用于治疗非感染性眼部免疫炎性病症的治疗方法与流程

redness)。在某些实施方案中，非ded相关的眼部红肿为非过敏性眼部红肿(non-allergicocularredness)。13.在某些实施方案中，调控调节性t(treg)细胞活性或功能的方法包括向有此需要的受试者给药一种药物组合物，该药物组合物包含治疗有效量的物质p(sp)阻断剂、sp拮抗剂、sp受体阻断剂、sp受体拮抗或其组合作为活性组分。在某些实施方案中，sp信号传导阻断诱导剂为选自sp阻断剂、sp拮抗剂、sp受体阻断剂和sp受体拮抗剂。在某些实施方案中，sp受体为nk1r(seqidno:1)。14.正在遭受眼部免疫炎性疾病例如treg相关的眼部病症的受试者可能遭受一种或多种症状。在某些实施方案中，减轻受试者的非感染性眼部免疫炎性病症的症状的方法包括向患有treg相关眼部病症的受试者给药一种组合物，该组合物包含治疗有效量的sp信号传导阻断诱导剂。在某些实施方案中，treg相关的眼部病症为选自干眼症(ded)、非ded相关的眼部红肿、过敏性结膜炎和眼痛中的一种。此类症状的非限制性示例包括眼睛内好像有一些东西的砂质(sandy)或砂砾(gritty)感(例如，受试者自述)、眼睛发干(eyedryness)、眼皮发沉(heavyeyelids)、刺痛(stinging)、瘙痒(itching)、灼痛(burning)、刺激性(irritation)、疼痛(pain)、红肿(redness)、炎症(inflammation)、分泌物(discharge)、当处于情绪压力下时无法哭泣、眼睛疲劳(eyefatigue)、视力模糊(blurredvision)或眼泪过多(excessivewatering)；并且其中，该方法抑制或减轻眼睛内好像有一些东西的砂质或砂砾感(例如，受试者自述)、眼睛发干、眼皮发沉、刺痛、瘙痒、灼痛、刺激性、疼痛、红肿、炎症、分泌物、当处于情绪压力下时无法哭泣、眼睛疲劳、视力模糊或眼泪过多的严重程度。在实施方案中，本文所述的方法可包括鉴定具有一种或多种这些症状的受试者。15.本文主旨的多种实施涉及治疗眼部免疫炎性病症，该病症为抗原呈递细胞和th17细胞所介导的眼部免疫炎性病症。在某些实施方案中，th17细胞介导的眼部免疫炎性病症为干眼症(ded)。16.本文例示的组合物包含一种或多种nk1r拮抗剂。17.在这些和其他实施方案中，nk1r拮抗剂包含nk1r的小分子拮抗剂、中和性抗nk1r抗体、针对物质p(sp)的阻断性融合蛋白、抗sp抗体、核酸或多肽(例如，抗体或可溶性肽，诸如后提的细胞外结构域或其配体结合部分)。18.在某些实施方案中，nk1r拮抗剂为小分子。小分子是质量小于2000道尔顿(daltons)的化合物。小分子的分子质量优选小于1000道尔顿，更优选小于600道尔顿，如该化合物的分子质量小于500道尔顿、400道尔顿、300道尔顿、200道尔顿或100道尔顿。小分子可以是例如有机的或无机的。例示性的有机小分子包括，但不限于，脂肪族烃、醇、醛、酮、有机酸、酯、单糖、二糖、芳香烃、氨基酸和脂质。例示性的无机小分子包含微量矿物质、离子、自由基和代谢物。另选地，小分子抑制剂可经合成性地工程化，以由片段、或小部分、或更长氨基酸链组成，以填充酶的结合袋。典型的小分子小于一千道尔顿。19.在某些实施方案中，药物组合物包含nk1r拮抗剂。例如，nk1r肽拮抗剂包含spantide(rpkpqqwfwll；seqidno:2)。在一些实施例中，nk1r拮抗剂为化学化合物，例如，小分子拮抗剂。示例性nk1r小分子拮抗剂如下所示。[0020][0021](2s,3s)-n-[(2-甲氧基苯基)甲基]-2-苯基-3-哌啶胺二盐酸盐，[0022][0023](2s,3s)-3-[[3,5-双(三氟甲基)苯基]甲氧基]-2-苯基哌啶盐酸盐，[0024][0025]5-[[(2r,3s)-2-[(1r)-1-[3,5-双(三氟甲基)苯基]乙氧基]-3-(4-氟苯基)-4-吗啉基]甲基]-1,2-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮，[0026][0027](2s,3s)-n-[[2-甲氧基-5-(三氟甲氧基)苯基]甲基]-2-苯基-3-哌啶胺二盐酸盐，[0028][0029](2s,3s)-n-(2-甲氧基苯基)甲基-2-二苯基甲基-1-氮杂双环[2.2.2]辛烷-3-胺，[0030][0031](4r)-4-羟基-1-[(1-甲基-1h-吲哚-3-基)羰基]-l-脯氨酰基-n-甲基-3-(2-萘基)-n-(苯基甲基)-l-丙氨酰胺，[0032][0033](2s,3s)-n-[[2-甲氧基-5-(1h-四唑-1-基)苯基]甲基]-2-苯基-3-哌啶胺二盐酸盐，[0034][0035]gr82334，[0036][0037]5-[[(2r,3s)-2-[(1r)-1-[3,5-双(三氟甲基)苯基]乙氧基]-3-(4-氟苯基)-4-吗啉基]甲基-n,n-二甲基-1h-1,2,3-三唑-4-甲胺盐酸盐，[0038][0039]n-乙酰基-l-色氨酸3,5-双(三氟甲基)苄酯，[0040][0041](3ar,7ar)-八氢-2-[1-亚胺基-2-(2-甲氧基苯基)乙基]-7,7-二苯基-4h-异吲哚，[0042][0043]1-[[(2-硝基苯基)氨基]羰基]-l-脯氨酰基-n-甲基-3-(2-萘基)-n-(苯基甲基)-l-丙氨酰胺，[0044][0045]1-[2-[(3s)-3-(3,4-二氯苯基)-1-[2-[3-(1-甲基乙氧基)苯基]乙酰基]-3-哌啶基]乙基]-4-苯基-1-氮阳离子双环[2.2.2]辛烷氯化物，或其组合。[0046]在某些实施方案中，药物组合物包含nk1r拮抗剂。在某些实施方案中，该nk1r拮抗剂为选自非旋光性(achiral)吡啶类神经激肽-1受体拮抗剂、奈妥匹坦(netupitant)21、贝图匹坦(betctupitant)29、埃尔罗匹坦(elzlopitant)、拉奈匹坦(lanepitant)、奥沙奈坦(osanetant)、他尔奈坦(talnetant)、gr205171、mk0517、mk517、men11467、奈帕坦特(nepadutant)、men11420、m274773、[sar(9),met(02)(11)]-物质p、tyr(6),d-phe(7),d-his(9)-物质-p(6-11)(sendide)、(β-ala(8))-神经激肽a(4-10)、(tyr(5),d-trp(6,8,9),lys-nh(2)(10))-神经激肽a、[d-proz,d-trip7,9]-spdpdt-sp、[d-proz,d-phe7,d-trp9]-sp、sr48968和4-烷基哌啶衍生物、泰尔奈坦(telnetant)、sb223412、sb223412a、泰尔奈坦盐酸盐、mdl103392、磷酸化吗啉缩醛人神经激肽-1受体激动剂、sdznkt343、ly303870、ym-35375和螺环-经取代的哌啶类ym-44778、ym-38336、septide、l732,13、放线菌素(dactinomyan)类似物、men10207、l659874、l668,169、fr113680和衍生物、gr83074、三肽类possersi，谷氨酰胺酰基-d-色氨酰基苯丙氨酸序列、l659,877、r396、咪唑并[4,5-b]喹噁啉花青素类(cyonines)作为神经激肽拮抗剂、men10208、dpdtp-octa、gr73632、gr64349、senktide、gr71251、[d-arg1,d-pro2,d-trp7,9,leu11]-sp(1-11)、acheu-asp-gln-trp-phe-glynh2、thr-asp-tyr-d-tvp-val-d-trp-d-trp-argnh2、环[eln-trp-phe-gly-leu-met]、d-pro2d-trp7,9、d-arg1d-trp7,9leu11、[gly6]-nkb[3-10]、[arg3,d-ala6]-nkb[3-10]、cp-9634、3-氨基喹啉啶、cp-99994、s18525、s19752、4-喹啉甲酰亚胺fremincik类、cp-122721、mk-869、gr205171、spantideii、cp-96,345、l703,606、sr140,dnk333、2-苯基-4-喹啉甲酰亚胺类、fk224、fr115224、fk888、zm253270-吡咯并嘧啶类的九肽神经激肽拮抗剂、gr71251、gr82334、rp67580、人神经激肽的二酰基哌嗪类拮抗剂，例如l-161664、rp67580、men10376、gr98400、n2-[n2-(1h-吲哚-3-基羰基)-l-赖氨酰基]-n-甲基-n-(苯基-甲基)-l-苯丙氨酰胺(2b)、sp-(1-11)、sp-(6-11)、sp-(4-11)win51703、spantideii、spantideiii、spantidei、阿瑞匹坦(aprepitant)、l754030、mk0869、ono-7436、ono7436、men13510、1-[2-(r)-{1-1r)-[3,5-双(三氟甲基)苯基]乙氧基}-3-(r)-(3,4-二氟苯基)-4-(r)-四氢-2h-吡喃-4-基甲基]-3-(r)-甲基哌啶-3-计算(1)、ly306,740、slv-323、2-经取代-4-芳基-6,7,8,9-四氢-5h-嘧啶并[4,5-b][1,5]噁唑啉-5-酮、9-经取代-7-芳基-3,4,5,6-四氢-2h-吡啶并[4,3-b]-和[2,3-b]-1,5-噁唑啉-6-酮、sr142801、sb222200、cp96345、sr48968、埃罗匹坦(ezlopitant)、cj11974、men11558、[18f]spa-rq、奈罗匹坦(neuropitant)21、贝图匹坦(betupitant)29、sr144190、sr48692、sr141716、l733060、沃佛匹坦(vofopitant)、r-673、奈帕坦特(nepadutant)、沙瑞度坦(saredutant)、uk290795、2-(4-联苯基)喹啉-4-甲酸酯和甲酰胺类似物(神经激肽-3受体拮抗剂)、4-氨基-2-(芳基)-丁基苯甲酰胺和类似物、mk-869、l742694、cp122721、1-烷基-5-(3,4-二氯苯基)-5-[2-[(3-经取代)-1-氮杂环丁烷基]乙基]-2-哌啶类、l760735、l758,298,cbz-gly-leu-trp-0bzl(cf(3))(2)、l733,061、sr144190、sb235375、n‑‑[(r,r)-(e)-1-芳基甲基-3-(2-氧代-氮杂环庚烷-3-基)氨基甲酰基]烯丙基-n-甲基-3,5-双(三氟甲基)苯甲酰胺、3-[n1-3,5-双(三氟甲基)苯甲酰基-n-芳基甲基-n1-甲基肼基]-n-[(r)-2-氧代-氮杂环庚烷-3-基]丙酰胺类、sr142806、sr48,968、cp141,938、ly306740、sb40023、sb414240、诺匹坦铵(nolpitantium)、sr140333、全氢异吲哚rp67580，德匹坦(depitant)、rpr100893、拉奈匹坦(lanepitant)、ly-303870、赛诺菲圣德拉堡(sanotisynthelabo)、诺匹坦铵、sr140333、sr48968、沙韦杜坦(savedutant)、av608、av-608,av608、cgp60829、nk-608、nkp-608c、nkp608、cs003、r113281、维替匹坦(vestipitant)、597599、gw597599、gw597599b、ssr240600、卡索匹坦(casopitant)、679769、gw679769、ta5538、ssr146977、slv317、slv-317、823296、gw823296、ave5883、ave-5883、az311、sb235375、sb733210、az685、sar102279、sar10279、ssr241586、slv332、神经激肽2拮抗剂-solvay、slv-332、slv332,nik616、mpv4505、nik616、mpc4505、z501、z-501、1tak637、cp96345、l659877、cgp49823、gr203040、l732138、s16474、win51708、zd7944、s18523、ci1021、pd154075、758298、zd4974、s18920、hmr2091、fk355、sch205528、nk5807、nip531、sch62373、uk224671、men10627、win64821、mdl105212a、men10573、tac363、1men11149、hsp117、nip530、azd5106或其组合。[0047]在某些实施方案中，nk1r拮抗剂包含cp-99,994、l-733,060或spantide。[0048]在某些实施方案中，nk1r拮抗剂为核酸分子。核酸分子的非限制性示例包括rna干扰诱导(rnai)分子(例如，sirna、shrna、mirna、snorna)、反义寡核苷酸、适体(例如，dna适体和rna适体)。在某些实施方案中，核酸为选自适体、小干扰rna、microrna、小发夹rna(smallhairpinrna)和反义核酸中的一种。[0049]本主旨的组合物可以配制为多种形式。在多种实施方案中，组合物为固体、软膏(ointment)、凝胶(gel)、液体、气溶胶(aerosol)、喷雾(mist)、聚合物、隐形眼镜(contactlens)、膜、乳液(emulsion)或悬浮液的形式。在一些实施方案中，组合物外用给药。在优选实施方案中，治疗不包括全身性给药或大量散布到非眼部组织。[0050]在这些和其他实施方案中，组合物通过外用给药(topicaladministration)、结膜下给药(subconjunctivaladministration)或玻璃体内给药(intravitrealadministration)而给药至受试者。在某些实施方案中，包含一种或多种nk1r拮抗剂的组合物经皮下给药，以减轻与眼部疾病例如角膜神经痛有关的疼痛或进行疼痛管理。组合物可以皮下注射到眼周区域，例如，前额、眼睑等。例如，将nk1r拮抗剂经皮下注射到与眼周相距0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0cm处。用于皮下给药的剂量和时间表可以类似于针对外用给药所述者或者频率更低(如针对疼痛管理所指示)。对于皮下给药至眼睑或前额的皮肤以进行疼痛管理，例如用于被诊断为患有或正在遭受水痘带状疱疹/带状疱疹和正在遭受慢性疼痛和红肿的那些人，将nk1r拮抗剂每周给药一至三次，持续大约一至两个月的一段时间，或持续与该疾病相关的疼痛的持续时间。[0051]在某些实施方案中，组合物每天至少一次外用给药至所述受试者。在某些实施方案中，组合物每天至少两次外用给药至所述受试者。在某些实施方案中，组合物每天至少三次外用给药至所述受试者。在某些实施方案中，组合物经眼部给药至所述受试者。在某些实施方案中，组合物与第二疗法或第二药物联合一起给药至受试者。[0052]在某些实施方案中，药物组合物包含sp阻断剂、sp拮抗剂、sp受体阻断剂、sp受体拮抗剂或其组合作为活性组分和药学可接受的载体。[0053]在多种实施方案中，与对照中的表达或活性水平相比，被抑制或被拮抗的sp及/或nk1r的表达或活性降低了约10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、99％或更多。在一些实施方案中，被抑制的表达或活性为对照中的表达或活性水平的约10％至约25％、约10％至约50％、约10％至约75％、约1％至约50％、约1％至约25％、约25％至约50％,50％至约75％之间，或为0.5％至99％之间的任何其他范围。[0054]在这些和其他实施方案中，在给药抑制剂之后约5、15、30或60分钟内，或者1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14天内，眼部免疫炎性病症的症状得到减轻。在一些实施方案中，组合物被给药至受试者的眼睛，给药频率为每天少于1、2、3、4、5或6次，每周约1、2、3、4、5、6或7次，或每天一次。在某些实施方案中，组合物由受试者给药(即，自己给药)或由医师给药。本主旨的多个方面提供用于治疗罹患眼部免疫炎性病症的受试者的方法。此类方法包括将组合物局部地给药至受试者的眼睛，该组合物具有有效量的nk1r拮抗剂，从而治疗该受试者。[0055]本公开的多个方面也提供包含组合物的隐形眼镜，该组合物包含有效量的nk1r及/或sp拮抗剂。该组合物掺入镜片中或涂覆在镜片上。也提供包括聚合物和生物活性组合物的装置，该生物活性组合物具有有效量的nk1r及/或sp拮抗剂。在多种实施方案中，该装置用于递送至眼部组织中或上。例如，该装置接触眼部组织。在某些实施方案中，此类装置被植入或诸如眼部组织或流体腔中。本发明的多个方面进一步提供组合物，该组合物包含处于眼科可接受的媒介物中的有效量的nk1r及/或sp拮抗剂或抑制剂。[0056]在某些实施方案中，滴眼液组合物包含治疗有效量的nk1r拮抗剂和药学可接受的载体。在某些实施方案中，组合物处于适用于将组合物液滴给药至受试者眼睛的分配器内。