专利名称：尿液单羟酚类代谢物检测试剂的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种尿液单羟酚类代谢物检测试剂的制备方法。
背景技术：
尿液单羟酚类代谢物水平的显著提高，可以提示恶性疾病的发生。通过检测尿液中的单羟酚类代谢物含量，可以用于提前判断恶性肿瘤发生的可能性，发现临床前的恶性肿瘤对于肿瘤细胞的逆转和治愈具有重要的意义，目前尚没有发现此领域的研究。
发明内容
本发明的目的就是提供一种生产成本低的尿液单羟酚类代谢物检测试剂的制备方法。本发明的尿液单羟酚类代谢物检测试剂的制备方法，包括以下步骤
A溶液制备用1份重量的金属汞与2 2. 2份重量的比重为1. 42g/ml的硝酸反应所得的混合溶液，量出混合溶液的体积，加2倍体积于混合溶液的蒸馏水稀释； B溶液浓度为0. 05g/ml 0. 15 g/ml的硝酸镍溶液；
C溶液制备按浓度计算要求，称取分析纯硫酸汞试剂的量，溶解于3mol/L的硫酸溶液中，再加3mol/L的硫酸溶液定容至硫酸汞溶液的浓度为0. 05g/ml 0. 15 g/ml ；
将A溶液、B溶液和C溶液按体积比1 1. 5 2 0. 5 1. 5混合均勻，再在混合溶液中加入与A、B两溶液体积之和等体积的蒸馏水，搅拌均勻，即得。本发明的制备方法所得的尿液单羟酚类代谢物检测试剂，使用方法取被检者晨尿3ml，滴入0. 5ml的本试剂中，摇勻，静置1_3分钟，检测标准是，出现白色/黄色沉淀或无沉淀者为阴性，出现红色/深红沉淀者为阳性。本发明的制备方法所得的尿液单羟酚类代谢物检测试剂用于疗效监测时，可在治疗实施前后进行检测，如治疗后仍为阳性，则说明治疗疗效不明显；如治疗前为阳性反应， 治疗后为转阴性反应，则说明治疗有效。在用于病情监测时，可用上述方法定期检测，在此过程中，如出现沉淀的颜色逐渐加深，或由阴性反应转为阳性反应，则提示肿瘤复发或转移。本发明的制备方法所得的尿液单羟酚类代谢物检测试剂，应用效果表现在以下几个方面
1、大白兔肿瘤模型试验，接种肝癌细胞IO5个，本试剂可以在接种癌细胞24小时后检测出阳性；而利用B超则在5天以后才能检测到肿瘤。该试验结果表明，本试剂能够发现临床前即亚临床时期的肿瘤。应用到人群筛查上，本试剂可以发现潜伏期的癌症。2、应用本试剂对已确诊的965例恶性肿瘤患者和非恶性肿瘤病人进行测试，其中恶性肿瘤337例，非恶性肿瘤6 例，结果是阳性反应者341例，阴性反应者6M例。与病理诊断结果对照后，假阳性6例，假阴性12例，阳性325例，阴性622例。各项检测指标为 敏感度96%，特异性99%，准确率98%，假阳性率1%，假阴性率3. 6%，阳性结果预测值98. 2%，阴性结果预测值98. 1%。3、本试剂应用于疗效监测，对57例已确诊恶性肿瘤的65个化疗疗程进行疗效评价，采用的指标为完全缓解、部分缓解、稳定和进展。本试剂检测结果为19个化疗疗程为完全缓解和部分缓解，与同期临床评价相比(临床评价，完全缓解和部分缓解的化疗疗程为21 个)，本试剂评价的符合率为90%。4、应用本试剂对93例已治疗出院的恶性肿瘤患者进行一年半的病情跟踪观察， 16例逐渐显示阳性反应，提示肿瘤的复发或转移。与同期的临床资料相比，确诊者为14 例，准确率为87. 5%。本发明的尿液单羟酚类代谢物检测试剂的制备方法，具有生产成本低的特点，通过对尿液单羟酚类代谢物检测试剂的制备方法进行对比研究，确定了经济、简便的制备方法和试剂各组分的最佳配比，所得的尿液单羟酚类代谢物检测试剂稳定性和灵敏度高、假阳性率和假阴性率低，适合于人群筛查和临床检验的要求。
具体实施例方式实施例1 配制1750ml的尿液单羟酚类代谢物检测试剂
本试剂由三种溶液组成，按体积比例，即A溶液B溶液C溶液=1:2:1，分别配制为 250ml, 500ml 和 250ml，其中
