一种鲢鱼鱼鳞胶原蛋白肽的制备方法与流程

本发明涉及蛋白提取技术领域，尤其涉及一种鲢鱼鱼鳞胶原蛋白肽的制备方法。

背景技术：

胶原蛋白肽是一种细胞外蛋白质。由二个或二个以上氨基酸组成－－蛋白肽。人体的吸收是以肽的方式进行，食用蛋白肽的吸收利用率可达100％。胶原蛋白是细胞外基质中最重要的组成部分，由二个或二个以上氨基酸组成－－蛋白肽。人体的吸收是以肽的方式进行，食用蛋白肽的吸收利用率可达100％。肽的分子量、氨基酸排列顺序不同所表现的功能就不同。胶原蛋白富含人体需要的甘氨酸、脯氨酸、羟脯氨酸等氨基酸。胶原蛋白是细胞外基质中最重要的组成部分。胶原蛋白肽是一种细胞外蛋白质，它是曲3条肽链拧成螺旋形的纤维状蛋白质，胶原蛋白是人体内含量最丰富的蛋白质，占全身总蛋白质的1/3。一个60kg的成年人的身体内约有3公斤胶原蛋白，主要存在于人体皮肤、骨骼、眼睛、牙齿、肌腱、内脏(包括心、胃、肠、血管)等部位，其功能是维持皮肤和组织器官的形态和结构，也是修复各损伤组织的重要原料物质。在人体皮肤成分中，有70％是由胶原蛋白所组成。当胶原蛋白不足时，不仅皮肤及骨骼会出现问题，对内脏器官也会产生不利影响。也就是说，胶原蛋白是维持身体正常活动所不可缺少的重要成分。同时也是使身体保持年轻、防止老化的物质。另外，胶原蛋白还可以预防疾病，改善体质，对美容和健康都很有帮助。胶原蛋白肽，可以被人体主动且无障碍吸收，无需消化，供身体组织充分利用。并且海洋胶原肽平均分子量更小，甚至只有2-4个氨基酸构成，远远小于普通肽。大连晓芹公司精选南极深海海鱼，以海鱼的鱼皮为原料，运用现代生物工程技术及酶工程技术提取，最后提炼为海洋胶原肽。现在胶原蛋白正慢慢进入美容护肤领域.胶原蛋白是人体组织结构的主要成分之一，也是人体内含量最多的一种蛋白质，约占人体蛋白质总量的1/3，相当于人体体重的6％，它遍及全身的各个组织器官，如：皮肤、骨骼、软骨、韧带、角膜、各种内膜、筋膜等，是维持皮肤与组织器官形态、结构的主要成分，也是修复各损伤组织的重要原料物质。如下图示当真皮层的胶原蛋白(下图黄色部分)被氧化、断裂后，对表皮的支撑作用就消失了，因此造成不均一的塌陷，这样皱纹就产生了。

现有的胶原蛋白肽制作的对其中胶原蛋白所提取的原料不同，所以效果就不同，现有的原料中蛋白质的总量较少，提取步骤繁琐，基本通过动物的皮肤作为原材料，浪费粮食，破坏环境。

技术实现要素：

针对现有技术的不足，本发明提供了一种鲢鱼鱼鳞胶原蛋白肽的制备方法，该方法以鲢鱼鱼鳞为原料，提取获得的胶原蛋白能够最大限度地保持天然的螺旋结构，蛋白总量较高，且对环境友好。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供一种鲢鱼鱼鳞胶原蛋白的制备方法，包括如下步骤：

取鲢鱼鱼鳞加入0.1～0.3mol/ledta溶液浸泡提取，得到提取液；

向所述提取液中加入胃蛋白酶酶解，灭酶、离心、收集上清液，获得鲢鱼鱼鳞胶原蛋白。

鱼鳞营养丰富，其中含有大量的胶原蛋白，并且通过调查研究其中鲢鱼鱼鳞胶原蛋白肽的抗氧化作用及其理化特性较稳定。本发明选用鲢鱼鱼鳞作为原材料，利用edta溶液和胃蛋白酶提取鱼鳞的胶原蛋白，提高了胶原蛋白的提取率，便于将鳞鱼鱼鳞中的有机物及非胶原蛋白组分去除，有利于对鱼鳞进行脱钙，有良好的脱钙效果，能够将胶原蛋白有效的从原组织中分离，降低了胶原蛋白的损失率。

