羟尼酮的晶型及其制备方法和用途与流程

本发明涉及羟尼酮的新晶型及其制备方法和用途，属于药物化学领域。
背景技术：
：纤维化是一种非常广泛的疾病，可发生于多种器官中，其主要病理改变为器官组织内纤维结缔组织增多，实质细胞减少，持续进展可致器官结构破坏和功能减退，直至器官衰竭。一旦产生纤维化，器官的功能就会收到极大的危害。肝纤维化是一个病理生理过程，是慢性肝病进展中的共同病理基础。各种致病因子引起肝细胞变性、坏死，结缔组织异常增生。如果在肝脏修复过程中的损伤因素长期不能去除，则长期持续的纤维化过程最终将会导致发展成肝硬化。多种慢性疾病，如慢性病毒性肝炎、慢性酒精中毒、胆汁淤积、先天性酶缺陷的代谢障碍性疾病、长期接触毒物和药物等均可引起肝纤维化。目前可用于肝纤维化治疗的药物较少，因而存在对安全有效的相关药物的需求。羟尼酮(hydronidone)是一种用于治疗肝纤维化的药物，研发代码为f351，其目前在中国进行的ii期临床研究评估了治疗慢性乙型肝炎患者肝纤维化的疗效和安全性。羟尼酮的化学名称为n-(4-羟基苯基)-5-甲基-2-吡啶酮，并且具有下述化学式：现有技术中存在多种制备羟尼酮化合物的方法。cn100358872c中公开了用于治疗各种纤维化疾病，如肝纤维化的n-取代的2(1h)吡啶酮衍生物或其药学上可接受的盐，其中优选的化合物为f351(羟尼酮)。在该化合物的制备中，通过用乙醇作为溶剂重结晶获得最终产品。cn101723883a涉及羟尼酮的合成方法，其中分别涉及浓缩母液(以乙醇为溶剂)、向四氢呋喃中添加乙醇、向二氯甲烷中添加乙醇的方式获得终产物。cn107698498a、cn107698499a、wo2018028508a1和wo2018028506a1分别公开了一种羟尼酮的制备方法，其中均在获得羟尼酮粗品之后，将其先通过乙醇和乙酸乙酯的混合溶剂打浆过滤；获得的滤饼经沸水溶解、脱色、冷却结晶、干燥等步骤之后获得白色结晶固体。cn111004173a中描述了一种制备羟尼酮的方法，其中将n-(4-甲氧基苯基)-5-甲基-2-吡啶酮与硫酸加热回流，从而通过脱甲基获得羟尼酮；在首先制得羟尼酮硫酸盐之后，通过碳酸钠或碳酸氢钠中和获得粗品羟尼酮，然后再通过打浆精制和在水中脱色过程获得白色结晶固体湿品，将其烘干后可得成品。然而，上述制备方法获得的羟尼酮存在溶解度(尤其是水溶性)和溶解速率低的问题，它们表现出不同的药代动力学特征，从而使得生物利用度不尽令人满意；并且稳定性也较差。这些因素影响了羟尼酮在成药过程中的应用性质。然而，由于药物的晶型及其物理化学性质，例如溶解度、溶解速率、熔点、生物利用度、稳定性等性质都是不可预测的，因此，本领域中仍然存在找到能够有助于满足制剂的需求的羟尼酮的合适的晶型的需求。技术实现要素：因此，本发明的目的在于提供具有更适合于药用，尤其是具有更好的口服暴露量和更高的生物利用度的羟尼酮晶型及其制备方法和用途，由此克服现有技术的缺点并且在成药性方面优于现有技术获得的产品。根据本发明，上述目的通过根据本发明的一种新的羟尼酮晶型及其制备方法和用途得以解决，其中所述羟尼酮(研发代码f351)，化学名称为n-(4-羟基苯基)-5-甲基-2-吡啶酮，并且具有下述化学式：根据本发明的一个方面，本发明涉及一种羟尼酮的晶型b，其x射线粉末衍射谱图包括采用cukα辐射测量的在下述2θ角处的衍射峰中的一个或多个：24.46°±0.2°、27.88°±0.2°、30.18°±0.2°、34.44°±0.2°和43.48°±0.2°。