一种藜麦小分子杂多糖的制备方法

文档序号:24968523发布日期:2021-05-07 22:38阅读:68来源:国知局
一种藜麦小分子杂多糖的制备方法
本发明涉及食品医药领域,具体是一种藜麦小分子杂多糖的制备方法。
背景技术
:藜麦具有抗旱、耐盐碱、耐贫瘠等生理特性,藜麦被称为完美营养食品,其籽粒的营养价值丰富,含有丰富的淀粉、蛋白质、脂肪、可溶性膳食纤维和多糖,同时还含有多种维生素、矿物质以及黄酮、多酚等具生物活性的功能成分。藜麦碳水化合物占60%左右,其中淀粉约占40-50%,非淀粉可溶性多糖和其他膳食纤维占总碳水化合物的20%左右,由阿拉伯糖、木糖、半乳糖、鼠李糖、葡萄糖等组成的杂多糖,果胶多糖和木聚糖,分子量在20~500kda。藜麦籽粒淀粉含量高,不适合肥胖、糖尿病人以及代谢缓慢的老年人食用。尽管藜麦非淀粉多糖具有重要的生理功能,具有抗氧化、降血脂、血糖,提高免疫等活性,但由于其含量相比与淀粉含量较低,相对分子质量和淀粉相当,难以获得相对分子质量分布均一的非淀粉多糖产品,限制了藜麦的精深加工和深度应用开发。小分子杂多糖是由不同的单糖聚合而成的低分子量多糖;它具有低黏度、溶解性好、易消化吸收等特点,近年来,小分子杂多糖在改善、修复肠道微生物功能,抗氧化、降血脂、血糖,提高免疫等方面有大量报道,具有重要研究和开发价值。小分子杂多糖可以通过多糖的降解制备。目前的制备方法主要有酸降解法、氧化降解法、物理(超声波、微波)降解法和酶降解法,而其中,单纯的酸降解法和氧化降解方法反应剧烈,降解程度难以控制,物理降解方法能耗大,降解程度难以控制以及单次降解样品量小。酶法降解成本高,反应条件苛刻,引入蛋白质杂质。氧化降解和物理降解法联合,并串联超滤装置,可以获得质量均一的小分子杂多糖,成本低廉,可以规模化制备。从藜麦籽粒中直接制备高纯度、相对分子质量分布均一的小分子杂多糖的方法未见报道。技术实现要素:本发明的目的在于克服现有技术的不足,提供一种藜麦小分子杂多糖的制备方法,以至少达到高纯度以及相对分子质量均一的目的。本发明的目的是通过以下技术方案来实现的:一种藜麦小分子杂多糖的制备方法,包括以下步骤:s1选取并粉碎藜麦原料,筛分,筛分后原料用体积百分比为75~85%的乙醇回流提取,提取后过滤并收集滤渣,蒸出乙醇后,收集蒸出料;s2针对得到的蒸出料,先采用pbs缓冲溶液浸润后,其中pbs缓冲液的体积与藜麦原料粉的质量之比为(5~10)ml:1g,升温到50~60℃并加入α-淀粉酶保温1~3h,随后煮沸提取1~3h,过滤提取液,过滤后的液体降温至保温的温度50~60℃后,再次加入α-淀粉酶50~60℃保温1~3h,得到保温液;其中,所述的α-淀粉酶的加入量为每100g藜麦原料粉加入活性单位为2500~15000u的酶制剂;s3将得到的保温液经过8000×g高速离心10min,得到的保温上清液经过前序处理后,得到处理液,随后将处理液再次经过8000×g高速离心10min,得到上清处理液;s4将得到的上清处理液中加入其两倍体积的无水乙醇,过夜沉淀,随后8000×g高速离心10min,得到沉淀物,用无水乙醇反复洗涤沉淀物后,挥发沉淀物中的残余乙醇,得到精制藜麦非淀粉多糖;s5将得到精制藜麦非淀粉多糖采用“超声波-双氧水-vc-超滤”的在线循环降解的方法,得到多糖降解液;s6将得到的多糖降解液采用阴离子交换树脂吸附,离子交换树脂与多糖降解液的固液比为1g:(5~10)ml,以浓度为0.1~0.5mol/l的氯化钠溶液解吸后得到解吸液,氯化钠溶液的体积与阴离子交换树脂的质量之比为(3~5)ml:1g,将得到的解吸液用截留分子量为10000da的超滤膜管8超滤,得到的超滤液经过真空冷冻干燥,即得到藜麦小分子杂多糖,其中,所述的超滤膜,实际为管状的,外面有个夹套管,样品溶液在膜管内逆向流动才能够充满,从而使整个超滤膜管内没有气泡,在一定压力条件下,小分子能够穿透过膜,并从流出口流出,从而被收集,因此其中的超滤膜可以采用超滤系统的超滤膜管。优选的,为了进一步实现高纯度以及相对分子质量均一的目的,所述的在线循环降解的具体步骤为:a.将s2中的精制藜麦非淀粉多糖加蒸馏水复溶,溶解物高速离心去除沉淀,得到上清液;b.将得到的上清液加蒸馏水稀释至浓度为50~200mg/ml,得到稀释液;c.