在某些实施方案中，组合物具有约200(含)至约400(含)之间毫渗摩尔/千克(milliosmoles/kilogram)的摩尔渗透压浓度(osmolarity)和约6.5(含)至约7.5(含)的ph。[0057]在某些实施方案中，组合物包含针对nk1r及/或sp的以及针对nk1r/sp相互作用的中和性或功能阻断性抗体。中和性或功能阻断性可以是经亲和纯化的多克隆抗体的重构或人源化衍生物或与经亲和纯化的多克隆抗体的表位结合。[0058]用于抑制或减轻眼部免疫炎性疾病的严重性的示例性方可以通过将组合物局部地给药至受试者眼睛而实施，该组合物包含多核苷酸、多肽、抗体、化合物或小分子，其抑制或修饰编码nk1r或sp及/或nk1r或sp的任何组分的多核苷酸或多肽的转录、转录物稳定性、翻译、修饰、定位、分泌、相互作用、结合或功能。[0059]在多种实施方案中，组合物包含核糖酶、反以寡核苷酸(诸如吗啉代)、microrna(mirna)、短发夹rna(shrna)或短干扰rna(sirna)以减少或静默基因表达。[0060]在某些实施方案中，组合物可包含与nk1r或sp结合的胞内抗体。或者或此外，组合物可以包含sp的可溶片段或其模拟物，其结合nk1r但不诱导信号传导。示例性多肽包括但不限于，能够中断sp/nk1r功能的融合蛋白及/或嵌合蛋白。[0061]在一些实施方案中，靶向nk1r或sp的功能阻断性抗体为单克隆抗体或多克隆抗体。抗体包括与nk1r受体多肽内的一个或多个序列结合的那些。在某些实施方案中，抗体为胞内抗体。在一些实施方案中，抗体包括单链单体、人源化抗体、重组抗体或嵌合抗体。[0062]在某些实施方案中，nk1r拮抗剂与第二治疗剂或治疗联合给药。nk1r拮抗剂与第二组合物同时或依次给药，该第二组合物包含以下一者或多者：抗生素、免疫抑制组合物(immunosuppressivecomposition)、抗炎组合物(anti-inflammatorycomposition)、生长因子、类固醇、趋化因子(chemokine)或趋化因子受体(chemokinereceptor)。[0063]其他实施方案在下文描述。[0064]本文中揭露的各实施方案预期可用于所揭露的其他各实施方案中。因此，本文中揭示的各种元素的全部组合均处于本发明的范畴内。[0065]一般定义[0066]除非另做定义，否则本文中使用的所有科技术语均具有与本发明所属领域(例如，细胞培养、分子遗传学和生物化学领域)技术人员所一般理解的相同的意义。[0067]本文中，除非预警中明确排除，否则单数形式“一”和“该”包括复数个对象。因此，例如，对“疾病”、“疾病状态”或“核酸”的描述是参考一个或多个此类实施方案的，且包括该领域技术人员所知的等效物等等。[0068]本文中，数值或范围语境中的术语“约”意为所引用或主张的数值或范围的±10％，除非该语境需要更为受限的范围。除非另做指示，否则说明书和权利要求书中使用的表达量、尺寸、维度、比例、形状、制剂、参数、百分比、参数、数量、特征和其他数字值的全部数字理解为在全部情况下均以术语“约”修饰，即使术语“约”可能无法明确地与该值、量或范围一起出现。据此，除非指示为相反，否则下文说明书和所附权利要求书中详述的数字参数不是也不必是确切的，而可以根据需要是近似的及/或更大或更小的，反映公差、转化系数、舍入、测量误差等，以及本领域技术人员已知的其他因素，取决于本公开主旨寻求获得的期望特性。例如，当指的是值时，术语“约”可能意味着涵盖相对于所指明的量的变动，该变动在一些实施方案中为±100％，在一些实施方案中为±50％，在一些实施方案中为±20％，在一些实施方案中为±10％，在一些实施方案中为±5％，在一些实施方案中为±1％，在一些实施方案中为±0.5％，且在一些实施方案中为±0.1％，因为这样的变动适合于执行所公开的方法或采用所公开的组合物。[0069]再者，当与一个或多个数字或数字范围联用时，术语“约”应理解为是指全部此类数字，包括范围内的全部数字，并通过将边界延伸到高于和低于所述数字值而修饰该范围。通过端点对数字范围进行引用包括被归入该范围内的全部数字，例如，完整的整数，包括其分数(例如，对1至5的引用包括1、2、3、4和5，也包括其分数，例如1.5、2.25、3.75、4.1等)以及该范围内的任何范围。[0070]如本文所用，术语“适体(aptamer(s))”或“适体序列(aptamersequence(s))”意指单链核酸(rna或dna)，其不同的核苷酸序列决定了该分子折叠为独特的三维结构。包含15至120个核苷酸的适体可以在体外从寡核苷酸的随机池(1014-1015个分子)中选择。与预先选择的包括蛋白质和肽的靶标以高亲和力和特异性结合的适体可以使用本领域已知的方法设计及/或选择。参见例如，cox,j.c.；ellington,a.d.(2001)bioorganic&medicinalchemistry9(10):2525–2531；cox,j.c.；hayhurst,a.；hesselberth,j.；bayer,t.s.；georgiou,g.；ellington,a.d.(2002)nucleicacidsresearch30(20):e108.；和neves,m.a.d.；o.reinstein；m.saad；p.e.johnson(2010)biophyschem153(1):9–16，其各自的完整内容通过引用并入本文。[0071]在上述说明书和权利要求书中，短语诸如“的至少一种”或“的一种或多种”可出现在一连串元件或特征之后。术语“及/或”也可出现在两个或更多个元件或特征的列举中。除非被其所应用的语境含蓄或明确地排除，否则这一短语试图意指所列举的元件或特征中的单独一个或任一所引用元件或特征与任一其他所应用元件或特征的组合。例如，短语“a和b中的至少一种”、“a和b中的一种或多种”、以及“a及/或b”各自试图意指“仅a、仅b、或a和b一起”。相似的解释也应用于包括三个或更多个项目的列举。例如，短语“a、b和c中的至少一种”、“a、b和c中的一种或多种”、以及“a、b及/或c”各自试图意指“仅a、仅b、仅c、a和b一起、a和c一起、b和c一起、或a和b和c一起”。此外，上文和权利要求书中术语“基于”的使用试图意指“至少部分地基于”，因此未引用的特征或元件也是允许的。[0072]如本文中所用，术语“联合疗法(combinationtherapy)”是指以下情况，在该情况下，将两种或更多种不同的药剂以重叠方案给药，使得受试者同时暴露于两种药剂。当在联合疗法中使用时，两种或更多种不同的药剂可同时或分开给药。这种联合给药可以包括两种或多种药剂在相同的剂型中同时给药，在分开的剂型中同时给药，和分开给药。换言之，两种或更多种药剂可一起配制在相同剂型中并且同时给药。替代性地，两种或更多种药剂可以同时给药，其中，这些药剂存在于分开的制剂中。作为另一种替代，第一种药剂可以给药，然后立即给药一种或多种额外药剂。在分开给药方案中，两种或更多种药剂可以相隔数分钟、或相关数小时、或相隔数天给药。[0073]“比较窗口”是指任意数量的连续位置的链段(例如，小于10至约、100、约20至约75、约30至约50、100至500、100至200、150至200、175至200、175至225、175至250、200至225、200至250)，在该比较窗口中，可以在将序列与相同数量的连续位置的参考序列进行最优对齐之后对两个序列进行比较。在多种实施方案中，比较窗口为两个对齐序列中的一个或两个的完整长度。在一些实施方案中，被比较的两个序列包含不同的长度，并且比较窗口是两个序列中较长或较短序列的完整长度。对齐序列以进行比较的方法是本领域中已知的。序列最优对齐以进行比较可以通过下列手段执行：例如，smith&waterman,adv.appl.math.2:482(1981)的局部用同源性算法；needleman&wunsch,j.mol.biol.48:443(1970)的同源性比对算法；pearson&lipman,proc.nat'l.acad.sci.usa85:2444(1988)的相似性检索方法；这些算法的计算机实现(wisconsingenetics软件包中的gap、bestfit、fasta和tfasta，geneticscomputergroup,575sciencedr.,madison,wis.)；或手动对齐和目视检查(参见例如，currentprotocolsinmolecularbiology(ausubeletal编，1995增订版))。[0074]在多种实施方案中，适用于确定百分比序列同一性和序列相似性的算法为blast算法和blast2.0算法，它们分别在altschuletal.,nuc.acidsres.25:3389-3402(1977)和altschuletal.,j.mol.biol.215:403-410(1990)中描述。可使用blast和blast2.0，使用本文所述的参数来确定核酸和蛋白质的百分比序列同一性。用于执行blast分析的软件可通过国家生物信息科技中心公开获得，如本领域中已知的。该算法包括首先通过鉴别查询序列长度w的短字来鉴定高得分序列对(hsp)，当将这些字与数据库序列中相同长度的字对齐时，这些字匹配或满足某个正值阈值得分t。t是指邻域字得分阈值(altschuletal，见上文)。这些初始邻域字点击充当启动搜索的种子，以找到含有它们的更长的hsp。将这些字点击在两个方向上沿着每个序列扩展，直到累计对齐得分可以增加为止。对于核苷酸序列，累计得分使用参数m(一对匹配残基的奖励得分，始终》0)和n(错配残基的惩罚得分，始终《0)计算。对于氨基酸序列，使用评分矩阵来计算累计得分。在以下情况下字点击停止在每个方向上的延伸：当累计对齐得分从其最大实现值减少数量x时；当累计得分由于一个或多个得分为负的残基对齐的蓄积而达到零或更低时；或当到达任一序列的末端时。blast算法参数w、t和x决定了该算法的灵敏度和速度。blastn程序(对于核苷酸序列)默认使用字长(w)为11，期望值(e)为10，m＝5，n＝-4，以及进行两条链的比较。对于氨基酸序列，blastp程序默认使用字长为3且期望值(e)为10；并且blosum62评分矩阵(参见henikoff&henikoff,proc.natl.acad.sci.usa89:10915(1989))算法(b)为50，期望值(e)为10，m＝5，n＝-4，并且进行两条链的比较。[0075]对于序列比较，典型地，一个序列充当参考序列，将测试序列与该参考序列进行比较。在多种实施方案中，当使用序列比较算法时，将测试序列和参考序列输入计算机，若必要，指定子序列坐标，并且指定序列算法程序参数。优选地，可使用默认程序参数，或者可指定替代性参数。随后，序列比较算法基于程序参数来计算测试序列相对于参考序列的序列同一性百分比。[0076]连词“包含(comprising)”与“包括(including)”、“含有(containing)”或“特征在于(characterizedby)”同义，是包含或开放性的，且并不排除额外的未引用的元件或方法步骤。相比之下，连词“由...组成(consistingof)”排除未在该主张中具体指出的任何元件、步骤或成分。连词“主要由...组成(consistingessentiallyof)”将所主张的范畴限制为具体的材料或步骤，以及“那些不在材料上影响本发明主张的基本特征和新颖特征的材料或步骤”。[0077]本文中，当称治疗化合物的量是“有效的(effective)”，则是指，当以本公开的模式使用时，该化合物的数量足以得到所希望的治疗性应答而没有过度的副作用(诸如毒性、刺激或过敏反应)，同时具有合理的效益/风险比。[0078]术语“增强(enhancement)”、“提高(enhancement)”、“提升(enhances)”、“升高(enhances)”是指所指定参数的增加(例如，至少约1.1倍、1.25倍、1.5倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、8倍、10倍、十二倍或甚至十五倍或更多的增加)及/或所指定的活性增加至少约5％、10％、25％、35％、40％、50％、60％、75％、80％、90％、95％、97％、98％、99％或100％。[0079]如本文中所用，术语“免疫细胞(immunecells)”通常包括源自骨髓中产生的造血干细胞(hsc)的白血球(白细胞)。“免疫细胞”包括，例如，淋巴细胞(t细胞、b细胞、天然杀手(nk)细胞)和髓系细胞(嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、单核细胞、巨噬细胞、树突细胞)。[0080]如本文中所用，术语“免疫效应细胞(immuneeffectorcell)”是指牵涉到免疫应答中的细胞，例如牵涉到促进免疫效应子应答中的细胞。免疫效应细胞的示例包括t细胞，例如，α/βt细胞和γ/δt细胞、b细胞、天然杀手(nk)细胞、天然杀手t(nk-t)细胞、肥大细胞和髓源性吞噬细胞。如该术语在本文中所用，“免疫效应子功能或免疫效应子应答”是指例如免疫效细胞增强或促进靶细胞的免疫攻击的功能或应答。例如，免疫效应子功能或应答是指t细胞或nk细胞促进杀伤靶细胞或抑制靶细胞生长或增殖的特性。在t细胞的情况下，主要刺激和共刺激为免疫效应子功能或应答的示例。[0081]在两个或更多个核酸或多核苷酸序列的语境中，术语“相同(identical)”或“同一性(identity)”百分比是指，当将两个或更多个序列或子序列进行比较或在比较窗口或指定区域内进行最大相关性对齐时，使用序列比较算法或通过手动对齐并目测检查测量，它们是相同的或具有特定百分比的相同氨基酸残基或核苷酸(例如，在特定区域内例如整个多肽序列或其单个结构域中，50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高同一性)。将至少约80％相同的此类序列称为“基本上相同”。在一些实施方案中，两个序列为100％相同。在某些实施方案中，两个序列在该序列中的一个(例如，若序列具有不同长度，两个序列中较短者)的整个长度上100％相同。在多种实施方案中，同一性可以是指测试序列的补体。在一些实施方案中，同一性在至少约10至约100、约20至约75、约30至约50个氨基酸或核苷酸长度的区域中存在。在某些实施方案中，同一性在至少约50个氨基酸长度的区域中存在，更优选100至500、100至200、150至200、175至200、175至225、175至250、200至225、200至250或更多个氨基酸长度的区域中存在。[0082]术语“抑制(inhibit)”、“消除(diminish)”、“降低(reduce)”或“压制(suppress)”是指所指定参数的减少(例如，至少约1.1倍、1.25倍、1.5倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、8倍、10ala6]-nkb[3-10]、cp-9634、3-氨基喹啉啶、cp-99994、s18525、s19752、4-喹啉甲酰亚胺fremincik类、cp-122721、mk-869、gr205171、spantideii、cp-96,345、l703,606、sr140,dnk333、2-苯基-4-喹啉甲酰亚胺类、fk224、fr115224、fk888、zm253270-吡咯并嘧啶类的九肽神经激肽拮抗剂、gr71251、gr82334、rp67580、人神经激肽的二酰基哌嗪类拮抗剂，例如l-161664、rp67580、men10376、gr98400、n2-[n2-(1h-吲哚-3-基羰基)-l-赖氨酰基]-n-甲基-n-(苯基-甲基)-l-苯丙氨酰胺(2b)、sp-(1-11)、sp-(6-11)、sp-(4-11)win51703、spantideii、spantideiii、spantidei、l754030、mk0869、ono-7436、ono7436、men13510、1-[2-(r)-{1-1r)-[3,5-双(三氟甲基)苯基]乙氧基}-3-(r)-(3,4-二氟苯基)-4-(r)-四氢-2h-吡喃-4-基甲基]-3-(r)-甲基哌啶-3-计算(1)、ly306,740、slv-323、2-经取代-4-芳基-6,7,8,9-四氢-5h-嘧啶并[4,5-b][1,5]噁唑啉-5-酮、9-经取代-7-芳基-3,4,5,6-四氢-2h-吡啶并[4,3-b]-和[2,3-b]-1,5-噁唑啉-6-酮、sr142801、sb222200、cp96345、sr48968、埃罗匹坦(ezlopitant)、cj11974、men11558、[18f]spa-rq、奈罗匹坦(neuropitant)21、贝图匹坦(betupitant)29、sr144190、sr48692、sr141716、l733060、沃佛匹坦(vofopitant)、r-673、奈帕坦特(nepadutant)、沙瑞度坦(saredutant)、uk290795、2-(4-联苯基)喹啉-4-甲酸酯和甲酰胺类似物(神经激肽-3受体拮抗剂)、4-氨基-2-(芳基)-丁基苯甲酰胺和类似物、mk-869、l742694、cp122721、1-烷基-5-(3,4-二氯苯基)-5-[2-[(3-经取代)-1-氮杂环丁烷基]乙基]-2-哌啶类、l760735、l758,298,cbz-gly-leu-trp-0bzl(cf(3))(2)、l733,061、sr144190、sb235375、n‑‑[(r,r)-(e)-1-芳基甲基-3-(2-氧代-氮杂环庚烷-3-基)氨基甲酰基]烯丙基-n-甲基-3,5-双(三氟甲基)苯甲酰胺、3-[n1-3,5-双(三氟甲基)苯甲酰基-n-芳基甲基-n1-甲基肼基]-n-[(r)-2-氧代-氮杂环庚烷-3-基]丙酰胺类、sr142806、sr48,968、cp141,938、ly306740、sb40023、sb414240、诺匹坦铵(nolpitantium)、sr140333、全氢异吲哚rp67580，德匹坦(depitant)、rpr100893、拉奈匹坦(lanepitant)、ly-303870、ly303870、赛诺菲圣德拉堡(sanotisynthelabo)、诺匹坦铵、sr140333、sr48968、沙韦杜坦(savedutant)、av608、av-608,av608、cgp60829、nk-608、nkp-608c、nkp608、cs003、r113281、维替匹坦(vestipitant)、597599、gw597599、gw597599b、神经激肽拮抗剂、ssr240600、卡索匹坦(casopitant)、679769、gw679769、ta5538、ssr146977、slv317、slv-317、823296、gw823296、ave5883、ave-5883、az311、sb235375、sb733210、az685、sar102279、sar10279、ssr241586、slv332、神经激肽2拮抗剂-solvay、nk-2拮抗剂-solvat、slv-332、slv332,nik616、mpv4505、nik616、mpc4505、z501、z-501、1tak637、cp96345、l659877、cgp49823、gr203040、l732138、s16474、win51708、zd7944、s18523、ci1021、pd154075、758298、zd4974、s18920、hmr2091、fk355、sch205528、nk5807、nip531、sch62373、uk224671、men10627、win64821、mdl105212a、men10573、tac363、1men11149、hsp117、nip530、和azd5106。