根据本发明的一个方面，本发明涉及一种羟尼酮的晶型b，其x射线粉末衍射谱图包括采用cukα辐射测量的在下述2θ角处的衍射峰中的一个或多个：8.76°±0.2°、12.24°±0.2°、12.94°±0.2°、14.56°±0.2°、15.30°±0.2°、18.00°±0.2°、22.66°±0.2°、26.04°±0.2°、27.88°±0.2°和29.48°±0.2°。根据本发明的一个方面，本发明涉及一种羟尼酮的晶型b，其x射线粉末衍射谱图包括采用cukα辐射测量的在下述2θ角处的衍射峰中的一个或多个：8.76°±0.2°、12.24°±0.2°、12.94°±0.2°、14.56°±0.2°、15.30°±0.2°、16.54°±0.2°、17.54°±0.2°、18.00°±0.2°、19.58°±0.2°、24.46°±0.2°、27.88°±0.2°、30.18°±0.2°、34.44°±0.2°和43.48°±0.2°。根据本发明的一个方面，本发明涉及一种羟尼酮的晶型b，其x射线粉末衍射谱图包括采用cukα辐射测量的在下述2θ角处的衍射峰中的一个或多个：16.54°±0.2°、17.54°±0.2°、24.46°±0.2°、27.34°±0.2°、27.88°±0.2°、28.34°±0.2°、30.18°±0.2°、32.89°±0.2°、34.44°±0.2°、43.48°±0.2°、44.12°±0.2°、45.42°±0.2°、46.40°±0.2°、47.26°±0.2°和47.50°±0.2°。根据本发明的一个方面，本发明涉及一种羟尼酮的晶型b，其x射线粉末衍射谱图包括采用cukα辐射测量的在下述2θ角处的衍射峰中的一个或多个：8.76°±0.2°、12.24°±0.2°、12.94°±0.2°、14.56°±0.2°、15.30°±0.2°、16.54°±0.2°、17.54°±0.2°、18.00°±0.2°、19.56°±0.2°、22.66°±0.2°、24.46°±0.2°、26.04°±0.2°、26.40°±0.2°、27.34°±0.2°、27.88°±0.2°、28.34°±0.2°、29.28°±0.2°、29.48°±0.2°、30.18°±0.2°、32.89°±0.2°、34.44°±0.2°、43.48°±0.2°、44.12°±0.2°、45.42°±0.2°、46.40°±0.2°、47.26°±0.2°和47.50°±0.2°。根据本发明的一个方面，本发明涉及一种羟尼酮的晶型b，其x射线粉末衍射谱图基本上如附图2所示。根据本发明的一个方面，本发明还提供了用于制备根据本发明的羟尼酮的晶型的方法。根据本发明，所述方法包括：通过加热使羟尼酮完全溶于溶剂中，然后通过使溶液降温而使得羟尼酮结晶析出，其中所述溶剂包括有机溶剂或水，优选乙酸乙酯或乙醇。根据本发明的一个实施方案，所述降温包括从加热温度降至环境温度，优选将至室温，更优选将至0℃；并且任选地采用冰水浴冷却。根据本发明的一个实施方案，所述降温速率为1～5℃/min，优选2～3℃/min，最优选约2℃/min。根据本发明的一个方面，本发明还提供了一种药物组合物，其包含治疗有效量的根据本发明的晶型b1和药学上可接受的辅料。根据本发明的一个方面，本发明还提供了一种药物组合物，其包含治疗有效量的根据本发明的晶型b2和药学上可接受的辅料。