y4是s、q或g，y5是s、n或m，并且y6是y或l，hcdr3包含如seq id no:6所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:17所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:18所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如seq id no:19所示氨基酸序列或由其组成；
[0517]
(ii)hcdr1包含如seq id no:7所示氨基酸序列或由其组成，hcdr2包含如siy1y2y3gy4y5ty6yadsvkg(seq id no:437)所示氨基酸序列或由其组成，其中y1是s或g，y2是s或g，y3是s或q，y4是s、q或g，y5是s、n或m，并且y6是y或l，hcdr3包含如seq id no:6所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:17所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:18所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如seq id no:19所示氨基酸序列或由其组成；
[0518]
(iii)hcdr1包含如gftfx1th(seq id no:438)所示氨基酸序列或由其组成，其中x1是n、s或q，hcdr2包含如y1y2y3gy4y5(seq id no:439)所示氨基酸序列或由其组成，其中y1是s或g，y2是s或g，y3是s或q，y4是s、q或g，并且y5是s、n或m，hcdr3包含如seq id no:6所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:20所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:21所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如seq id no:22所示氨基酸序列或由其组成；或
[0519]
(iv)hcdr1包含如gftfx1thy(seq id no:440)所示氨基酸序列或由其组成，其中x1是n、s或q，hcdr2包含如iy1y2y3gy4y5t(seq id no:441)所示氨基酸序列或由其组成，其中y1是s或g，y2是s或g，y3是s或q，y4是s、q或g，并且y5是s、n或m，hcdr3包含如seq id no:12所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:23所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:21所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如seq id no:19所示氨基
酸序列或由其组成；
[0520]
(e)(i)hcdr1包含如gftfx1thyih(seq id no:436)所示氨基酸序列或由其组成，其中x1是n、s或q，hcdr2包含如sisy1sgy2y3tyyadsvkg(seq id no:442)所示氨基酸序列或由其组成，其中y1是s或g，y2是s或q，并且y3是s或n，hcdr3包含如seq id no:6所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:17所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:18所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如seq id no:19所示氨基酸序列或由其组成；
[0521]
(ii)hcdr1包含如seq id no:7所示氨基酸序列或由其组成，hcdr2包含如sisy1sgy2y3tyyadsvkg(seq id no:442)所示氨基酸序列或由其组成，其中y1是s或g，y2是s或q，并且y3是s或n，hcdr3包含如seq id no:6所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:17所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:18所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如seq id no:19所示氨基酸序列或由其组成；
[0522]
(iii)hcdr1包含如gftfx1th(seq id no:438)所示氨基酸序列或由其组成，其中x1是n、s或q，hcdr2包含如sy1sgy2y3(seq id no:443)所示氨基酸序列或由其组成，其中y1是s或g，y2是s或q，并且y3是s或n，hcdr3包含如seq id no:6所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:20所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:21所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如seq id no:22所示氨基酸序列或由其组成；或
[0523]
(iv)hcdr1包含如gftfx1thy(seq id no:440)所示氨基酸序列或由其组成，其中x1是n、s或q，hcdr2包含如isy1sgy2y3t(seq id no:444)所示氨基酸序列或由其组成，其中y1是s或g，y2是s或q，并且y3是s或n，hcdr3包含如seq id no:12所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:23所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:21所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如seq id no:19所示氨基酸序列或由其组成；
[0524]
(f)(i)hcdr1包含如gfx1fsx2yx3x4x5(seq id no:445)所示氨基酸序列或由其组成，其中x1是s或t，x2是s、k或r，x3是w或y，x4是i或l，并且x5是s或n，hcdr2包含如y1iy2qy3y4y5ey6y7yvesvkg(seq id no:446)所示氨基酸序列或由其组成，其中y1是s或n，y2是k或h，y3是s、q或h，y4是g或a，y5是s、h或l，y6是t或k，并且y7是y、k或r，hcdr3包含如seq id no:228所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:237所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:238所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如seq id no:239所示氨基酸序列或由其组成；
[0525]
(ii)hcdr1包含如x1yx2x3x4(seq id no:447)所示氨基酸序列或由其组成，其中x1是s、k或r，x2是w或y，x3是i或l，并且x4是s或n，hcdr2包含如y1iy2qy3y4y5ey6y7yvesvkg(seq id no:446)所示氨基酸序列或由其组成，其中y1是s或n，y2是k或h，y3是s、q或h，y4是g或a，y5是s、h或l，y6是t或k，并且y7是y、k或r，hcdr3包含如seq id no:228所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:237所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:238所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如seq id no:239所示氨基酸序列或由其组成；
[0526]
(iii)hcdr1包含如gfx1fsx2y(seq id no:448)所示氨基酸序列或由其组成，其中x1是s或t，并且x2是s、k或r，hcdr2包含如y1qy2y3y4e(seq id no:449)所示氨基酸序列或由其组成，其中y1是k或h，y2是s、q或h，y3是g或a，并且y4是s、h或l，hcdr3包含如seq id no:
228所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:240所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:241所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如seq id no:242所示氨基酸序列或由其组成；或
[0527]
(iv)hcdr1包含如gfx1fsx2yx3(seq id no:450)所示氨基酸序列或由其组成，其中x1是s或t，x2是s、k或r，并且x3是w或y，hcdr2包含如iy1qy2y3y4ey5(seq id no:451)所示氨基酸序列或由其组成，其中y1是k或h，y2是s、q或h，y3是g或a，y4是s、h或l，并且y5是t或k，hcdr3包含如seq id no:232所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:243所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:241所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如seq id no:239所示氨基酸序列或由其组成；
[0528]
(g)(i)hcdr1包含如gfx1fsx2yx3x4x5(seq id no:445)所示氨基酸序列或由其组成，其中x1是s或t，x2是s、k或r，x3是w或y，x4是i或l，并且x5是s或n，hcdr2包含如sihqy1y2y3ey4y5yvesvkg(seq id no:453)所示氨基酸序列或由其组成，其中y1是q或h，y2是g或a，y3是h或l，y4是t或k，并且y5是k或r，hcdr3包含如seq id no:228所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:237所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:238所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如seq id no:239所示氨基酸序列或由其组成；
[0529]
(ii)hcdr1包含如x1yx2x3x4(seq id no:447)所示氨基酸序列或由其组成，其中x1是s、k或r，x2是w或y，x3是i或l，并且x4是s或n，hcdr2包含如sihqy1y2y3ey4y5yvesvkg(seq id no:453)所示氨基酸序列或由其组成，其中y1是q或h，y2是g或a，y3是h或l，y4是t或k，并且y5是k或r，hcdr3包含如seq id no:228所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:237所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:238所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如seq id no:239所示氨基酸序列或由其组成；
[0530]
(iii)hcdr1包含如gfx1fsx2y(seq id no:448)所示氨基酸序列或由其组成，其中x1是s或t，并且x2是s、k或r，hcdr2包含如hqy1y2y3e(seq id no:456)所示氨基酸序列或由其组成，其中y1是q或h，y2是g或a，并且y3是h或l，hcdr3包含如seq id no:228所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:240所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:241所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如seq id no:242所示氨基酸序列或由其组成；或
[0531]
(iv)hcdr1包含如gfx1fsx2yx3(seq id no:450)所示氨基酸序列或由其组成，其中x1是s或t，x2是s、k或r，并且x3是w或y，hcdr2包含如ihqy1y2y3ey4(seq id no:458)所示氨基酸序列或由其组成，其中y1是q或h，y2是g或a，y3是h或l，并且y4是t或k，hcdr3包含如seq id no:232所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:243所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:241所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如seq id no:239所示氨基酸序列或由其组成；
[0532]
(h)(i)hcdr1包含如gftfsx1yx2ix3(seq id no:452)所示氨基酸序列或由其组成，其中x1是s或r，x2是w或y，并且x3是s或n，hcdr2包含如y1iy2qy3y4y5ey6y7yvesvkg(seq id no:446)所示氨基酸序列或由其组成，其中y1是s或n，y2是k或h，y3是s、q或h，y4是g或a，y5是s、h或l，y6是t或k，并且y7是y、k或r，hcdr3包含如seq id no:228所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:237所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:238
所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如seq id no:239所示氨基酸序列或由其组成；
[0533]
(ii)hcdr1包含如x1yx2ix3(seq id no:454)所示氨基酸序列或由其组成，其中x1是s或r，x2是w或y，并且x3是s或n，hcdr2包含如y1iy2qy3y4y5ey6y7yvesvkg(seq id no:446)所示氨基酸序列或由其组成，其中y1是s或n，y2是k或h，y3是s、q或h，y4是g或a，y5是s、h或l，y6是t或k，并且y7是y、k或r，hcdr3包含如seq id no:228所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:237所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:238所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如seq id no:239所示氨基酸序列或由其组成；
[0534]
(iii)hcdr1包含如gftfsx1y(seq id no:455)所示氨基酸序列或由其组成，其中x1是s或r，hcdr2包含如y1qy2y3y4e(seq id no:449)所示氨基酸序列或由其组成，其中y1是k或h，y2是s、q或h，y3是g或a，并且y4是s、h或l，hcdr3包含如seq id no:228所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:240所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:241所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如seq id no:242所示氨基酸序列或由其组成；或
[0535]
(iv)hcdr1包含如gftfsx1yx2(seq id no:457)所示氨基酸序列或由其组成，其中x1是s或r，并且x2是w或y，hcdr2包含如iy1qy2y3y4ey5(seq id no:451)所示氨基酸序列或由其组成，其中y1是k或h，y2是s、q或h，y3是g或a，y4是s、h或l，并且y5是t或k，hcdr3包含如seq id no:232所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:243所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:241所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如seq id no:239所示氨基酸序列或由其组成；或
[0536]