[0087]如本文中所用，术语“nk-1受体”用作本领域中一般理解的意义，是指哺乳动物受体，也指速激肽nk-1受体，它是407个氨基酸的蛋白质，分子量为58.000，并且是g蛋白偶联受体家族1(类视紫红质)的成员，及其保守变体。[0088]如本文中所用，术语“nk-1受体拮抗剂”是指与nk-1受体选择性地结合并且降低或消除其生物活性的化合物。例如，选择性结合是指拮抗剂与nk-1受体的亲和力是其与nk-2受体或nk-3受体的亲和力的约2倍至10,000倍。例如，nk1r拮抗剂与nk-1受体结合，其亲和力是与nk-2或nk-3受体的亲和力的2倍、5倍、10倍、50-fold100倍、1000倍、5000倍、10,000倍或更高。[0089]“序列同一性的百分比(percentageofsequenceidentity)”通过在比较窗口内最优对齐的两个序列来确定的，与用于两个序列最优对齐的参考序列(其不包含添加或缺失)相比，其中，多核苷酸或多肽序列的在比较窗口内的部分可以包含添加或缺失(即，空位)。该百分比通过以下计算：确定两个序列中出现相同核碱基或氨基酸残基的位置的数量以得到匹配位置的数量，该匹配位置的数量除以比较窗口内位置的总数，结果再乘以100一得到序列同一性的百分比。[0090]本文中，“药学可接受的(pharmaceuticallyacceptable)”载剂或赋形剂指的是，适用于人类及/或动物的没有过度的副作用(如毒性、刺激和过敏反应)同时具有合理的效益/风险比的载剂或赋形剂。它可以是，例如，药学可接受的溶剂、悬浮剂或媒介物，用于将即时化合物输送至该受试者。该载体或赋形剂不包含nk1r拮抗剂活性。[0091]如本文中所用，术语“前药(prodrug)”是指一种化合物，它是作为药学活性剂的另一化合物的前体，其中，该前体化合物被以无活性形式给药至受试者，并且在给药后被体内代谢为药学活性剂。[0092]小分子是质量小于2000道尔顿的化合物。小分子的分子质量优选小于1000道尔顿，更优选小于600道尔顿，如该化合物的分子质量小于500道尔顿、400道尔顿、300道尔顿、200道尔顿或100道尔顿。[0093]如本文中所用，术语“受试者(subject)”、“患者(patient)”、“个体(individual)”等不试图限制并且通常可互换。换言之，描述为“患者”的个体并不必罹患给定的疾病，而可以是仅仅寻求医疗建议。如本文中所用，术语“受试者”包括动物王国的任何成员，诸如哺乳动物。在一种实施方案中，受试者是人。在另一实施方案中，受试者为小鼠。[0094]同样，“基本上纯的(substantiallypure)”意为已经与其天然伴随组分分离的核苷酸或多肽。典型地，以重量计，当核苷酸和多肽的至少60％、70％、80％、90％、95％或甚至99％不含其天然关联的蛋白质和天然出现的有机分子时，则该核苷酸和多肽是基本上纯的。[0095]本文中，与病变相关的“症状(symptom)”包括与该病变相关的任何临床表现和实验室表现，且并不限于该受试者可感觉到或观察到的表现。[0096]如本文中所用，“治疗(treating)”涵盖例如对病症或疾病进展状态的抑制、逆转或者严重程度的减轻。治疗也涵盖对该病症的任何一种或多种症状的阻止或改善。本文中，对受试者疾病进程或并发症的“抑制”意为，阻止或减轻该受试者的疾病进展及/或并发症、迹象或症状。[0097]以本文中引用的登录号指明的genbank和ncbi文件通过引用而并入本文。本文中引用的所有其他已出版的参考文献、文档、手稿和科学文献通过引用而并入本文。在矛盾的情况下，包括定义在内，以本说明书为准。此外，材料、方法和实施例仅做例示性说明之用，而非试图限制。[0098]本文中提供的范围理解为该范围内所有值的略写。例如，1至50的范围理解为包括来自由1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50所组成的组的任意数字、数字组合或子范围。浓度、量、细胞计数、百分比和其他数字值在本文中可以范围格式呈现。应理解，此类范围格式仅出于方便和简洁而使用，且应灵活地解释为不仅包括明确列举为范围限值的数字值而且包括该范围所涵盖的全部个体数字值或子范围，如同每个数字值和子范围被明确列举一样。例如，若提供参数范围，则该范围内的所有整数及其小数点后一位也为本发明所提供。例如，“0.2至5mg”是对0.2mg、0.3mg、0.4mg、0.5mg、0.6mg等直至包括5.0mg的公开。[0099]本文中公开的各实施方案预期可用于所公开的其他各实施方案中。因此，本文中揭示的各种元素的全部组合均处于本发明的范畴内。[0100]从下述对本发明优选实施方案的说明和权利要求书可明了本发明的其他特征和优点。除非另做定义，否则本文中使用的所有科技术语均具有与本发明所属领域技术人员所一般理解的相同的意义。尽管与本文所述类似或等效的方法和材料可用于实践或测试本发明，但适当的方法和材料描述如下。附图说明[0101]图1a至图1c为显示ded小鼠模型中增加的物质p(sp)的水平的图表。[0102]图2为显示阻断sp-nk1r信号传导在治疗眼部免疫炎性病症中的机制的示意图。[0103]图3a和图3b为显示nk1r拮抗剂废除sp介导的调节性t细胞(treg)减少的图表。[0104]图4为显示在ded进程中眼部表面的物质p水平增加的图表。在c57bl/6小鼠体内诱导ded，诱导时间为14天。收获对照(第0天)和ded小鼠(第4天)的三叉神经节(tg)并将组织均质化。使用elisa分析对照和ded小鼠的均质化组织上清液中的tg中的物质p的蛋白质水平，并且将蛋白质水平调节至通过bca蛋白质测定试剂盒测量的总蛋白质。数据表示两个独立实验的均值±sem。*p《0.05。[0105]图5a和图5b为显示源自三叉神经节的物质p促使源自骨髓的树突细胞成熟的图表。图5a.在不同剂量的物质p(25、50和100pg/ml)存下下，将源自骨髓的树突细胞(bmdc)培养18小时。通过使用流式细胞术评估mhcii的表达(平均荧光强度[mfi])来评定bmdc的成熟。图5b.将从ded小鼠或对照小鼠收获的三叉神经节(tgn)培养3天，接着与bmdc共培养24小时。为了组队源自tgn的sp对bmdc的效应，将神经激肽-1受体拮抗剂spantide(10μm和100μm)添加到共培养系统中。使用流式细胞术评估不同的组中cd11c+bmdc对mhcii的表达。数据表示两个独立实验的均值±sem。mfi：平均荧光强度。*p《0.05。[0106]图6a至图6e为显示nk1r的外用阻断抑制抗原呈递细胞成熟并改善干眼症的一系列图表和散点图。在进行ded的诱导4天后，对小鼠使用nk1r拮抗剂cp-99,994或l-733,060(1μg/μl)或者pbs(作为对照)进行外用治疗，每天三次，直到ded诱导后第14天。未治疗的ded小鼠充当对照。(图6a)在第4、7、10和14天进角膜荧光素染色(cfs)以评估疾病严重程度。在第14天，使用流式细胞术评估不同的组中成熟的mhciihicd11b+抗原呈递细胞(apc)在角膜(图6b)和引流淋巴结(图6c和图6d)中的频率以及引流淋巴结中apc对mhcii的表达(图6e)。mfi：平均荧光强度。数据表示两个独立实验的均值±sem。*p《0.05。[0107]图7a至图7d为显示nk1r的外用阻断抑制引流淋巴结中th17细胞的活化及其浸润入结膜内的一系列图表和曲线图。在进行ded的诱导4天后，小鼠接受使用nk1r拮抗剂cp-99,994或l-733,060(1μg/μl)或者pbs(作为对照)进行的外用治疗，每天三次，直到ded诱导后第14天。未治疗的ded小鼠充当对照。(图7a)在ded诱导后14天，使用流式细胞术评估使用cp-99,994、l-733,060或pbs治疗的天然、ded小鼠以及未治疗的ded小鼠的dln中cd4+il-17+th17细胞的频率。(图7b和图7c)在第14天，分别使用流式细胞术和实时pcr评估不同组的用nk1r拮抗剂治疗的天然小鼠和未治疗的ded小鼠的结膜中th17细胞的频率和(图7d)结膜中il-17的mrna表达水平。数据表示两个独立实验的均值±sem。conj：结膜。*p《0.05。[0108]图8a至图8c为显示物质p通过抑制抑制性分子和分泌的免疫调节细胞因子的treg表达来诱导treg功能障碍而该功能障碍被spantidei逆转的一系列图表。图8a是一系列图表，其表明sp在体外抑制treg对抑制性分子foxp3、ctla4和pd-1的表达。此外，将treg与sp一起孵育导致了(图8b)treg分泌的免疫调节性细胞因子(tgfβ和il-10)的水平显著降低并且(图8c)treg在体外抑制效应t细胞增殖的能力降低。但是，将nk-1r拮抗剂spantidei(spt)添加之共培养物中逆转了sp诱导的treg功能障碍。数据表示均值±sem。*p《0.05。[0109]图9a至图9d为表明通过全身性给药spantidei对sp信号传导进行的抑制恢复了treg功能，抑制th17细胞，并且降低了ded的严重程度的一系列图表。图9a：与用pbs治疗的对照相比，用spantidei(spt)治疗的ded小鼠具有显著降低的角膜荧光素染色(cfs)得分。图9b：从用spantidei治疗的ded小鼠的dln中分离的treg抑制效应t细胞增殖的能力高于源自对照组的treg。此外，用spantidei治疗ded小鼠导致ded小鼠的(图9c)引流淋巴结和(图9d)结膜中cd4+il-17+thh17细胞的频率与对照相比显著下降。数据表示均值±sem。*p《0.05，**p《0.001。[0110]图10为表明用imagej使用眼部红肿指数(ori)对动物模型中的眼部红肿进行评估的一系列摄影图像。步骤1：通过数码相机捕获结膜图像并记录为rgb彩色jpeg图像(3264x2448像素)。步骤2：为了降低图像中的背景噪声，根据所选择的滤纸区域(黑色方框)做出色彩校正(白平衡)。步骤3：由使用者选择roi(感兴趣的区域，黄色圆圈内的区域)作为评定区域，并且程序读出每个像素的红-绿-蓝(rgb)值，将其转化为色相饱和度(hsv)空间，并自动将这些值转化为选定区域内红肿的数字百分制值(imagej计算机程序；nih)。[0111]图11为表明从非过敏性(非感染性)眼部红肿的兔模型获得的结果的一系列图像、表格和图表。牺牲动物，并将40μl的连续递增浓度的达哌拉唑(dapiprazole)施加至动物的右眼以诱导眼部红肿。pbs作为对照用于左眼。通过裂隙灯检查眼睛，对每次诱导拍照，在诱导后第一个2分钟阶段内每30秒拍照一次，然后在接下来的8分钟内每4分钟拍照一次，再每10分钟拍照一次，直到1小时。表格总结了在1小时观察期内，诱导后ori得分的最大变化和当该变化发生的时间(峰值时间)。代表性图像显示眼部红肿的发展，并且照片总结了ori得分变化的动力学，数据表示均值±sem。结果显示，5％达哌拉唑诱导ori得分的最大增加。*，p《0.05，《0.01，5％达哌拉唑与pbs对比。[0112]图12为表明从过敏性眼部红肿的豚鼠模型获得的结果的一系列图像、表格和图表。牺牲动物，并将20μl的1.5mg/ml组胺施加至动物的右眼以诱导眼部红肿。pbs作为对照用于左眼。通过裂隙灯检查眼睛，对每次诱导拍照，在诱导后第一个2分钟阶段内每30秒拍照一次，然后在接下来的8分钟内每4分钟拍照一次，再每10分钟拍照一次，直到1小时。表格总结了在1小时观察期内，诱导后ori得分的最大变化和当该变化发生的时间(峰值时间)。代表性图像显示眼部红肿的发展，并且照片总结了ori得分变化的动力学，数据表示均值±sem。p《0.01，与pbs进行比较。[0113]图13为表明神经激肽-1受体拮抗作用减轻了非过敏性眼部红肿的图表和一系列图像。在以40μl体积滴注5％达哌拉唑的同时，用1.0mg/mll-703,606(高选择性nk1r拮抗剂)对动物进行外用治疗。用达哌拉唑诱导但不进行l-703,606治疗的动物用作对照。通过裂隙灯检查眼睛，对每次诱导拍照，在诱导后第一个2分钟阶段内每30秒拍照一次，然后在接下来的8分钟内每4分钟拍照一次，再每10分钟拍照一次，直到1小时。总结了ori得分变化的动力学，数据表示均值±sem。结果显示，sp/nk1r的阻断迅速且一贯地减轻眼部红肿。*，p《0.05，p《0.01，与对照进行比较。[0114]图14为明神经激肽-1受体拮抗作用减轻了过敏性眼部红肿的图表和一系列图像。在以20μl体积滴注1.5mg/ml组胺的同时，用1.0mg/mll-703,606(高选择性nk1r拮抗剂)对动物进行外用治疗。用组胺诱导但不进行l-703,606治疗的动物用作对照。通过裂隙灯检查眼睛，对每次诱导拍照，在诱导后第一个2分钟阶段内每30秒拍照一次，然后在接下来的8分钟内每4分钟拍照一次，再每10分钟拍照一次，直到1小时。总结了ori得分变化的动力学，数据表示均值±sem。结果显示，sp/nk1r的阻断迅速且一贯地减轻眼部红肿。*，p《0.05，p《0.01，与对照进行比较。[0115]图15a和图15b为显示在干眼症(ded)的进程中，眼部表明内的物质p水平增加的一系列图表。在c57bl/6小鼠体内诱导ded，诱导时间为14天。收获对照(第0天)和ded小鼠(第4天和第14天)的角膜、结膜和三叉神经节(tg)并将组织均质化。图15a：使用酶联免疫吸附测定法分析对照和ded小鼠的均质化组织上清液中的角膜、结膜和tg中的物质p的蛋白质水平，并且将蛋白质水平调节至通过bca蛋白质测定试剂盒(thermoscientific,rockford,il)测量的总蛋白质。图15b：对照和ded小鼠的角膜、结膜和tg中的物质pmrna水平使用实时pcr进行分析。数据表达为均值±sem(图15a和图15b)。n＝2个独立实验(图15a和图15b)。[0116]图16a至图16c是可用于本文所述方法中的非肽小分子化合物的示意图。这些非肽化合物中的每一种共享类似的结构，由三个元件组成：(a)具有桥头氮的哌啶环或奎宁环；(b)二苯甲基；和(c)苄基氨基侧链。全部三个元件都是与nk1r相互作用所必需的。l-733,060在结构上与mk-869(l-754,030)/阿瑞匹坦(aprepitant)最为接近，后者是fda批准的第一种适用于化疗引起的恶心和呕吐的nk1r拮抗剂。该药物也已经用于偏头痛或抑郁症。mk-869的水溶性不佳阻止其用作滴眼液制剂。图16a是示意图，其显示cp-99,994(pfizer)的分子结构。图16b是示意图，其显示l-733,060(merck)(cp-99,994的类似物)的分子结构。图16c是示意图，其显示l-703,060(merck)(cp-96,345的类似物)的分子结构。l-703,060具有高于cp-96,345的nk1r亲和力。l-703,060具有苄基氨基奎宁环结构而不是哌啶环。[0117]图17为显示达哌拉唑的分子结构的示意图。具体实施方式[0118]本公开涉及治疗物质p(sp)相关的非感染性眼部病症(包括干眼症(ded)、眼部红肿、过敏性结膜炎和眼痛)的方法，包括sp或sp受体(例如，神经激肽1受体nk1r)的阻断剂或拮抗剂的眼部递送(例如，外用、结膜下或玻璃体内给药)，该拮抗剂与合适的媒介物联合使用。“sp或nk1r阻断剂或拮抗剂”包含任何能够抑制sp受体介导的信号传导的试剂，并且可andvisionscience,vol.95,no.3,2018,pp.264–271)。