根据本发明的一个实施方案，在本发明的药物组合物中，所述药学上的辅料包括：一种、两种或更多种赋形剂或载体。根据本发明的一个实施方案，可以将根据本发明的药物组合物制成各种制剂形式，包括：溶液剂、糖浆剂、混悬剂、乳剂、注射剂、粉剂、散剂、颗粒剂、胶囊剂、片剂、包衣片剂或丸剂，微囊、微丸、环糊精包合物，缓释、控释、迟释剂型等。根据本发明的一个方面，本发明还提供了根据本发明的羟尼酮的晶型在制备用于治疗纤维化，优选肝纤维化相关的疾病的药物中的用途。根据本发明的一个实施方案，本发明的化合物还可以与其它治疗纤维化的活性物质联用，所述活性物质例如包括α-干扰素、β-干扰素、γ-干扰素、皮质激素等。为了避免任何歧义，在本文中在单独提及术语“晶型”的情况下，本领域技术人员能够理解，所述“晶型”至少包括羟尼酮的晶型b，并且晶型b至少包括在不同溶剂条件下获得的晶型b1和b2。本领域技术人员同样能够理解，上述各个方面与各个实施方案中所包含的一个、两个或更多个技术特征可以彼此独立地进行重新组合，从而得出落入本发明的其它技术方案。有益效果本发明提供的羟尼酮的新晶型及其制备方法，相对于现有技术的羟尼酮固体形式具有下述有利之处：根据本发明的羟尼酮晶型b(b1和b2)的稳定性优于其无定形态，并且通过该晶型获得的药物的口服暴露量和口服生物利用度均优于其无定形态获得的药物。此外，根据本发明的制备方法能够以简便、重现性好、收率高的方式获得纯度高的羟尼酮晶型b，这样有利于工业化生产，从而具备较好的应用价值。术语定义和解释除非另有说明，本申请说明书和权利要求书中记载的术语定义，包括其作为实例的定义、示例性的定义、优选的定义、表格中记载的定义、实施例中具体化合物的定义等，可以彼此之间任意组合和结合。这样的组合和结合后的定义及化合物结构，应当属于本申请说明书记载的范围内。本说明书和权利要求书记载“约”某个数值时，包括了该数值本身，以及本领域可接受的该数值前后范围内的数值，例如该数值±15％范围内的数值，该数值±10％范围内的数值，该数值±5％范围内的数值等。术语“患者”是指包括哺乳动物在内的任何动物，优选小鼠、大鼠、其它啮齿类动物、兔、狗、猫、猪、牛、羊、马或灵长类动物，最优选人。术语“治疗有效量”是指研究人员、兽医、医师或其它临床医师正在组织、系统、动物、个体或人中寻找的引起生物学或医学反应的活性化合物或药物的量，它包括以下一项或多项：(1)预防疾病：例如在易感染疾病、紊乱或病症但尚未经历或出现疾病病理或症状的个体中预防疾病、紊乱或病症；(2)抑制疾病：例如在正经历或出现疾病、紊乱或病症的病理或症状的个体中抑制疾病、紊乱或病症(即阻止病理和/或症状的进一步发展)；(3)缓解疾病：例如在正经历或出现疾病、紊乱或病症的病理或症状的个体中缓解疾病、紊乱或病症(即逆转病理和/或症状)。术语“药学上可接受的”是指处方组分或活性成分对一般治疗目标的健康没有过分的有害影响。术语“药学上可以接受的赋形剂或载体”意指一种或多种相容性固体或液体填料或凝胶物质，它们适合于人使用，而且必须有足够的纯度和足够低的毒性。“相容性”在此指的是组合物中各组份能与本发明的化合物以及它们之间相互掺和，而不明显降低化合物的药效。药理上可以接受的赋形剂或载体部分例子有纤维素及其衍生物(如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素钠、纤维素乙酸酯等)、明胶、滑石、固体润滑剂(如硬脂酸、硬脂酸镁)、硫酸钙、植物油(如豆油、芝麻油、花生油、橄榄油等)、多元醇(如丙二醇、甘油、甘露醇、山梨醇等)、乳化剂、润湿剂(如十二烷基硫酸钠)、着色剂、调味剂、稳定剂、抗氧化剂、防腐剂、无热原水等。