(i)(i)hcdr1包含如gftfsx1yx2ix3(seq id no:452)所示氨基酸序列或由其组成，其中x1是s或r，x2是w或y，并且x3是s或n，hcdr2包含如sihqy1y2y3ey4y5yvesvkg(seq id no:453)所示氨基酸序列或由其组成，其中y1是q或h，y2是g或a，y3是h或l，y4是t或k，并且y5是k或r，hcdr3包含如seq id no:228所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:237所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:238所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如seq id no:239所示氨基酸序列或由其组成；
[0537]
(ii)hcdr1包含如x1yx2ix3(seq id no:454)所示氨基酸序列或由其组成，其中x1是s或r，x2是w或y，并且x3是s或n，hcdr2包含如sihqy1y2y3ey4y5yvesvkg(seq id no:453)所示氨基酸序列或由其组成，其中y1是q或h，y2是g或a，y3是h或l，y4是t或k，并且y5是k或r，hcdr3包含如seq id no:228所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:237所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:238所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如seq id no:239所示氨基酸序列或由其组成；
[0538]
(iii)hcdr1包含如gftfsx1y(seq id no:455)所示氨基酸序列或由其组成，其中x1是s或r，hcdr2包含如hqy1y2y3e(seq id no:456)所示氨基酸序列或由其组成，其中y1是q或h，y2是g或a，并且y3是h或l，hcdr3包含如seq id no:228所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:240所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:241所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如seq id no:242所示氨基酸序列或由其组成；或
[0539]
(iv)hcdr1包含如gftfsx1yx2(seq id no:457)所示氨基酸序列或由其组成，其中x1是s或r，并且x2是w或y，hcdr2包含如ihqy1y2y3ey4(seq id no:458)所示氨基酸序列或由
是a、s或g，y3是s或h，y4是g或y，y5是s或y，y6是t或a，y7是y、r或n，并且y8是e或g，hcdr3包含如seq id no:331所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:337所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:338所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如seq id no:339所示氨基酸序列或由其组成；
[0546]
(ii)hcdr1包含如x1yax2x3(seq id no:466)所示氨基酸序列或由其组成，其中x1是s或t，x2是i或m，并且x3是s或t，hcdr2包含如y1isy2y3gy4y5y6y7yay8svkg(seq id no:465)所示氨基酸序列或由其组成，其中y1是a或s，y2是a、s或g，y3是s或h，y4是g或y，y5是s或y，y6是t或a，y7是y、r或n，并且y8是e或g，hcdr3包含如seq id no:331所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:337所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:338所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如seq id no:339所示氨基酸序列或由其组成；
[0547]
(iii)hcdr1包含如gftfx1x2y(seq id no:467)所示氨基酸序列或由其组成，其中x1是s或g，并且x2是s或t，hcdr2包含如sy1y2gy3y4(seq id no:468)所示氨基酸序列或由其组成，其中y1是a、s或g，y2是s或h，y3是g或y，并且y4是s或y，hcdr3包含如seq id no:331所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:340所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:341所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如seq id no:342所示氨基酸序列或由其组成；或
[0548]
(iv)hcdr1包含如gftfx1x2ya(seq id no:469)所示氨基酸序列或由其组成，其中x1是s或g，并且x2是s或t，hcdr2包含如isy1y2gy3y4t(seq id no:470)所示氨基酸序列或由其组成，其中y1是s或g，y2是s或h，y3是g或y，并且y4是s或y，hcdr3包含如seq id no:332所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:343所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:341所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如seq id no:339所示氨基酸序列或由其组成；或
[0549]
(c)(i)hcdr1包含如gftfx1x2yax3x4(seq id no:464)所示氨基酸序列或由其组成，其中x1是s或g，x2是s或t，x3是i或m，并且x4是s或t，hcdr2包含如sisy1y2gyyy3y4yay5svkg(seq id no:471)所示氨基酸序列或由其组成，其中y1是a或s，y2是s或h，y3是t或a，y4是r或n，并且y5是e或g，hcdr3包含如seq id no:331所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:337所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:338所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如seq id no:339所示氨基酸序列或由其组成；
[0550]
(ii)hcdr1包含如x1yax2x3(seq id no:466)所示氨基酸序列或由其组成，其中x1是s或t，x2是i或m，并且x3是s或t，hcdr2包含如sisy1y2gyyy3y4yay5svkg(seq id no:471)所示氨基酸序列或由其组成，其中y1是a或s，y2是s或h，y3是t或a，y4是r或n，并且y5是e或g，hcdr3包含如seq id no:331所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:337所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:338所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如seq id no:339所示氨基酸序列或由其组成；
[0551]
(iii)hcdr1包含如gftfx1x2y(seq id no:467)所示氨基酸序列或由其组成，其中x1是s或g，并且x2是s或t，hcdr2包含如sy1y2gyy(seq id no:472)所示氨基酸序列或由其组成，其中y1是a或s，并且y2是s或h，hcdr3包含如seq id no:331所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:340所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:341所示
氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如seq id no:342所示氨基酸序列或由其组成；或
[0552]
(iv)hcdr1包含如gftfx1x2ya(seq id no:469)所示氨基酸序列或由其组成，其中x1是s或g，并且x2是s或t，hcdr2包含如isy1y2g(seq id no:473)所示氨基酸序列或由其组成，其中y1是a、s或g，并且y2是s或h，hcdr3包含如seq id no:332所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:343所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:341所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如seq id no:339所示氨基酸序列或由其组成。
[0553]
实施例32.一种分离的抗npr1抗体或抗原结合片段；或者如实施例1-5、7-20、26、28或30中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段包含三个重链互补决定区(hcdr1、hcdr2和hcdr3)和三个轻链互补决定区(lcdr1、lcdr2和lcdr3)，并且其中：
[0554]
(a)(i)hcdr1包含如seq id no:28所示氨基酸序列或由其组成，hcdr2包含如seq id no:29、119和190中任一项所示氨基酸序列或由其组成，hcdr3包含如seq id no:30所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:41所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:42所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如seq id no:43、126、134、145、172、178和184中任一项所示氨基酸序列或由其组成；(ii)hcdr1包含如seq id no:31所示氨基酸序列或由其组成，hcdr2包含如seq id no:29、119和190中任一项所示氨基酸序列或由其组成，hcdr3包含如seq id no:30所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:41所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:42所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如seq id no:43、126、134、145、172、178和184中任一项所示氨基酸序列或由其组成；(iii)hcdr1包含如seq id no:32所示氨基酸序列或由其组成，hcdr2包含如seq id no:33、120和191中任一项所示氨基酸序列或由其组成，hcdr3包含如seq id no:30所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:44所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:45所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如seq id no:46、127、135、146、173、179和185中任一项所示氨基酸序列或由其组成；或(iv)hcdr1包含如seq id no:34所示氨基酸序列或由其组成，hcdr2包含如seq id no:35、121和192中任一项所示氨基酸序列或由其组成，hcdr3包含如seq id no:36所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:47所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:45所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如seq id no:43、126、134、145、172、178和184中任一项所示氨基酸序列或由其组成；
[0555]
(b)(i)hcdr1包含如seq id no:4、112和165中任一项所示氨基酸序列或由其组成，hcdr2包含如seq id no:5、100和151中任一项所示氨基酸序列或由其组成，hcdr3包含如seq id no:6所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:17所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:18所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如seq id no:19所示氨基酸序列或由其组成；(ii)hcdr1包含如seq id no:7所示氨基酸序列或由其组成，hcdr2包含如seq id no:5、100和151中任一项所示氨基酸序列或由其组成，hcdr3包含如seq id no:6所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:17所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:18所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如seq id no:19所示氨基酸序列或由其组成；(iii)hcdr1包含如seq id no:8、113和166中任
一项所示氨基酸序列或由其组成，hcdr2包含如seq id no:9、101和152中任一项所示氨基酸序列或由其组成，hcdr3包含如seq id no:6所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:20所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:21所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如seq id no:22所示氨基酸序列或由其组成；或(iv)hcdr1包含如seq id no:10、114和167中任一项所示氨基酸序列或由其组成，hcdr2包含如seq id no:11、102和153中任一项所示氨基酸序列或由其组成，hcdr3包含如seq id no:12所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:23所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:21所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如seq id no:19所示氨基酸序列或由其组成；或
[0556]
(c)(i)hcdr1包含如seq id no:226、367和378中任一项所示氨基酸序列或由其组成，hcdr2包含如seq id no:227、368和379中任一项所示氨基酸序列或由其组成，hcdr3包含如seq id no:228所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:237所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:238所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如seq id no:239所示氨基酸序列或由其组成；(ii)hcdr1包含如seq id no:229、369和380中任一项所示氨基酸序列或由其组成，hcdr2包含如seq id no:227、368和379中任一项所示氨基酸序列或由其组成，hcdr3包含如seq id no:228所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:237所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:238所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如seq id no:239所示氨基酸序列或由其组成；(iii)hcdr1包含如seq id no:32、370和381中任一项所示氨基酸序列或由其组成，hcdr2包含如seq id no:230、371和382中任一项所示氨基酸序列或由其组成，hcdr3包含如seq id no:228所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:240所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:241所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如seq id no:242所示氨基酸序列或由其组成；或(iv)hcdr1包含如seq id no:34、372和383中任一项所示氨基酸序列或由其组成，hcdr2包含如seq id no:231、373和384中任一项所示氨基酸序列或由其组成，hcdr3包含如seq id no:232所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:243所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:241所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如seq id no:239所示氨基酸序列或由其组成。