将稀释液中分别加入双氧水和维生素c试剂,其中双氧水加入体积占藜麦多糖质量为1~5%(ml:mg),维生素c加入质量占藜麦多糖质量为2~6%(mg:mg),搅拌均匀后,在超滤系统中,超声波辅助循环降解20~50min;所述的超滤系统包括泵循环管、玻璃导管、超声波清洗器、超滤泵以及超滤膜管,所述的泵循环管的两端均固定在超滤泵的侧面;所述的玻璃导管固定在泵循环管的外侧面,并串联在所述的泵循环管和超滤泵之间;所述的泵循环管与所述的玻璃导管之间联通;所述的超滤泵下方设有超声波清洗器;所述的玻璃导管完全淹没在超声波清洗器的清洗槽内的溶剂中,形成超声波降解池;所述的超滤泵顶面分别固定并联通有超滤膜管以及超滤储液杯的底端;所述的超滤储液杯的顶面通过连接管联通有所述的超滤膜管的侧面,所述的超滤膜管远离所述的连接管的一端设有出液口;所述的超滤膜管顶端设有压力表;所述的玻璃导管规格为厚2毫米,长度5~8厘米,内径10-20毫米;所述的超滤循环系统采用串联-循环的方式,串联-循环降解时间为20~50min,并采用功率为280-320w的超声波清洗器;具体工作原理为,先将待超滤的样品导入超滤泵中,同时关闭出液口,液体先经过超滤泵进入到泵循环管中,并在超声波清洗器的清洗槽中超声,此时由于泵循环管串联并联通的玻璃导管与超声振动形成协谐振,从而使泵循环管内的样品充分振荡溶解,再通过泵循环管再次导回过滤泵中,过滤泵将样品液由低到高导入到超滤膜管,超滤膜管随着泵压力变化而使样品溶液进行过滤后通过连接管导入超滤储液杯中,此时打开出液口,收集小分子样品,超滤储液杯收集大分子样品充分后再导入到超滤泵中,超滤泵再通过泵循环管返回玻璃导管内进行超声振动,此过程压力均在超滤膜管顶端的压力表显示,从而可以依据压力表进行过滤泵中压力的调节,从而实现串联-循环的过程,待结束后,打开出液口,从而使样品溶液排出而收集;通过采用双氧水和维生素c作为藜麦非淀粉多糖的降解试剂,利用双氧水和维生素c在超声波的辅助下,以及配合超滤系统,串联循环降解,利用物理和化学降解解的方法同膜分离结合,从而提高了多糖降解效率和目标产物分离的效率,从而一定程度上实现高纯度和相对分子质量均一的目的。优选的,为了进一步实现高纯度的目的,所述的阴离子交换树脂为琼脂糖凝胶树脂、纤维素树脂、聚甲基丙烯酸树脂或聚苯乙烯树脂中的一种;所述的阴离子交换树脂为deae-sepharosefastflow、deae-650m、toyopearlhw-55f、toyopearlhw-65f、d201或d301型离子交换树脂中的一种;利用选用的阴离子交换树脂,同时限定相关的离子交换树脂的情况,从而使多糖降解液能够在阴离子交换树脂中充分被吸附,进而为后续解吸做铺垫,从而使多糖降解液能够被充分吸附,进而提高多糖降解液的高纯度的目的。优选的,为了进一步实现高纯度的目的,所述的前序处理为,先将得到的保温上清液中加入氯化钙固体粉末后煮沸30min,冷却至保温温度后,高速离心后得到混合上清液,将混合上清液中加入乙二胺四乙酸二钠粉末,得到处理液;其中,所述的氯化钙加入量为藜麦粉原料质量的1~5%,所述的乙二胺四乙酸二钠加入量为藜麦原料质量的1~5%;所述的保温温度为50~60℃;通过采用氯化钙固体和乙二胺四乙酸二钠分别对保温上清液进行除杂以及脱色处理,使保温上清液经过络合处理和脱色处理后,能够充分消除杂质的干扰,从而实现高纯度的目的。本发明的有益效果是:1.通过先将藜麦粉碎后再经过pbs缓冲液浸润,再经过两次α-淀粉酶处理、前序处理、无水乙醇处理后,经过线循环降解方法处理,最后经过阴离子交换树脂处理以及超滤膜处理,而通过两次α-淀粉酶处理,α-淀粉酶具有高效降解淀粉活性,避免了纤维素酶,果胶酶、葡萄糖苷酶等多糖降解酶降解藜麦非淀粉多糖,同时加入2倍体积无水乙醇沉淀非淀粉多糖,容易将单糖、二糖、寡糖和淀粉降解产物(低聚糖)同多糖分离,得到纯度较高的精制多糖,并且提高了最终产品的纯度和得率。2.通过采用双氧水和维生素c作为藜麦非淀粉多糖的降解试剂,利用双氧水和维生素c在超声波的辅助下,以及配合超滤系统,利用双氧水和维生素c在超声波的辅助下,以及配合超滤系统,串联循环降解,利用物理和化学降解的方法同膜分离结合,从而提高了多糖降解效率和目标产物分离的效率,一定程度上实现高纯度和相对分子质量均一的目的。3.利用选用的阴离子交换树脂,同时限定相关的离子交换树脂的情况,从而使多糖降解液能够在阴离子交换树脂中充分被吸附,进而为后续解吸做铺垫,从而使多糖降解液能够被充分吸附,进而提高多糖降解液的高纯度的目的。4.通过采用氯化钙固体和乙二胺四乙酸二钠分别对保温上清液进行除杂以及脱色处理,使保温上清液经过除杂处理和脱色处理后,能够充分消除杂质的干扰,从而实现高纯度的目的。附图说明图1为本发明产品的纯度及相对分子质量检测的结果图;图2为本发明产品的单糖组成分析示意图;图3为本发明产品的红外光谱分析示意图;图4为本发明的超滤系统的示意图,其中,1-泵循环管,2-玻璃导管,3-超声波清洗器,4-超滤泵,5-压力表,6-超滤储液杯,7-连接管,8-超滤膜管,81-出液口,9-超声波降解池。具体实施方式下面结合附图进一步详细描述本发明的技术方案,但本发明的保护范围不局限于以下所述。