附图说明图1是根据本发明在不同溶剂中获得的f351的晶型之后立即测量的xrpd谱图的曲线的堆叠图，其中(1)f351etoh-0d对应于实施例3中通过在乙醇中重结晶获得的f351晶型b2的结果；(2)f351ea-0d对应于实施例2中通过在乙酸乙酯中重结晶获得的f351晶型b1的结果；和(3)f351as-0d对应于实施例1中无定形f351获得的结果；从该堆叠图可以看出，晶型b1和b2是相同的晶型；图2是在实施例2获得的羟尼酮晶型b1的xrpd谱图；图3是在实施例1中通过冷却羟尼酮的熔体获得的无定形形式a的xrpd谱图；图4是在实施例1中获得的无定形形式a的dsc谱图；图5是在实施例2中获得的晶型b1的dsc谱图；图6是在实施例3中获得的晶型b2的dsc谱图。具体实施方式下文将结合具体实施例对本发明的技术方案做更进一步的详细说明。应当理解，下列实施例仅为示例性地说明和解释本发明，而不应被解释为对本发明保护范围的限制。凡基于本发明上述内容所实现的技术均涵盖在本发明旨在保护的范围内。除非另有说明，以下实施例中使用的试剂均为市售商品，或者可以通过已知方法制备。测试方法在获得样品之后，采用下述方法对获得的样品分别进行测量：1.样品处理将基质样品或工作液(标准曲线/质控相关样品等)取出后放至室温，涡旋混匀(按需要可在使用前将空白样品离心)。取47.5μl作为空白基质的血浆，向其中加入2.5μl工作液(标准曲线/质控相关样品等)，涡旋混匀。将获得的混合液加入1000μl内标工作液(对空白而言，不加内标而是补加相同体积的乙腈)，涡旋混匀，然后在14,000rpm离心15分钟。取50μl上清液，向其中再加入150μl超纯水到相应的96孔进样板中，涡旋混匀。将获得的溶液进行lc-ms/ms进样分析。2.储备液溶液配制f-351储备液：精密称取10mgf351对照品，置于棕色玻璃闪烁瓶中，添加100μl的乙腈或其它适量溶剂使其溶解，混合均匀，配制成100mg/ml的储备液，在4℃储存备用。普萘洛尔(propranolol)储备液(内标)：精密称取10mg萘洛尔对照品，置于玻璃闪烁瓶中，加100μl的乙腈或其它适量溶剂使其溶解，混合均匀，配制成100mg/ml的内标储备液(isstock)，在4℃储存备用。3.实验溶液配制内标工作溶液配制：吸取20μl的普萘洛尔内标储备液，用乙腈稀释至浓度为20ng/ml的内标工作液。流动相溶液配制：流动相a：吸取1ml甲酸至液相色谱瓶中，加入1000ml超纯水后混匀，配制成0.1％甲酸水溶液。流动相b：吸取1ml甲酸至液相色谱瓶中，加入1000ml乙腈后混匀，配制成0.1％甲酸乙腈溶液。洗针溶液配制：弱洗液：吸取500ml甲醇至液相色谱瓶中，加入500ml水后混匀，配制成50％的甲醇水溶液，作为弱洗针溶液。强洗液：按体积比v:v:v:v＝1:1:1:1分别吸取250ml甲醇至液相色谱瓶中，加入250ml的异丙醇、250ml的乙腈、250ml的0.1％甲酸水溶液，混合均匀，配制成强洗针溶液。4.标准曲线工作液与标准曲线样品配制取10μl的f-351储备液，用240μl的50％乙腈水溶液稀释成浓度为400μg/ml标准曲线工作液。