[0557]
实施例33.一种分离的抗npr1抗体或抗原结合片段；或者如实施例1、2、4、6、21-25、27、29或31中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段包含三个重链互补决定区(hcdr1、hcdr2和hcdr3)和三个轻链互补决定区(lcdr1、lcdr2和lcdr3)，并且其中：
[0558]
(a)(i)hcdr1包含如seq id no:310所示氨基酸序列或由其组成，hcdr2包含如seq id no:311所示氨基酸序列或由其组成，hcdr3包含如seq id no:312和348中任一项所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:320所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:321和354中任一项所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如seq id no:322、355和361中任一项所示氨基酸序列或由其组成；(ii)hcdr1包含如seq id no:229所示氨基酸序列或由其组成，hcdr2包含如seq id no:311所示氨基酸序列或由其组成，hcdr3包含如seq id no:312和348中任一项所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:320所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:321和354中任一项所示氨
基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如seq id no:322、355和361中任一项所示氨基酸序列或由其组成；(iii)hcdr1包含如seq id no:80所示氨基酸序列或由其组成，hcdr2包含如seq id no:313所示氨基酸序列或由其组成，hcdr3包含如seq id no:312和348中任一项所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:323所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:324所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如seq id no:325、356和362中任一项所示氨基酸序列或由其组成；或(iv)hcdr1包含如seq id no:82所示氨基酸序列或由其组成，hcdr2包含如seq id no:314所示氨基酸序列或由其组成，hcdr3包含如seq id no:315和349中任一项所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:326所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:324所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如seq id no:322、355和361中任一项所示氨基酸序列或由其组成；或
[0559]
(b)(i)hcdr1包含如seq id no:270和407中任一项所示氨基酸序列或由其组成，hcdr2包含如seq id no:271、389和408中任一项所示氨基酸序列或由其组成，hcdr3包含如seq id no:331所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:337所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:338所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如seq id no:339所示氨基酸序列或由其组成；(ii)hcdr1包含如seq id no:273和409中任一项所示氨基酸序列或由其组成，hcdr2包含如seq id no:271、389和408中任一项所示氨基酸序列或由其组成，hcdr3包含如seq id no:331所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:337所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:338所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如seq id no:339所示氨基酸序列或由其组成；(iii)hcdr1包含如seq id no:32和410中任一项所示氨基酸序列或由其组成，hcdr2包含如seq id no:274、390和411中任一项所示氨基酸序列或由其组成，hcdr3包含如seq id no:331所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:340所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:341所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如seq id no:342所示氨基酸序列或由其组成；或(iv)hcdr1包含如seq id no:275和412中任一项所示氨基酸序列或由其组成，hcdr2包含如seq id no:276、391和413中任一项所示氨基酸序列或由其组成，hcdr3包含如seq id no:332所示氨基酸序列或由其组成，lcdr1包含如seq id no:343所示氨基酸序列或由其组成，lcdr2包含如seq id no:341所示氨基酸序列或由其组成，并且lcdr3包含如seq id no:339所示氨基酸序列或由其组成。
[0560]
实施例34.一种分离的抗npr1抗体或抗原结合片段；或者如实施例1-5、7-20、26、28、30或32中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段包含选自如下的三个重链互补决定区(hcdr1、hcdr2和hcdr3)和三个轻链互补决定区(lcdr1、lcdr2和lcdr3)：
[0561]
(a)(i)seq id no:28(hcdr1)、seq id no:119(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)和seq id no:134(lcdr3)；(ii)seq id no:31(hcdr1)、seq id no:119(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)和seq id no:134(lcdr3)；(iii)seq id no:32(hcdr1)、seq id no:120(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:44(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)和seq id no:135(lcdr3)；或(iv)seq id no:34(hcdr1)、seq id no:121(hcdr2)、seq id no:36(hcdr3)、seq id no:47(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)和seq id no:134(lcdr3)；
[0562]
(b)(i)seq id no:28(hcdr1)、seq id no:119(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)和seq id no:126(lcdr3)；(ii)seq id no:31(hcdr1)、seq id no:119(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)和seq id no:126(lcdr3)；(iii)seq id no:32(hcdr1)、seq id no:120(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:44(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)和seq id no:127(lcdr3)；或(iv)seq id no:34(hcdr1)、seq id no:121(hcdr2)、seq id no:36(hcdr3)、seq id no:47(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)和seq id no:126(lcdr3)；
[0563]
(c)(i)seq id no:28(hcdr1)、seq id no:119(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)和seq id no:145(lcdr3)；(ii)seq id no:31(hcdr1)、seq id no:119(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)和seq id no:145(lcdr3)；(iii)seq id no:32(hcdr1)、seq id no:120(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:44(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)和seq id no:146(lcdr3)；或(iv)seq id no:34(hcdr1)、seq id no:121(hcdr2)、seq id no:36(hcdr3)、seq id no:47(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)和seq id no:145(lcdr3)；
[0564]
(d)(i)seq id no:28(hcdr1)、seq id no:119(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)和seq id no:172(lcdr3)；(ii)seq id no:31(hcdr1)、seq id no:119(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)和seq id no:172(lcdr3)；(iii)seq id no:32(hcdr1)、seq id no:120(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:44(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)和seq id no:173(lcdr3)；或(iv)seq id no:34(hcdr1)、seq id no:121(hcdr2)、seq id no:36(hcdr3)、seq id no:47(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)和seq id no:172(lcdr3)；
[0565]
(e)(i)seq id no:28(hcdr1)、seq id no:119(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)和seq id no:178(lcdr3)；(ii)seq id no:31(hcdr1)、seq id no:119(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)和seq id no:178(lcdr3)；(iii)seq id no:32(hcdr1)、seq id no:120(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:44(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)和seq id no:179(lcdr3)；或(iv)seq id no:34(hcdr1)、seq id no:121(hcdr2)、seq id no:36(hcdr3)、seq id no:47(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)和seq id no:178(lcdr3)；
[0566]
(f)(i)seq id no:28(hcdr1)、seq id no:119(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)和seq id no:184(lcdr3)；(ii)seq id no:31(hcdr1)、seq id no:119(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)和seq id no:184(lcdr3)；(iii)seq id no:32(hcdr1)、seq id no:120(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:44(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)和seq id no:185(lcdr3)；或(iv)seq id no:34(hcdr1)、seq id no:121(hcdr2)、seq id no:36(hcdr3)、seq id no:47(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)和seq id no:184(lcdr3)；
[0567]
(g)(i)seq id no:4(hcdr1)、seq id no:100(hcdr2)、seq id no:6(hcdr3)、seq id no:17(lcdr1)、seq id no:18(lcdr2)和seq id no:19(lcdr3)；(ii)seq id no:7(hcdr1)、seq id no:100(hcdr2)、seq id no:6(hcdr3)、seq id no:17(lcdr1)、seq id no:18(lcdr2)和seq id no:19(lcdr3)；(iii)seq id no:8(hcdr1)、seq id no:101
no:185(lcdr3)；或(iv)seq id no:34(hcdr1)、seq id no:35(hcdr2)、seq id no:36(hcdr3)、seq id no:47(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)和seq id no:184(lcdr3)；
[0579]
(s)(i)seq id no:28(hcdr1)、seq id no:190(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)和seq id no:134(lcdr3)；(ii)seq id no:31(hcdr1)、seq id no:190(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)和seq id no:134(lcdr3)；(iii)seq id no:32(hcdr1)、seq id no:191(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:44(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)和seq id no:135(lcdr3)；或(iv)seq id no:34(hcdr1)、seq id no:192(hcdr2)、seq id no:36(hcdr3)、seq id no:47(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)和seq id no:134(lcdr3)；