在非感染性眼部红肿中，ded和过敏是两种典型的根本病症(clinophthalmol.2013；7:1197-1204；curreyeres.2018；43:43-5.)。眼部红肿的治疗取决于根本原因。抗组胺药和肥大细胞稳定剂目前用于轻度过敏性结膜炎，且服务端需要外用类固醇。由于其显著的副作用，皮质类固醇的长期使用受到限制。对于非过敏性红肿，一般使用外用血管收缩剂。例如，目前治疗非传染性眼部红肿的方法主要包括含有血管收缩剂的非处方(otc)滴眼液，诸如clear和然而，由于快速抗药反应(耐受性、或者有效性丧失)、停药后红肿反弹(与基线相比病情恶化)和全身性副作用，其疗效有限(curreyeres.2018；43:43-45)。最近，一种更具选择性的血管收缩剂——(0.025％溴莫尼定)已被fda批准为治疗眼部红肿的otc药物。但是，由于对药物成分或防腐剂的过敏反应，药物本身可能导致眼部红肿，并且它仍然有可能造成快速过敏和反弹的副作用。[0122]本发明是治疗非感染性眼部免疫炎性疾病(包括ded和眼部红肿(一种独立的临床指征))的一种根本上不同的方法，并且不涉及治疗非感染性眼部免疫病症的任何现有治疗方法。皮质类固醇是非特异性抗炎药，目前非标示性地(off-label)用于治疗ded和眼部红肿，但它们与许多不良副作用有关。在美国，两种fda批准的ded处方疗法是外用环孢菌素和立他司特具有多种疗效和耐受性问题，包括眼部灼痛感。在2016年获批，并且早期结果与没有明显不同，疗效低下，且存在许多导致患者停止治疗的耐受性问题和副作用。此外，无一有助于眼部红肿。[0123]神经激肽-1(nk-1)受体拮抗剂[0124]神经激肽-1(nk-1)受体是神经递质物质p的受体，并且分布在整个中枢神经系统中。某些神经激肽-1(nk-1)受体拮抗剂已知具有抗抑郁药、抗焦虑药和止吐药的性质。目前尚无证据表明任何k1r激动剂(诸如sp)治疗可以减轻ded。事实上，nk1r-/-小鼠具有多种与野生型小鼠不同的表型，包括神经系统病变。在这种基因修饰的小鼠品系中，通过那些在野生型情况下“非优选的”(在敲除小鼠中变为“优选的”)sp受体(nk2r或nk3r)进行的sp信号传导仍然存在或者甚至得到增强。因此，sp信号传导在ded发病机制中的确切作用需要使用更好的动物模型进一步研究。[0125]据此，在某些实施方案中，组合物包含治疗有效量的nk-1受体拮抗剂、其药学可接受的盐、nk-1受体拮抗剂或其药学可接受的盐的前药、或nk-1受体拮抗剂或其药学可接受的盐的nk-1化合物的溶剂合物或水合物。[0126]在某些实施方案中，nk1r拮抗剂包含nk1r的小分子拮抗剂、中和性抗nk1r抗体、针对sp的阻断性融合蛋白、抗sp抗体或核酸。在某些实施方案中，nk1r拮抗剂为小分子。[0127]在某些实施方案中，nk1r拮抗剂包含：[0128]spantide(rpkpqqwfwll；seqidno:2)，[0129][0130](2s,3s)-n-[(2-甲氧基苯基)甲基]-2-苯基-3-哌啶胺二盐酸盐，[0131][0132](2s,3s)-3-[[3,5-双(三氟甲基)苯基]甲氧基]-2-苯基哌啶盐酸盐，[0133][0134]5-[[(2r,3s)-2-[(1r)-1-[3,5-双(三氟甲基)苯基]乙氧基]-3-(4-氟苯基)-4-吗啉基]甲基]-1,2-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮，[0135][0136](2s,3s)-n-[[2-甲氧基-5-(三氟甲氧基)苯基]甲基]-2-苯基-3-哌啶胺二盐酸盐，[0137][0138](2s,3s)-n-(2-甲氧基苯基)甲基-2-二苯基甲基-1-氮杂双环[2.2.2]辛烷-3-胺，[0139][0140](4r)-4-羟基-1-[(1-甲基-1h-吲哚-3-基)羰基]-l-脯氨酰基-n-甲基-3-(2-萘基)-n-(苯基甲基)-l-丙氨酰胺，[0141][0142](2s,3s)-n-[[2-甲氧基-5-(1h-四唑-1-基)苯基]甲基]-2-苯基-3-哌啶胺二盐酸盐，[0143][0144]gr82334，[0145][0146]5-[[(2r,3s)-2-[(1r)-1-[3,5-双(三氟甲基)苯基]乙氧基]-3-(4-氟苯基)-4-吗啉基]甲基-n,n-二甲基-1h-1,2,3-三唑-4-甲胺盐酸盐，[0147][0148]n-乙酰基-l-色氨酸3,5-双(三氟甲基)苄酯，[0149][0150](3ar,7ar)-八氢-2-[1-亚胺基-2-(2-甲氧基苯基)乙基]-7,7-二苯基-4h-异吲哚，b]喹噁啉花青素类(cyonines)作为神经激肽拮抗剂、men10208、dpdtp-octa、gr73632、gr64349、senktide、gr71251、[d-arg1,d-pro2,d-trp7,9,leu11]-sp(1-11)、acheu-asp-gln-trp-phe-glynh2、thr-asp-tyr-d-tvp-val-d-trp-d-trp-argnh2、环[eln-trp-phe-gly-leu-met]、d-pro2d-trp7,9、d-arg1d-trp7,9leu11、[gly6]-nkb[3-10]、[arg3,d-ala6]-nkb[3-10]、cp-9634、3-氨基喹啉啶、cp-99994、s18525、s19752、4-喹啉甲酰亚胺fremincik类、cp-122721、mk-869、gr205171、spantideii、cp-96,345、l703,606、sr140,dnk333、2-苯基-4-喹啉甲酰亚胺类、fk224、fr115224、fk888、zm253270-吡咯并嘧啶类的九肽神经激肽拮抗剂、gr71251、gr82334、rp67580、人神经激肽的二酰基哌嗪类拮抗剂，例如l-161664、rp67580、men10376、gr98400、n2-[n2-(1h-吲哚-3-基羰基)-l-赖氨酰基]-n-甲基-n-(苯基-甲基)-l-苯丙氨酰胺(2b)、sp-(1-11)、sp-(6-11)、sp-(4-11)win51703、spantideii、spantideiii、spantidei、阿瑞匹坦(aprepitant)、l754030、mk0869、ono-7436、ono7436、men13510、1-[2-(r)-{1-1r)-[3,5-双(三氟甲基)苯基]乙氧基}-3-(r)-(3,4-二氟苯基)-4-(r)-四氢-2h-吡喃-4-基甲基]-3-(r)-甲基哌啶-3-计算(1)、ly306,740、slv-323、2-经取代-4-芳基-6,7,8,9-四氢-5h-嘧啶并[4,5-b][1,5]噁唑啉-5-酮、9-经取代-7-芳基-3,4,5,6-四氢-2h-吡啶并[4,3-b]-和[2,3-b]-1,5-噁唑啉-6-酮、sr142801、sb222200、cp96345、sr48968、埃罗匹坦(ezlopitant)、cj11974、men11558、[18f]spa-rq、奈罗匹坦(neuropitant)21、贝图匹坦(betupitant)29、sr144190、sr48692、sr141716、l733060、沃佛匹坦(vofopitant)、r-673、奈帕坦特(nepadutant)、沙瑞度坦(saredutant)、uk290795、2-(4-联苯基)喹啉-4-甲酸酯和甲酰胺类似物(神经激肽-3受体拮抗剂)、4-氨基-2-(芳基)-丁基苯甲酰胺和类似物、mk-869、l742694、cp122721、1-烷基-5-(3,4-二氯苯基)-5-[2-[(3-经取代)-1-氮杂环丁烷基]乙基]-2-哌啶类、l760735、l758,298,cbz-gly-leu-trp-0bzl(cf(3))(2)、l733,061、sr144190、sb235375、n‑‑[(r,r)-(e)-1-芳基甲基-3-(2-氧代-氮杂环庚烷-3-基)氨基甲酰基]烯丙基-n-甲基-3,5-双(三氟甲基)苯甲酰胺、3-[n1-3,5-双(三氟甲基)苯甲酰基-n-芳基甲基-n1-甲基肼基]-n-[(r)-2-氧代-氮杂环庚烷-3-基]丙酰胺类、sr142806、sr48,968、cp141,938、ly306740、sb40023、sb414240、诺匹坦铵(nolpitantium)、sr140333、全氢异吲哚rp67580，德匹坦(depitant)、rpr100893、拉奈匹坦(lanepitant)、ly-303870、赛诺菲圣德拉堡(sanotisynthelabo)、诺匹坦铵、sr140333、sr48968、沙韦杜坦(savedutant)、av608、av-608,av608、cgp60829、nk-608、nkp-608c、nkp608、cs003、r113281、维替匹坦(vestipitant)、597599、gw597599、gw597599b、ssr240600、卡索匹坦(casopitant)、679769、gw679769、ta5538、ssr146977、slv317、slv-317、823296、gw823296、ave5883、ave-5883、az311、sb235375、sb733210、az685、sar102279、sar10279、ssr241586、slv332、神经激肽2拮抗剂-solvay、slv-332、slv332,nik616、mpv4505、nik616、mpc4505、z501、z-501、1tak637、cp96345、l659877、cgp49823、gr203040、l732138、s16474、win51708、zd7944、s18523、ci1021、pd154075、758298、zd4974、s18920、hmr2091、fk355、sch205528、nk5807、nip531、sch62373、uk224671、men10627、win64821、mdl105212a、men10573、tac363、1men11149、hsp117、nip530、和azd5106。[0158]在某些实施方案中，拮抗剂包括具有式(i)的化合物，[0159]或其药学可接受的盐。[0160]ar为经取代或未经取代的芳基或杂芳基。[0161]n为1至3的整数。[0162]x1为–nh-、-c(o)-或-o-。[0163]x2为–chr7-或-o-。[0164]l1为键、或者经取代或未经取代的c1-c4亚烷基。[0165]l2为键、或者经取代或未经取代的c1-c4亚烷基。[0166]每个r1、r2、r3、r4、r5、r6和r7独立地为氢、卤素、经取代或未经取代的c1-c4亚烷基、经取代或未经取代的2至4元杂烷基、经取代或未经取代的环烷基、经取代或未经取代的杂环烷基、经取代或未经取代的芳基、或者经取代或未经取代的杂芳基；或者r6与r7结合以形成经取代或未经取代的杂环烷基。[0167]在某些实施方案中，l2为键；n为1；ar为苯基；x2为–ch2-；并且r6为氢。[0168]在一些实施方案中，拮抗剂包括具有式(ii)的化合物，[0169]或其药学可接受的盐。x1、l1、r1、r2、r3、r4和r5如本文所述。[0170]在一些实施方案中，x1为–nh-或–o-。在一些实施方案中，l1为经取代或未经取代的亚甲基。[0171]在一些实施方案中，拮抗剂具有下式：[0172][0173]或其药学可接受的盐。[0174]在一些实施方案中，每个r1、r2、r4和r5独立地为氢、-och3、-ocf3、-och3、–cf3或[0175]在一些实施方案中，r3为氢。[0176]在一些实施方案中，r1或r5独立地为氢或–och3。[0177]在一些实施方案中，r2或r4独立地为氢、–cf3或–ocf3。[0178]在一些实施方案中，式(ii-a)化合物包括：[0179][0180]在一些实施方案中，式(ii-b)化合物包括：[0181][0182]在某些实施方案中，x2为–o-；l2为键；并且n为1。[0183]在一些实施方案中，拮抗剂包括具有式(iii)的化合物，[0184]或其药学可接受的盐。ar、x1、l1、r1、r2、r3、r4、r5和r6如本文所述。[0185]在一些实施方案中，l1为经取代或未经取代的亚甲基。例如，l1为–ch(ch3)-。[0186]在一些实施方案中，拮抗剂包括具有式(iii-a)的化合物，[0187]或其药学可接受的盐。ar、r1、r2、r3、r4、r5和r6如本文所述。[0188]在一些实施方案中，ar为经取代或未经取代的苯基。在一些实施方案中，ar为[0189]在一些实施方案中，r6经取代的c1-c4烷基。在一些实施方案中，r6为[0190]在一些实施方案中，每个r1、r2、r4和r5独立地为氢或-cf3。在一些实施方案中，r3为氢。[0191]在一些实施方案中，每个r1和r5独立地为氢。[0192]在一些实施方案中，每个r2和r4独立地为氢或–cf3。[0193]在一些实施方案中，式(iii-a)化合物包括[0194][0195]在某些实施方案中，r6与r7结合以形成5至6元杂环烷基。在某些实施方案中，x2为–chr7-；r6与r7结合以形成6元杂环烷基；并且n为2。[0196]在一些实施方案中，拮抗剂包括具有式(iv)的化合物，[0197]或其药学可接受的盐。x1、l1、r1、r2、r3、r4和r5如本文所述。ar1和ar2与ar相同。[0198]在一些实施方案中，l2为亚甲基。[0199]在一些实施方案中，拮抗剂包括具有式(iv-a)的化合物，[0200]或其药学可接受的盐。r1、r2、r3、r4和r5如本文所述。ar1和ar2与ar相同。[0201]在一些实施方案中，ar1和ar2为苯基。[0202]在一些实施方案中，每个r1和r5独立地为氢或–och3。[0203]在一些实施方案中，r2、r3和r4为氢。[0204]在一些实施方案中，式(iv)化合物包括[0205]在多种实施方案中，组合物包含与nk1r结合或修改其功能的多核苷酸、适体、抗体或其片段或小分子，其与药学上可接受的载体一起外用给药。用于多核苷酸组合物的递送方法包括但不限于，脂质体、受体介导的递送系统、裸dna和工程化的病毒载体诸如疱疹病毒、逆转录病毒、腺病毒和腺相关病毒等。多核苷酸组合物可以与药学可接受的液体载体(例如，水性或部分水性的液体载体)一起外用给药。在某些实施方案中，组合物中的多核苷酸序列与脂质体(例如，阳离子或阴离子脂质体)缔合。[0206]在一些实施方案中，nk1r拮抗剂包含核酸分子，诸如：核糖核酸(rna)、脱氧核糖核酸(dna)、合成rna或dna序列、改性rna或dna序列、互补dna(cdna)、短向导rna(sgrna)、短干扰rna(sirna)、微小的干扰rna(mirna)、小的时序调节rna(strna)、短发夹rna(shrna)、mrna、包含一个或多个修饰的核碱基或主链的核酸序列、或其组合。在某些实施方案中，核酸分子为反义寡核苷酸。反义寡核苷酸为与特异性dna或rna序列互补的核苷酸序列。一旦被引入细胞内，互补核苷酸就与该细胞产生的天然序列组合以形成复合体并阻断转录或转译。优选地，反义寡核苷酸长度为至少11个核苷酸，但可以为至少12、15、20、25、30、35、40、45或50或更多个核苷酸的长度。也可使用更长的序列。[0207]“反义寡核苷酸(antisenseoligonucleotides)”或“反义化合物(antisensecompound)”意味着与另一rna或dna分子(靶标rna、dna)结合的rna或dna。例如，如果它是rna寡核苷酸，则它通过rna-rna相互结合的方式与另一rna靶标结合并改变靶标rna的活性。反义寡核苷酸可上调或下调特定多核苷酸的表达及/或功能。该定义旨在包括任何外来rna或dna分子，就治疗、诊断或其他观点来看，该分子可用。此类分子包括，例如，反义rna或dna分子、干扰rna(rnai)、微小rna、诱饵rna分子、sirna、酶、rna、短发夹rna(shrna)、治疗性编辑rna以及激动和拮抗性rna、反义寡聚化合物、反义寡核苷酸、外部向导序列(egs)寡核苷酸、交替剪接体、引物、探针和其他与靶标核酸的至少一部分杂交的寡聚化合物。因此，这些化合物可被引入单链、双链、部分单链或环状形式的寡聚化合物中。[0208]例如，反义寡核苷酸分子可以直接给药，或提供在dna构造体中并被引入细胞内，以降低sp的水平。在某些实施方案中，反义寡核苷酸与调节区特异性地结合，导致抑制或增强的转录。[0209]在一些实施方案中，反义寡核苷酸可以为脱氧核糖核苷酸、核糖核苷酸或两者的组合。在多种实施方案中，寡核苷酸可以经修饰以延长该寡核苷酸的体内半衰期。寡核苷酸可手工合成或通过自动合成仪合成，方法是使用非磷酸二酯类核苷酸间链接将一个核苷酸的5'末端与另一个核苷酸的3'末端连接，该核苷酸间链接为诸如烷基膦酸酯类、硫代磷酸酯类、二硫代磷酸酯类、烷基硫代膦酸酯类、烷基膦酸酯类、氨基磷酸酯类、磷酸酯类、氨基甲酸酯类、乙酰氨酸酯类、羧甲基酯类、碳酸酯类和磷酸三酯类。[0210]修饰的或突变的核酸序列。在一些实施方案中，本文中例示的任何核酸序列可以从天然核酸序列修饰或衍生，例如，通过引入突变、缺失、置换、核碱基修饰、主链等。核酸序列包括载体、基因编辑剂、分离的核酸、反义核苷酸等。本发明的核酸序列也包括变体，在该变体中，不同的碱基存在于该化合物的一个或多个核苷酸位置处。例如，如果第一个核苷酸为腺苷，则可以产生含有位于这一位置处的胸苷、鸟苷或胞苷的变体。