再取400μg/ml的标准曲线工作液，用50％乙腈水溶液依次稀释到200、100、20、10、2、1、0.2μg/ml的标准曲线工作液，见表1。取2.5μl标准曲线工作液添加至47.5μl空白基质中，配制成标准曲线样品，浓度依次为20000、10000、5000、1000、500、100、50、10ng/ml。表15.质控工作液与质控样品配制取32μlf-351储备液，用50％乙腈水溶液稀释成浓度为320μg/ml的质控工作液。再取320μg/ml的质控工作液，用50％乙腈水溶液依次稀释成浓度为80、0.6μg/ml的质控工作液。取2.5μl质控工作液添加至47.5μl空白基质中，配制成质控样品，浓度依次为16000、4000、30ng/ml。6.通过液相色谱质谱联用法(岛津公司lc-30ad超高效液相色谱系统和美国应用生物系统公司的tq5500plus质谱仪)上，采用下述条件进行样品的测量：6.1色谱条件色谱柱：acquitybehc181.7μm(2.1*50mm)流速：500μl/min柱温：40℃进样量：1μl自动进样器温度：4℃洗脱剂梯度配比如下表2所示：表2：洗脱剂梯度6.2.质谱仪条件：扫描模式：正离子多反应监测模式离子源：电喷雾离子源离子源电压(is)：5500v离子源温度(tem)：550℃q1分辨率：unitq3分辨率：unit雾化气(gas1)：55psi气帘气(cur)：35psi碰撞气(cad)：8辅助加热气(gas2)：55psi；其中上述雾化气、气帘气、碰撞气和辅助加热气均为氮气。针对本发明的晶型b与普萘洛尔的测试中，质谱条件还存在下表3所述的区别：表3：测试本发明的晶型与普萘洛尔的质谱条件7.x射线粉末衍射法样品制备：取适量样品于xrpd样品盘的凹槽中，将样品平铺之后再用另一玻璃板将粉末样品压平整。测试条件：采用shimadzuxrd-6000仪器按照以下参数扫描样品：射线源为cu～kα靶光管的操作电压为40kv，电流为30ma；样品扫描范围的2θ值从5°到50°。扫描速度为5deg/min。实施例实施例1(制备无定型羟尼酮a)将约11g的f351置于50ml陶瓷坩埚中。然后将坩埚置于马弗炉中。将马弗炉设定190℃的温度，在约40min内加热至内容物完全熔化。另外预先准备铁盘，将该铁盘置于冰水浴中恒温。在坩埚中的f351完全熔化之后，将其倾倒至该铁盘中，获得10.5g浅黄色透明块状固体，将其编号为无定形a。其直接用于后续实验。实施例2(在乙酸乙酯中重结晶获得晶型b1)将10gf351置于500ml单口瓶中，向其中添加300ml乙酸乙酯。将混合物加热至回流得到悬浊液，在此过程中继续搅拌30min。使获得的溶液的温度降至室温(降温速度约2℃/min)，在此过程中逐渐有固体析出。将其过滤并且真空干燥，获得8g白色粉末，将其编号为晶型b1，直接用于后续实验。实施例3(在乙醇中重结晶获得晶型b2)将10gf351置于500ml单口瓶中，向其中添加50ml乙醇。将混合物加热至回流并且使固体全部溶解至获得澄清溶液，在此过程中进行搅拌并且在获得澄清溶液之后继续搅拌30min。使获得的溶液的温度降至室温(降温速度约2℃/min)，在此过程中逐渐有固体析出。将其过滤并且真空干燥，获得7.7g白色粉末，将其编号为晶型b2，可直接用于后续实验。实施例4(样品dsc法测定)称取约1mg的样品于40μl的标准铝坩埚中，加盖(带孔)，压紧，置于mettlerdsc设备中进行测量。测试温度范围为30℃～300℃，升温速率为20℃/min。