1.一种用于检测路易体病标志物的cas12a-dnazyme传感器,其特征在于,包括以下组分:dnazyme和locker杂交链d-l溶液;sub-1和sub-2杂交链sub1-2溶液;发夹h溶液;含lbcas12a、crrna和ssdna-fq的报告器溶液;和目标物溶液。
2.根据权利要求1所述的一种用于检测路易体病标志物的cas12a-dnazyme传感器,其特征在于:用于组装cas12a-dnazyme传感器的dna序列包括以下序列:
dnazyme:5'-ggcggtaccaggtcaaaggtgggtgaggggacgccaagagtccccgcggttagatagaccgttcgcg-3';
locker:5'-ggtggctggagggggcgcgaacggtctat-3';
sub-1:5'-tttgcagtatcagtctatctat/ra/ggaagtaccgccgtactgcaaactgggtgtgtcgtctggttgggtg-3';
sub-2:5'-tttgcagtatcagtctatctat/ra/ggaagtaccgccgtactgcaaacgaccaacccagcacccaaccaga-3';
发夹h:5'-atcagtctatgcaatagatagactgatactgcaaa-3';
ssdna-fq:5'-cy3-ttatt-bhq2-3';
所述crrna序列为:5'-uaauuucuacuaaguguagaucaguaucagucuaucuau-3'。
3.如权利要求1所述一种用于检测路易体病标志物的cas12a-dnazyme传感器的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)将dnazyme和locker分别溶于缓冲液b中得到终浓度为100μm的溶液;分别取100μm的dnazyme和locker的溶液各1μl,溶于48μl的缓冲液b中,混匀后于95ºc加热5min,自然冷却至室温,得到dnazyme和locker的杂交链d-l溶液,称为混合物1;
(2)将α-syn寡聚体溶于缓冲液a中制备成目标物溶液;向混合物1加入目标物溶液,于37ºc反应2h,得到混合物2;
(3)将sub-1和sub-2分别溶于缓冲液b中得到浓度为100μm的溶液;将sub-1溶液和sub-2溶液分别于95ºc加热5min,自然冷却至室温;然后取退火后的100μm的sub-1溶液和sub-2溶液各1μl,溶于48μl的缓冲液b中,混匀后在室温反应2h,得到sub-1和sub-2的杂交链sub1-2溶液,称为混合物3;
(4)将发夹h溶于缓冲液b中得到浓度为100μm的溶液;将2μm的发夹h经95ºc加热5min并自然冷却至室温;分别取10μl退火后的2μm发夹h、混合物2、混合物3,混匀后于30ºc反应2h,得到含有目标物的混合物4;
(5)各取10μl浓度均为500nm的lbcas12a和crrna混匀,25ºc反应30min,再加入50μl的浓度为1μm的ssdna-fq,混匀后得到报告器溶液;
(6)将70μl的报告器溶液和30μl的混合物4混匀后于37ºc避光反应2h,得到总体积为100μl的待测溶液;在525nm的激发光波长下测量并记录样品在540−650nm范围内的荧光强度。
4.根据权利要求3所述的一种用于检测路易体病标志物的cas12a-dnazyme传感器的制备方法,其特征在于,所述缓冲液a成分为:0.24%tris-0.87%nacl,ph=7.4,0.2μm滤膜过滤;缓冲液b成分为:200mmnacl,100mmtris-hcl,ph=7.4。
5.如权利要求1所述一种用于检测路易体病标志物的cas12a-dnazyme传感器在检测路易体病中的应用。