[0580]
(t)(i)seq id no:28(hcdr1)、seq id no:190(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)和seq id no:172(lcdr3)；(ii)seq id no:31(hcdr1)、seq id no:190(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)和seq id no:172(lcdr3)；(iii)seq id no:32(hcdr1)、seq id no:191(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:44(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)和seq id no:173(lcdr3)；或(iv)seq id no:34(hcdr1)、seq id no:192(hcdr2)、seq id no:36(hcdr3)、seq id no:47(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)和seq id no:172(lcdr3)；
[0581]
(u)(i)seq id no:4(hcdr1)、seq id no:5(hcdr2)、seq id no:6(hcdr3)、seq id no:17(lcdr1)、seq id no:18(lcdr2)和seq id no:19(lcdr3)；(ii)seq id no:7(hcdr1)、seq id no:5(hcdr2)、seq id no:6(hcdr3)、seq id no:17(lcdr1)、seq id no:18(lcdr2)和seq id no:19(lcdr3)；(iii)seq id no:8(hcdr1)、seq id no:9(hcdr2)、seq id no:6(hcdr3)、seq id no:20(lcdr1)、seq id no:21(lcdr2)和seq id no:22(lcdr3)；或(iv)seq id no:10(hcdr1)、seq id no:11(hcdr2)、seq id no:12(hcdr3)、seq id no:23(lcdr1)、seq id no:21(lcdr2)和seq id no:19(lcdr3)；
[0582]
(v)(i)seq id no:28(hcdr1)、seq id no:29(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)和seq id no:43(lcdr3)；(ii)seq id no:31(hcdr1)、seq id no:29(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:41(lcdr1)、seq id no:42(lcdr2)和seq id no:43(lcdr3)；(iii)seq id no:32(hcdr1)、seq id no:33(hcdr2)、seq id no:30(hcdr3)、seq id no:44(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)和seq id no:46(lcdr3)；或(iv)seq id no:34(hcdr1)、seq id no:35(hcdr2)、seq id no:36(hcdr3)、seq id no:47(lcdr1)、seq id no:45(lcdr2)和seq id no:43(lcdr3)；
[0583]
(w)(i)seq id no:367(hcdr1)、seq id no:368(hcdr2)、seq id no:228(hcdr3)、seq id no:237(lcdr1)、seq id no:238(lcdr2)和seq id no:239(lcdr3)；(ii)seq id no:369(hcdr1)、seq id no:368(hcdr2)、seq id no:228(hcdr3)、seq id no:237(lcdr1)、seq id no:238(lcdr2)和seq id no:239(lcdr3)；(iii)seq id no:370(hcdr1)、seq id no:371(hcdr2)、seq id no:228(hcdr3)、seq id no:240(lcdr1)、seq id no:241(lcdr2)和seq id no:242(lcdr3)；或(iv)seq id no:372(hcdr1)、seq id no:373(hcdr2)、seq id no:232(hcdr3)、seq id no:243(lcdr1)、seq id no:241(lcdr2)和seq id no:239(lcdr3)；
[0584]
(x)(i)seq id no:378(hcdr1)、seq id no:379(hcdr2)、seq id no:228(hcdr3)、
seq id no:237(lcdr1)、seq id no:238(lcdr2)和seq id no:239(lcdr3)；(ii)seq id no:380(hcdr1)、seq id no:379(hcdr2)、seq id no:228(hcdr3)、seq id no:237(lcdr1)、seq id no:238(lcdr2)和seq id no:239(lcdr3)；(iii)seq id no:381(hcdr1)、seq id no:382(hcdr2)、seq id no:228(hcdr3)、seq id no:240(lcdr1)、seq id no:241(lcdr2)和seq id no:242(lcdr3)；或(iv)seq id no:383(hcdr1)、seq id no:384(hcdr2)、seq id no:232(hcdr3)、seq id no:243(lcdr1)、seq id no:241(lcdr2)和seq id no:239(lcdr3)；
[0585]
(y)(i)seq id no:226(hcdr1)、seq id no:227(hcdr2)、seq id no:228(hcdr3)、seq id no:237(lcdr1)、seq id no:238(lcdr2)和seq id no:239(lcdr3)；(ii)seq id no:229(hcdr1)、seq id no:227(hcdr2)、seq id no:228(hcdr3)、seq id no:237(lcdr1)、seq id no:238(lcdr2)和seq id no:239(lcdr3)；(iii)seq id no:32(hcdr1)、seq id no:230(hcdr2)、seq id no:228(hcdr3)、seq id no:240(lcdr1)、seq id no:241(lcdr2)和seq id no:242(lcdr3)；或(iv)seq id no:34(hcdr1)、seq id no:231(hcdr2)、seq id no:232(hcdr3)、seq id no:243(lcdr1)、seq id no:241(lcdr2)和seq id no:239(lcdr3)；
[0586]
(z)(i)seq id no:270(hcdr1)、seq id no:271(hcdr2)、seq id no:272(hcdr3)、seq id no:282(lcdr1)、seq id no:261(lcdr2)和seq id no:283(lcdr3)；(ii)seq id no:273(hcdr1)、seq id no:271(hcdr2)、seq id no:272(hcdr3)、seq id no:282(lcdr1)、seq id no:261(lcdr2)和seq id no:283(lcdr3)；(iii)seq id no:32(hcdr1)、seq id no:274(hcdr2)、seq id no:272(hcdr3)、seq id no:284(lcdr1)、seq id no:241(lcdr2)和seq id no:285(lcdr3)；或(iv)seq id no:275(hcdr1)、seq id no:276(hcdr2)、seq id no:277(hcdr3)、seq id no:286(lcdr1)、seq id no:241(lcdr2)和seq id no:283(lcdr3)；或
[0587]
(aa)(i)seq id no:291(hcdr1)、seq id no:292(hcdr2)、seq id no:293(hcdr3)、seq id no:237(lcdr1)、seq id no:238(lcdr2)和seq id no:304(lcdr3)；(ii)seq id no:294(hcdr1)、seq id no:292(hcdr2)、seq id no:293(hcdr3)、seq id no:237(lcdr1)、seq id no:238(lcdr2)和seq id no:304(lcdr3)；(iii)seq id no:295(hcdr1)、seq id no:296(hcdr2)、seq id no:293(hcdr3)、seq id no:240(lcdr1)、seq id no:241(lcdr2)和seq id no:305(lcdr3)；或(iv)seq id no:297(hcdr1)、seq id no:298(hcdr2)、seq id no:299(hcdr3)、seq id no:243(lcdr1)、seq id no:241(lcdr2)和seq id no:304(lcdr3)。
[0588]
实施例35.一种分离的抗npr1抗体或抗原结合片段；或者如实施例1、2、4、6、21-25、27、29、31或33中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段包含选自如下的三个重链互补决定区(hcdr1、hcdr2和hcdr3)和三个轻链互补决定区(lcdr1、lcdr2和lcdr3)：
[0589]
(a)(i)seq id no:52(hcdr1)、seq id no:53(hcdr2)、seq id no:54(hcdr3)、seq id no:65(lcdr1)、seq id no:66(lcdr2)和seq id no:67(lcdr3)；(ii)seq id no:55(hcdr1)、seq id no:53(hcdr2)、seq id no:54(hcdr3)、seq id no:65(lcdr1)、seq id no:66(lcdr2)和seq id no:67(lcdr3)；(iii)seq id no:56(hcdr1)、seq id no:57
(hcdr2)、seq id no:54(hcdr3)、seq id no:68(lcdr1)、seq id no:69(lcdr2)和seq id no:70(lcdr3)；或(iv)seq id no:58(hcdr1)、seq id no:59(hcdr2)、seq id no:60(hcdr3)、seq id no:71(lcdr1)、seq id no:69(lcdr2)和seq id no:67(lcdr3)；
[0590]
(b)(i)seq id no:76(hcdr1)、seq id no:77(hcdr2)、seq id no:78(hcdr3)、seq id no:89(lcdr1)、seq id no:90(lcdr2)和seq id no:91(lcdr3)；(ii)seq id no:79(hcdr1)、seq id no:77(hcdr2)、seq id no:78(hcdr3)、seq id no:89(lcdr1)、seq id no:90(lcdr2)和seq id no:91(lcdr3)；(iii)seq id no:80(hcdr1)、seq id no:81(hcdr2)、seq id no:78(hcdr3)、seq id no:92(lcdr1)、seq id no:93(lcdr2)和seq id no:94(lcdr3)；或(iv)seq id no:82(hcdr1)、seq id no:83(hcdr2)、seq id no:84(hcdr3)、seq id no:95(lcdr1)、seq id no:93(lcdr2)和seq id no:91(lcdr3)；
[0591]
(c)(i)seq id no:310(hcdr1)、seq id no:311(hcdr2)、seq id no:348(hcdr3)、seq id no:320(lcdr1)、seq id no:354(lcdr2)和seq id no:361(lcdr3)；(ii)seq id no:229(hcdr1)、seq id no:311(hcdr2)、seq id no:348(hcdr3)、seq id no:320(lcdr1)、seq id no:354(lcdr2)和seq id no:361(lcdr3)；(iii)seq id no:80(hcdr1)、seq id no:313(hcdr2)、seq id no:348(hcdr3)、seq id no:323(lcdr1)、seq id no:324(lcdr2)和seq id no:362(lcdr3)；或(iv)seq id no:82(hcdr1)、seq id no:314(hcdr2)、seq id no:349(hcdr3)、seq id no:326(lcdr1)、seq id no:324(lcdr2)和seq id no:361(lcdr3)；
[0592]
(d)(i)seq id no:270(hcdr1)、seq id no:389(hcdr2)、seq id no:331(hcdr3)、seq id no:337(lcdr1)、seq id no:338(lcdr2)和seq id no:339(lcdr3)；(ii)seq id no:273(hcdr1)、seq id no:389(hcdr2)、seq id no:331(hcdr3)、seq id no:337(lcdr1)、seq id no:338(lcdr2)和seq id no:339(lcdr3)；(iii)seq id no:32(hcdr1)、seq id no:390(hcdr2)、seq id no:331(hcdr3)、seq id no:340(lcdr1)、seq id no:341(lcdr2)和seq id no:342(lcdr3)；或(iv)seq id no:275(hcdr1)、seq id no:391(hcdr2)、seq id no:332(hcdr3)、seq id no:343(lcdr1)、seq id no:341(lcdr2)和seq id no:339(lcdr3)；
[0593]
(e)(i)seq id no:407(hcdr1)、seq id no:408(hcdr2)、seq id no:331(hcdr3)、seq id no:337(lcdr1)、seq id no:338(lcdr2)和seq id no:339(lcdr3)；(ii)seq id no:409(hcdr1)、seq id no:408(hcdr2)、seq id no:331(hcdr3)、seq id no:337(lcdr1)、seq id no:338(lcdr2)和seq id no:339(lcdr3)；(iii)seq id no:410(hcdr1)、seq id no:411(hcdr2)、seq id no:331(hcdr3)、seq id no:340(lcdr1)、seq id no:341(lcdr2)和seq id no:342(lcdr3)；或(iv)seq id no:412(hcdr1)、seq id no:413(hcdr2)、seq id no:332(hcdr3)、seq id no:343(lcdr1)、seq id no:341(lcdr2)和seq id no:339(lcdr3)；
[0594]
(f)(i)seq id no:310(hcdr1)、seq id no:311(hcdr2)、seq id no:312(hcdr3)、seq id no:320(lcdr1)、seq id no:321(lcdr2)和seq id no:322(lcdr3)；(ii)seq id no:229(hcdr1)、seq id no:311(hcdr2)、seq id no:312(hcdr3)、seq id no:320(lcdr1)、seq id no:321(lcdr2)和seq id no:322(lcdr3)；(iii)seq id no:80(hcdr1)、seq id no:313(hcdr2)、seq id no:312(hcdr3)、seq id no:323(lcdr1)、seq id no:324(lcdr2)
和seq id no:325(lcdr3)；或(iv)seq id no:82(hcdr1)、seq id no:314(hcdr2)、seq id no:315(hcdr3)、seq id no:326(lcdr1)、seq id no:324(lcdr2)和seq id no:322(lcdr3)；
[0595]