实施例1一种藜麦小分子杂多糖的制备方法,包括以下步骤:s1选取并粉碎1kg藜麦原料,筛分,筛分后原料用8l的体积百分比为78%的乙醇,在80℃下回流提取3h,提取后过滤并收集滤渣,60℃蒸出乙醇后,收集蒸出料;s2针对得到的蒸出料,先采用8l的pbs缓冲溶液浸润后,其中pbs缓冲液的体积与藜麦原料粉的质量之比为8ml:1g,升温到80℃并加入α-淀粉酶保温1h,随后煮沸提取2h,过滤提取液,过滤后的液体降温至保温的温度80℃后,再次加入α-淀粉酶80℃条件下保温2h,得到保温液;其中,所述的α-淀粉酶的加入量为每100g藜麦原料粉加入活性单位为2800u的酶制剂;s3将得到的保温液经过8000×g高速离心10min,得到的保温上清液经过前序处理后,得到处理液,随后将处理液再次经过8000×g高速离心10min,得到上清处理液;s4将得到的上清处理液中加入其两倍体积的无水乙醇,过夜沉淀,随后8000×g高速离心10min,得到沉淀物,用无水乙醇反复洗涤沉淀物后,挥发残余沉淀,得到精制藜麦非淀粉多糖;s8将得到精制藜麦非淀粉多糖采用“超声波-双氧水-vc-超滤”的在线循环降解的方法,得到多糖降解液;s6将得到的多糖降解液采用200g阴离子交换树脂吸附,离子交换树脂与多糖降解液的固液比为1g:8ml,以浓度为0.1~0.8mol/l的氯化钠溶液解吸后得到解吸液,氯化钠溶液的体积与阴离子交换树脂的质量之比为3ml:1g,即为600ml,将得到的解吸液用截留分子量为10000da的超滤膜管8超滤,得到的超滤液经过真空冷冻干燥,即得到藜麦小分子杂多糖148g。为了进一步实现高纯度以及相对分子质量均一的目的,所述的在线循环降解的具体步骤为:a.将s2中的精制藜麦非淀粉多糖加蒸馏水复溶,溶解物高速离心去除沉淀,得到上清液;b.将得到的上清液加蒸馏水稀释至浓度为80mg/ml,得到稀释液;c.将稀释液中分别加入双氧水和维生素c试剂,其中双氧水加入体积占为100ml,维生素c加入质量为200mg,搅拌0.8h待均匀后,在超滤系统中,辅助超声波,循环降解80min;所述的超滤系统包括泵循环管1、玻璃导管2、超声波清洗器3、超滤泵4以及超滤膜管8,所述的泵循环管1的两端均固定在超滤泵4的侧面;所述的玻璃导管2固定在泵循环管1的外侧面,并串联在所述的泵循环管1和超滤泵4之间;所述的泵循环管1与所述的玻璃导管2之间联通;所述的超滤泵4下方设有超声波清洗器3;所述的玻璃导管2完全淹没在超声波清洗器3的清洗槽内的溶剂中,形成超声波降解池9;所述的超滤泵4顶面分别固定并联通有超滤膜管8以及超滤储液杯6的底端;所述的超滤储液杯6的顶面通过连接管7联通有所述的超滤膜管8的侧面,所述的超滤膜管8远离所述的连接管的一端设有出液口81;所述的超滤膜管8顶端设有压力表5;所述的玻璃导管规格为厚2毫米,长度8~8厘米,内径10-20毫米;所述的超滤循环系统采用串联-循环的方式,串联-循环降解时间为20min,并采用功率为280w的超声波清洗器3;通过采用双氧水和维生素c作为藜麦非淀粉多糖的降解试剂,利用双氧水和维生素c在超声波的辅助下,以及配合超滤系统,串联循环降解,利用物理和化学降解解的方法同膜分离结合,从而一定程度上实现高纯度和相对分子质量均一的目的。为了进一步实现高纯度的目的,所述的阴离子交换树脂为deae-680m;利用选用的阴离子交换树脂,同时限定相关的离子交换树脂的情况,从而使多糖降解液能够在阴离子交换树脂中充分被吸附,进而为后续解吸做铺垫,从而使多糖降解液能够被充分吸附,进而提高多糖降解液的高纯度的目的。为了进一步实现高纯度的目的,所述的前序处理为,先将得到的保温上清液中加入氯化钙固体粉末后煮沸30min,冷却至保温温度后,高速离心后得到混合上清液,将混合上清液中加入乙二胺四乙酸二钠粉末,得到处理液;其中,所述的氯化钙加入量为藜麦粉原料质量的1%,即为10g,所述的乙二胺四乙酸二钠加入量为藜麦原料质量的1%,即为10g;所述的保温温度为80℃;通过采用氯化钙固体和乙二胺四乙酸二钠分别对保温上清液进行重金属的络合处理以及脱色处理,使保温上清液经过络合处理和脱色处理后,能够充分去除杂质,从而实现高纯度的目的。针对得到产物,采用hpsec法测定,具体为:色谱柱为ymc-packdiol-200色谱柱(8×300mm),流动相为双蒸水;流速为0.8ml/min;进样量10μl;检测器为rid;温度为室温。具体步骤为:(1)精密称取葡萄糖、t10,t80,t70聚糖标准品,配制成8mg/ml的标准溶液。(2)按外标法定量测定降解产物相对分子质量约8000da,纯度达98%。降解产物的单糖组成采用pmp柱前衍生化高效液相色谱法测定,具体为:色谱柱diamonsilc18柱(4.6×280mm),流动相为乙腈:磷酸盐缓冲溶液(80:20),流速为1ml/min;进样量20μl;检测器为uv;温度为室温。