这可以在分离的核酸序列的任何位置处进行。本发明的核酸序列可具有对核碱基或主链的修饰。一些用于本发明的经修饰版本的核酸序列包括那些包含经修饰的主链(例如，硫代磷酸酯类、磷酸三酯类、甲基膦酸酯类、短链烷基或环烷基类糖间链接、或短链杂原子或杂环类糖间链接)的核酸序列。在一些实施方案中，经修饰的寡核苷酸包含具有硫代磷酸酯主链的那些和具有杂原子主链的那些，ch2‑‑nh‑‑o‑‑ch2、ch,‑‑n(ch3)‑‑o‑‑ch2[称为亚甲基(甲基亚胺基)或mmi主链]、ch2‑‑o‑‑n(ch3)‑‑ch2、ch2‑‑n(ch3)‑‑n(ch3)‑‑ch2和o‑‑n(ch3)‑‑ch2‑‑ch2主链，其中，天然磷酸二酯主链表示为o‑‑p‑‑o‑‑ch。demesmaekeretal.acc.chem.res.1995,28:366-374公开的酰胺主链也在本文中例示。在一些实施方案中，核酸序列具有吗啉代主链结构(summerton与weller美国专利号5,034,506)；肽核酸(pna)主链，其中，寡核苷酸的磷酸二酯主链被替换为聚酰胺主链，核碱基直接或间接地与聚酰胺主链的氮杂氮原子键结(nielsenetal.science1991,254,1497)。核酸序列也可以包含一个或多个经取代的糖部分。核酸序列也可以具有替代呋喃戊糖基糖的糖模拟物诸如环丁基部分。[0211]此外或作为另一种选择，核酸序列也可以包括核碱基(本领域中一般简称为“碱基”)修饰或置换。如本文中所用，“未修饰的”或“天然的”核碱基包括嘌呤碱基腺嘌呤(a)和鸟嘌呤(g)，以及嘧啶碱基胸腺嘧啶(t)、胞嘧啶(c)和尿嘧啶(u)。经修饰的核碱基包括仅偶尔或短暂地在天然核酸中发现的核碱基，例如，次黄嘌呤、6-甲基腺嘌呤、5-甲基嘧啶特别是5-甲基胞嘧啶(也称为5-甲基-2'-脱氧胞嘧啶，且在本领域中一般称为5-me-c)、5-羟甲基胞嘧啶(hmc)、糖基hmc和龙胆二糖基hmc；以及合成的核碱基，例如，2-氨基腺嘌呤、2-(甲基氨基)腺嘌呤、2-(咪唑基烷基)腺嘌呤、2-(氨基烷基氨基)腺嘌呤或其他杂经取代的烷基腺嘌呤、2-硫尿嘧啶、2-硫胸腺嘧啶、5-溴尿嘧啶、5-羟基甲基尿嘧啶、8-氮杂鸟嘌呤、7-脱氮鸟嘌呤、n6-(6-氨基己基)腺嘌呤和2,6-二氨基嘌呤。(kornberg,a.,dnareplication,w.h.freeman&co.,sanfrancisco,1980,pp75-77；gebeyehu,g.,etal.nucl.acidsres.1987,15:4513)。可以包括本领中已知的“万用”碱基，例如，肌苷。已经证明，5-me-c置换将核酸双螺旋稳定性增加0.6-1.2℃。(sanghvi,y.s.,incrooke,s.t.andlebleu,b.,eds.,antisenseresearchandapplications,crcpress,bocaraton,1993,pp.276-278)。[0212]本发明的核酸序列的另一种修饰涉及将一个或多个部分或缀合物化学连接至该核酸序列，该部分或缀合物增强寡核苷酸的活性或细胞摄取。此类部分包括但不限于脂质部分诸如胆固醇部分；胆固醇基部分(letsingeretal.,proc.natl.acad.sci.usa1989,86,6553)；胆酸(manoharanetal.bioorg.med.chem.let.1994,4,1053)；硫醚，例如，己基-s-三苯甲基硫醇(manoharanetal.ann.n.y.acad.sci.1992,660,306；manoharanetal.bioorg.med.chem.let.1993,3,2765)；硫代胆固醇(oberhauseretal.,nucl.acidsres.1992,20,533)；脂肪族链，例如，十二烷二醇或十一烷基残基(saison-behmoarasetal.emboj.1991,10,111；kabanovetal.febslett.1990,259,327；svinarchuketal.biochimie1993,75,49)；磷脂质，例如，二-十六烷基-rac-甘油或三乙基铵1,2-二-o-十六烷基-rac-甘油基-3-h-磷酸盐(manoharanetal.tetrahedronlett.1995,36,3651；sheaetal.nucl.acidsres.1990,18,3777)；聚胺或聚乙二醇链(manoharanetal.nucleosides&nucleotides1995,14,969)；或金刚烷乙酸(manoharanetal.tetrahedronlett.1995,36,3651)。[0213]在某些实施方案中，分离的核酸序列包含硫代磷酸酯类核苷酸间链接与为选自烷基膦酸酯类、二硫代磷酸酯类、烷基硫代膦酸酯类、氨基磷酸酯类、氨基甲酸酯类、碳酸酯类、磷酸三酯类、乙酰氨酸酯类、羧甲基酯类及/或其组合所组成的组中的至少一种核苷酸间链接的组合。在另一个优选实施方案中，分离的核酸任选地包含至少一个经修饰的核碱基，该经修饰的核碱基包含肽核酸、锁核酸(lna)分子、类似物、衍生物及/或其组合。[0214]给定核酸序列中的全部位置不必均匀地经修饰，事实上，可以将一种以上的前述修饰并入单个核酸序列中或甚至并入核酸序列内单个核苷酸处。[0215]某些分离的核酸序列是嵌合分子。在本公开的语境中，“嵌合分子”或“嵌合体”是分离的核酸序列，其含有两个或更多个化学上不同的区域，每个区域由至少一个核苷酸构成。这些分离的核酸序列变性含有至少一个提供一种或多种有益性质(例如，核酸酶抗性增加、到细胞内的摄取增加、对靶标的结合亲和力增加)的经修饰核苷酸的区域，以及作为能够裂解rna:dna或rna:rna杂交体的酶的底物的区域。举例而言，rnaseh是细胞核酸内切酶，其裂解rna:dna双链体的rna链。因此，rnaseh的激活导致rna靶标的裂解，从而极大地增强了基因表达的反义调节的效率。因此，当使用嵌合的分离核酸序列时，使用较短的分离核酸序列往往可获得与使用杂交至相同靶标区的硫代磷酸酯脱氧核糖核苷酸相当的结果。嵌合的分离核酸序列可以形成为两个或更多个寡核苷酸、经修饰的寡核苷酸、寡核苷酸及/或寡核苷酸模拟物的复合结构。[0216]在另一种实施方案中，分离核酸序列的经修饰的区域包含至少一个在糖的2'位置修饰的核苷酸，最优选2'-o-烷基、2'-o-烷基-o-烷基或2'-氟修饰的核苷酸。在另一种实施方案中，分离的核酸序列也可以经修饰以增强核酸酶抗性。细胞含有多种可降解核酸的外切核酸酶和内切核酸酶。已经证明，大量核苷酸修饰和核苷修饰使得并入该修饰的核酸序列对于核酸酶消化的抗性高于天然寡脱氧核苷酸。核酸酶抗性通过下述常规地测量：将分离的核酸序列与细胞提取物或分离的核酸酶溶液一起孵育，以及一般通过凝胶电泳测量完整寡核苷酸随时间推移的保留程度。与未修饰的分离核酸序列相比，已经修饰以增强其核酸酶抗性的分离核酸序列保持完整的时间更长。多种寡核苷酸修饰已经被证明增强或赋予核酸酶抗性。分离的核酸序列可以含有至少一个硫代磷酸酯类修饰。在一些情况下，增强靶标结合亲和力的寡核苷酸修饰也能够独立地增强核酸酶抗性。一些希望的修饰可见于demesmaekeretal.acc.chem.res.1995,28:366-374中。[0217]在一些实施方案中，将包含rna分子的nk1r拮抗剂工程化以包含一个或多个经修饰的核碱基。修饰的rna组分包括下列：2'-o-甲基胞苷；n4-甲基胞苷；n4-2'-o-二甲基胞苷；n4-乙酰基胞苷；5-甲基胞苷；5,2'-o-二甲基胞苷；5-羟基甲基胞苷；5-甲酰基胞苷；2'-o-甲基-5-甲酰基胞苷；3-甲基胞苷；2-硫代胞苷；赖胞苷；2'-o-甲基尿苷；2-硫代尿苷；2-硫代-2'-o-甲基尿苷；3,2'-o-二甲基尿苷；3-(3-氨基-3-羧基丙基)尿苷；4-硫代尿苷；核糖基胸腺嘧啶；5,2'-o-二甲基尿苷；5-甲基-2-硫代尿苷；5-羟基尿苷；5-甲氧基尿苷；尿苷-5-氧乙酸；尿苷-5-氧乙酸甲酯；5-羧甲基尿苷；5-甲氧羰基甲基尿苷；5-甲氧羰基甲基-2'-o-甲基尿苷；5-甲氧羰基甲基-2'-硫代尿苷；5-氨基甲酰基甲基尿苷；5-氨基甲酰基甲基-2'-o-甲基尿苷；5-(羧基羟基甲基)尿苷；5-(羧基羟基甲基)尿苷甲酯；5-氨基甲基-2-硫代尿苷；5-甲基氨基甲基尿苷；5-甲基氨基甲基-2-硫代尿苷；5-甲基氨基甲基-2-硒尿苷；5-羧基甲基氨基甲基尿苷；5-羧甲基氨基甲基-2'-o-甲基-尿苷；5-羧甲基氨基甲基-2-硫代尿苷；二氢尿苷；二氢核糖基胸腺嘧啶；2'-甲基腺苷；2-甲基腺苷；n6n-甲基腺苷；n6,n6-二甲基腺苷；n6,2'-o-三甲基腺苷；2-甲硫基-n6n-异戊烯基腺苷；n6-(顺式-羟基异戊烯基)-腺苷；2-甲硫基-n6-(顺式-羟基异戊烯基)-腺苷；n6-甘氨酰基氨基甲酰基)腺苷；n6-苏氨酰基氨基甲酰基腺苷；n6-甲基-n6-苏氨酰基氨基甲酰基腺苷；2-甲硫基-n6-甲基-n6-苏氨酰基氨基甲酰基腺苷；n6-羟基正缬氨酰基氨基甲酰基腺苷；2-甲硫基-n6-羟基正缬氨酰基氨基甲酰基腺苷；2'-o-核糖基腺苷(磷酸酯)；肌苷；2'-o-甲基肌苷；1-甲基肌苷；1,2'-o-二甲基肌苷；2'-o-甲基鸟苷；1-甲基鸟苷；n2-甲基鸟苷；n2,n2-二甲基鸟苷；n2,2'-o-二甲基鸟苷；n2,n2,2'-o-三甲基鸟苷；2'-o-核糖基鸟苷(磷酸酯)；7-甲基鸟苷；n2,7-二甲基鸟苷；n2,n2,7-三甲基鸟苷；怀俄苷(wyosine)；甲基怀俄苷；修饰下的羟基怀俄苷；怀丁苷(wybutosine)；羟基怀丁苷；过氧怀丁苷；辫苷(queuosine)；环氧辫苷；半乳糖基-辫苷；甘露糖基-辫苷；7-氰基-7-脱氮鸟苷；arachaeosine[也称为7-甲酰胺基-7-脱氮鸟苷]；和7-氨基甲基-7-脱氮鸟苷。[0218]在其他实施方案中，rna修饰包括嘧啶类的核糖上的2'-氟、2'-氨基和2'-o-甲基修饰、无碱基的残基或位于rna的3’末端处的颠换碱基。将此类修饰常规地并入寡核苷酸内，并且这些寡核苷酸已经被证明具有比2'-脱氧寡核苷酸更高的针对给定靶标的tm(即，更高的靶标结合亲和力)。[0219]已经开发了多种用于将短dna或rna序列递送至细胞内的方法，例如，多核苷酸分子可以直接接触到组织位点上，或经修饰的多核苷酸分子被设计为特异性地靶向所希望的细胞类型(例如，序列连接至与靶标细胞表面上表达的受体或抗原特异性结合的肽或受体)。[0220]示例性途径使用重组dna构造体，在该构造体中，短的多核苷酸序列被置于强力的聚合酶iii或聚合酶ii启动子的控制之下。这种构造体的使用将会导致足量的多核苷酸被转录，这些多核苷酸将会与本发明核酸的内源性转录物形成互补碱基对，并因此阻止内源性mrna转录物的转译。本发明涵盖使用互补链作为模板的短多核苷酸的构造。例如，可将载体引入体内，使得它被细胞摄取并将干扰rna或前体的转录导向至双链rna分子。或者，用于短的多核苷酸转录物的模板被置于细胞类型特异性启动子或其他调节性元件的转录控制之下。因此，外用给药的组合物扩散或吸收超出预期的眼部靶标组织不会造成有害的或全身性的副作用。该载体保持为游离型或变成被整合至染色体，只要它能被转录以产生所希望的多核苷酸即可。[0221]通过作为本领域中标准方法的重组dna技术构造表达载体。载体可以是质粒、病毒或本领域中已知的其他载体，用于在哺乳动物细胞中复制和表达。编码短多核苷酸的序列的表达可以被置于本领域中任何已知在哺乳动物优选人类细胞中发挥作用的启动子的控制之下。启动子是诱导型的或组成型的。示例性启动子包括但不限于：sv40早期启动子区域(bernoistetal.,nature290:304,1981)；包含在劳斯氏肉瘤病毒的3'长末端重复序列内的启动子(yamamotoetal.,cell,22:787-797,1988)；疱疹胸苷激酶启动子(wagneretal.,proc.natl.acad.sci.usa,78:1441,1981)；或金属硫蛋白基因的调节序列(brinsteretal.,nature,296:39,1988)。[0222]在一些实施方案中，多肽组成物与脂质体缔合，该脂质体单独使用或与受体介导的递送系统联合使用，以能够跨越浆膜进行转运。多肽组成物可以是例如可溶的或膜结合的。示例性受体介导的递送系统包括含有颗粒的低密度或非常低密度脂蛋白或者媒介物与低密度脂蛋白(ldl)受体(ldlr)的融合物，如使用丙型肝炎病毒(hcv)感染和hcv介导的药物递送方法观察到的。[0223]在某些实施方案中，组合物包含一种或多种抗击或针对nk1r及/或sp(或其亚基)的细胞外或细胞内抗体(也称为胞内抗体)。细胞外抗体与药学适宜的水性或非水性载体一起外用给药。将编码细胞内抗体的序列亚克隆到病毒或哺乳动物表达载体中，封装在亲脂性装置中以促进跨浆膜的转运，并且与药学适宜的水性或非水性载体一起外用给药至眼睛。一旦进入浆膜，宿主细胞机构就转录、转移并处理胞内抗体密码，以生成靶向nk1r及/或sp(或其亚基)的细胞内功能阻断性抗体。在分泌的分子的情况下，细胞内抗体阻止靶标蛋白质的转录后修饰或分泌。在膜结合分子的情况下，细胞内抗体也可以下通过sp进行受体接合或结合时阻止细胞内信号传导事件。[0224]在一些实施方案中，组合物包含nk1r拮抗剂或sp抑制剂，其中，该抑制剂抑制sp的转录、转录物稳定性、转译、修饰、定位、分泌或受体结合。[0225]治疗方法[0226]多种实施方案涉及用于治疗眼部免疫炎性病症的方法，通过抑制眼组织内的抗原呈递细胞成熟和th17细胞活化，以及，就细胞数量及/或功能而言，sp介导的treg减少。在非限制性示例中，免疫炎性病症包括眼部红肿、ded、自身免疫性葡萄膜炎、角膜神经痛、角膜痛觉过敏、角膜疼痛或眼部移植物抗宿主疾病。在一些实施方案中，该方法包括外用给药化合物，该化合物优先抑制sp-nk1r信号传导。[0227]在某些实施方案中，治疗受试者的非感染性眼部免疫炎性病症的方法包括向患有调节性t细胞(treg)相关眼部病症的受试者给药一种组合物，该组合物包含治疗有效量的一种或多种神经激肽1受体(nk1r)拮抗剂。[0228]t细胞及/或cd4+及/或cd8+t细胞的亚型和亚群为幼生t(tn)细胞、效应t细胞(teff)、记忆性t细胞及其亚型，诸如干细胞记忆性t(tscmx)细胞、中枢记忆性t(tcm)细胞、效应子记忆性t(tem)细胞或终末分化的效应子记忆性t细胞；肿瘤浸润淋巴细胞(til)；不成熟的t细胞；成熟的t细胞；辅助性t细胞、细胞毒性t细胞、黏膜相关的不变t(mait)细胞；天然出现的和适应性调节t(treg)细胞；辅助性t细胞，诸如th1细胞、th2细胞、th3细胞、th17细胞、th9细胞、th22细胞、卵泡辅助性t细胞；α/βt细胞和δ/γt细胞。[0229]通常，t调节细胞已经被鉴定为能够抑制免疫应答的cd4+cd25+t细胞群。将foxp3鉴定为treg的“主要调节因子”帮助将treg定义为不同的t细胞谱系。对treg表面上的其他抗原标记物的鉴定已经使得能够对活treg进行鉴定和facs分选为更大纯度，得到更高富集的抑制性treg群体。除了cd4和cd25之外，小鼠和人类treg两者还表达gitr/aitr、ctla-4，并且表达低水平的cd127(il-7ra)。此外，treg可以以不同的状态存在，可以基于其表现标记物的表达鉴定它们。在胸腺中从cd4+胸腺细胞发育而来的treg称为“天然”treg；但是，响应于tcr、tgfβ和il-2的低剂量接合，treg也可以在外周从幼生cd4+t细胞诱导而来。这些“诱导的”treg分泌免疫抑制细胞因子il-10。随着treg变为活化型，其表型再一次改变，并且已经证明，包括小鼠和人类中的garp、人类中的cd45ra、和小鼠中的cd103在内的标记物可用于鉴定活化的treg。[0230]越来越多的证据表明，treg通过多种机制获得其功能，这些机制可以包括分泌可溶的免疫抑制因子诸如il-9、il-10和tgfβ，通过高亲和力tcr和其他共刺激分子诸如ctla-4、gitr以及细胞溶解活性进行细胞接触介导的调节。受tgfβ的影响，适应性treg细胞在外周位点(包括黏膜相关淋巴样组织(malt))中从cd4+treg前体成熟，在那里它们获得treg典型标记物(包括cd25、ctla4和gitr/aitr)的表达。当转录因子foxp3上调时，treg细胞开始其抑制效应。这包括分泌细胞因子(包括il-10和tgfβ，它们可以诱导效应t细胞的细胞周期停止或凋亡)和阻断树突细胞的共刺激和成熟。[0231]在下述实施例章节中表明，通过阻断sp信号传导来恢复或增强非感染性眼部免疫炎性病症(包括ded)中的treg的抑制作用，从而实现免疫静止。发现，阻断sp-nk1r信号传导恢复或增强了眼部免疫炎性病症(诸如眼部红肿、干眼症和眼痛)中的treg功能，并因此抑制炎症且实现免疫静止。也表明，神经激肽-1受体拮抗作用通过抑制抗原呈递细胞成熟和th17细胞活化来改善干眼症。[0232]本主旨的多个方面提供降低有此需要的受试者的眼组织、眼附属组织或淋巴组织中th17细胞丰度的方法，包括向该受试者给药包含nk1r拮抗剂的组合物。[0233]据此，在某些实施方案，治疗受试者的非感染性眼部免疫炎性病症例如眼部红肿及/或ded的方法包括向该受试者给药包含治疗有效量的nk1r拮抗剂的组合物，其中，nk1r拮抗剂抑制抗原呈递细胞成熟和th17细胞活化。[0234]在某些实施方案中，治疗受试者的非感染性眼部免疫炎性病症的方法包括向患有调节性t细胞(treg)相关眼部病症的受试者给药一种组合物，该组合物包含治疗有效量的一种或多种神经激肽1受体(nk1r)拮抗剂。