(g)(i)seq id no:270(hcdr1)、seq id no:271(hcdr2)、seq id no:331(hcdr3)、seq id no:337(lcdr1)、seq id no:338(lcdr2)和seq id no:339(lcdr3)；(ii)seq id no:273(hcdr1)、seq id no:271(hcdr2)、seq id no:331(hcdr3)、seq id no:337(lcdr1)、seq id no:338(lcdr2)和seq id no:339(lcdr3)；(iii)seq id no:32(hcdr1)、seq id no:274(hcdr2)、seq id no:331(hcdr3)、seq id no:340(lcdr1)、seq id no:341(lcdr2)和seq id no:342(lcdr3)；或(iv)seq id no:275(hcdr1)、seq id no:276(hcdr2)、seq id no:332(hcdr3)、seq id no:343(lcdr1)、seq id no:341(lcdr2)和seq id no:339(lcdr3)；或
[0596]
(h)(i)seq id no:310(hcdr1)、seq id no:311(hcdr2)、seq id no:348(hcdr3)、seq id no:320(lcdr1)、seq id no:354(lcdr2)和seq id no:355(lcdr3)；(ii)seq id no:229(hcdr1)、seq id no:311(hcdr2)、seq id no:348(hcdr3)、seq id no:320(lcdr1)、seq id no:354(lcdr2)和seq id no:355(lcdr3)；(iii)seq id no:80(hcdr1)、seq id no:313(hcdr2)、seq id no:348(hcdr3)、seq id no:323(lcdr1)、seq id no:324(lcdr2)和seq id no:356(lcdr3)；或(iv)seq id no:82(hcdr1)、seq id no:314(hcdr2)、seq id no:349(hcdr3)、seq id no:326(lcdr1)、seq id no:324(lcdr2)和seq id no:355(lcdr3)。
[0597]
实施例36.一种分离的抗npr1抗体或抗原结合片段；或者如实施例1-5、7-20、26、28、30、32或34中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段包含：
[0598]
(a)含有seq id no:201的氨基酸序列的重链可变区，以及含有seq id no:136的氨基酸序列的轻链可变区；
[0599]
(b)含有seq id no:122的氨基酸序列的重链可变区，以及含有seq id no:136的氨基酸序列的轻链可变区；
[0600]
(c)含有seq id no:201的氨基酸序列的重链可变区，以及含有seq id no:128的氨基酸序列的轻链可变区；
[0601]
(d)含有seq id no:122的氨基酸序列的重链可变区，以及含有seq id no:128的氨基酸序列的轻链可变区；
[0602]
(e)含有seq id no:201的氨基酸序列的重链可变区，以及含有seq id no:147的氨基酸序列的轻链可变区；
[0603]
(f)含有seq id no:122的氨基酸序列的重链可变区，以及含有seq id no:147的氨基酸序列的轻链可变区；
[0604]
(g)含有seq id no:201的氨基酸序列的重链可变区，以及含有seq id no:174的氨基酸序列的轻链可变区；
[0605]
(h)含有seq id no:122的氨基酸序列的重链可变区，以及含有seq id no:174的氨基酸序列的轻链可变区；
[0606]
(i)含有seq id no:201的氨基酸序列的重链可变区，以及含有seq id no:180的氨基酸序列的轻链可变区；
[0607]
(j)含有seq id no:122的氨基酸序列的重链可变区，以及含有seq id no:180的氨基酸序列的轻链可变区；
[0608]
(k)含有seq id no:201的氨基酸序列的重链可变区，以及含有seq id no:186的氨基酸序列的轻链可变区；
[0609]
(l)含有seq id no:122的氨基酸序列的重链可变区，以及含有seq id no:186的氨基酸序列的轻链可变区；
[0610]
(m)含有seq id no:103的氨基酸序列的重链可变区，以及含有seq id no:24的氨基酸序列的轻链可变区；
[0611]
(n)含有seq id no:115的氨基酸序列的重链可变区，以及含有seq id no:24的氨基酸序列的轻链可变区；
[0612]
(o)含有seq id no:122的氨基酸序列的重链可变区，以及含有seq id no:48的氨基酸序列的轻链可变区；
[0613]
(p)含有seq id no:37的氨基酸序列的重链可变区，以及含有seq id no:128的氨基酸序列的轻链可变区；
[0614]
(q)含有seq id no:37的氨基酸序列的重链可变区，以及含有seq id no:136的氨基酸序列的轻链可变区；
[0615]
(r)含有seq id no:37的氨基酸序列的重链可变区，以及含有seq id no:147的氨基酸序列的轻链可变区；
[0616]
(s)含有seq id no:154的氨基酸序列的重链可变区，以及含有seq id no:24的氨基酸序列的轻链可变区；
[0617]
(t)含有seq id no:161的氨基酸序列的重链可变区，以及含有seq id no:24的氨基酸序列的轻链可变区；
[0618]
(u)含有seq id no:168的氨基酸序列的重链可变区，以及含有seq id no:24的氨基酸序列的轻链可变区；
[0619]
(v)含有seq id no:37的氨基酸序列的重链可变区，以及含有seq id no:174的氨基酸序列的轻链可变区；
[0620]
(w)含有seq id no:37的氨基酸序列的重链可变区，以及含有seq id no:180的氨基酸序列的轻链可变区；
[0621]
(x)含有seq id no:37的氨基酸序列的重链可变区，以及含有seq id no:186的氨基酸序列的轻链可变区；
[0622]
(y)含有seq id no:193的氨基酸序列的重链可变区，以及含有seq id no:136的氨基酸序列的轻链可变区；
[0623]
(z)含有seq id no:193的氨基酸序列的重链可变区，以及含有seq id no:174的氨基酸序列的轻链可变区；
[0624]
(aa)含有seq id no:13的氨基酸序列的重链可变区，以及含有seq id no:24的氨基酸序列的轻链可变区；
[0625]
(bb)含有seq id no:37的氨基酸序列的重链可变区，以及含有seq id no:48的氨基酸序列的轻链可变区；
[0626]
(cc)含有seq id no:374的氨基酸序列的重链可变区，以及含有seq id no:244的
氨基酸序列的轻链可变区；
[0627]
(dd)含有seq id no:385的氨基酸序列的重链可变区，以及含有seq id no:244的氨基酸序列的轻链可变区；
[0628]
(ee)含有seq id no:233的氨基酸序列的重链可变区，以及含有seq id no:244的氨基酸序列的轻链可变区；
[0629]
(ff)含有seq id no:278的氨基酸序列的重链可变区，以及含有seq id no:287的氨基酸序列的轻链可变区；或
[0630]
(gg)含有seq id no:300的氨基酸序列的重链可变区，以及含有seq id no:306的氨基酸序列的轻链可变区。
[0631]
实施例37.一种分离的抗npr1抗体或抗原结合片段；或者如实施例1、2、4、6、21-25、27、29、31，33或35中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段包含：
[0632]
(a)含有seq id no:61的氨基酸序列的重链可变区，以及含有seq id no:72的氨基酸序列的轻链可变区；
[0633]
(b)含有seq id no:85的氨基酸序列的重链可变区，以及含有seq id no:96的氨基酸序列的轻链可变区；
[0634]
(c)含有seq id no:350的氨基酸序列的重链可变区，以及含有seq id no:363的氨基酸序列的轻链可变区；
[0635]
(d)含有seq id no:392的氨基酸序列的重链可变区，以及含有seq id no:344的氨基酸序列的轻链可变区；
[0636]
(e)含有seq id no:414的氨基酸序列的重链可变区，以及含有seq id no:344的氨基酸序列的轻链可变区；
[0637]
(f)含有seq id no:316的氨基酸序列的重链可变区，以及含有seq id no:327的氨基酸序列的轻链可变区；
[0638]
(g)含有seq id no:333的氨基酸序列的重链可变区，以及含有seq id no:344的氨基酸序列的轻链可变区；或
[0639]
(h)含有seq id no:350的氨基酸序列的重链可变区，以及含有seq id no:357的氨基酸序列的轻链可变区。
[0640]
实施例38.一种分离的抗npr1抗体或抗原结合片段；或者如实施例1-5、7-20、26、28、30、32、34或36中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段包含：
[0641]
(a)含有seq id no:203的氨基酸序列的重链，以及含有seq id no:138的氨基酸序列的轻链；
[0642]
(b)含有seq id no:208的氨基酸序列的重链，以及含有seq id no:138的氨基酸序列的轻链；
[0643]
(c)含有seq id no:203的氨基酸序列的重链，以及含有seq id no:130的氨基酸序列的轻链；
[0644]
(d)含有seq id no:208的氨基酸序列的重链，以及含有seq id no:130的氨基酸序列的轻链；
[0645]
(e)含有seq id no:203的氨基酸序列的重链，以及含有seq id no:149的氨基酸序列的轻链；
[0646]
(f)含有seq id no:208的氨基酸序列的重链，以及含有seq id no:149的氨基酸序列的轻链；
[0647]
(g)含有seq id no:203的氨基酸序列的重链，以及含有seq id no:176的氨基酸序列的轻链；
[0648]
(h)含有seq id no:208的氨基酸序列的重链，以及含有seq id no:176的氨基酸序列的轻链；
[0649]
(i)含有seq id no:203的氨基酸序列的重链，以及含有seq id no:182的氨基酸序列的轻链；
[0650]
(j)含有seq id no:208的氨基酸序列的重链，以及含有seq id no:182的氨基酸序列的轻链；
[0651]
(k)含有seq id no:203的氨基酸序列的重链，以及含有seq id no:188的氨基酸序列的轻链；
[0652]
(l)含有seq id no:208的氨基酸序列的重链，以及含有seq id no:188的氨基酸序列的轻链；
[0653]
(m)含有seq id no:105的氨基酸序列的重链，以及含有seq id no:26的氨基酸序列的轻链；
[0654]
(n)含有seq id no:108的氨基酸序列的重链，以及含有seq id no:26的氨基酸序列的轻链；
[0655]
(o)含有seq id no:117的氨基酸序列的重链，以及含有seq id no:26的氨基酸序列的轻链；
[0656]
(p)含有seq id no:124的氨基酸序列的重链，以及含有seq id no:50的氨基酸序列的轻链；
[0657]
(q)含有seq id no:39的氨基酸序列的重链，以及含有seq id no:130的氨基酸序列的轻链；
[0658]
(r)含有seq id no:39的氨基酸序列的重链，以及含有seq id no:138的氨基酸序列的轻链；
[0659]
(s)含有seq id no:141的氨基酸序列的重链，以及含有seq id no:138的氨基酸序列的轻链；
[0660]
(t)含有seq id no:39的氨基酸序列的重链，以及含有seq id no:149的氨基酸序列的轻链；
[0661]
(u)含有seq id no:156的氨基酸序列的重链，以及含有seq id no:26的氨基酸序列的轻链；
[0662]
(v)含有seq id no:159的氨基酸序列的重链，以及含有seq id no:26的氨基酸序列的轻链；
[0663]
(w)含有seq id no:163的氨基酸序列的重链，以及含有seq id no:26的氨基酸序列的轻链；
[0664]
(x)含有seq id no:170的氨基酸序列的重链，以及含有seq id no:26的氨基酸序
列的轻链；
[0665]
(y)含有seq id no:39的氨基酸序列的重链，以及含有seq id no:176的氨基酸序列的轻链；
[0666]
(z)含有seq id no:39的氨基酸序列的重链，以及含有seq id no:182的氨基酸序列的轻链；
[0667]
(aa)含有seq id no:39的氨基酸序列的重链，以及含有seq id no:188的氨基酸序列的轻链；
[0668]
(bb)含有seq id no:195的氨基酸序列的重链，以及含有seq id no:138的氨基酸序列的轻链；
[0669]
(cc)含有seq id no:195的氨基酸序列的重链，以及含有seq id no:176的氨基酸序列的轻链；
[0670]
(dd)含有seq id no:15的氨基酸序列的重链，以及含有seq id no:26的氨基酸序列的轻链；
[0671]
(ee)含有seq id no:39的氨基酸序列的重链，以及含有seq id no:50的氨基酸序列的轻链；
[0672]
(ff)含有seq id no:376的氨基酸序列的重链，以及含有seq id no:246的氨基酸序列的轻链；
[0673]
(gg)含有seq id no:387的氨基酸序列的重链，以及含有seq id no:246的氨基酸序列的轻链；
[0674]
(hh)含有seq id no:235的氨基酸序列的重链，以及含有seq id no:246的氨基酸序列的轻链；
[0675]
(ii)含有seq id no:280的氨基酸序列的重链，以及含有seq id no:289的氨基酸序列的轻链；或
[0676]
(jj)含有seq id no:302的氨基酸序列的重链，以及含有seq id no:308的氨基酸序列的轻链。
[0677]
实施例39.一种分离的抗npr1抗体或抗原结合片段；或者如实施例1、2、4、6、21-25、27、29、31、33、35或37中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段包含：
[0678]
(a)含有seq id no:63的氨基酸序列的重链，以及含有seq id no:74的氨基酸序列的轻链；
[0679]
(b)含有seq id no:87的氨基酸序列的重链，以及含有seq id no:98的氨基酸序列的轻链；
[0680]
(c)含有seq id no:352的氨基酸序列的重链，以及含有seq id no:365的氨基酸序列的轻链；
[0681]
(d)含有seq id no:394的氨基酸序列的重链，以及含有seq id no:346的氨基酸序列的轻链；
[0682]
(e)含有seq id no:416的氨基酸序列的重链，以及含有seq id no:346的氨基酸序列的轻链；
[0683]
(f)含有seq id no:318的氨基酸序列的重链，以及含有seq id no:329的氨基酸
序列的轻链；
[0684]
(g)含有seq id no:335的氨基酸序列的重链，以及含有seq id no:346的氨基酸序列的轻链；或
[0685]
(h)含有seq id no:352的氨基酸序列的重链，以及含有seq id no:359的氨基酸序列的轻链。
[0686]
实施例40.如实施例1-39中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其是选自由以下组成的组的抗原结合片段：fab、fab
′
、f(ab
′
)2、fv、单结构域抗体(dab)和单链可变片段(scfv)，任选地其中所述抗原结合片段选自由以下组成的组：fab、fab
′
、fv、单结构域抗体(dab)和单链可变片段(scfv)。
[0687]
实施例41.如实施例1-40中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其是单克隆的。
[0688]
实施例42.如实施例1-41中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其是全人的。
[0689]
实施例43.如实施例1-42中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其是igg抗体，任选地是igg1抗体。
[0690]