具体步骤为:(1)称取阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、鼠李糖、木糖、半乳糖醛酸标准单糖,配制成2mg/ml的标准溶液,并进行pmp衍生化修饰,称取降解产物冻干粉10mg,配制成1mg/ml的溶液,酸水解后,进行pmp衍生化。(2)按外标法测定降解产物由6种单糖组成的小分子杂多糖,如图2所示。(3)降解产物的红外光谱分析如图3所示,称取降解产物的冻干粉8mg,同光谱级溴化钾混合研磨,压片,并进行光谱扫描分析,降解产物具有杂多糖的典型特征峰。综上分析结果,如图1所示,表明降解产物的纯度达98%,相对分子质量约8000da,由6种单糖组成的小分子量杂多糖。实施例2一种藜麦小分子杂多糖的制备方法,包括以下步骤:s1选取并粉碎1kg的藜麦原料,筛分,筛分后原料用10l体积百分比为78%的乙醇回流提取,提取后过滤并收集滤渣,蒸出乙醇后,收集蒸出料;s2针对得到的蒸出料,先采用pbs缓冲溶液浸润后,其中pbs缓冲液的体积与藜麦原料粉的质量之比为10ml:1g,即为10l,升温到80℃并加入α-淀粉酶保温3h,随后煮沸提取3h,过滤提取液,过滤后的液体降温至保温的温度80℃后,再次加入α-淀粉酶80℃条件下保温3h,得到保温液;其中,所述的α-淀粉酶的加入量为每100g藜麦原料粉加入活性单位为8000u的酶制剂;s3将得到的保温液经过8000×g高速离心10min,得到的保温上清液经过前序处理后,得到处理液,随后将处理液再次经过8000×g高速离心10min,得到上清处理液;s4将得到的上清处理液中加入其两倍体积的无水乙醇,过夜沉淀,随后8000×g高速离心10min,得到沉淀物,用无水乙醇反复洗涤沉淀物后,挥发沉淀物中的残余乙醇,得到精制藜麦非淀粉多糖;s8将得到精制藜麦非淀粉多糖采用“超声波-双氧水-vc-超滤”的在线循环降解的方法,得到多糖降解液;s6将得到的多糖降解液采用300g的阴离子交换树脂吸附,离子交换树脂与多糖降解液的固液比为1g:8ml,以浓度为0.2mol/l的氯化钠溶液解吸后得到解吸液,氯化钠溶液的体积为1l,将得到的解吸液用截留分子量为10000da的超滤膜管8超滤,得到的超滤液经过真空冷冻干燥,即得到藜麦小分子杂多糖186g。为了进一步实现高纯度以及相对分子质量均一的目的,所述的在线循环降解的具体步骤为:a.将s2中的精制藜麦非淀粉多糖加蒸馏水复溶,溶解物高速离心去除沉淀,得到上清液;b.将得到的上清液加蒸馏水稀释至浓度为200mg/ml,得到稀释液;c.将稀释液中分别加入双氧水和维生素c试剂,其中双氧水加入120ml,维生素c加入220mg,搅拌0.8h均匀后,在超滤系统中,辅助超声波,循环降解230min;所述的超滤系统包括泵循环管1、玻璃导管2、超滤泵4以及超滤膜管8,所述的泵循环管1的两端均固定在超滤泵4的侧面;所述的玻璃导管2固定在泵循环管1的外侧面,并串联在所述的泵循环管1和超滤泵4之间;所述的泵循环管1与所述的玻璃导管2之间联通;所述的超滤泵4下方设有超声波清洗器3;所述的玻璃导管2完全淹没在超声波清洗器3的清洗槽内的溶剂中,形成超声波降解池9;所述的超滤泵4顶面分别固定并联通有超滤膜管8以及超滤储液杯6的底端;所述的超滤储液杯6的顶面通过连接管7联通有所述的超滤膜管8的侧面,所述的超滤膜管8远离所述的连接管的一端设有出液口81;所述的超滤膜管8顶端设有压力表5;所述的玻璃导管规格为厚2毫米,长度8~8厘米,内径10-20毫米;所述的超滤循环系统采用串联-循环的方式,串联-循环降解时间为30min,并采用功率为300w的超声波清洗器3;通过采用双氧水和维生素c作为藜麦非淀粉多糖的降解试剂,利用双氧水和维生素c在超声波的辅助下,以及配合超滤系统,串联循环降解,利用物理和化学降解解的方法同膜分离结合,从而一定程度上实现高纯度和相对分子质量均一的目的。为了进一步实现高纯度的目的,所述的阴离子交换树脂为deae-sepharosefastflow;利用选用的阴离子交换树脂,同时限定相关的离子交换树脂的情况,从而使多糖降解液能够在阴离子交换树脂中充分被吸附,进而为后续解吸做铺垫,从而使多糖降解液能够被充分吸附,进而提高多糖降解液的高纯度的目的。为了进一步实现高纯度的目的,所述的前序处理为,先将得到的保温上清液中加入氯化钙固体粉末后煮沸30min,冷却至保温温度80℃后,高速离心后得到混合上清液,将混合上清液中加入乙二胺四乙酸二钠粉末,得到处理液;其中,所述的氯化钙加入量为藜麦粉原料质量的8%,即为18g,所述的乙二胺四乙酸二钠加入量为藜麦原料质量的8%,即为18g;所述的保温温度为80℃;通过采用氯化钙固体和乙二胺四乙酸二钠分别对保温上清液进行重金属的络合处理以及脱色处理,使保温上清液经过络合处理和脱色处理后,能够充分去除杂质,从而实现高纯度的目的。