本发明比较了酸提取法、碱提取法和热提取水，结果显示本发明采用胃蛋白酶提取法对胶原蛋白的改性、分离的效果最好。

收集鱼鳞原料后，将原料放入鱼鳞清洗机内，对原料进行清洗，鱼鳞清洗机选用型号为jx177386。清洗后，利用edta溶液对原料浸泡提取。

作为优选，所述edta溶液的浓度为0.17mol/l。

作为优选，所述浸泡提取中，鲢鱼鱼鳞与edta溶液的质量比为1:30。

作为优选，所述浸泡提取的时间为30h～35h。

在一些具体实施例中，浸泡提取的时间为30h。

作为优选，以ml/g计，所述酶解的液料比为18:1。

作为优选，所述胃蛋白酶的加入量为1600u/g。

作为优选，所述酶解的温度为60℃，时间为61.9h，ph为9.5。

在一个具体实施例中，本发明获得胶原蛋白后采用sds-page凝胶电泳对鲢鱼鱼鳞胶原蛋白进行分析，确认了原料属于ⅰ型胶原蛋白，且含量最多的氨基酸，其次足谷氨酸、丙氨酸、脯氨酸和羟脯氨酸，傅里叶红外光谱扫描结果表明所提取的胶原蛋白较好地保持了螺旋结构。

本发明还提供了由所述的提取方法制得的鲢鱼鱼鳞胶原蛋白。

本发明提供了一种鲢鱼鱼鳞胶原蛋白肽的制备方法，包括如下步骤：取鲢鱼鱼鳞加入0.1～0.3mol/ledta溶液浸泡提取，得到提取液；向所述提取液中加入胃蛋白酶酶解，获得鲢鱼鱼鳞胶原蛋白。本发明具备以下有益效果：

1、浪费和环境的污染。以鳞鱼鱼鳞为原料提取胶原蛋白，既充分利用了鱼鳞资源避免，环境的污染，又有效的提高水产品加工的经济效益，同时也解决了口蹄疫、疯，牛病可能带来的胶原蛋白安全问题，通过使用设备对原料进行清洗，减少了劳动力，提高了生产效率。

2、本发明通过采用脱钙处理，选用添加胃蛋白酶对便于提取原料内的胶原蛋白，提高提取率，便于将鳞鱼鱼鳞中的有机物及非胶原蛋白组分去除，有利于对鱼鳞进行脱钙，有良好的脱钙效果，将胶原蛋白有效的从原组织中分离，降低了胶原蛋白的损失率。

3、本发明通过采用sds-page凝胶电泳和傅里叶红外光谱扫描，便于对得到的胶原蛋白进行分析，通过比较碱性蛋白酶、中性蛋白酶和木瓜蛋白酶对鲢鱼鱼鳞胶原蛋白的酶解效果及产物抗氧化活性，结果显示碱性蛋白酶酶解产物的抗氧化活性最强，通过碱性蛋白酶制备，使产品康元华肽对各自有基的清除率得到显著的提高。

附图说明

图1为鲢鱼鱼鳞胶原蛋白的制备流程示意图。

具体实施方式

本发明提供了一种鲢鱼鱼鳞胶原蛋白的制备方法。本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。

本发明采用的试材皆为普通市售品，皆可于市场购得。

下面结合实施例，进一步阐述本发明：

实施例1

本发明鲢鱼鱼鳞胶原蛋白的制备工艺如图1所示，具体包括如下步骤：

sp1：原材料制备：通过调查选用鱼鳞为原材料，对原材料进行提前准备，将原材料清理放在所需位置；

sp2：脱钙处理：将提前准备好的原材料放入准备好加工的罐体内，对原材料进行浸泡提取、酶解，即脱钙改性处理；脱钙处理为：按料液比1：30加入0.17mol/l的edta溶液，浸泡提取30h，添加胃蛋白酶25.51umg，液料比(v/w)18：1，提取时间61.9h，进行脱钙处理。其中，加酶量为1600u/g，ph值9.5，酶解温度60℃。

sp3：分析提取：通过脱钙过后的原料进行提取，对提取过后的产品进行分析检测质量是否合格

sp4：混合成型：将合格的产品提取过后，制作抗氧化胶原蛋白肽；

sp5：产品回收：制作过程的产品取出进行提取回收。

得到胶原蛋白后采用sds-page凝胶电泳对鲢鱼鱼鳞胶原蛋白进行分析，确认了原料属于ⅰ型胶原蛋白，含量最多的氨基酸，其次足谷氨酸、丙氨酸、脯氨酸和羟脯氨酸傅里叶红外光谱扫描结果表明所提取的胶原蛋白较好地保持了螺旋结构。

本发明通过采用sds-page凝胶电泳和傅里叶红外光谱扫描，便于对得到的胶原蛋白进行分析，通过比较碱性蛋白酶、中性蛋白酶和木瓜蛋白酶对鲢鱼鱼鳞胶原蛋白的酶解效果及产物抗氧化活性，结果显示，碱性蛋白酶酶解产物的抗氧化活性最强，通过碱性蛋白酶制备，使产品康元华肽对各自有基的清除率得到显著的提高。

本发明采用化学法(酸法和碱法)提取鲢鱼鱼鳞胶原蛋白，利用酸或碱断开肽键，结果显示，反应比较激烈，得到的肽结构会被严重破坏，胶原蛋白的含量和活性明显低于本发明。

需要说明的是，在本文中，诸如第一和第二等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。在没有更多限制的情况下，由语句“包括一个引用结构”限定的要素，并不排除在包括所述要素的过程、方法、物品或者设备中还存在另外的相同要素。

尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。