实施例44.如实施例1-43中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其是具有κ轻链的igg1抗体。
[0691]
实施例45.如实施例1-44中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其是igg1同种型的全人抗体并且具有κ轻链。
[0692]
实施例46.如实施例1-45中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段具有如本文所述的进一步修饰，例如，其中所述抗体或抗原结合片段另外地根据卡巴特的eu索引在fc区具有突变，其中所述突变至少包含d265a和p329a；或其中所述突变至少包含l234a和l235a。
[0693]
实施例47.如实施例1-40中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段是：a)单克隆的；和/或b)全人的；和/或c)igg抗体，任选地igg1抗体；和/或d)具有κ轻链；和/或e)根据卡巴特的eu索引在fc区具有突变，任选地其中所述突变至少包含d265a和p329a；和/或f)根据卡巴特的eu索引在fc区具有突变，任选地其中所述突变至少包含l234a和l235a。
[0694]
实施例48.如实施例1-47中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段是治疗性的。
[0695]
实施例49.一种分离的抗体或抗原结合片段，其与如实施例1至48中任一项所述的抗体或抗原结合片段结合人npr1上相同的表位。
[0696]
实施例50.一种分离的抗体或抗原结合片段，其与如实施例1至49中任一项所述的抗体或抗原结合片段竞争结合人npr1。
[0697]
实施例51.一种或多种分离的核酸，所述分离的核酸编码如实施例1至50中任一项所述的抗体或抗原结合片段的氨基酸序列。
[0698]
实施例52.一种载体，所述载体包含如实施例51所述的一种或多种分离的核酸。
[0699]
实施例53.一种宿主细胞，所述宿主细胞包含如实施例51所述的一种或多种分离的核酸或如实施例52所述的载体。
[0700]
实施例54.一种产生如实施例1至50中任一项所述的抗体或抗原结合片段的方法，所述方法包括在适合产生所述抗体或抗原结合片段的条件下培养如实施例53所述的宿主
细胞。
[0701]
实施例55.如实施例54所述的方法，其中所述方法另外地包括纯化所述抗体或抗原结合片段。
[0702]
实施例56.一种药物组合物，所述药物组合物包含由如实施例55所述的方法产生的纯化抗体或抗原结合片段，以及药学上可接受的载剂。
[0703]
实施例57.一种药物组合物，所述药物组合物包含如实施例1至50中任一项所述的抗体或抗原结合片段，以及药学上可接受的载剂。
[0704]
实施例58.如实施例56或57所述的药物组合物或者包含如实施例1至50中任一项所述的抗体或抗原结合片段的组合，其中所述组合物进一步包含另外的治疗剂。
[0705]
实施例59.如实施例58所述的药物组合物或组合，其中所述另外的治疗剂选自ace(血管紧张素转化酶)抑制剂、血管紧张素受体阻滞剂(arb)、脑啡肽酶抑制剂、β阻滞剂、利尿剂、钙通道阻滞剂、强心苷、钠-葡萄糖共转运蛋白2抑制剂(sglt2i)及其组合。
[0706]
实施例60.如实施例58或实施例59所述的药物组合物或组合，其中所述另外的治疗剂选自依那普利、贝那普利、卡托普利、福辛普利、赖诺普利、莫西普利、培哚普利、喹那普利、雷米普利、群多普利、缬沙坦、阿齐沙坦、坎地沙坦、依普罗沙坦、厄贝沙坦、氯沙坦、奥美沙坦、替米沙坦、沙库比曲、比索洛尔、卡维地洛、普萘洛尔、美托洛尔、酒石酸美托洛尔、琥珀酸美托洛尔、噻嗪类利尿剂、环利尿剂、保钾利尿剂、氨氯地平、氯维地平、地尔硫卓、非洛地平、伊拉地平、尼卡地平、硝苯地平、尼索地平、维拉帕米、洋地黄苷、卡格列净、达格列净、依帕列净、埃格列净、及其组合。
[0707]
实施例61.如实施例58或实施例59所述的药物组合物或组合，其中所述另外的治疗剂选自氯噻嗪、氯噻酮、氢氯噻嗪、吲达帕胺、美托拉宗、布美他尼、依他尼酸、呋塞米、托拉塞米、阿米洛利、依普利酮、螺内酯、氨苯蝶啶、地高辛及其组合。
[0708]
实施例62.如实施例58-61中任一项所述的药物组合物或组合，其中所述另外的治疗剂是血管紧张素受体-脑啡肽酶抑制剂(arni)。
[0709]
实施例63.如实施例58所述的药物组合物或组合，其中所述另外的治疗剂选自皮质类固醇、白三烯修饰剂、支气管扩张剂及其组合。
[0710]
实施例64.如实施例63所述的药物组合物或组合，其中所述另外的治疗剂选自氟替卡松、布地奈德、莫米松、倍氯米松、环索奈德、糠酸氟替卡松、泼尼松、甲基强的松龙、孟鲁司特、扎鲁司特、齐留通、长效β激动剂、短效β激动剂、茶碱和异丙托铵及其组合。
[0711]
实施例65.如实施例63或实施例64所述的药物组合物或组合，其中所述另外的治疗剂选自沙美特罗、福莫特罗、沙丁胺醇和左旋沙丁胺醇及其组合。
[0712]
实施例66.如实施例58所述的药物组合物或组合，其中所述另外的治疗剂选自β-肾上腺素受体拮抗剂、碳酸酐酶抑制剂、α2-肾上腺素受体激动剂、拟副交感神经药、前列腺素类似物、rho激酶抑制剂、及其组合、及其组合。
[0713]
实施例67.如实施例66所述的药物组合物或组合，其中所述另外的治疗剂选自噻吗洛尔、左布洛诺尔、美替洛尔、卡替洛尔、倍他洛尔、乙酰唑胺、多佐胺、布林佐胺、醋甲唑胺、溴莫尼定、阿拉可乐定、拟胆碱药、拉坦前列腺素(latanoprost)、拉坦前列素(latanoprostene bunod)、曲伏前列素、比马前列素、他氟前列腺素、奈塔舒地尔和利帕舒地尔、及其组合。
[0714]
实施例68.如实施例58所述的药物组合物，其中所述另外的治疗剂选自ace(血管紧张素转换酶)抑制剂、血管紧张素受体阻滞剂(arb)、脑啡肽酶抑制剂、β阻滞剂、利尿剂、钙通道阻滞剂、强心苷、钠-葡萄糖共转运蛋白2抑制剂(sglt2i)、血管紧张素受体-脑啡肽酶抑制剂(arni)、皮质类固醇、白三烯修饰剂、支气管扩张剂、β-肾上腺素受体拮抗剂、碳酸酐酶抑制剂、α2-肾上腺素受体激动剂、拟副交感神经药、前列腺素类似物、rho激酶抑制剂及其组合。
[0715]
实施例69.如实施例68所述的药物组合物，其中所述另外的治疗剂选自依那普利、贝那普利、卡托普利、福辛普利、赖诺普利、莫西普利、培哚普利、喹那普利、雷米普利、群多普利、缬沙坦、阿齐沙坦、坎地沙坦、依普罗沙坦、厄贝沙坦、氯沙坦、奥美沙坦、替米沙坦、沙库比曲、比索洛尔、卡维地洛、普萘洛尔、美托洛尔、酒石酸美托洛尔、琥珀酸美托洛尔、噻嗪类利尿剂、环利尿剂、保钾利尿剂、氨氯地平、氯维地平、地尔硫卓、非洛地平、伊拉地平、尼卡地平、硝苯地平、尼索地平、维拉帕米、洋地黄苷、卡格列净、达格列净、依帕列净、埃格列净、氯噻嗪、氯噻酮、氢氯噻嗪、吲达帕胺、美托拉宗、布美他尼、依他尼酸、呋塞米、托拉塞米、阿米洛利、依普利酮、螺内酯、氨苯蝶啶、地高辛、氟替卡松、布地奈德、莫米松、倍氯米松、环索奈德、糠酸氟替卡松、泼尼松、甲基强的松龙、孟鲁司特、扎鲁司特、齐留通、长效β激动剂、短效β激动剂、茶碱、异丙托铵、沙美特罗、福莫特罗、沙丁胺醇、和左旋沙丁胺醇、噻吗洛尔、左布洛诺尔、美替洛尔、卡替洛尔、倍他洛尔、乙酰唑胺、多佐胺、布林佐胺、醋甲唑胺、溴莫尼定、阿拉可乐定、拟胆碱药、拉坦前列腺素(latanoprost)、拉坦前列素(latanoprostene bunod)、曲伏前列素、比马前列素、他氟前列腺素、奈塔舒地尔和利帕舒地尔、及其组合。
[0716]
实施例70.如实施例1-50中任一项所述的抗体或其抗原结合片段、如实施例51所述的一种或多种分离的核酸、如实施例52所述的载体、如实施例53所述的宿主细胞或如实施例56-69中任一项所述的药物组合物，用于(i)在疗法中，(ii)作为药物或(iii)在制造用于治疗疾病的药物中使用。
[0717]
实施例71.如实施例1-50中任一项所述的抗体或抗原结合片段、如实施例51所述的一种或多种分离的核酸、如实施例52所述的载体、如实施例53所述的宿主细胞或如实施例56-69中任一项所述的药物组合物用于制造用于在需要这种治疗的受试者中治疗与利钠肽受体活性有关的障碍或疾病的药物的用途。
[0718]
实施例72.如实施例1-50中任一项所述的抗体或抗原结合片段、如实施例51所述的一种或多种分离的核酸、如实施例52所述的载体、如实施例53所述的宿主细胞或如实施例56-69中任一项所述的药物组合物用于制造用于在需要这种治疗的受试者中治疗心血管障碍的药物的用途。
[0719]
实施例73.如实施例72所述的用途，其中所述心血管障碍选自：高血压、周围血管疾病、心力衰竭、冠状动脉疾病(cad)、缺血性心脏病(ihd)、二尖瓣狭窄和返流、心绞痛、肥厚性心肌病、糖尿病性心肌病、室上性和室性心律失常、心律不齐、房颤(af)、新发房颤、复发性房颤、心脏纤维化、心房扑动、有害血管重塑、斑块稳定和心肌梗死(mi)。
[0720]
实施例74.如实施例1-50中任一项所述的抗体或抗原结合片段、如实施例51所述的一种或多种分离的核酸、如实施例52所述的载体、如实施例53所述的宿主细胞或如实施例56-69中任一项所述的药物组合物用于制造用于在需要这种治疗的受试者中治疗心力衰
竭、肥厚性心肌病(hcm)、高血压、先兆子痫、哮喘、青光眼和/或细胞因子释放综合征的药物的用途。
[0721]
实施例75.如实施例73或实施例74所述的用途，其中所述受试者患有心力衰竭，并且其中所述心力衰竭选自射血分数降低的心力衰竭(hfref)、射血分数保留的心力衰竭(hfpef)、急性心肌梗死后心力衰竭或急性代偿性心力衰竭。
[0722]
实施例76.如实施例73或实施例74所述的用途，其中所述受试者患有肥厚性心肌病，并且其中所述肥厚性心肌病是心室肥大。
[0723]
实施例77.如实施例73或实施例74所述的用途，其中所述受试者患有高血压，并且其中所述高血压选自顽固性高血压、高血压性心脏病、肺高血压、肺动脉高血压、单纯收缩期高血压、顽固性高血压和肺动脉高血压。
[0724]
实施例78.如实施例73、74或77所述的用途，其中所述受试者患有高血压，并且其中所述高血压选自顽固性高血压或高血压性心脏病。
[0725]
实施例79.如实施例1-50中任一项所述的抗体或抗原结合片段、如实施例51所述的一种或多种分离的核酸、如实施例52所述的载体、如实施例53所述的宿主细胞或如实施例56-69中任一项所述的药物组合物用于制造用于在需要这种治疗的受试者中治疗肾障碍的药物的用途。
[0726]
实施例80.如实施例79所述的用途，其中所述肾障碍选自：糖尿病肾功能不全、非糖尿病肾功能不全、肾衰竭、糖尿病肾病、非糖尿病肾病、急性肾损伤、造影剂诱发的肾病、肾病综合征、肾小球肾炎、硬皮病、肾小球硬化、原发性肾病蛋白尿、肾血管性高血压、糖尿病视网膜病变和终末期肾脏疾病(esrd)、内皮功能障碍、舒张功能障碍、肾纤维化和多囊肾疾病(pkd)。
[0727]
实施例81.如实施例1-50中任一项所述的抗体或抗原结合片段、如实施例51所述的一种或多种分离的核酸、如实施例52所述的载体、如实施例53所述的宿主细胞或如实施例56-69中任一项所述的药物组合物或组合，用于在需要这种治疗的受试者中治疗与利钠肽受体活性有关的障碍或疾病。
[0728]
实施例82.如实施例1-50中任一项所述的抗体或抗原结合片段、如实施例51所述的一种或多种分离的核酸、如实施例52所述的载体、如实施例53所述的宿主细胞或如实施例56-69中任一项所述的药物组合物或组合，用于在需要这种治疗的受试者中治疗心血管障碍。
[0729]
实施例83.如实施例82所述的抗体或抗原结合片段、一种或多种分离的核酸、载体、宿主细胞、药物组合物或组合，其中所述心血管障碍选自：高血压、周围血管疾病、心力衰竭、冠状动脉疾病(cad)、缺血性心脏病(ihd)、二尖瓣狭窄和返流、心绞痛、肥厚性心肌病、糖尿病性心肌病、室上性和室性心律失常、心律不齐、房颤(af)、新发房颤、复发性房颤、心脏纤维化、心房扑动、有害血管重塑、斑块稳定和心肌梗死(mi)。
[0730]
实施例84.如实施例1-50中任一项所述的抗体或抗原结合片段、如实施例51所述的一种或多种分离的核酸、如实施例52所述的载体、如实施例53所述的宿主细胞或如实施例56-69中任一项所述的药物组合物或组合，用于在需要这种治疗的受试者中治疗心力衰竭、肥厚性心肌病(hcm)、高血压、先兆子痫、哮喘、青光眼和/或细胞因子释放综合征。
[0731]
实施例85.如实施例83或实施例84所述的抗体或抗原结合片段、一种或多种分离
的核酸、载体、宿主细胞、药物组合物或组合，其中所述受试者患有心力衰竭，并且其中所述心力衰竭选自射血分数降低的心力衰竭(hfref)、射血分数保留的心力衰竭(hfpef)、急性心肌梗死后心力衰竭或急性代偿性心力衰竭。
[0732]
实施例86.如实施例83或实施例84所述的抗体或抗原结合片段、一种或多种分离的核酸、载体、宿主细胞、药物组合物或组合，其中所述受试者患有肥厚性心肌病，并且其中所述肥厚性心肌病是心室肥大。
[0733]
实施例87.如实施例83或实施例84所述的抗体或抗原结合片段、一种或多种分离的核酸、载体、宿主细胞、药物组合物或组合，其中所述受试者患有高血压，并且其中所述高血压选自顽固性高血压、高血压性心脏病、肺高血压、肺动脉高血压、单纯收缩期高血压、顽固性高血压和肺动脉高血压。
[0734]
实施例88.如实施例83、84或87所述的抗体或抗原结合片段、一种或多种分离的核酸、载体、宿主细胞、药物组合物或组合，其中所述受试者患有高血压，并且其中所述高血压选自顽固性高血压或高血压性心脏病。
[0735]
实施例89.如实施例1-50中任一项所述的抗体或抗原结合片段、如实施例51所述的一种或多种分离的核酸、如实施例52所述的载体、如实施例53所述的宿主细胞或如实施例56-69中任一项所述的药物组合物或组合，用于在需要这种治疗的受试者中治疗肾障碍。
[0736]
实施例90.如实施例89所述的抗体或抗原结合片段、一种或多种分离的核酸、载体、宿主细胞、药物组合物或组合，其中所述肾障碍选自：糖尿病肾功能不全、非糖尿病肾功能不全、肾衰竭、糖尿病肾病、非糖尿病肾病、急性肾损伤、造影剂诱发的肾病、肾病综合征、肾小球肾炎、硬皮病、肾小球硬化、原发性肾病蛋白尿、肾血管性高血压、糖尿病视网膜病变和终末期肾脏疾病(esrd)、内皮功能障碍、舒张功能障碍、肾纤维化和多囊肾疾病(pkd)。
[0737]
实例
[0738]
以下实例提供本披露的说明性实施例。本领域普通技术人员将认识到可以在不改变本披露的精神或范围的情况下进行多种修改和变化。这样的修改和变化涵盖在本披露的范围内。提供的实例不以任何方式限制本披露。
[0739]
该披露提供了特异性结合并活化npr1的抗npr1抗体，例如(i)与npr1结合；并且(ii)在不存在anp的情况下活化npr1的抗体或抗原结合片段。特异性结合并活化npr1的抗体可能具有不同的可能作用方式：(1)抗体诱导npr1单体内的构象变化以活化受体；(2)抗体直接模拟天然配体anp的结构和功能，并通过结合在npr1的anp结合口袋中而活化受体；或(3)抗体稳定预先形成的hnpr1和anp的功能活性复合物(npr1-anp复合物)。
[0740]
实例1：噬菌体文库淘选和筛选
[0741]
为了选择涵盖所述的不同作用方式的npr1特异性抗体，应用了13种不同的淘选策略(参见表5)。仅针对蛋白质执行了十种策略(策略1-6和10-13)。另外，进行了三次不同的细胞淘选(策略7-9)。总共有四种淘选策略(策略3和11-13)旨在富集anp竞争性抗体(用anp洗脱，在npr1-anp复合物上对噬菌体预吸附，以及在鼠抗anp抗体上进行抗独特型淘选)。
[0742]
表5.淘选策略概述
[0743][0744][0745]
为了进行fc捕获淘选，将npr1-hfc通过适当的捕获抗体(山羊或小鼠抗人fc抗体)固定在96孔板上。将抗原固定在96孔板的适当数量的孔中，然后在添加噬菌体抗体之前将孔阻断。与孔制备平行地，将噬菌体抗体阻断。在阻断噬菌体期间，将另外的阻断试剂加入阻断缓冲液中以避免选择针对hfc标签或捕获抗体(山羊或小鼠γ球蛋白)的抗体的选择。阻断程序后，在人γ球蛋白和反向靶标hnpr3-hfc上进行两个预吸附步骤，以避免选择针对fc标签或反向靶标的抗体。将预先阻断和预先吸附的噬菌体混合物与固定的npr1-hfc添加到每个孔中，并使噬菌体-抗体与抗原结合。强化洗涤确保除去非特异性结合的噬菌体，然后洗脱特异性结合的噬菌体。根据第一轮淘选的方案进行第二轮和第三轮的固相淘选。抗原量减少，并且应用具有增加的严格性的洗涤条件。
[0746]
对于溶液淘选，npr1被生物素化，并确认了生物素化npr1对anp结合的保留活性。
在溶液淘选期间，展示fab的噬菌体和生物素化的npr1-hfc在溶液中孵育，这有利于噬菌体接近抗原。阻断适量的链霉亲和素珠，并同时阻断适量的噬菌体抗体。在噬菌体阻断过程中，将人γ球蛋白、反向靶标hnpr3-hfc和flag-tev接头肽添加到阻断缓冲液中，以避免选择针对hfc标签、反向靶标或接头肽的抗体。为了去除链霉亲和素、生物素或珠结合噬菌体，使用含有或不含偶联生物素化无关抗原的经阻断的链霉亲和素珠进行经阻断的噬菌体颗粒的预吸附步骤。因此，将生物素化的npr1-hfc/npr1-hfc-anp复合物添加到预吸附的和经阻断的噬菌体颗粒中，并允许噬菌体-抗体在溶液中结合抗原。为了富集与npr1的anp结合位点结合的抗体噬菌体(anp竞争性抗体)，将预先形成的npr1-anp复合物添加到噬菌体阻断溶液中，或将anp肽用于洗脱结合的噬菌体。因此，使用的anp肽至少比npr1抗原或表达npr1的细胞过量250倍摩尔。使用阻断的链霉亲和素珠捕获噬菌体-抗原复合物，并且用磁性分离器收集与链霉亲和素珠结合的噬菌体颗粒。通过若干洗涤步骤将非特异性结合的噬菌体洗掉。从链霉亲和素珠中洗脱特异性结合的噬菌体。将洗脱物转移到大肠杆菌培养物中用于噬菌体感染。根据第一轮淘选的方案进行第二轮和第三轮的基于珠的溶液淘选。抗原量减少，并且应用具有增加的严格性的洗涤条件。