同实施例1产品测定方法,降解产物的纯度达94%,相对分子质量约8000da,由6种单糖组成的小分子量杂多糖实施例3一种藜麦小分子杂多糖的制备方法,包括以下步骤:s1选取并粉碎1kg的藜麦原料,筛分,筛分后原料用10l体积百分比为88%的乙醇回流提取,提取后过滤并收集滤渣,60℃蒸出乙醇后,收集蒸出料;s2针对得到的蒸出料,先采用pbs缓冲溶液浸润后,其中pbs缓冲液的体积与藜麦原料粉的质量之比为10ml:1g,即为10l,升温到80℃并加入α-淀粉酶保温3h,随后煮沸提取2h,过滤提取液,过滤后的液体降温至保温的温度80℃后,再次加入α-淀粉酶80℃条件下保温2h,得到保温液;其中,所述的α-淀粉酶的加入量为每100g藜麦原料粉加入活性单位为8000u的酶制剂;s3将得到的保温液经过8000×g高速离心10min,得到的保温上清液经过前序处理后,得到处理液,随后将处理液再次经过8000×g高速离心10min,得到上清处理液;s4将得到的上清处理液中加入其两倍体积的无水乙醇,过夜沉淀,随后8000×g高速离心10min,得到沉淀物,用无水乙醇反复洗涤沉淀物后,挥发沉淀物中的残余乙醇,得到精制藜麦非淀粉多糖;s8将得到精制藜麦非淀粉多糖采用“超声波-双氧水-vc-超滤”的在线循环降解的方法,得到多糖降解液;s6将得到的多糖降解液采用300g的阴离子交换树脂吸附,离子交换树脂与多糖降解液的固液比为1g:8ml,以浓度为0.3mol/l的氯化钠溶液解吸后得到解吸液,氯化钠溶液的体积为1.8l,将得到的解吸液用截留分子量为10000da的超滤膜管8超滤,得到的超滤液经过真空冷冻干燥,即得到藜麦小分子杂多糖148g。为了进一步实现高纯度以及相对分子质量均一的目的,所述的在线循环降解的具体步骤为:a.将s2中的精制藜麦非淀粉多糖加蒸馏水复溶,溶解物高速离心去除沉淀,得到上清液;b.将得到的上清液加蒸馏水稀释至浓度为200mg/ml,得到稀释液;c.将稀释液中分别加入双氧水和维生素c试剂,其中双氧水加入180ml,维生素c加入280mg,搅拌0.8h均匀后,在超滤系统中,辅助超声波,循环降解30min;所述的超滤系统包括泵循环管1、玻璃导管2、超滤泵4以及超滤膜管8,所述的泵循环管1的两端均固定在超滤泵4的侧面;所述的玻璃导管2固定在泵循环管1的外侧面,并串联在所述的泵循环管1和超滤泵4之间;所述的泵循环管1与所述的玻璃导管2之间联通;所述的超滤泵4下方设有超声波清洗器3;所述的玻璃导管2完全淹没在超声波清洗器3的清洗槽内的溶剂中,形成超声波降解池9;所述的超滤泵4顶面分别固定并联通有超滤膜管8以及超滤储液杯6的底端;所述的超滤储液杯6的顶面通过连接管7联通有所述的超滤膜管8的侧面,所述的超滤膜管8远离所述的连接管的一端设有出液口81;所述的超滤膜管8顶端设有压力表5;所述的玻璃导管规格为厚2毫米,长度8~8厘米,内径10-20毫米;所述的超滤循环系统采用串联-循环的方式,串联-循环降解时间为30min,并采用功率为300w的超声波清洗器3;通过采用双氧水和维生素c作为藜麦非淀粉多糖的降解试剂,利用双氧水和维生素c在超声波的辅助下,以及配合超滤系统,串联循环降解,利用物理和化学降解解的方法同膜分离结合,从而一定程度上实现高纯度和相对分子质量均一的目的。为了进一步实现高纯度的目的,所述的阴离子交换树脂为琼脂糖凝胶树脂、纤维素树脂、聚甲基丙烯酸树脂或聚苯乙烯树脂中的一种;所述的阴离子交换树脂为d201型离子交换树脂中的一种;利用选用的阴离子交换树脂,同时限定相关的离子交换树脂的情况,从而使多糖降解液能够在阴离子交换树脂中充分被吸附,进而为后续解吸做铺垫,从而使多糖降解液能够被充分吸附,进而提高多糖降解液的高纯度的目的。为了进一步实现高纯度的目的,所述的前序处理为,先将得到的保温上清液中加入氯化钙固体粉末后煮沸30min,冷却至保温温度后,高速离心后得到混合上清液,将混合上清液中加入乙二胺四乙酸二钠粉末,得到处理液;其中,所述的氯化钙加入量为20g,所述的乙二胺四乙酸二钠加入量为20g;所述的保温温度为80℃;通过采用氯化钙固体和乙二胺四乙酸二钠分别对保温上清液进行重金属的络合处理以及脱色处理,使保温上清液经过络合处理和脱色处理后,能够充分去除杂质,从而实现高纯度的目的。同实施例1产品测定方法,降解产物的纯度达92%,相对分子质量约8000da,由6种单糖组成的小分子量杂多糖。