在某些实施方案中，treg相关眼部病症为选自非干眼症(ded)相关的眼部红肿、干眼症(ded)、过敏性结膜炎和眼痛中的一种。在某些实施方案中，非ded相关的眼部红肿包括过敏性眼部红肿。在某些实施方案中，非ded相关的眼部红肿包括非过敏性眼部红肿。[0235]在某些实施方案中，调控调节性t(treg)细胞活性或功能的方法包括向有此需要的受试者给药一种药物组合物，该药物组合物包含治疗有效量的一种或多种神经激肽1受体(nk1r)拮抗剂。[0236]在某些实施方案中，减轻受试者的非感染性眼部免疫炎性病症的症状的方法包括向患有treg相关眼部病症的受试者给药一种组合物，该组合物包含治疗有效量的sp信号传导阻断诱导剂。在某些实施方案中，treg相关眼部病症包含非ded相关的眼部红肿、干眼症(ded)、过敏性结膜炎、眼痛、角膜神经痛、角膜痛觉过敏、角膜疼痛。最近，角膜神经痛引起了临床医生和科学家的极大兴趣，因为他们越来越强烈的意识到患者苦于无法解释的眼表疼痛和症状。这种情况往往与干眼症相关，因为眼睛干燥和灼热感是神经性眼痛和干眼症的共同症状，但眼神经性疼痛本身应被视为一种疾病。神经病理性疼痛患者可能很少或没有水性干眼症的迹象，并且经常对传统干眼症治疗应答不佳。与传统干眼症不同，可能很少或没有眼表损伤的迹象(这种情况有时被称为“无色斑疼痛”)，但是患者也可能有干眼症的症状，但疼痛症状与干眼症表现不成比例。[0237]在这种情况下，疼痛感觉的体验可能存在很大差异，反映了多种原因性因素，诸如：导致眼表伤害感受器受损的伤害性刺激的类型、受影响的角膜感觉受体的类型(包括冷感热受体、机械感受器和多模态受体)、炎症应答的程度、以及影响神经系统的病症和损伤的类型。[0238]据此，在某些实施方案中，治疗受试者的角膜神经痛、角膜痛觉过敏、角膜疼痛或减轻其症状的方法包括向该受试者给药一种组合物，所述组合物包含治疗有效量的一种或多种神经激肽1受体(nk1r)拮抗剂。[0239]在某些实施方案中，在角膜神经痛或其状的治疗中，一种或多种第二药物可以与或其他治疗方法共同给药或协同给药。例如，第二药物可以是抗炎药诸如外用皮质类固醇、外用和口服阿奇霉素、口服多西环素、环孢菌素、他克莫司、阿那白滞素。其他治疗方法包括再生性疗法，例如，自体血清滴眼液(20-100％)、神经生长因子、富含血小板血浆、脐带血清滴眼液。针对疼痛的全身性药物疗法是可以与本文所例示的组合物联合使用的另一种治疗方法。例如，去甲替林、阿米替林、卡马西平、3gaba能药物(加巴喷丁、普瑞巴林)、snri如度洛西汀和文拉法辛、阿片类药物如曲马多、1b类钠离子通道阻断剂美西律。[0240]在某些实施方案中，nk1r拮抗剂与第二治疗剂或治疗联合给药。nk1r拮抗剂与第二组合物同时或依次给药，该第二组合物包含以下一者或多者：抗生素、免疫抑制组合物、抗炎组合物、生长因子、类固醇、趋化因子或趋化因子受体。[0241]在某些实施方案中，该组合物包含一种或多种抗生素组合物以用于与nk1r拮抗剂合用。抗生素和nk1r拮抗剂组合物同时或依次给药。用于与nk1r拮抗剂的联合疗法的示例性抗生素组合物包括，但不限于，阿米卡星(amikacin)、庆大霉素(gentamicin)、卡那霉素(kanamycin)、新霉素(neomycin)、萘替米星、链霉素、妥布霉素、替考拉宁、万古霉素、阿奇霉素、克拉霉素、克拉霉素、地红霉素、红霉素、罗红霉素、醋竹桃霉素、阿莫西林、氨苄青霉素、阿洛西林、羧苄青霉素、氯唑西林、双氯西林、氟唑西林、美洛西林、乙氧萘青霉素、青霉素、哌拉西林、替卡西林、杆菌肽、粘菌素、多粘菌素b、环丙沙星、依诺沙星、加替沙星、左氧氟沙星、洛美沙星、莫西沙星、诺氟沙星、氧氟沙星、曲伐沙星、磺胺米隆、磺胺醋酰、磺胺甲二唑、柳氮磺胺吡啶、磺胺异噁唑、四环素、甲氧苄氨嘧啶、磺胺甲基异噁唑、地美环素、强力霉素、米诺环素、多西环素、土霉素或四环素(tetracycline)。[0242]在一些实施方案中，该组合物包含nk1r拮抗剂，与第二种免疫抑制组合物同时或依次给药。该组合物可以例如外用或眼内给药。第二种免疫抑制组合物可以外用、眼内或全身给药。在多种实施方案中，免疫抑制化合物包含环孢菌素a或其类似物，其浓度为0.05至4.0％(mg/ml)。或者或此外，该免疫抑制组合物可以包含糖皮质激素、细胞静止素、烷基化剂(氮芥/环磷酰胺、亚硝基脲、铂化合物)、抗代谢药(甲氨蝶呤、任何叶酸类似物、硫唑嘌呤、巯嘌呤、任何嘌呤类似物、任何嘧啶类似物、蛋白质合成的任何抑制剂、细胞毒性抗生素(更生霉素、蒽环霉素、丝裂霉素c、博来霉素、光辉霉素)、多克隆抗体((更生霉素、蒽环霉素、丝裂霉素c、博来霉素、光辉霉素)、多克隆抗体(任何针对抗淋巴细胞或抗胸腺细胞抗原的抗体)、单克隆抗体(任何针对t细胞受体的抗体、任何针对il-2的抗体、巴利昔单抗/得利珠单抗(declizumab)/)、他克莫司/prograftm/fk506、西罗莫司/rapamunetm/雷帕霉素、干扰素β、干扰素γ、阿片类药物、tnfα结合蛋白、麦考酚酯或fty720。[0243]药物制剂和递送至眼睛[0244]用于拮抗nk1r的剂量、制剂、剂量体积、方案和方法可变。因此，最小和最大有效剂量依据给药方法而变。在某些实施方案中，nk1r拮抗剂配制为外用制剂。在某些实施方案中，外用制剂为液体滴剂。在某些实施方案中，液体滴剂包含至少0.0001μg/μl至约50μg/μl的一种或多种nk1r拮抗剂。在某些实施方案中，液体滴剂包含至少0.001μg/μl至约50μg/μl的一种或多种nk1r拮抗剂。在某些实施方案中，液体滴剂包含至少0.01μg/μl至约50μg/μl的一种或多种nk1r拮抗剂。在某些实施方案中，液体滴剂包含至少0.1μg/μl至约50μg/μl的一种或多种nk1r拮抗剂。在某些实施方案中，液体滴剂包含至少0.0001μg/μl至约40μg/μl的一种或多种nk1r拮抗剂。在某些实施方案中，液体滴剂包含至少0.0001μg/μl至约35μg/μl的一种或多种nk1r拮抗剂。在某些实施方案中，液体滴剂包含至少0.0001μg/μl至约30μg/μl的一种或多种nk1r拮抗剂。在某些实施方案中，液体滴剂包含至少0.0001μg/μl至约25μg/μl的一种或多种nk1r拮抗剂。在某些实施方案中，液体滴剂包含至少0.1μg/μl至约10μg/μl的一种或多种nk1r拮抗剂。[0245]在某些实施方案中，将包含nk1r拮抗剂的液体滴剂外用给药至每只眼睛，一天至少一次，一天至多4或5次。在某些实施方案中，将包含nk1r拮抗剂的液体滴剂给药一段持续时间，对于眼部红肿为至少一天至两天或更多天或按照需要给药，而对于进行干眼疗法则无限期。[0246]在本发明的多种实施方案中，包含nk1r拮抗剂的组合物可以给药仅一次或多次。例如，nk1r拮抗剂可以使用本文所公开的方法每天、每周、每个月或每年给药至少约一次、两次、三次、四次、五次、六次或七次。在一些实施方案中，包含nk1r拮抗剂的组合物每个月给药一次。在某些实施方案中，该组合物通过玻璃体内注射每个月给药一次。在多种实施方案诸如牵涉滴眼液的输送法南干中，组合物是自己给药的。[0247]在某些实施方案中，滴眼液配制在药学可接受的无活性赋形剂或载体诸如磷酸盐缓冲盐水中，并在4℃储存。[0248]优选制剂为固体、贴剂、软膏、凝胶、液体、气溶胶、喷雾、聚合物、隐形眼镜、膜、乳液或悬浮液的形式。制剂外用给药，例如，组合物被递送并直接接触眼睛。组合物以0.01-50％(重量/体积)的浓度存在。例如，抑制性组合物以1％(重量/体积)、10％(重量/体积)、20％(重量/体积)、25％(重量/体积)、30％(重量/体积)、40％(重量/体积)、50％(重量/体积)、或其间任何百分比的浓度存在。该方法不包含全身性给药或计划将组合物大量传播至非眼部组织。[0249]任选地，组合物进一步含有药学可接受的载剂。示例性药学载体包括但不限于，为选自由以下所组成的组的化合物：生理学可接受的盐、与卡波醇的泊洛沙姆类似物、卡波醇/羟丙基甲基纤维素(hpmc)、卡波醇-甲基纤维素、溶粘蛋白剂(mucolyticagent)、羧甲基纤维素(cmc)、透明质酸、环糊精和石油。在一个实施方案中，溶粘蛋白剂为n-乙酰基半胱氨酸。[0250]对于眼部免疫炎性疾病的治疗，可以将nk1r拮抗剂(例如，包含nk1r拮抗剂的药物组合物)局部地给药，例如，作为外用滴眼液、眼周注射(例如，眼球筋膜囊下注射)、眼内注射、玻璃体内注射、眼球后注射、视网膜内注射、结膜下注射或使用电离子透入疗法或可以主动或被动递送药物的眼周装置。[0251]适用于外用给药的药物制剂可以配制为水溶液、软膏、霜剂、栓剂、洗液、粉末、溶液、糊剂、凝胶、喷雾剂、气溶胶、脂质体、微胶囊、微球或油。[0252]适用于外用给药至眼睛的药物制剂包括滴眼液，其中，nk1r拮抗剂被溶解或悬浮在合适的载体中，尤其是水溶液。待给药至眼睛的制剂将具有眼科相容的ph和渗透压。术语“眼科可接受的媒介物”意为药物组合物具有与眼科组织生理上相容的物理性质(例如，ph及/或渗透压)。[0253]在一些实施方案中，本发明的眼科组合物配制为无菌水溶液，其渗透压为约200至约400毫渗摩尔/千克水(“mosm/kg”)和生理学相容的ph。该溶液的渗透压可通过常规试剂诸如无机盐(例如，nacl)、有机盐(例如，柠檬酸钠)、多元醇(例如，丙二醇或山梨醇)或其组合来调节。[0254]在多种实施方案中，本发明的眼科制剂可以是液体、固体或半固体剂型的形式。本发明的眼科制剂可包含，取决于最终剂型，合适的眼科可接受的赋形剂。在一些实施方案中，配制眼科制剂以维持生理学可耐受的ph范围。在某些实施方案中，该眼科制剂的ph范围在约5至约9的范围内。在一些实施方案中，该眼科制剂的ph范围在约6至约8的范围内，或为约6.5、约7或约7.5。[0255]在一些实施方案中，该组合物是水溶液形式，诸如可以以滴眼液形式存在的水溶液。通过合适的分配器，可以通过将已知数量的液滴诸如一滴、两滴、三滴、四滴或五滴给药至眼睛，来计量所希望剂量的活性剂。[0256]本发明的组合物中可以包括一种或多种眼科可接受的ph调节剂及/或缓冲剂，包括酸类诸如醋酸、硼酸、柠檬酸、乳酸、磷酸和盐酸；碱类诸如氢氧化钠、磷酸钠、硼酸钠、柠檬酸钠、醋酸钠和乳酸钠；以及缓冲剂诸如柠檬酸盐/葡萄糖、碳酸氢钠和氯化铵。可以包括将该组合物的ph维持在眼科可接受范围内的量的此类酸、碱和缓冲剂。组合物中可以包括一种或多种眼科可接受的盐，其量足以将该组合物的渗透压带至眼科可接受的范围内。此类盐包括那些具有钠、钾或铵阳离子的盐，和那些具有氯、柠檬酸根、抗坏血酸根、硼酸根、磷酸根、碳酸氢根、硫酸根、硫代硫酸根或亚硫酸氢根阴离子的盐。[0257]用于眼部递送的药物组合物也包括原位可胶凝水性组合物。这种组合物包含胶凝剂，其浓度可在与眼睛或与泪液接触后促进胶凝。合适的胶凝剂包括但不限于热固性聚合物。如本文中所用，术语“原位可胶凝”不仅包括在与眼睛或与泪液接触后形成凝胶的低粘度液体，而且包括更粘稠的液体诸如在给药至眼睛后表现出实质性增加的粘度或凝胶硬度的半固体和触变性凝胶。参见例如，ludwig,adv.drugdeliv.rev.3；57:1595-639(2005)，其整体内容通过引用并入本文。[0258]通过隐形眼镜进行药物递送[0259]本文提供隐形眼镜和包含nk1r拮抗剂的组合物。例如，该组合物掺入镜片中或涂覆在镜片上。该组合物被隐形眼镜聚合物化学结合或物理包埋。或者，有色添加剂被聚合物组合物化学结合或物理包埋且以与治疗药物组合物相同的速率释放，使得有色添加剂强度的变化指示保留结合或包埋在聚合物内的治疗性药物组合物的量或剂量。或者或此外，将紫外(uv)吸收剂化学结合或物理包埋在隐形眼镜聚合物内。隐形眼镜是疏水的或亲水的。[0260]用于制造具有递送本发明组合物的单元的疏水性镜片的材料包括，但不限于，阿美福康a(amefocona)、阿昔福康a(amsilfocona)、尔奎那福康a(aquilafocona)、阿福康a(arfocona)、开布福康a(cabufocona)、开布福康b(cabufoconb)、卡布昔福康a(carbosilfocona)、奎福康a(crilfocona)、奎福康b(crilfoconb)、地美福康a(dimefocona)、因伏福康a(enflufocona)、因伏福康b(enflofoconb)、艾瑞福康a(erifocona)、伏欧落福康a(flurofocona)、伏昔福康a(flusilfocona)、伏昔福康b(flusilfoconb)、伏昔福康c(flusilfoconc)、伏昔福康d(flusilfocond)、伏昔福康e(flusilfocone)、黑沙福康a(hexafocona)、后佛福康a(hofocona)、亥布福康a(hybufocona)、依他必思伏欧落福康a(itabisfluorofocona)、依他伏欧落福康a(itafluorofocona)、依他福康a(itafocona)、依他福康b(itafoconb)、可福康a(kolfocona)、可福康b(kolfoconb)、可福康c(kolfoconc)、可福康d(kolfocond)、落提福康a(lotifocona)、落提福康b(lotifoconb)、落提福康c(lotifoconc)、美拉福康a(melafocona)、米嘎福康a(migafocona)、奈福康a(nefocona)、奈福康b(nefoconb)、奈福康c(nefoconc)、央昔福康a(onsifocona)、欧福康a(oprifocona)、欧可昔伏福康a(oxyfluflocona)、帕伏福康b(paflufoconb)、帕伏福康c(paflufoconc)、帕伏福康d(paflufocond)、帕伏福康e(paflufocone)、帕伏福康f(paflufoconf)、帕昔福康a(pasifocona)、帕昔福康b(pasifoconb)、帕昔福康c(pasifoconc)、帕昔福康d(pasifocond)、帕昔福康e(pasifocone)、配迷福康a(pemufocona)、包罗福康a(porofocona)、包罗福康b(porofoconb)、落伏福康a(roflufocona)、落伏福康b(roflufoconb)、落伏福康c(roflufoconc)、落伏福康d(roflufocond)、落伏福康e(roflufocone)、落昔福康a(rosilfocona)、沙他福康a(satafocona)、昔伏福康a(siflufocona)、西拉福康a(silafocona)、丝特若福康a(sterafocona)、苏洛福康a(sulfocona)、苏洛福康b(sulfoconb)、特拉福康a(telafocona)、替昔福康a(tisilfocona)、妥洛福康a(tolofocona)、催福康a(trifocona)、乌尼福康a(unifocona)、维纳福康a(vinafocona)及威洛福康a(wilofocona)。[0261]用于制造具有递送本发明组合物的单元的疏水性镜片的材料包括但不限于，巴菲康a(abafilcona)、阿考菲康a(acofilcona)、阿考菲康b(acofilconb)、阿克夸菲康a(acquafilcona)、阿洛菲康a(alofilcona)、阿尔法菲康a(alphafilcona)、阿姆菲康a(amfilcona)、阿替菲康a(astifilcona)、阿拉菲康a(atlafilcona)、巴拉菲康a(balafilcona)、必思菲康a(bisfilcona)、巴菲康a(bufilcona)、库菲康a(comfilcona)、克罗菲康a(crofilcona)、环菲康a(cyclofilcona)、达菲康a(darfilcona)、德他菲康a(deltafilcona)、德他菲康b(deltafilconb)、地莫费尔康a(dimefilcona)、卓克斯菲康a(droxfilcona)、依拉菲康a(elastofilcona)、依匹昔菲康a(epsilfilcona)、艾司菲康a(esterifilcona)、依他菲康a(etafilcona)、福可菲康a(focofilcona)、佳利富康a(galyfilcona)、珍菲康a(genfilcona)、戈伐菲康a(govafilcona)、海菲康a(hefilcona)、海菲康b(hefilconb)、海菲康c(hefilconc)、海拉菲康a(hilafilcona)、海拉菲康b(hilafilconb)、海西菲康a(hioxifilcona)、海西菲康b(hioxifilconb)、海西菲康c(hioxifilconc)、氢菲康a(hydrofilcona)、利诺菲康a(lenefilcona)、利克菲康a(licryfilcona)、利克菲康b(licryfilconb)、利多菲康a(lidofilcona)、利多菲康b(lidofilconb)、若他拉菲康a(lotrafilcona)、若他拉菲康b(lotrafilconb)、马菲康a(mafilcona)、马沙菲康a(mesafilcona)、美他菲康b(methafilconb)、米帕菲康a(mipafilcona)、奈弗康a(nelfilcona)、奈曲福康a(netrafilcona)、奥库菲康a(ocufilcona)、奥库菲康b，c(ocufilconb，c)、奥库菲康d(ocufilcond)、奥库菲康e(ocufilcone)、奥菲康a(ofilcona)、奥马菲康a(omafilcona)、奥昔菲康a(oxyfilcona)、喷他菲康a(pentafilcona)、波菲尔康a(perfllcona)、脓菲康a(pevafilcona)、菲莫菲康a(phemfilcona)、聚麦康(polymacon)、斯弗康a(senofilcona)、西拉费尔康a(silafilcona)、西欧可喜菲康a(siloxyfilcona)、舒菲康a(surfilcona)、替菲康a(tefilcona)、四菲康a(tetrafilcona)、催菲康a(trilfilcona)、维菲康a(vmcona)、维菲康b(viflconb)和赛洛菲康a(xylofilcona)。