结果见下表4。表4dsc测试结果关于dsc测试的谱图，请另外参见图4-6。实施例5(吸湿性测定)在0％～95％～0％相对湿度(rh)循环下，称取10mg左右的样品在25℃条件下进行吸湿/解吸特性测试，参数如下:设置参数样品室温度25℃平衡条件dm/dt:0.01％/min湿度范围，rh(％)0％～95％～0％rh测量步长，rh(％)5％rh样品量～10mg吸湿性分级:吸湿性分级水分吸附标准*潮解吸收足量的水分形成液体极易吸湿的w％≧15％吸湿的2％≦w％≦15％轻微吸湿的0.2％≦w％≦2％不易吸湿的w％<0.2％“*”：在25±1℃和80±2％rh条件下(欧洲药典10.0)表5-1无定形a的dvs结果表5-2晶型b2的dvs结果通过dvs测试结果可以看出，无定形a是轻微吸湿的，而根据本发明的晶型b2是不易吸湿的。实施例6(稳定性试验)分别测量0.5g本发明的无定形a和晶型b1、b2的有效成分和杂质含量，并且对杂质进行结构分析，同时还进行xrpd测量，获得相关数据。另外，分别将1.0g本发明的无定形a和晶型b1、b2放置在相对湿度为92.5％和温度为45℃的环境中，分别在第10天、第30天、第60天和第90天测量有效成分和杂质含量，并且对杂质进行结构分析，同时还进行xrpd测量，获得相关数据。此外，还将1.0g本发明的无定形a和晶型b1、b2在-10℃放置10天，测量有效成分和杂质含量，并且对杂质进行结构分析，同时还进行xrpd测量，获得相关数据。上述试验的结果汇总于下表6中。表6稳定性试验结果*在上述表6中，中间体在通常情况下主要包括：2-羟基-5-甲基-吡啶；最大单杂通常以n-(4-羟基苯基)-5-甲基-2-吡啶酮形式出现。从上述表6中可以看出，根据本发明的无定形a与晶型b1和b2均具有良好的稳定性，在各种温度和湿度条件下长时间保存之后在总杂质方面仍然维持了非常低的水平；即使在45℃和92.5％相对湿度下保存60天总杂质仍然不超过0.08％，由此证实了根据本发明的无定形a和晶型b1、b2的长期稳定性。实施例7(口服生物利用度)首先准备根据本发明的无定形a、晶型b1和晶型b2的样品作为供试品，这些物质的基本参数如下表7所示：表7：供试品的部分理化参数分别将上述物质配制成灌胃给药溶液，其中灌胃给药溶液采用0.5％的纤维素钠水溶液作为溶剂；将配制的灌胃给药溶液浓度为10mg·ml-1。选取9只雄性sd大鼠分成3组，每组3只，编为灌胃给药组1-3，分别按照100mg·kg-1的剂量(即10ml·kg-1体积的剂量)给予浓度为10mg·ml-1的灌胃给药溶液。上述给药信息可以汇总如下表8所示：表8：给药方案分别在上述动物给药前以及在给药后0.083、0.25、0.5、0.75、1、1.5、2、3、4、8小时，对灌胃给药组的动物采集血浆样品。从采集的血液样品中分离血浆，并且添加乙二胺四乙酸二钾(edta-k2)作为抗凝剂。下表9为对通过各种给药方式处理的大鼠血浆样品中的活性化合物进行测量和计算之后获得的结果：表9：大鼠血浆样品药代动力学参数由上述结果可以看出，根据本发明晶型b1和b2在药代动力学方面具有以下优势：晶型b1和b2的药物口服暴露量和口服生物利用度均高于无定形。综上所述，对本发明的实施方式进行了说明。但是，本发明不限定于上述实施方式。凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。当前第1页12