实施例4一种藜麦小分子杂多糖的制备方法,包括以下步骤:s1选取并粉碎1kg藜麦原料,筛分,筛分后原料用8l的体积百分比为78%的乙醇,80℃回流提取3h,提取后过滤并收集滤渣,60℃蒸出乙醇后,收集蒸出料;s2针对得到的蒸出料,先采用pbs缓冲溶液浸润后,其中pbs缓冲液的体积与藜麦原料粉的质量之比为8ml:1g,即为8l,升温到60℃并加入α-淀粉酶保温3h,随后煮沸提取1h,过滤提取液,过滤后的液体降温至保温的温度60℃后,再次加入α-淀粉酶60℃条件下保温3h,得到保温液;其中,所述的α-淀粉酶的加入量为每100g藜麦原料粉加入活性单位为6000u的酶制剂;s3将得到的保温液经过8000×g高速离心10min,得到的保温上清液经过前序处理后,得到处理液,随后将处理液再次经过8000×g高速离心10min,得到上清处理液;s4将得到的上清处理液中加入其两倍体积的无水乙醇,过夜沉淀,随后8000×g高速离心10min,得到沉淀物,用无水乙醇反复洗涤沉淀物后,挥发沉淀物中的残余乙醇,得到精制藜麦非淀粉多糖;s8将得到精制藜麦非淀粉多糖采用“超声波-双氧水-vc-超滤”的在线循环降解的方法,得到多糖降解液;s6将得到的多糖降解液采用280g的阴离子交换树脂吸附,离子交换树脂与多糖降解液的固液比为1g:8ml,以浓度为0.4mol/l的氯化钠溶液解吸后得到解吸液,氯化钠溶液的体积为1l,将得到的解吸液用截留分子量为10000da的超滤膜管8超滤,得到的超滤液经过真空冷冻干燥,即得到藜麦小分子杂多糖180g。为了进一步实现高纯度以及相对分子质量均一的目的,所述的在线循环降解的具体步骤为:a.将s2中的精制藜麦非淀粉多糖加蒸馏水复溶,溶解物高速离心去除沉淀,得到上清液;b.将得到的上清液加蒸馏水稀释至浓度为200mg/ml,得到稀释液;c.将稀释液中分别加入双氧水和维生素c试剂,其中双氧水加入180ml,维生素c加入280mg,搅拌0.8h均匀后,在超滤系统中,辅助超声波,循环降解80min;所述的超滤系统包括泵循环管1、玻璃导管2、超滤泵4以及超滤膜管8,所述的泵循环管1的两端均固定在超滤泵4的侧面;所述的玻璃导管2固定在泵循环管1的外侧面,并串联在所述的泵循环管1和超滤泵4之间;所述的泵循环管1与所述的玻璃导管2之间联通;所述的超滤泵4下方设有超声波清洗器3;所述的玻璃导管2完全淹没在超声波清洗器3的清洗槽内的溶剂中,形成超声波降解池9;所述的超滤泵4顶面分别固定并联通有超滤膜管8以及超滤储液杯6的底端;所述的超滤储液杯6的顶面通过连接管7联通有所述的超滤膜管8的侧面,所述的超滤膜管8远离所述的连接管的一端设有出液口81;所述的超滤膜管8顶端设有压力表5;所述的玻璃导管规格为厚2毫米,长度8~8厘米,内径10-20毫米;所述的超滤循环系统采用串联-循环的方式,串联-循环降解时间为30min,并采用功率为320w的超声波清洗器3;通过采用双氧水和维生素c作为藜麦非淀粉多糖的降解试剂,利用双氧水和维生素c在超声波的辅助下,以及配合超滤系统,串联循环降解,利用物理和化学降解解的方法同膜分离结合,从而一定程度上实现高纯度和相对分子质量均一的目的。为了进一步实现高纯度的目的,所述的阴离子交换树脂为琼脂糖凝胶树脂、纤维素树脂、聚甲基丙烯酸树脂或聚苯乙烯树脂中的一种;所述的阴离子交换树脂为toyopearlhw-88f阴离子交换树脂;利用选用的阴离子交换树脂,同时限定相关的离子交换树脂的情况,从而使多糖降解液能够在阴离子交换树脂中充分被吸附,进而为后续解吸做铺垫,从而使多糖降解液能够被充分吸附,进而提高多糖降解液的高纯度的目的。为了进一步实现高纯度的目的,所述的前序处理为,先将得到的保温上清液中加入氯化钙固体粉末后煮沸30min,冷却至保温温度后,高速离心后得到混合上清液,将混合上清液中加入乙二胺四乙酸二钠粉末,得到处理液;其中,所述的氯化钙加入量为28g,所述的乙二胺四乙酸二钠加入量为28g;所述的保温温度为80℃;通过采用氯化钙固体和乙二胺四乙酸二钠分别对保温上清液进行重金属的络合处理以及脱色处理,使保温上清液经过络合处理和脱色处理后,能够充分去除杂质,从而实现高纯度的目的。同实施例1产品测定方法,降解产物的纯度达93%,相对分子质量约8000da,由6种单糖组成的小分子量杂多糖。实施例8一种藜麦小分子杂多糖的制备方法,包括以下步骤:s1选取并粉碎1kg藜麦原料,筛分,筛分后原料用10l的体积百分比为78%的乙醇,80℃回流提取3h,提取后过滤并收集滤渣,60℃蒸出乙醇后,收集蒸出料;s2针对得到的蒸出料,先采用pbs缓冲溶液浸润后,其中pbs缓冲液的体积与藜麦原料粉的质量之比为10ml:1g,即为10l,升温到60℃并加入α-淀粉酶保温3h,随后煮沸提取1h,过滤提取液,过滤后的液体降温至保温的温度80℃后,再次加入α-淀粉酶60℃条件下保温3h,得到保温液;其中,所述的α-淀粉酶的加入量为每100g藜麦原料粉加入活性单位为8000u的酶制剂;s3将得到的保温液经过8000×g高速离心10min,得到的保温上清液经过前序处理后,得到处理液,随后将处理液再次经过8000×g高速离心10min,得到上清处理液;s4将得到的上清处理液中加入其两倍体积的无水乙醇,过夜沉淀,随后8000×g高速离心10min,得到沉淀物,用无水乙醇反复洗涤沉淀物后,挥发沉淀物中的残余乙醇,得到精制藜麦非淀粉多糖;s8将得到精制藜麦非淀粉多糖采用“超声波-双氧水-vc-超滤”的在线循环降解的方法,得到多糖降解液;s6将得到的多糖降解液采用300g的阴离子交换树脂吸附,离子交换树脂与多糖降解液的固液比为1g:8ml,以浓度为0.1mol/l的氯化钠溶液解吸后得到解吸液,氯化钠溶液的体积为1.8l,将得到的解吸液用截留分子量为10000da的超滤膜管8超滤,得到的超滤液经过真空冷冻干燥,即得到藜麦小分子杂多糖148g。