转化生长因子β(TGFβ)结合剂及其用途的制作方法

本披露涉及包含tgfβ受体胞外域(tgfβr-ecd)衍生的融合分子的tgfβ结合剂，及其用于结合并中和tgfβ配体的用途，特别是用于治疗与tgfβ相关的疾病或病症的用途。

背景技术：

1、转化生长因子β(tgfβ)是超过30个配体的超家族的一部分，这些配体调节几种生理过程，包括细胞增殖、迁移和分化。它们的水平和/或信号传导的扰动会产生显著的病理效应。tgfβ与多种人类障碍的发病机制有关(akhurst,r.j.和hata,a.,2012；akhurst,r.j.,2017)。例如，tgfβ和激活素配体在许多疾病(包括纤维化和癌症)中起关键的致病作用。tgfβ相关障碍的实例包括血液学恶性肿瘤、实体瘤、骨髓衰竭状态、以及以不受控的纤维化(如肺、肝、肾和血管纤维化)为特征的多种障碍、肺动脉高压和系统性硬化(ssc；也称为硬皮病)(nanthakumar,d.b.等人,2015；meng,x.-m.等人,2016)。

2、tgfβ信号传导的持续激活在纤维化的发病机制中起核心作用(varga,j.和whitfield,m.l.,2009)。tgfβ经典信号传导刺激成纤维细胞向肌成纤维细胞转化(desmouliere,a.等人,1993；midgley,a.c.等人,2013)，并在胶原和细胞外基质(ecm)的其他组分的产生和沉积(prud’homme,g.j.,2007)以及其他参与纤维化的介质的诱导(todd,n.w.等人,2015)中起关键作用。在患有纤维化疾病(如硬皮病和特发性肺纤维化(pulmonary fibrosis，ipf))的患者中，tgfβ增加皮肤和/或肺中的胶原沉积，并刺激皮肤中的成纤维细胞激活为肌成纤维细胞(prud’homme,g.j.,2007；lafyatis,r.,2014；kissin,e.y.等人,2006)。此外，非经典tgfβ途径也有助于维持纤维化表型(leask,a.,2008)。因此，tgfβ信号传导途径已成为纤维化治疗干预的最明显的靶标(varga,j.和whitfield,m.l.,2009；hunzelmann,n.和krieg,t.,2010；varga,j.和pasche,b.,2008)。

3、还认为tgfβ是肿瘤进展的关键调节物，并被大多数肿瘤类型过表达。其有利于肿瘤发生，部分地是通过在上皮肿瘤细胞中诱导上皮-间充质转化(emt)，导致侵袭性转移。tgfβ还通过在肿瘤微环境中充当有力的免疫应答遏制剂而促进肿瘤发生。事实上，tgfβ被认为是肿瘤微环境中存在的最强效的免疫遏制因子之一。tgfβ干扰许多免疫细胞类型的分化、增殖和存活，这些免疫细胞类型包括树突状细胞、巨噬细胞、nk细胞、嗜中性粒细胞、b细胞和t细胞；因此，它调节先天免疫和适应性免疫两者。有证据强调了tgfβ在肿瘤微环境中的重要性，该证据显示，在几种肿瘤类型(包括黑素瘤、肺癌、胰腺癌、结直肠癌、肝癌和乳腺癌)中tgfβ配体水平升高与疾病的进展和复发、转移、以及死亡相关。因此，已经投入了大量的努力来设计涉及tgfβ抑制的抗肿瘤治疗性方法。这些方法包括使用基于结合或“捕获(trap)”tgfβ配体的tgfβ受体胞外域的多肽融合物(参见例如wo 01/83525、wo 2005/028517、wo 2008/113185、wo 2008/157367、wo 2010/0031168、wo 2010/099219、wo 2012/071649、wo 2012/142515、wo 2013/000234、wo 2018/158727、us 5693607、us 2005/0203022、us 2007/0244042、us 8318135、us 8658135、us 8815247、us 2015/0225483、和us2015/0056199)。

4、开发抑制tgfβ功能的治疗剂的一种方法是使用抗体或可溶性诱饵受体(也称为基于受体胞外域(ecd)的配体陷阱)结合并隔绝配体，从而阻断配体接近其细胞表面受体。通常，基于受体ecd的陷阱是一类能够选择性地隔绝配体并且可以使用蛋白质工程方法进行优化的治疗剂。

5、此前，已证明具有连接为双联体的两个tgfβ受体ii型(tgfβrii)胞外域的单链二价tgfβ陷阱可以中和tgfβ配体超家族的成员(wo 2008/113185、wo 2010031168)。在那些情况下，通过使用tgfβrii胞外域的结构化配体结合结构域侧翼的固有无序区(idr)共价连接两个tgfβrii胞外域来实现二价性。进一步证明，当将这样的二价双联体串联连接至多聚化结构域(如n-末端或c-末端的fc组分)时，效力增加(wo 2017/037634、wo 2018/158727)。