[0747]
针对全细胞淘选，将适量的噬菌体-抗体阻断。在噬菌体阻断期间，将反向靶标hnpr3-hfc添加到阻断缓冲液中以避免选择针对反向靶标的抗体。同时，每个噬菌体库，阻断表达npr1的适量的靶细胞和不表达抗原(亲本细胞)的适量的吸附细胞。将阻断的靶细胞旋转沉降，重悬于预阻断的噬菌体颗粒中，并允许噬菌体-抗体与细胞上呈递的npr1结合。将噬菌体-细胞复合物洗涤若干次。为了富集与npr1的anp结合位点结合的抗体噬菌体(anp竞争性抗体)，将预先形成的npr1-anp复合物添加到噬菌体阻断溶液中，或将anp肽用于洗脱结合的噬菌体。因此，使用的anp肽至少比npr1抗原或表达npr1的细胞过量250倍摩尔。从靶细胞中洗脱特异性结合的噬菌体。离心后，将上清液(洗脱液)应用于吸附细胞，以去除与除靶抗原以外的细胞表面分子结合的噬菌体(吸附后)。将最终的上清液转移到大肠杆菌培养物中用于噬菌体感染。根据第一轮淘选的方案进行第二和第三轮全细胞淘选。应用具有增加的严格性的洗涤条件。
[0748]
随后将淘选轮的输出亚克隆到细菌表达载体中，并将细菌裂解物(bel)用于初次和二次筛选。在初次筛选(基于elisa)期间，分析输出与人和大鼠npr1的结合。与人npr3结合的克隆被取消。在表达hnpr1的cho-k1细胞上进行二次筛选。进行仅在anp存在下的有关anp竞争和结合的进一步筛选。大约有1700个克隆满足筛选选择标准，并选择了760个克隆进行测序。760个克隆的测序产生210个hcdr3唯一命中，其结合特性汇总在表6中。在这些克隆中，有72个表现出显著的anp竞争，而7个克隆仅在anp存在时结合。
[0749]
表6. 210个hcdr3唯一命中的结合特性
[0750]
pro(使用激发波长为317nm，发射波长为665nm)进行读数。根据以下公式计算cgmp浓度(δf[％])：
[0764]
比率＝[(a
665nm
/b
620nm
)*104]
[0765]
平均比率＝(σ比率/2)
[0766]
cv＝[(标准偏差/均值)*100]
[0767]
δf＝[((校准品或样品比率-比率
neg
)/比率
neg
)*100]
[0768]
比率
neg
：阴性对照
[0769]
使用细胞cgmp测定鉴定出五种具有明显功能活性的候选物：ww01、ww02、ww03、ww04和ww06。这五种候选物具有功能活性，并且可以分配至不同的作用方式。ww01、ww02和ww03能够稳定npr1-anp复合物，而ww06被确定为具有anp竞争性。这些候选物均来自初始淘选代码10和11(针对作用方式2或3)。图5显示了在不存在或存在由五种功能候选物(igg形式)诱导的0.075nm anp的情况下cgmp的细胞产生测定结果。
[0770]
实例4：生产和表征fabcys形式的
[0771]
还测试了功能性克隆的fabcys格式的功能性。用编码二硫键桥连fabcys的重链和轻链的哺乳动物表达载体dna转染真核hkb11细胞。在适当的时间收集细胞培养物上清液，并使用液体处理工作站进行金属离子亲和色谱。将缓冲液交换到1x杜氏pbs(ph 7.2)中，并将样品无菌过滤(0.2μm孔径)。
[0772]
针对五个功能候选物ww01、ww02、ww03、ww04和ww06在不存在和存在单价fabcys形式的anp的情况下对人和大鼠npr1和反向靶标人npr3的单价亲和力，对其另外进行分析。表7总结了亲和力测定、表位分级和cgmp测定的结果。
[0773]
表7.fabcys形式的ww01、ww02、ww03、ww04和ww06的亲和力、表位和cgmp数据概述
[0774][0775]
对于候选物ww01和ww03，在不存在anp的情况下，未观察到与人和大鼠npr1的结合力或所述结合力非常弱，而在存在anp的情况下，其亲和力在低纳摩尔至亚纳摩尔范围内。两者共享相同的表位箱“b”。候选物ww02的亲和力太弱，以至于无法充分确定kd值和表位箱。ww04和ww06的亲和力在两位数纳摩尔至亚纳摩尔范围内，与anp的存在与否无关。两者共享相同的表位箱“a”。ww06是唯一不表现出大鼠交叉反应性的候选物。
[0776]
尽管对于ww02、ww03和ww04，在不存在或存在anp的情况下均未观察到与反相靶标hnpr3的结合，但对于ww01以及更高浓度的ww06，均检测到与反相靶标的额外结合。
[0777]
实例5：将重新格式化为igg形式
[0778]
通过使用一种生物素化的引物和一种非生物素化的引物扩增fab编码插入物，将fabcys载体亚克隆到igg1_lala载体中以在哺乳动物细胞中表达。将扩增的产物结合在链霉亲和素珠上，使用限制酶消化，并洗涤，从而将纯化的插入物释放到上清液中。将插入物克隆到受体载体中，转化dna，并通过菌落pcr和测序对单个克隆进行质量控制。
[0779]
如上所述表征了五个igg形式的功能候选物ww01、ww02、ww03、ww04和ww06。结合数据(elisa、流式细胞仪、anp竞争)和功能数据(cgmp测定)以及亲和力和表位箱如表8所示。有趣的是，与igg形式相比，ww06在fabcys形式下具有明显增强的功能活性，如图6所示。
[0780]
表8.igg形式的ww01、ww02、ww03、ww04和ww06的亲和力、表位和cgmp数据概述
[0781][0782]
实例6：成熟文库的生成
[0783]
为了增加所选的抗体片段(ww01、ww02、ww03、ww04和ww06)的亲和力和生物活性，通过多样化的盒/模块平行交换lcdr3和hcdr2区(prassler等人(2009):in vitro affinity maturation ofantibodies:complementarity determining region exchange and rapmat technology[抗体的体外亲和力成熟：互补决定区交换和rapmat技术]；immunotherapy[免疫疗法]1(4),第571-583页，将其内容特此通过引用并入本文)，而框架区保持恒定。将亲本fab片段从相应的表达载体转移到文库克隆载体中以进行亲和力成熟。
[0784]
针对每个成熟候选物单独进行成熟文库的生成。为了lcdr3优化，通过限制性消化从编码亲本抗体的序列中除去编码lcdr3、框架4以及轻链恒定区的大约400bp dna片段。为了减少亲本非多样化序列的背景，通过连接，将切下的片段替换为大约520bp的虚拟序列，然后通过限制性消化和连接，插入编码多样化lcdr3区的dna片段库与框架4和恒定域(多样化lcdr3盒)。
[0785]
在第二个文库集中，hcdr2编码序列是多样化的，而连接框架区保持恒定。为减少
亲本非多样化序列的背景，通过限制性消化和连接，将含有亲本hcdr2和框架3序列的大约150bp dna片段替换为大约590bp的虚拟序列，然后还通过限制性消化和连接插入多样化的hcdr2盒(包括框架3)。
[0786]
成功克隆了十个成熟文库，并且文库大小在9.2x108和2.2x109cfu之间。将连接混合物电穿孔到大肠杆菌细胞中，产生》108个独立菌落。如前所述进行文库的扩增(rauchenberger等人(2003):human combinatorial fab library yielding specific and functional antibodies against the human fibroblast growth factor receptor 3[人组合fab文库产生针对人成纤维细胞生长因子受体3的特异性和功能性抗体]；j biol chem[生物化学杂志]278(40),第38194-38205页，将其内容特此通过引用并入本文)。针对质量控制，随机挑选每个文库中大约10-20个单一菌落并测序。
[0787]
为了选择亲和力改善的候选物，将衍生自成熟文库的噬菌体进行三轮成熟淘选，如下进一步所述。延长洗涤步骤可提高淘选严格性。另外，进行了解离速率(off-rate)选择(hawkins等人(1992):selection of phage antibodies by binding affinity.[通过结合亲和力选择噬菌体抗体]mimicking affinity maturation.[模仿亲和力成熟]j.mol.biol.[分子生物学杂志]226(3),第889-896页，将其内容特此通过引用并入本文)。
[0788]
实例7：淘选和筛选-[0789]
成熟文库用于四种不同的成熟淘选策略。与亲本克隆相比，策略#3和#4旨在富集具有改善的亲和力的后代。另外，策略#1和#2旨在富集对npr1而非npr1-anp复合物具有改善的亲和力的克隆。其背后的基本原理是生产能够通过构象变化直接活化npr1的候选物的想法。在淘选过程中，所有成熟文库都单独保存。表9中详细总结了淘选策略。随后将第三轮淘选的输出亚克隆到细菌表达载体中，并将细菌裂解物(bel)用于set筛选。
[0790]
表9：成熟淘选策略概述
[0791][0792]
将第三轮淘选的输出用于溶液平衡滴定(set)筛选。与亲本克隆相比，在set筛选
中分析了88个克隆/子码(总共2640个克隆)对hnpr1和/或hnpr1-anp复合物的改善的亲和力。
[0793]
在set筛选期间，鉴定出82个hcdr2或lcdr3唯一改善的衍生物。与它们的亲本克隆相比，ww01和ww03衍生物对hnpr1和hnpr1-anp复合物的亲和力均提高了20倍。与亲本克隆相比，ww04衍生物的亲和力没有显著提高，而ww06衍生物的亲和力提高了3倍。参见图7(显示对hnpr1具有亲和力)和图8(显示对hnpr1-anp复合物具有亲和力)。亲和力(kd[pm])在两个图的亲本克隆名称下方的x轴上表示。
[0794]
实例8：成熟候选物-的表征
[0795]
在82个改善的候选物中，有74个成功地亚克隆为fabcys形式，并且74个克隆中有61个通过了生产质量控制，并针对与相关抗原的结合、与相关细胞系的结合、anp竞争以及cgmp生产中的功能活性(与它们的亲本克隆进行比较)进行了表征。ww01的所有16种衍生物和ww03的所有27种衍生物具有高达20倍的改善的结合和功能活性。在anp存在下，大多数衍生物还显示出改善的结合和功能性。一些衍生物显示出与w74r(组成型活性hnpr1突变体)的结合，这对亲本fabcys而言并非如此。ww04的四个衍生物中的一个具有增强两倍的结合和功能活性，而其余的表现像亲本fabcys。ww06的所有14种衍生物均改善了对npr1的结合，并可与anp保持竞争。与亲代fabcys相比，14个后代中的10个后代的功能活性提高了三倍。一些衍生物表现出大鼠交叉反应性，而亲本fabcys则不然。
[0796]
在fabcys表征后，从61种衍生物中选择了另外40种进行igg转化和进一步表征。然后针对与相关抗原的结合、与相关细胞系的结合、anp竞争、以及cgmp生产中的功能活性(与它们的亲本克隆进行比较)对表10中所示十个潜在候选物进行了测定。经由3p测定对它们进行进一步分析，并经由set kd测量确定在不存在和存在anp的情况下它们对人和大鼠npr1的亲和力。以igg形式分析ww01和ww03衍生物抗体，以fabcys形式分析ww06衍生物。
[0797]
对于蛋白质组谱分析(frese等人(2013):an automated immunoassay for early specificity profiling of antibodies[用于抗体早期特异性分析的自动化免疫测定]；mabs 5(2),第279-287页，将其内容特此通过引用并入本文)，将32种不同的蛋白质和对照以1.0μg/ml的浓度在4℃下涂覆于两个384孔msd标准板上过夜。弃去包被溶液，用pbs中的50μl 3％(w/v)bsa在微量滴定板振荡器(约500rpm)上在室温下阻断板1小时，然后用50μl洗涤缓冲液(含0.05％(v/v)吐温20的pbs)进行三次洗涤步骤。将抗体样品在测定缓冲液(含0.5％(w/v)bsa、0.05％(v/v)吐温20的pbs)中稀释至100nm和10nm。作为对照，使用了参考抗体(fab或igg，取决于样品形式)和测定缓冲液。以30μl/孔添加样品和对照，并在微量滴定板振荡器上于室温孵育3小时。将板洗涤三次并每孔添加30μl检测抗体(ecl标记的抗人fab)并在微量滴定板振荡器(约500rpm)上孵育一小时。在洗涤msd板并添加35μl/孔msd读数缓冲液t和表面活性剂后，使用sector imager 6000(meso scale discovery公司；盖瑟斯堡，马里兰州，美国)检测电化学发光信号。为了评估，将特定蛋白质上的抗体样品的信号除以参考mab的对应信号，得到结合比(br)。然后计算除对照之外的所有蛋白质(总共25个)的累积结合比(cbr)：高达150的cbr代表没有可检测的非特异性结合的抗体或其片段。上述值表示与参考mab相比具有增加的非特异性结合的抗体或其片段。
[0798]
表10：成熟候选物的概述
[0799]
成熟抗体亲本抗体成熟的cdrxx01ww01hcdr2xx02ww06hcdr2xx03ww03hcdr2xx04ww03lcdr3xx05ww06hcdr2xx06ww03lcdr3xx07ww03lcdr3xx08ww01hcdr2xx10ww06hcdr2xx12ww03lcdr3
[0800]
此外，通过elisa测试了这些克隆与以下抗原的结合：人npr1、组成型活性人npr1突变体(w74r)、大鼠npr1、人npr3(反向靶标)，每种都在存在和不存在anp和bsa的情况下。还通过流式细胞术分析了克隆在不存在和存在anp(100nm)的情况下与表达人npr1的cho k1细胞、以及与亲本cho k1细胞的结合。10个候选物的结合特性如图9和10所示。图11显示了这些候选物中的九个的anp竞争结果。
[0801]
xx01、xx03、xx04、xx06、xx07和xx12的负值表明这些抗体增强了对anp的结合。使用细胞cgmp产生测定分析10个候选物的功能活性，结果如图12所示。从亲本克隆ww06的功能数据可以预期，其衍生物xx02、xx05和xx10在igg形式下显示出弱至无功能活性，而在单价fabcys形式下具有很高的功能性。
[0802]
通过set kd测量确定单价fabcys形式的xx01-xx08、xx10和xx12的亲和力。相比于亲本克隆的亲和力(经由在另一个实验中确定的)，结果总结在表11中。ww01和ww03衍生物对人和大鼠npr1的亲和力提高了2300倍，而对npr1-anp复合物的亲和力仅略微提高了(最大5倍)。它们对hnpr1的亲和力在10和46nm之间，对hnpr1-anp复合物的亲和力在100和300pm之间。所有ww01和ww03后代均显示大鼠交叉反应性，其大鼠/人kd比率《5。ww06衍生物对人npr1和hnpr1-anp复合物的亲和力最大提高了8倍，kd值在1和5nm之间，但未观察到与大鼠npr1或大鼠npr1-anp复合物的结合。
[0803]
表11：亲本和成熟的候选物的亲和力
[0804][0805]
实例9：交叉克隆和ptm去除
[0806]
亲本克隆ww03在hcdr2中具有“dg”位点。大多数ww03衍生物(27个中有26个)在lcdr3中是多样化的。仅一种候选物(xx03)在hcdr2中多样化，包括在重链可变区的氨基酸位置54处将“dg”突变为“dk”(参见例如seq id no:122的位置54)。将功能性lcdr3多样化克隆的轻链与xx03的重链交叉克隆，以工程化这些克隆而不丧失功能性。此外，将“dg”至“dk”突变插入若干lcdr3多样化衍生物的原始重链中。表12显示了示例性交叉克隆和d54k工程化候选物的概述。
[0807]
表12：vl-vh交叉克隆和d54k工程化克隆(ww03衍生物)概述
[0808][0809]
交叉克隆(xx16)与原始克隆(xx06)和anp的示例性功能数据如图13所示。与它们的原始克隆相比，所有交叉克隆都具有相似甚至更好的功能活性。在体外研究中，xx16甚至具有与天然配体anp相当的最大cgmp浓度，所述研究分析了它们在hnpr1转化的cho细胞中的活性(见图14)。
[0810]
经由3p测定测试了交叉克隆和ptm去除的克隆的特异性。d54k工程化克隆xx13和xx14均显示出与几种抗原的非特异性结合，因此被取消，而没有交叉克隆显示出非特异性结合。结果显示在表13中。
[0811]
表13：xx15和xx16的体外功能数据
[0812][0813]
实例10：抗npr1抗体的晶体结构
[0814]
与hnpr1形成复合物的几个分子的晶体结构如下所述。
[0815]
对于fab03-ww03，ww03的fab构建体以每1个npr1分子2个fab分子的摩尔比复合到hnpr1(c264t)的胞外结构域。将复合物在冷室中孵育1小时，摇动，然后将其加载到缓冲液20mm hepes ph 7.4、100mm nacl中的superdex 200 16/60柱上。从小的聚集物峰和过量的fab中分离出复合蛋白，然后浓缩至19.8mg/ml。所述复合物在空间群p212121中结晶，并衍射至的分辨率。所述模型是使用与hnpr1结构和fab分子进行分子替换构建、在coot中迭代构建、并用buster精修到21.7％的rfree。
[0816]