[0262]实施例提供于下，以促进更完全地理解本发明。下述实施例举例说明制作和实践本发明的例示性模式。但是，本发明的范畴并不限于这些实施例中公开的具体实施方案，由于可使用其他替代方法来获得相似的结果，这些具体实施方案仅用作例示性说明的目的。[0263]实施例[0264]实施例1：ded小鼠模型中的物质p(sp)水平增加[0265]调节性t细胞(treg)是抑制炎症并维持免疫静止的主要成分(natrevimmunol.2008；8:523-532)。已经证明，treg在抑制ded中的炎症方面有缺陷，而恢复treg功能对于治疗ded至关重要(jimmunol2009)。此外，图1a至图1c显示，ded眼部表面内(图1a和图1b)和引流淋巴结中(图1c)的sp水平增加，表明阻断sp限号传导在ded中的潜在治疗功效。在图1a至图1c中，收获来自ded小鼠的角膜、结膜和引流淋巴结(dln)组织并均质化。使用elisa试剂盒测量组织匀浆中的sp水平。在ded中，sp蛋白质显著增加(*，p《0.05)。[0266]但是，已经有报导指出，sp信号传导在维持角膜上皮稳态中发挥关键的生理学作用(plosone2016；11:e0149865；j.immunol.2016；197:4021-33)并且促进角膜伤口愈合(diabetes2014；63:4262-74；jcellphysiol.1996；169:159-6)。例如，us2017/0246238主张，活化(而非阻断)sp信号传导介导了眼睛保护并且可以减轻干眼症(us2017/0246238)，得到suvass.等人的观察结果的支持，该观察结果表明，在sp受体nk1r中具有遗传缺陷的(nk1r-/-)小鼠呈现出ded相关的临床特征。但是，目前尚无证据表明任何k1r激动剂(诸如sp)治疗可以减轻ded。事实上，nk1r-/-小鼠具有多种与野生型小鼠不同的表型，包括神经系统病变。在这种基因修饰的小鼠品系中，通过那些在野生型情况下“非优选的”(在敲除小鼠中变为“优选的”)sp受体(nk2r或nk3r)进行的sp信号传导仍然存在或者甚至得到增强。因此，sp信号传导在ded发病机制中的确切作用需要使用更好的动物模型进一步研究。[0267]本技术描述，通过阻断sp信号传导来恢复或增强非感染性眼部免疫炎性病症(包括ded)中的treg的抑制作用，从而实现免疫静止(图2)。例如，图2示出，阻断sp-nk1r信号传导恢复或增强了眼部免疫炎性病症(诸如眼部红肿、干眼症和眼痛)中的treg功能，并因此抑制炎症且实现免疫静止(阻断；↑，增强；↓，抑制或降低)。[0268]这一观察结果无疑与us2017/0246238的观察结果相反，因为本技术表明sp拮抗剂(不是激动剂)具有治疗活性。[0269]实施例2：nk1r拮抗剂废止sp介导的treg减少[0270]图3a和图3b显示sp对于treg细胞的体外效应的结果。从天然小鼠分离正常的功能性foxp3+cd4+treg，并与不同剂量(例如，0.01、0.1、1和10nm)的sp在体外共同培养。发现，从0.1nm开始，0.1、1和10nm的sp显著减少了treg(图3a)。相反，nk1r拮抗剂的添加阻止了treg的损失(图3b)。将分离的treg与sp(1nm)共同培养，并且导致回收的treg显著减少。当将nk1r拮抗剂spantidei(100μm)添加到培养物中时，sp诱导的treg减少被废止(*，p《0.05)(图3b)。这些数据表明了阻断sp-nk1r信号传导对于treg的体外保护效应，指示临床治疗功效。[0271]实施例3：外用nk1r拮抗剂降低ded严重程度并且抑制眼表炎症[0272]物质p通过阻遏抑制性分子和分泌的免疫调节细胞因子的treg表达来诱导treg功能障碍，而该功能障碍被spantidei逆转。图15a和图15b是所获得的结果，表明在干眼症(ded)的进程中，眼部表明内的物质p水平增加。在c57bl/6小鼠体内诱导ded，诱导时间为14天。收获对照(第0天)和ded小鼠(第4天和第14天)的角膜、结膜和三叉神经节(tg)并将组织均质化。图15a显示研究的结果，其中，使用酶联免疫吸附测定法分析对照和ded小鼠的均质化组织上清液中的角膜、结膜和tg中的物质p的蛋白质水平，并且将蛋白质水平调节至通过bca蛋白质测定试剂盒(thermoscientific,rockford,il)测量的总蛋白质。图15b显示研究的结果，其中，对照和ded小鼠的角膜、结膜和tg中的物质pmrna水平使用实时pcr进行分析。数据表达为均值±sem(图15a和图15b)。n＝2个独立实验(图15a和图15b)。[0273]图6a、图6b、图7c、图8a至图8c、和图9a至图9d显示评估在ded和眼部红肿的动物模型中阻断sp信号传导的体内治疗功效的结果。通过使用受控环境室将野生型小鼠在干燥应激中暴露14天，诱导ded。在该模型中部进行任何其他操控。在诱导4天后，小鼠(本领域公认的模型)发展出临床显性疾病，然后开始进行nk1r拮抗剂(cp-99,994或l-733,060，3×/天)的外用给药，持续10天(直到第14天)。未治疗的或pbs治疗的小鼠充当对照。使用国家眼科研究所/工业nei评级方案通过临床荧光素评分(cfs)评定疾病的临床严重程度。用于将荧光素染色评级的nei量表将角膜和结膜表面分隔以辅助测量荧光素摄取。对于每个角膜上五个区域中的每一个，使用0至3的标准化评级系统。当不存在染色时，指定为0级；并且最高得分为15。[0274]在第7、10和14天，与未治疗的或经媒介物(例如，磷酸盐缓冲盐水(pbs))治疗的小鼠相比，外用cp-99,994或l-733,060显著降低了ded小鼠的cfs得分(p《0.05)(图6a)。此外，眼表的炎性浸润得到显著抑制，例如，通过nk1r拮抗作用(例如，外用cp-99,994或l-733,060)减轻，证据是角膜中活化的cd11b+细胞(例如，mhc-ii+cd11b+细胞)显著减少(图6b)和结膜中的th17细胞(例如，il-17+cd4+细胞)显著减少(图6c)(*，p《0.05)。这些数据表明，对sp受体nk1r的外用阻断通过恢复眼表免疫静止而有效地降低了ded严重程度，表明外用nk1r阻断剂对于治疗眼部免疫炎性疾病是有效的。[0275]图8a显示结果，其表明sp在体外阻遏treg对抑制性分子foxp3、ctla4和pd-1的表达。此外，将treg与sp一起孵育导致treg分泌的免疫调节性细胞因子(tgfβ和il-10)的水平显著降低(图8b)。图8c表明，与sp预孵育的treg在体外抑制效应t细胞增殖的能力较低。但是，将nk-1r拮抗剂spantidei(spt)添加之共培养物中逆转了sp诱导的treg功能障碍。数据表示均值±sem。*p《0.05。[0276]图9a至图9d显示结果，其表明通过全身性给药spantidei对sp信号传导进行的抑制恢复了treg功能，阻遏th17细胞，并且降低了ded的严重程度。图9a显示，与用pbs治疗的对照相比，用spantidei(spt)治疗的ded小鼠具有显著降低的角膜荧光素染色(cfs)得分。图9b显示，从用spantidei治疗的ded小鼠的dln中分离的treg阻遏效应t细胞增殖的能力高于源自对照组的treg。用spantidei治疗ded小鼠导致ded小鼠的(图9c)引流淋巴结和(图9d)结膜中cd4+il-17+thh17细胞的频率与对照相比显著下降，因此表明在减轻ded严重程度方面的功效。数据表示均值±sem。*p《0.05，**p《0.001。[0277]这些数据表明，对sp受体nk1r的外用阻断通过恢复眼表免疫静止而有效地降低了ded严重程度，表明外用nk1r阻断剂对于眼部免疫炎性疾病诸如ded及/或眼部红肿而言是有效的治疗性干预手段。[0278]nk1r：uniprotp25103[0279]mdnvlpvdsdlspnistntsepnqfvqpawqivlwaaaytvivvtsvvgnvvvmwiilahkrmrtvtnyflvnlafaeasmaafntvvnftyavhnewyyglfyckfhnffpiaavfasiysmtavafdrymaiihplqprlsatatkvvicviwvlalllafpqgyysttetmpsrvvcmiewpehpnkiyekvyhicvtvliyflpllvigyaytvvgitlwaseipgdssdryheqvsakrkvvkmmivvvctfaicwlpfhiffllpyinpdlylkkfiqqvylaimwlamsstmynpiiycclndrfrlgfkhafrccpfisagdyeglemkstrylqtqgsvykvsrlettistvvgaheeepedgpkatpssldltsncssrsdsktmtesfsfssnvls(seqidno:1)。[0280]实施例4：nk1r拮抗剂减轻眼部红肿的严重程度[0281]开发了一种基于图像j的客观量化眼部红肿严重程度而不依赖于眼科医生主观评分的方法(amparo,etal.“theocularrednessindex:anovelautomatedmethodformeasuringocularinjection.”investigativeophthalmology&visualscience,2013,pp.quicksubmit:2017–06-18t21:14:33–0400)。这一数字评分系统自动化地分析患者眼睛图像并给出作为眼部红肿指数(ori)的得分，该得分以连续百分制形式在0至100的范围内，其中，100是最严重的红肿。这种方法已经用于眼部红肿的动物模型中以评定红肿的严重程度。[0282]所得结果可见于图10至图14中。使用眼部红肿指数(ori)用imagej遵循以下步骤在动物模型中做出眼部红肿的评定。步骤1：通过数码相机捕获结膜图像并记录为rgb彩色jpeg图像(3264x2448像素)。步骤2：为了降低图像中的背景噪声，根据所选择的滤纸区域(黑色方框)做出色彩校正(白平衡)。步骤3：由使用者选择roi(感兴趣的区域，黄色圆圈内的区域)作为评定区域，并且程序读出每个像素的红-绿-蓝(rgb)值，将其转化为色相饱和度(hsv)空间，最后，自动将这些值转化为选定区域内红肿的数字百分制值(imagej计算机程序；nih)。[0283]图11显示从非过敏性(非感染性)眼部红肿的兔模型获得的结果。牺牲动物，并将40μl的连续递增浓度的达哌拉唑(dapiprazole)施加至动物的右眼以诱导眼部红肿。pbs作为对照用于左眼。通过裂隙灯检查眼睛，对每次诱导拍照，在诱导后第一个2分钟阶段内每30秒拍照一次，然后在接下来的8分钟内每4分钟拍照一次，再每10分钟拍照一次，直到1小时。表格总结了在1小时观察期内，诱导后ori得分的最大变化和当该变化发生的时间(峰值时间)。代表性图像显示眼部红肿的发展，并且照片总结了ori得分变化的动力学，数据表示均值±sem。结果显示，5％达哌拉唑诱导ori得分的最大增加。*，p《0.05，《0.01，5％达哌拉唑与pbs对比。[0284]图12显示从过敏性眼部红肿的豚鼠模型获得的结果。牺牲动物，并将20μl的1.5mg/ml组胺施加至动物的右眼以诱导眼部红肿。pbs作为对照用于左眼。通过裂隙灯检查眼睛，对每次诱导拍照，在诱导后第一个2分钟阶段内每30秒拍照一次，然后在接下来的8分钟内每4分钟拍照一次，再每10分钟拍照一次，直到1小时。表格总结了在1小时观察期内，诱导后ori得分的最大变化和当该变化发生的时间(峰值时间)。代表性图像显示眼部红肿的发展，并且照片总结了ori得分变化的动力学，数据表示均值±sem。p《0.01，与pbs进行比较。[0285]神经激肽-1受体拮抗作用显示减轻非过敏性眼部红肿(图13)。在以40μl体积滴注5％达哌拉唑的同时，用1.0mg/mll-703,606(高选择性nk1r拮抗剂)对动物进行外用治疗。用达哌拉唑诱导但不进行l-703,606治疗的动物用作对照。通过裂隙灯检查眼睛，对每laboratories,wilmington,ma)。[0296]干眼症(ded)的诱导：通过将小鼠在具有15l/min恒定气流和21-23℃的低湿度(相对湿度：《20％)受控环境室(cec)中圈养14天，诱导ded。将在室内空气条件下圈养的年龄和性别匹配的小鼠作为对照。使用荧光素(sigma-aldrich)染色评定角膜上皮疾病并且使用国家眼科研究所分级系统(nei，bethesda,md；cheny.etal.ifn-gamma-expressingth17cellsarerequiredfordevelopmentofsevereocularsurfaceautoimmunity.jimmunol2017,199:1163-9)进行评分。将1μl的2.5％荧光素施加至小鼠的侧结膜囊，并且在3分钟后，使用裂隙灯显微镜在钴蓝光下检查角膜。使用0-3的标准国家眼科研究所分级系统对角膜的五个区域中的每一个以掩蔽模式记录点状染色。[0297]使用nk1r拮抗剂进行外用治疗：将小鼠分配至四个组中一个(每组n＝5)。在ded诱导后第4天至第14天，将1μg/μl的nk1r拮抗剂cp-99,994、l-733,060(r&dsystems,minneapolis,mn)或者pbs每天外用给药三次。未治疗的ded小鼠充当对照。[0298]源自骨髓的树突细胞(bmdc)的生成：从c57bl/6小鼠收获长骨(股骨和胫骨)并制备细胞悬浮液。将细胞与红血球(rbc)裂解缓冲液(sigma-aldrich,st.louis,mo)在37℃一起孵育10分钟。将骨髓细胞以5x106细胞的浓度铺板在5mlrpmi-1640培养基/孔(lonzabiologics,inc.,hopkinton,ma,usa)中，该培养基以5％热灭活胎牛血清(atlantabiologicals,flowerbranch,ga)、2mml-谷氨酰胺(lonzabiologics,inc.)、100u/ml青霉素(lonzabiologics,inc.)、100μg/ml链霉素(lonzabiologics,inc.)、50mm2-巯基乙醇(sigma-aldrich)和20ng/ml粒细胞/巨噬细胞集落刺激因子(gm-csf,biolegend,sandiego,ca)补充，培养6到7天。通过在第2天和第4天洗涤培养物而去除淋巴细胞。在第7天，收获非粘附的和松散粘附的不成熟bmdc。为了活化bmdc，将不成熟的bmdc在20ng/ml的il-1β(peprotech,rockyhill,nj)存在下在6孔板中培养24小时。[0299]原代三叉神经节培养：使用已知方法培养三叉神经节(tg)，例如，bertkeas,etal.a5-positiveprimarysensoryneuronsarenonpermissiveforproductiveinfectionwithherpessimplexvirus1invitro.jvirol2011,85:6669-77。从6至8周龄c57bl/6小鼠收获tg，并且用木瓜蛋白酶消化，之后再用ii型胶原酶/中性蛋白酶(invitrogen)消化。通过5层optiprep密度梯度(sigma-aldrich)的下面几层选择tg。将神经元计数，并且以3,000个细胞每孔的密度铺板在聚-l-赖氨酸和层粘连蛋白包被的4室载玻片或24孔板上(malinsa,etal.natprotoc2007,2:152-60)。在前3天，使用完全神经元培养基维持神经元培养物：以下列补充的神经元基础a培养基(invitrogen，目录号10888-022)：2％b27补充剂；1％青霉素和链霉素；l-谷氨酰胺(500μm)；神经生长因子(ngf；50ng/ml)；胶质细胞源性神经营养因子(gdnf；50ng/ml)；以及有丝分裂抑制剂氟脱氧尿苷(40μm)和阿非迪霉素(aphidicolin)(16.6μg/ml)。然后将培养基替换为不含氟脱氧尿苷和阿非迪霉素的培养基(生长因子来自r&dsystems，其他补充剂来自sigma)。[0300]源自骨髓的树突细胞与三叉神经节共培养：执行原代tg培养，并在培养7天后收集松散粘附的不成熟bmdc。计数bmdc的数目之后，将在不含gm-csf的bmdc培养基(基于rpmi-1640)中的细胞密度调节为150,000个细胞/ml。去除tg培养基后，向每孔中添加含有不成熟bmdc的1ml培养基。2小时后，向每孔中添加il-1β(20ng/10μl)以诱导bmdc成熟，并将细胞共培养18小时。[0301]单细胞悬浮液制备和流式细胞术：收获下颌下和颈部引流淋巴结(dln)并制备单细胞悬浮液。在商用蛋白质转运抑制剂(0.7μl/100μl培养基，golgistop；bdbiosciences,sanjose,ca)存在下，将细胞用佛波醇12-肉豆蔻酸酯13-乙酸酯(pma，50ng/ml；sigma-aldrich)和离子霉素(500ng/ml；sigma-aldrich)刺激6小时。