为了进一步实现高纯度以及相对分子质量均一的目的,所述的在线循环降解的具体步骤为:a.将s2中的精制藜麦非淀粉多糖加蒸馏水复溶,溶解物高速离心去除沉淀,得到上清液;b.将得到的上清液加蒸馏水稀释至浓度为200mg/ml,得到稀释液;c.将稀释液中分别加入双氧水和维生素c试剂,其中双氧水加入180ml,维生素c加入280mg,搅拌0.8h均匀后,在超滤系统中,辅助超声波,循环降解80min;所述的超滤系统包括泵循环管1、玻璃导管2、超滤泵4以及超滤膜管8,所述的泵循环管1的两端均固定在超滤泵4的侧面;所述的玻璃导管2固定在泵循环管1的外侧面,并串联在所述的泵循环管1和超滤泵4之间;所述的泵循环管1与所述的玻璃导管2之间联通;所述的超滤泵4下方设有超声波清洗器3;所述的玻璃导管2完全淹没在超声波清洗器3的清洗槽内的溶剂中,形成超声波降解池9;所述的超滤泵4顶面分别固定并联通有超滤膜管8以及超滤储液杯6的底端;所述的超滤储液杯6的顶面通过连接管7联通有所述的超滤膜管8的侧面,所述的超滤膜管8远离所述的连接管的一端设有出液口81;所述的超滤膜管8顶端设有压力表5;所述的玻璃导管规格为厚2毫米,长度8~8厘米,内径10-20毫米;所述的超滤循环系统采用串联-循环的方式,串联-循环降解时间为30min,并采用功率为320w的超声波清洗器3;通过采用双氧水和维生素c作为藜麦非淀粉多糖的降解试剂,利用双氧水和维生素c在超声波的辅助下,以及配合超滤系统,串联循环降解,利用物理和化学降解解的方法同膜分离结合,从而一定程度上实现高纯度和相对分子质量均一的目的。为了进一步实现高纯度的目的,所述的阴离子交换树脂为琼脂糖凝胶树脂、纤维素树脂、聚甲基丙烯酸树脂或聚苯乙烯树脂中的一种;所述的阴离子交换树脂为d301阴离子交换树脂;利用选用的阴离子交换树脂,同时限定相关的离子交换树脂的情况,从而使多糖降解液能够在阴离子交换树脂中充分被吸附,进而为后续解吸做铺垫,从而使多糖降解液能够被充分吸附,进而提高多糖降解液的高纯度的目的。为了进一步实现高纯度的目的,所述的前序处理为,先将得到的保温上清液中加入氯化钙固体粉末后煮沸30min,冷却至保温温度后,高速离心后得到混合上清液,将混合上清液中加入乙二胺四乙酸二钠粉末,得到处理液;其中,所述的氯化钙加入量为80g,所述的乙二胺四乙酸二钠加入量为80g;所述的保温温度为80℃;通过采用氯化钙固体和乙二胺四乙酸二钠分别对保温上清液进行重金属的络合处理以及脱色处理,使保温上清液经过络合处理和脱色处理后,能够充分去除杂质,从而实现高纯度的目的。同实施例1产品测定方法,降解产物的纯度达98%,相对分子质量约8000da,由6种单糖组成的小分子量杂多糖。实施例6一种藜麦小分子杂多糖的制备方法,包括以下步骤:s1选取并粉碎1kg藜麦原料,筛分,筛分后原料用10l的体积百分比为78%的乙醇,80℃回流提取3h,提取后过滤并收集滤渣,60℃蒸出乙醇后,收集蒸出料;s2针对得到的蒸出料,先采用pbs缓冲溶液浸润后,其中pbs缓冲液的体积与藜麦原料粉的质量之比为10ml:1g,即为10l,升温到60℃并加入α-淀粉酶保温3h,随后煮沸提取1h,过滤提取液,过滤后的液体降温至保温的温度80℃后,再次加入α-淀粉酶60℃条件下保温3h,得到保温液;其中,所述的α-淀粉酶的加入量为每100g藜麦原料粉加入活性单位为8000u的酶制剂;s3将得到的保温液经过8000×g高速离心10min,得到的保温上清液经过前序处理后,得到处理液,随后将处理液再次经过8000×g高速离心10min,得到上清处理液;s4将得到的上清处理液中加入其两倍体积的无水乙醇,过夜沉淀,随后8000×g高速离心10min,得到沉淀物,用无水乙醇反复洗涤沉淀物后,挥发沉淀物中的残余乙醇,得到精制藜麦非淀粉多糖;s8将得到精制藜麦非淀粉多糖采用“超声波-双氧水-vc-超滤”的在线循环降解的方法,得到多糖降解液;s6将得到的多糖降解液采用300g的阴离子交换树脂吸附,离子交换树脂与多糖降解液的固液比为1g:8ml,以浓度为0.8mol/l的氯化钠溶液解吸后得到解吸液,氯化钠溶液的体积为1l,将得到的解吸液用截留分子量为10000da的超滤膜管8超滤,得到的超滤液经过真空冷冻干燥,即得到藜麦小分子杂多糖180g。为了进一步实现高纯度以及相对分子质量均一的目的,所述的在线循环降解的具体步骤为:a.