1、A溶液称取64g汞，溶解于比重1.42g/ml的硝酸96ml中，待汞完全溶解，加入 166. 7ml的蒸馏水，即配制成250ml的A溶液；
2、B溶液硝酸镍溶液的浓度为0.lg/ml，称取6水硝酸镍80g，溶解于适量的5mol/L 的硝酸溶液中，再加入5mol/L的硝酸溶液定容至500ml，即配制成浓度为0. lg/ml的硝酸镍溶液；
3、C溶液硫酸汞溶液的浓度为0.lg/ml，称取硫酸汞25g，溶解于适量的3mol/L的硫酸溶液中，再加3mol/L的硫酸溶液定容至250ml，即配制成浓度为0. lg/ml的硫酸汞溶液；
然后，将以上三种溶液混合均勻，最后，再加入A、B两溶液体积之和等体积的蒸馏水 750ml,搅拌均勻，即配制成1750ml本试剂。实施例2 配制1750ml的尿液单羟酚类代谢物检测试剂
本试剂由三种溶液组成，按体积比例，即A溶液B溶液C溶液=1:2:1，分别配制为 250ml, 500ml 和 250ml，其中
1、A溶液同实施例1；
2、B溶液硝酸镍溶液浓度为0.15g/ml，称取6水硝酸镍119. 3g，溶解于适量的5mol/ L的硝酸溶液中，再加入5mol/L的硝酸溶液定容至500ml，即配制成浓度为0. 15g/ml的硝酸镍溶液。3、C溶液同实施例1。然后，将以上三种溶液混合均勻，最后，再加入A、B两溶液体积之和等体积的蒸馏水750ml，搅拌均勻，即配制成1750ml本试剂。实施例3 配制1500ml的尿液单羟酚类代谢物检测试剂
本试剂由三种溶液组成，按体积比例，即A溶液B溶液C溶液=1 1. 5:1，分别配制为 250ml, 375ml 和 250ml，其中1、A溶液同实施例1；
2、B溶液硝酸镍溶液浓度为0.lg/ml，称取6水硝酸镍59. 7g，溶解于适量的5mol/L 的硝酸溶液中，再加入5mol/L的硝酸溶液定容至375ml，即配制成浓度为0. lg/ml的硝酸镍溶液；
3、C溶液同实施例1；
然后，将以上三种溶液混合均勻，最后，再加入A、B两溶液体积之和等体积的蒸馏水 625ml,搅拌均勻，即配制成1500ml本试剂。
权利要求
1. 一种尿液单羟酚类代谢物检测试剂的制备方法，其特征在于它包括以下步骤 A溶液制备用1份重量的金属汞与2 2. 2份重量的比重为1. 42g/ml的硝酸反应所得的混合溶液，量出混合溶液的体积，加2倍体积于混合溶液的蒸馏水稀释； B溶液浓度为0. 05g/ml 0. 15 g/ml的硝酸镍溶液；C溶液制备按浓度计算要求，称取分析纯硫酸汞试剂的量，溶解于3mol/L的硫酸溶液中，再加3mol/L的硫酸溶液定容至硫酸汞溶液的浓度为0. 05g/ml 0. 15 g/ml ；将A溶液、B溶液和C溶液按体积比1 1. 5 2 0. 5 1. 5混合均勻，再在混合溶液中加入与A、B两溶液体积之和等体积的蒸馏水，搅拌均勻，即得。
全文摘要
一种尿液单羟酚类代谢物检测试剂的制备方法，包括以下步骤A溶液制备用1份重量的金属汞与2～2.2份重量的硝酸反应所得的混合溶液，加蒸馏水稀释；B溶液浓度为0.05g/ml～0.15g/ml的硝酸镍溶液；C溶液制备硫酸汞溶液的浓度为0.05g/ml～0.15g/ml；将A溶液、B溶液和C溶液按体积比1:1.5～2:0.5～1.5混合均匀，再在混合溶液中加入蒸馏水，搅拌均匀，即得。本发明的尿液单羟酚类代谢物检测试剂的制备方法，具有生产成本低的特点，所得的尿液单羟酚类代谢物检测试剂稳定性和灵敏度高、假阳性率和假阴性率低，适合于人群筛查和临床检验的要求。
文档编号G01N21/82GK102565055SQ201210011749
公开日2012年7月11日 申请日期2012年1月16日 优先权日2012年1月16日
发明者王奇, 陶海南 申请人:万可, 宜春市中奇金域生物科技有限公司