通过在球结膜与眼睑结膜交界处提起，沿着球结膜和眼睑插入点解剖，获取结膜(vannas剪刀；storz,bausch&lomb)。将结膜样品在以10％胎牛血清(fbs)补充的rpmi(thermofisherscientific,waltham,ma)中培养，并且用pma(50ng/ml；sigma-aldrich)和离子霉素(500ng/ml；sigma-aldrich)在蛋白质转运抑制剂(0.7μl/100μl培养基，golgistop；bdbiosciences)存在下在37℃刺激24小时。将收获的角膜在含有2mg/mliv型胶原酶(sigma-aldrich)和2mg/mldnasei(roche)的rpmi培养基中在37℃消化1小时。然后将悬浮液过滤通过70-μm细胞过滤器。dln和角膜的单细胞悬浮液用以下抗体染色：亮紫421偶联的抗鼠i-a/i-e(mhc-ii)、pe偶联的抗cd11c(bdpharmingen,sanjose,ca)、percp/cy5.5偶联的抗cd11b、fitc偶联的抗cd4(biolegend,sandiego,ca)和pe偶联的抗白介素17a(ebioscience,sandiego,ca)。在将细胞固定和透化之后，用pe/cy7偶联的抗foxp3(ebioscience)进行核内染色。对照样品用适当的同型匹配的抗体染色。使用lsrii流式细胞仪(bdbiosciences,franklinlakes,nj,usa)检查染色的细胞，并且使用商用summit软件(summitv4.3；dakocolorado,inc.,fortcollins,co)分析数据。[0302]酶联免疫吸收测定：对于蛋白质提取，收获角膜和三叉神经节，并在含有蛋白酶抑制剂(sigma-aldrich)的冷的无菌pbs中在-80℃储存备用。将样品在冰上均质化并离心。使用商用竞争酶免疫测定试剂盒(r&dsystems)测定sp的水平。[0303]实时pcr：从小鼠收获眼球和眼睑结膜、角膜和三叉神经节，并在trizol试剂(invitrogen,carlsbad,ca)中在-80℃储存，直到使用rneasy微量试剂盒(qiagen,valencia,ca)和superscriptiii试剂盒(invitrogen)分离rna并逆转录。使用taqman通用pcr预混液和预先设计的用于il-17a(mm00439618_m1)、sp(mm01166996_m1)和3-磷酸甘油醛脱氢酶(gapdh,mm99999915_g1)的引物(appliedbiosystems,carlsbad,ca)执行实时pcr。使用实时pcr系统(lightcycler480ii系统；rocheappliedscience,indianapolis,in)分析样品，并且通过比较性阈值循环方法使用gapdh作为内部对照来分析结果。[0304]统计学分析：执行未配对学生t检验以进行两组之间的比较，并将p《0.05视为统计学显著的。结果表达为至少2个独立实验的均值±sem。[0305]物质p表达在干眼症的进程中增加[0306]为了评定sp在不同阶段的ded中的表达水平，测量正常和ded小鼠的角膜和三叉神经节(tg)中的spmrna和蛋白质水平。采用了一种众所周知的ded小鼠模型，在该模型中，通过将动物在受控环境室中圈养2周来诱导ded，如先前所示(chauhansk,etal.,anovelpro-lymphangiogenicfunctionforth17/il-17.blood2011,118:4630-4)。在ded诱导后第4天和第14天收获角膜和tg，并且分别使用elisa和实时pcr评定两种组织中的spmrna水平。使用elisa评估tg培养物上清液中的sp蛋白质水平。我们的结果表明了角膜和tg两者中的sp表达，两种组织中的该表达水平在ded诱导后均上调(图4，分别为p＝0.01和p＝0.003)。到第14天，角膜和tg两者中的sp蛋白质水平均回至接近正常值。在mrna水平上，ded小鼠的角膜中的sp表达显著高于健康对照(在第4天为.84倍，p＝0.001；在第14天为1.43倍，p＝0.02)。此外，在tg中，spmrna水平显著高于在角膜中所见的那些，并且在ded进程中，由干燥应激引发的增加的表达出现得比较晚。这些结果显示了sp主要在tg神经元中在眼表处的组成性表达，其水平响应于干燥应激而上调。[0307]源自三叉神经的sp在体外促进源自骨髓的树突细胞成熟[0308]成熟的apc在thh17细胞的活化和ded中的自身免疫应答中发挥作用(barabinos.etal.progretineyeres2012,31:271-85；stevensonw,chauhansk,danar:dryeyedisease:animmune-mediatedocularsurfacedisorder.archophthalmol2012,130:90-100；hamrahp,etal.investophthalmolvissci2003,44:581-9)。鉴于观察到了sp水平响应于干燥应激而增加，下一步将评定sp对于apc成熟的效应。通过将小鼠骨髓细胞与20ng/mlgm-csf一起培养6天，培育不成熟的原子骨髓的树突细胞(bmdc)。然后，用20ng/mlil-1β在gm-csf不存在下将bmdc启动24小时。将启动的bmdc在三种不同浓度的sp(25、50和100pg/ml)存在下培养18小鼠，并使用流式细胞术评定bmdc对mhcii成熟标记物的表达(图5a)。结果表明，增加sp的浓度导致cd11c+bmdc中mhcii的平均荧光素强度(mfi)的显著且剂量依赖性的增加(sp50和100pg/ml与媒介物对比，分别为p＝0.03和p＝0.02)。为了探究tg神经元(其支配角膜)对于bmdc成熟的作用，将从ded小鼠或对照小鼠收获的tg培养3天，然后与启动的bmdc共培养18小时。此外，将两种不同剂量的神经激肽-1受体拮抗剂spantide(10和100μm)添加到共培养系统中，以阻断sp信号传导。使用流式细胞术分析不同的组中cd11c+bmdc对mhcii成熟标记物的表达。如图5b中所示，源自ded小鼠的tg诱导相较于源自正常健康小鼠的tg显著增加的bmdc对mhcii的表达(743±32与644±26对比，p＝0.04)。最后，用100μm浓度的spantide阻断sp显著废止了dedtg对于bmdc成熟的效应(p＝0.04，图5b)，表明源自tg神经元的sp在上调bmdc对mhcii的表达中的作用。[0309]nk1r拮抗剂改善ded并且抑制角膜和引流淋巴结中的抗原呈递细胞成熟[0310]鉴于nk1r拮抗剂在废止sp诱导的apc成熟中的体外效应，检查了sp受体的外用阻断对于ded在临床迹象的效应。在进行ded的诱导4天后，小鼠接受使用nk1r拮抗剂cp-99,994、l-733,060或者pbs对照的外用应用，每天三次，直到ded诱导后第14天。如图6a中所示，与未治疗的和经pbs治疗的对照相比，在ded诱导后第7、10和14天，nk1r拮抗剂cp-99,994或l-733,060的外用应用相助降低了cfs得分和ded严重程度(p《0.05)。为了证实sp的外用阻断在ded小鼠中对于apc成熟的效应，我们使用流式细胞术检查了角膜和dln中mhc-iihicd11b+细胞+细胞频率(图7b和图7c)。与天然小鼠相比，未治疗的和经pbs治疗的ded小鼠的角膜显示mhc-iihicd11b+细胞的频率显著增加。但是，在经cp-99,994和l-733,060治疗的小鼠两者中，角膜中的mhc-iihicd11b+细胞的频率均显著降低(图6b)。同样，与经pbs治疗的小鼠相比，经cp-99,994和l-733,060治疗的小鼠的dln显示了成熟的mhc-iihicd11b+细胞频率(图7c和图7d；cp-99,994与pbs对比，p＝0.005；l-733,060与pbs对比，p＝0.001)以及cd11b+细胞对mhc-ii的表达水平(图6e，cp-99,994与pbs对比，p＝0.003；l-733,060与pbs对比，p＝0.02)显著降低。[0311]nk1r拮抗剂抑制dln中的th17细胞的活化及其浸润到结膜中[0312]接着，检查了sp信号传导的外用阻断对于dln和结膜中的th17细胞活化的效应。未治疗的小鼠和经pbs治疗的小鼠的dln显示th17细胞的频率相较于天然小鼠有所增加(1倍至1.5倍)(分别为p＝0.003和p＝0.013)。但是，nk1r拮抗剂的外用应用显著降低了dln中的th17细胞频率(图8a和图8b，cp-99,994与pbs对比，p＝0.02；而l-733,060与pbs对比，p＝0.01)。在经nk1r拮抗剂治疗的小鼠的结膜中观察到了类似的th17细胞频率的下降趋势(图8c和图8d，cp-99,994与pbs对比，p＝0.02，而l-733,060与pbs对比，p＝0.01)。此外，实时pcr数据表明，在经nk1r拮抗剂治疗的小鼠的结膜中，炎性细胞因子il-17的mrna表达水平显著减少(cp-99,994与pbs对比以及l-733,060与pbs对比，p＝0.001)，进一步证实了在ded小鼠中阻断sp信号传导对于抑制th17免疫应答的效应。[0313]nk1r拮抗作用减轻了ded的严重程度和症状[0314]神经源性炎症已经被表明是牵涉到ded的发展和长期性中的一种潜在机制(beuermanrw,etal.,oculsurf2005,3:s203-6；sternme,etal.,theroleofthelacrimalfunctionalunitinthepathophysiologyofdryeye.expeyeres2004,78:409-16)。但是，迄今为止，神经调节因子诸如sp在ded发病机制中的确切作用尚未阐明(sabatinof.etal.theintriguingroleofneuropeptidesattheocularsurface.oculsurf2017,15:2-14)。本文中，证明了tg是引起ded的sp的主要来源。本文中显示源自tg的sp增强bmdc对mhcii的表达(与dc抗原呈递功能相关联的一种关键机制)，并且显示这一效应可以通过使用nk1r拮抗剂spantide阻断sp信号传导而被废止。最后，使用已确定的ded小鼠模型，还显示用nk1r拮抗剂cp-99,994和l-733,060对ded小鼠进行外用治疗抑制了mhcii的apc撷取，削弱了thh17细胞浸润和活性，并且减轻了ded严重程度。[0315]角膜是体内神经支配最为丰富的组织，其接收来自三叉神经的眼分支的致密感觉神经纤维。表达sp的纤维的致密网络支配角膜上皮的基底区域，而末端分支穿透更为浅表的层。已知sp是神经系统与免疫系统之间的交叉通讯中的关键分子。尽管神经元细胞充当sp的主要来源，但sp的内源性表达也已经被证明存在于免疫细胞、角膜细胞和上皮细胞中(o'connort.m.etal.,jcellphysiol2004,201:167-80；watanabem.etal.jpnjophthalmol2002,46:616-20)。到目前为止，很少有研究对ded中sp水平的改变进行研究。本文所述的结果证明，tg神经元中的sp的基线表达水平显著高于角膜，两者均响应于干燥应激而上调。在这些实验中，神经元spmrna水平在ded诱导后的较晚时间点增加，这一事实为sp在蛋白质水平上的早期表达似乎是由于角膜上皮中预先形成的蛋白质提供了证据。[0316]抗原呈递细胞(apc)，包括树突细胞(dc)，在先天性免疫和获得性免疫的界面处的免疫应答调节中发挥重要作用(fransenj.h.etal.arthritisresther2010,12:207)。组织驻留dc的异质群体已经在酵母上皮和基质中有所描述(hamrahp,huqso,liuy,zhangq,danamr.jleukocbiol2003,74:172-8)。在炎性条件下，这些dc经历成熟过程并且获得抗原呈递能力以刺激t淋巴细胞依赖性应答(liuy.j.etal.natimmunol2001,2:585-9)。已经在广泛的免疫炎性条件下(包括干眼症)观察到了成熟的mhcii+dc的存在(catryl,etal.graefesarchclinexpophthalmol1991,229:182-5)。成熟的apc从眼表归巢到dln是ded的早期免疫发病机制中的关键步骤(barabinos,cheny,chauhans,danar.progretineyeres2012,31:271-85；stevensonw,chauhansk,danar.archophthalmol2012,130:90-100)。apc介导的效应t细胞启动已经被认为是ded中自体免疫性的潜在来源(barabinos,cheny,chauhans,danar:ocularsurfaceimmunity:homeostaticmechanismsandtheirdisruptionindryeyedisease.progressinretinalandeyeresearch2012,31:271-85)。tg-bmdc共培养的结果表明，源自tg的sp增强了dc对mhcii类的表达，因此增强其抗原呈递能力。有趣的是，拮抗共培养物中的nk1r废止了sp诱导dc成熟，进一步证明了sp信号传导在诱导apc活化中的作用。[0317]迄今为止，nk1r拮抗剂在ded动物模型中的疗效尚未得到描述。为了评估它们在ded环境中的疗效，测试了两种不同的高度特异性的和潜在的nk1r拮抗剂：cp-99,994和l-733,060。结果显示，cp-99,994[(2s,3s)-n-[(2-甲氧基苯基)甲基]-2-苯基-3-哌啶胺二盐酸盐]或l-733,060[(2s,3s)-3-[[3,5-双(三氟甲基)苯基]甲氧基]-2-苯基哌啶盐酸盐]的外用应用抑制了apc成熟和th17活性，导致角膜上皮病变的改善。先前在眼部疾病中尚未报导cp-99,994的应用。但是，sp是一种具有多种功能的多效分子，包括眼表的生理稳态。sp的外用应用促进糖尿病小鼠的角膜上皮伤口愈合，而l-733,060的结膜下注射显著抑制sp对上皮愈合的保护作用(yangl,etal.diabetes2014,63:4262-74)。[0318]综上，本文中关于ded诱导后角膜和dln中mhc-iihicd11b+apc频率增加的数据证明了干燥应激在促进驻留角膜apc成熟及其向dln迁移方面的作用。还显示，用nk1r拮抗剂治疗ded小鼠显著降低了角膜和dln中的成熟apc的频率，其中，apc启动初始t细胞分化为分泌il-17的th17细胞。所观察到的nk1r拮抗剂对于apc成熟的抑制效应促进了对其抑制th17细胞活化的疗效的评估。在经nk1r拮抗剂治疗的小鼠的dln和结膜两者中均观察到了th17细胞的频率的实质性降低，这与il-17mrna水平的显著降低相关联。[0319]本文所述的发现提供了证据，表明拮抗nk1r介导的信号传导在抑制th17介导的眼表疾病和减轻ded严重程度中有效。[0320]实施例7：通过靶向物质p/神经激肽1受体来恢复干眼症中的调节性t细胞功能[0321]这些实验的目标为评估treg响应sp而发生的表型和功能变化，并且为评定阻断神经激肽1受体(nk-1r)在恢复ded小鼠模型中的treg功能中发挥的作用。[0322]从天然雌性c57bl/6小鼠的引流淋巴结(dln)分离cd4+cd25+foxp3+treg。[0323]将分离的treg与sp(1μm)在spantidei(10μm)存在或不存在下共培养48小时。通过流式细胞术评定treg的表型，并探究treg抑制效应t细胞增殖的能力。[0324]在小鼠体内诱导ded，诱导时间为14天。从ded诱导前一天开始，将spantidei或pbs(对照)经腹膜内给药(36μg/天)，直到第14天。评定了dln中treg的被抑制的功能、dln和结膜中th17细胞的频率、以及角膜上皮病变的严重程度。[0325]结果表明物质p通过抑制抑制性分子和分泌的免疫调节细胞因子的treg表达来诱导treg功能障碍，而该功能障碍被spantidei逆转(图9a至图9c)。通过全身性给药spantidei对sp信号传导进行的抑制恢复了treg功能，抑制th17细胞，并且降低了ded的严重程度(图10a至图10d)。[0326]sp通过抑制抑制性分子和免疫调节性细胞因子的treg表达来诱导treg功能障碍。sp诱导的treg功能障碍被nk-1r拮抗剂spantidei逆转。用全身性spantidei治疗ded小鼠恢复了treg的抑制功能，抑制了th17细胞，并且减轻了ded严重程度。[0327]其他实施方案[0328]尽管已经连同其详细说明书而描述本发明，但前述说明书试图例示性说明本发明而非限制本发明的范畴，本发明的范畴应为所附权利要求书的范畴所界定。其他方面、优点和修饰处于后附权利要求书的范畴内。[0329]本文中所指的专利和科学文献构建了该领域技术人员所能应用的知识体系。本文中引用的所有美国专利和已公开或未公开的美国专利申请通过引用而并入本文。本文中引用的所有已公开的外国专利和专利申请通过引用而并入本文。本文中引用的所有其他已出版的参考文献、文档、手稿和科学文献通过引用而并入本文。[0330]尽管本发明已经参照其优选的具体实施方案得以部分地显示和说明，但该领域技术人员应理解，可对本发明的形式和细节进行各种改变而不悖离由所附权利要求书所涵盖的本发明范畴。当前第1页12当前第1页12