将s2中的精制藜麦非淀粉多糖加蒸馏水复溶,溶解物高速离心去除沉淀,得到上清液;b.将得到的上清液加蒸馏水稀释至浓度为200mg/ml,得到稀释液;c.将稀释液中分别加入双氧水和维生素c试剂,其中双氧水加入180ml,维生素c加入280mg,搅拌0.8h均匀后,在超滤系统中,辅助超声波,循环降解80min;所述的超滤系统包括泵循环管1、玻璃导管2、超滤泵4以及超滤膜管8,所述的泵循环管1的两端均固定在超滤泵4的侧面;所述的玻璃导管2固定在泵循环管1的外侧面,并串联在所述的泵循环管1和超滤泵4之间;所述的泵循环管1与所述的玻璃导管2之间联通;所述的超滤泵4下方设有超声波清洗器3;所述的玻璃导管2完全淹没在超声波清洗器3的清洗槽内的溶剂中,形成超声波降解池9;所述的超滤泵4顶面分别固定并联通有超滤膜管8以及超滤储液杯6的底端;所述的超滤储液杯6的顶面通过连接管7联通有所述的超滤膜管8的侧面,所述的超滤膜管8远离所述的连接管的一端设有出液口81;所述的超滤膜管8顶端设有压力表5;所述的玻璃导管规格为厚2毫米,长度8~8厘米,内径10-20毫米;所述的超滤循环系统采用串联-循环的方式,串联-循环降解时间为30min,并采用功率为320w的超声波清洗器3;通过采用双氧水和维生素c作为藜麦非淀粉多糖的降解试剂,利用双氧水和维生素c在超声波的辅助下,以及配合超滤系统,串联循环降解,利用物理和化学降解解的方法同膜分离结合,从而一定程度上实现高纯度和相对分子质量均一的目的。为了进一步实现高纯度的目的,所述的阴离子交换树脂为toyopearlhw-68f阴离子交换树脂;利用选用的阴离子交换树脂,同时限定相关的离子交换树脂的情况,从而使多糖降解液能够在阴离子交换树脂中充分被吸附,进而为后续解吸做铺垫,从而使多糖降解液能够被充分吸附,进而提高多糖降解液的高纯度的目的。为了进一步实现高纯度的目的,所述的前序处理为,先将得到的保温上清液中加入氯化钙固体粉末后煮沸30min,冷却至保温温度后,高速离心后得到混合上清液,将混合上清液中加入乙二胺四乙酸二钠粉末,得到处理液;其中,所述的氯化钙加入量为80g,所述的乙二胺四乙酸二钠加入量为80g;所述的保温温度为80℃;通过采用氯化钙固体和乙二胺四乙酸二钠分别对保温上清液进行重金属的络合处理以及脱色处理,使保温上清液经过络合处理和脱色处理后,能够充分去除杂质,从而实现高纯度的目的。同实施例1产品测定方法,降解产物的纯度达93%,相对分子质量约8000da,由6种单糖组成的小分子量杂多糖。同实施例1产品测定方法,降解产物的纯度达98%,相对分子质量约8000da,由6种单糖组成的小分子量杂多糖。对比例1仅仅采用一次α-淀粉酶、仅仅采用蒸馏水、先采用α-淀粉酶后采用蒸馏水或先采用蒸馏水后采用α-淀粉酶,分别替换实施例1中的s2,针对分别得到的精制藜麦多糖以及实施例1的精制藜麦非淀粉多糖,检测其多糖提取率、淀粉含量以及非淀粉多糖的含量,得到表1。表1不同提取处理方式的多糖提取率、淀粉含量以及非淀粉多糖的含量情况表提取方式多糖提取率%淀粉含量%非淀粉多糖%酶280100水26468酶+水38368水+酶320100酶+水+酶810100其中,多糖提取率%=多糖质量÷藜麦粉质量×100%,淀粉含量%=多糖中淀粉质量÷总多糖的质量×100%,非淀粉多糖%=多糖中非淀粉多糖质量÷总多糖的质量×100%。对比例2针对采用“超声波-双氧水-vc-超滤”的在线循环降解的方法,仅仅采用超声波降解、仅仅采用双氧水、仅仅采用维生素c、先采用双氧水后采用维生素c或先采用超声波降解后采用双氧水,针对分别得到的降解液以及对比实施例1的降解液,分析其均一性、多糖降解效率以及获得小分子多糖时间,得到表2。表2不同降解液中的均一性、多糖降解效率以及获得小分子多糖时间情况表其中,多糖降解效率定义为:1小时内1g多糖降解成相对分子质量大于5000da,小于10000da的多糖片段的量与初始多糖质量的比值。获得小分子多糖时间指:将降解产物同未降解的多糖以及降解产生的单糖、寡糖分离所需的时间。由表1和表2的数据,以及各个实施例可说明,采用本发明得到的藜麦小分子杂多糖的纯度均在90%以上,同时其多糖提取率为81%以及多糖降解率为70%,得到的产物的相对分子质量约8000da,并由6种单糖组成的小分子量杂多糖。以上所述仅是本发明的优选实施方式,应当理解本发明并非局限于本文所披露的形式,不应看作是对其他实施例的排除,而可用于各种其他组合、修改和环境,并能够在本文所述构想范围内,通过上述教导或相关领域的技术或知识进行改动。而本领域人员所进行的改动和变化不脱离本发明的精神和范围,则都应在本发明所附权利要求的保护范围内。当前第1页12
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