对于fab06-ww06，ww06的fab构建体以每1个npr1分子2个fab分子的摩尔比复合到hnpr1(c264t)的胞外结构域。将复合物在冷室中孵育1小时，摇动，然后将其加载到缓冲液20mm hepes ph 7.4、100mm nacl中的superdex 200 16/60柱上。从小的聚集物峰和过量的fab中分离出复合蛋白，然后浓缩至大约20.0mg/ml。所述复合物在空间群p212121中结晶，并衍射至的分辨率。所述模型是使用与hnpr1结构和fab分子进行分子替换构建、在coot中迭代构建、并用buster精修到20.9％的rfree。
[0817]
对于fab16-xx16，xx16的fab构建体以每1个npr1分子2个fab分子的摩尔比复合到hnpr1(c264t)的胞外结构域。将复合物在冷室中孵育1小时，摇动，然后将其加载到缓冲液20mm hepes ph 7.4、100mm nacl中的superdex 200 16/60柱上。从小的聚集物峰和过量的fab中分离出复合蛋白，然后浓缩至大约20.0mg/ml。所述复合物在空间群p212121中结晶，并衍射至的分辨率。所述模型是使用与hnpr1结构和fab分子进行分子替换构建、在coot中迭代构建、并用buster精修到24.4％的rfree。
[0818]
与hnpr1复合的fab06的晶体结构如图15所示。图16显示了hnpr1 ecd的构象，就像与fab06复合一样；从图像中除去fab06以更清楚地揭示由fab结合诱导的hnpr1的构象。图15和16所示的结构解释了图6所示的fab和igg功能数据之间的差异。fab c末端相距180度，排除了跨越受体二聚体的单个igg。与anp复合的hnpr1-ecd的结构(也已确定为这项工作的一部分)在图17(左)中示出用于比较，而与hnpr1细胞外结构域复合的fab16(fab形式的xx16抗体)的晶体结构在右图中示出。与表达wt hnpr1的cho细胞相比，在表达hnpr1 w74r/c232t(组成型活性突变体)的cho细胞上进行测试时，ww06 fab的效力显著增强(cgmp产生)(图18，图a和b)，表明所述突变使npr1的头对头构象不稳定并促进抗体结合/受体活化。
[0819]
实例11：噬菌体文库淘选和筛选
[0820]
进行了六个淘选策略，这反映来自初始淘选的最成功策略或对这些针对具体作用方法的策略的修改。表14中详细总结了淘选策略。策略#2和#5与在初始
活动中进行的策略相同，并且被选中是因为所有五个初始功能候选物衍生自这些淘选策略。策略#3和#4是初始策略的变化形式，重点是hnpr1与表达hnpr1的细胞交替出现。此外，在策略#1和#6中，npr1的组成型活性突变体(w74r)被用作抗原。噬菌体展示载体pypdis中第三轮淘选的输出的细菌裂解物(bel)被直接用于初次和二次筛选。
[0821]
表14：淘选策略概述-[0822][0823]
分析第三轮淘选的输出与相关抗原和细胞系的结合。在不存在和存在anp、组成型活性hnpr1突变体(w74r)和反向靶标人hnpr3的情况下，在基于elisa的人npr1初次筛选中，筛选了368个克隆/子码(总共4416个克隆)。初步筛选产生810次命中，将其在二次筛选中相对于相关细胞系(在不存在和存在anp的情况下表达人npr1的cho-k1细胞，亲代cho-k1细胞)和大鼠npr1的结合进行了分析。考虑仅与npr1-anp复合物结合、良好的细胞结合和大鼠交叉反应性，总共择优选择了380个来自初次和二次筛选的克隆进行测序。vl和vh测序导致138个hcdr3唯一克隆，其具有不同的结合特性(表15)。这些克隆中有六个仅在anp存在下结合。
[0824]
表15：hcdr3唯一命中-的结合特性
[0825][0826]
由于衍生自初始淘选的候选物ww06在fabcys形式下相比于在igg形式下显著更具有活性，因此功能性筛选以fabcys形式而非igg形式进行。
[0832][0833]
亲和力在低nm至低μm范围内，并且很大程度上取决于anp的存在与否。七个功能候选物中有四个(yy01、yy02、yy03和yy04)在anp的存在下显示出显著改善的结合。yy05和yy07与anp竞争与npr1的结合，并且在不存在anp的情况下显示出更高的亲和力。yy06的亲和力独立于anp。一些候选物表现出与参考流通池的非特异性结合，而另一些候选物具有如此高的亲和力，以至于其kd值接近测定极限。yy01、yy02、yy03和yy04共享一个表位箱，其与来自初始活动的ww03相同。yy05和yy07共享另一个表位箱，其与来自初始活动的ww06相同。yy06结合至单个表位箱。
[0834]
实例12：重新格式化为igg-[0835]
通过使用两种生物素化引物扩增fab编码插入物，将来自fabcys载体的候选物亚克隆到igg1_lala载体中以在哺乳动物细胞中表达。将扩增的产物结合在链霉亲和素珠上，使用限制酶消化，并洗涤，从而将纯化的插入物释放到上清液中。将插入物克隆到受体载体中，转化dna，并通过菌落pcr和测序对单个克隆进行质量控制。
[0836]
选择五个候选物用于亲和力成熟。yy01和yy04使npr1-anp复合物稳定，yy06以独立于anp的方式起作用，而yy05和yy07具有anp竞争性。结合数据(elisa、流式细胞仪、anp竞争)、功能数据(cgmp测定)、亲和力和表位箱如表17所示。
[0837]
表17.igg形式的yy01、yy04、yy08、yy06和yy07的亲和力、表位和cgmp数据概述
[0838][0839]
实例13：成熟文库的生成
[0840]
为了提高亲和力和生物活性，并减少选择的抗体候选物的非特异性，将lcdr3和hcdr1/hcdr2区使用多元化成熟模块(ymm)并行优化，所述模块预先用技术生产(van den brulle等人(2008):a novel solid phase technology for high-throughput gene synthesis[用于高通量基因合成的新型固相技术]；biotechniques[生物技术]45(3),第340-343页，将其内容特此通过引用并入本文)。
[0841]
在编码亲本fab片段的载体中进行成熟文库的克隆。针对五种亲本抗体(yy01、yy04、yy05、yy06和yy07)进行成熟库的生成。对于文库的生成，所有成熟候选者均经过单独处理。成功克隆了成熟文库，并且文库大小在6.2x108和4.5x109cfu之间。
[0842]
为了监测克隆效率，在插入多样化ymm之前，将亲本hcdr1/2和lcdr3替换为mbp填充物。将消化的载体片段与2倍摩尔过量的带有多样化hcdr1/2或lcdr3的插入物片段连接。将连接混合物电穿孔到大肠杆菌细胞中，产生》108个独立菌落。如文献所述进行文库扩增(tiller等人(2013):a fully synthetic human fab antibody library based on fixed vh/vl framework pairings with favorable biophysical properties[基于具有良好生物物理特性的固定vh/vl构架对的全合成人fab抗体文库]；mabs 5(3),第445-470页，将其内容特此通过引用并入本文)。针对质量控制，随机挑选每个文库中大约10-20个单一菌落并测序。
[0843]
实例14：淘选和筛选-[0844]
九个成熟文库用于四种不同的成熟淘选策略，与亲本克隆相比，所述策略旨在富集具有改善的亲和力的后代。此外，在适当的情况下包括大鼠材料，并且在涉及抗原浓度和洗涤条件的严格条件下进行淘选。在淘选过程中，将yy01和yy04(仅lcdr3)以及yy05和yy07的文库合并，而将yy06的文库分开保存。表18中详细总结了淘选策略。将第三轮淘选后的输出的细菌裂解物(bel)直接用于基于elisa的预筛选和set筛选。
[0845]
表18：成熟淘选策略概述
[0846][0847]
将第三轮淘选的输出用于基于elisa的预筛选，以确保仅选择与npr1和/或npr1-anp复合物结合的克隆以进行进一步的溶液平衡滴定(set)筛选。与亲本克隆相比，在set筛选中分析了总共880个克隆对hnpr1和/或hnpr1-anp复合物的改善的亲和力。
[0848]
在set筛选过程中，鉴定出263个hcdr1//2或lcdr3唯一改善的衍生物，测序和转化为igg1_lala形式后，产生了112个唯一克隆。与亲本克隆相比，yy05和yy07衍生物对npr1的亲和力没有改善，但对npr1-anp复合物的亲和力却提高了200倍。yy01的衍生物与亲本克隆yy04的亲和力相似，亲本克隆yy04的衍生物的亲和力仅略有提高。yy06衍生物对npr1的亲和力提高了4到40倍，对npr1-anp复合物的亲和力提高了7到70倍。参见图24(显示对hnpr1具有亲和力)和图25(显示对hnpr1-anp复合物具有亲和力)。亲和力(kd[pm])在两个图的亲本克隆名称下方的x轴上表示。
[0849]
实例15：成熟候选物-的表征
[0850]
在112个改善的候选物中，有95个被选择用于进阶生产。95个克隆中有77个通过了生产质量控制，并针对与相关抗原的结合、与相关细胞系的结合、以及cgmp生产中的功能活性(与它们的亲本克隆进行比较)进行了表征。在对igg进行详细的表征后，选择了17种候选物(详见表19)，以探索性规模igg生产进行生成，并经由3p测定进行进一步分析。此外，将它们转换为fabcys形式，以经由set kd测量在不存在和存在anp的情况下确定其对人和大鼠npr1的亲和力。
[0851]
表19：成熟候选物的概述
[0852][0853][0854]
对于所述成熟候选物(以单价fabcys形式)中的16种的亲和力经由set测量和/或经由octet来确定。与亲本克隆的亲和力相比，结果总结在下表20和21中。
[0855]
表20：fabcys形式的yy01、yy06、zz12、zz13、zz15、zz16和zz17的亲和力数据(set)的概述
[0856][0857]
表21：fabcys形式的yy01、yy06、zz12、zz13、zz15、zz16和zz17的亲和力数据(octet)的概述
[0858][0859][0860]
实例16：anp竞争性和anp非竞争性激动剂抗体的表位测定
[0861]
将hnpr1和xx16 fab复合物的晶体结构用于鉴定hnpr1上的xx16 fab表位。xx16 fab在hnpr1上的相互作用表面由表22中详述的若干连续和不连续(即非连续)序列形成。这些残基形成由xx16 fab识别的三维构象表位。
[0862]
表22中显示了xx16 fab(anp非竞争性)的表位作图结果。将hnpr1残基基于seq id no:1(p16066)进行编号。将fab残基基于其线性氨基酸序列进行编号。所示的hnpr1残基在xx16 fab中的原子的内具有至少一个原子，以解释潜在的水介导的相互作用。
[0863]
表22.xx16 fab的表位作图
[0864]
[0865]
[0866][0867]
使用结构分析和亲和力成熟数据确定的用于结合xx16 fab和npr1的关键表位残基包括(第一级)99-103、105-111、131-133、378；和(第二级)：33-34、76、82、104、374-375。npr1(seq id no:1)的氨基酸99-103既包含e106骨架(使d54k在hcdr2中实现亲和力成熟)，又包含来自两个钳夹hcdr3的y101的npr1原聚体的w106。某些关键表位残基显示在下表23中。包含这些关键残基的npr1区域包括n34、w76、l82、v102-a111、h131-v134和v374-e378。
[0868]
表23.xx16 fab(anp非竞争性)的关键表位残基
[0869][0870]
将hnpr1和ww03 fab复合物的晶体结构用于鉴定hnpr1上的ww03 fab表位。ww03 fab在hnpr1上的相互作用表面由表24中详述的若干连续和不连续(即非连续)序列形成。这些残基形成由ww03 fab识别的三维构象表位。
[0871]
表24中显示了ww03 fab(anp非竞争性)的表位作图结果。将hnpr1残基基于seq id no:1(p16066)进行编号。将fab残基基于其线性氨基酸序列进行编号。所示的hnpr1残基在ww03 fab中的原子的内具有至少一个原子，以解释潜在的水介导的相互作用。
[0872]
表24.ww03 fab的表位作图
[0873]
[0874]
[0875][0876]
使用结构分析和亲和力成熟数据确定的ww03 fab和npr1结合的关键表位残基包括表25中所示的残基。包含这些关键残基的npr1区包括r79、l82、l99-a111、h131-v134和v374-t375。
[0877]
表25.ww03 fab(anp非竞争性)的关键表位残基
[0878]
[0879][0880]
将hnpr1和ww06 fab复合物的晶体结构用于鉴定hnpr1上的ww06 fab表位。ww06 fab在hnpr1上的相互作用表面由表26中详述的若干连续和不连续(即非连续)序列形成。这些残基形成由ww06 fab识别的三维构象表位。
[0881]
表26中显示了ww06 fab(anp竞争性)的表位作图结果。将hnpr1残基基于seq id no:1(p16066)进行编号。将ww06 fab残基基于其线性氨基酸序列进行编号。所示的hnpr1残基在ww06 fab中的原子的内具有至少一个原子，以解释潜在的水介导的相互作用。
[0882]
表26.ww06 fab(anp竞争性)的表位作图
[0883]
[0884]
[0885][0886]
使用结构分析和亲和力成熟数据确定的ww06和npr1结合的关键表位残基包括表27中所示的残基。包含这些关键残基的npr1区域包括y188-f198、e201-r208、v215-k238和r294-g297。
[0887]
表27.ww06(anp竞争性)的关键表位残基
[0888][0889]
实例17：小鼠体内表征ww06对血浆cgmp的影响
[0890]
将ww06 fabcys用于hnpr1转基因小鼠的体内研究中，以确定该抗体对体内血浆cgmp水平的影响。
[0891]
对于血浆cgmp样品的分析，使用
15
n2、
13
c cgmp作为内标采取以下文献的lc-ms/ms检测方法：oeckl和ferger,journal of neuroscience methods[神经科学方法杂志]203(2012)338-343；和zhang等人,j.chromatogr b:analyt technol biomed life sci[色谱杂志b：生物医学和生命科学中的分析技术]2009；877:513-20；将其各自的内容特此通过引用并入本文)。
[0892]
静脉内施用ww06 fab的hnpr1 tg小鼠的血浆cgmp浓度在5分钟的时间点增加，信号在3小时后恢复到基线。如预期的并且与图26和27中所示的数据一致，fabcys抗体的t
1/2
《30min。显示的每个值是从三只单独的动物收集的三个点的平均值。剂量应答数据如图26所示，以及pk数据如图27所示。
[0893]
实例18：xx16对anp ko和wt小鼠心脏重量和nt-probnp的影响
[0894]
将xx16用于体内研究，以确定其对anp敲除(ko)和野生型(wt)小鼠的心脏重量和nt-probnp水平的影响。
[0895]
anp敲除小鼠患有高血压和心脏肥大(hw/bw比率增加)。nt-probnp是心脏功能障碍的生物标志物。在anp敲除和野生型小鼠中，每两周一次以0.3或3mg/kg的剂量皮下注射xx16，持续四周。
[0896]
图28中示出了结果。在第二次治疗后两周，与媒介物治疗的动物相比，xx16剂量依赖性地降低了野生型和anp ko小鼠的心脏重量/体重比率和nt-probnp。
[0897]
实例19：xx16对高血压大鼠的血压和尿流率的急性影响
[0898]
将xx16用于确定其对高血压大鼠(易卒中型自发性高血压大鼠，shrsp)的血压和尿流率的影响。静脉内(一次)给动物施用0.3mg/kg xx16、1mg/kg xx16或媒介物对照。使用股动脉导管测量血压。在静脉内施用后三小时进行测量，结果示于图29。
[0899]
与媒介物治疗的动物相比，静脉内xx16治疗可使高血压大鼠(shrsp)的平均动脉压正常化、尿流率急剧增加。
[0900]
实例20：xx16对wistar-han大鼠血压和血浆cgmp的慢性影响
[0901]
评估了遥测植入正常大鼠中xx16的慢性血液动力学效应。皮下施用xx16(以0.1、0.3、1、3、10和30mg/kg的剂量)。图30中示出了结果。皮下施用xx16可以降低除0.1mg/kg组以外的所有组的平均动脉压(map)。map降低有一个底线(约95mmhg)。观察到返回基线map的时间的剂量依赖性效应；对于30mg/kg的治疗组，这种效应大于70天。血浆cgmp浓度具有大约90nmol/l左右的上限，此后血浆cgmp逐渐降低至基线。这种效果与血压应答非常相似。
[0902]
实例21：现有抗npr1抗体与本技术抗体的比较
[0903]
就两种抗体在表达hnpr1的人细胞或表达rnpr1的大鼠细胞中(分别地，均在存在或不存在0.075nm人或大鼠anp的情况下)产生cgmp的能力而言，将ww03抗体与pct申请号wo 2010/065293 a1的抗体5591-igg进行了比较。在两种细胞系中都不存在anp的情况下，ww03抗体显示出优异的增强作用。此外，ww03抗体在表达rnpr1的大鼠细胞(无论是否存在anp)上均表现出优异的增强作用。
[0904]
总之，先前的抗体(例如wo 2010/065293的那些，包括5591-igg)在体内没有表现出活性(例如通过使用cgmp测定分析活化)。相反，本技术的抗体在小鼠和大鼠中均表现出体内活性。此外，已使用晶体结构数据证明本文所述抗体的表位结合与wo 2010/065293的抗体不同。本文所述的活性、交叉反应性和晶体学数据证明，与先前的抗体相比，本技术中描述的抗体具有不同且优越的作用。