6、迄今为止，大多数中和tgfβ的治疗性方法都聚焦在tgfβ1同种型上，尤其是在免疫肿瘤学中。这是因为tgfβ1是在免疫系统中(li,m.o.等人,2006)以及在许多类型的人类肿瘤中(martin,c.j.等人,2020)主要表达的同种型。尽管预期靶点通常是tgfβ1同种型，但大多数开发中的治疗剂通常以不同的效力抑制其他tgfβ同种型。例如，非苏木单抗(fresolimumab)是一种单克隆抗体，其为所有三种tgfβ同种型的泛抑制剂。尽管它中和所有同种型，但它对tgfβ1同种型的抑制比对tgfβ3同种型的抑制强约7倍，并且比对tgfβ2同种型的抑制强约14倍(grutter,c.等人,2008)。已在临床试验中在癌症患者中(morris,j.c.等人,2014；lacouture,m.e.和morris,j.c.,2015)以及在肾小球硬化症患者中(vincenti,f.等人,2017)测试了该单克隆抗体。

7、tgfβ2同种型与心脏稳态(roberts,a.b.等人,1992；herbertz,s.等人,2015)、肿瘤休眠控制(bragado,p.等人,2013)和造血的正向调节(langer,j.c.等人,2004)有关，这表明该同种型应该免受中和，因为它起有益的作用。

8、因此，提供基于tgfβrii-ecd的陷阱是有用的，这些陷阱具有定制的同种型特异性以最大化在特定的疾病适应证中的治疗性疗效，同时最小化不良反应。特别地，提供中和tgfβ3的效力与中和tgfβ1的效力相似的陷阱可以是有用的。

技术实现思路

1、本文提供了具有用于中和tgfβ配体的定制同种型特异性谱的基于tgfβ受体胞外域的四价陷阱及其在治疗与tgfβ相关的疾病和病症中的使用方法。本文提供的四价tgfβ结合剂包含经由多聚化结构域组装的两个多肽，每个多肽具有连接为双联体的两个tgfβii受体(tgfβr)配体结合结构域。本文提供的tgfβ结合剂已被设计用于定制tgfβ同种型特异性，以最大化在特别的疾病适应证中的治疗性疗效，同时最小化不良反应。

2、本技术至少部分地基于发明人的认识，即具有区别于开发中的其他已知药剂的同种型特异性的tgfβ配体陷阱可有利于治疗某些tgfβ相关疾病和病症。最近的报告已表明，tgfβ3同种型在某些tgfβ相关病症(如纤维化)中起重要作用。例如，最近的一份报告通过证明mir-29对tgfβ3的特异性下调抵消肾纤维化(renal fibrosis)，将tgfβ3鉴定为肾脏纤维化(kidney fibrosis)的关键治疗性靶标(wang,h.等人,2019)。最近关于免疫细胞产生tgfβ3的报告也表明tgfβ3同种型在免疫中的重要作用(komai,i.d.和okamura,t.,2018)。关于ssc，一项在非裔美国人患者中进行的全基因组关联研究将tgfβ3鉴定为新的ssc易感性基因(gourh,p.等人,2017)。

3、关于tgfβ2，该同种型与心脏稳态(roberts,a.b.等人,1992；herbertz,s.等人,2015)、肿瘤休眠控制(bragado,p.等人,2013)和造血的正向调节(langer,j.c.等人,2004)有关，这已表明避免中和该同种型可以是期望的。

4、总之，这样的发现表明，在相似程度上中和tgfβ1和tgfβ3对于治疗某些障碍(特别是涉及tgfβ3的那些)可以是有益的。在一些情况下，实现对tgfβ1和tgfβ3的大致相等的抑制可以用于确保tgfβ1和tgfβ3都能被有效中和，这可以预防当这些同种型中的一种被优先中和时可发生的补偿机制，并且/或者可最大化疗效。还期望相似地抑制tgfβ1和tgfβ3而不中和tgfβ2信号传导，因为避免此同种型的中和可以是有益的。

5、在广泛的方面，本文提供了可用于抑制转化生长因子β(tgfβ)同种型的作用的新颖的多肽构建体。根据本披露的多肽包含tgfβ结合区和多聚化结构域，其中该多聚化结构域的n-末端连接至该tgfβ结合区的c-末端。tgfβ结合区包含通过第一接头连接在一起并通过第二接头连接至多聚化结构域的两个tgfβ受体配体结合结构域(tgfβr-lbd)。在另一广泛的方面，提供了包含两条这样的多肽链的tgfβ结合剂，这两条多肽链经由多聚化结构域组装，从而形成具有针对tgfβ配体(tgfβ1、tgfβ2和tgfβ3)的特定抑制特异性的四价分子。

6、不希望受理论的限制，本发明至少部分地基于这样的发现，即修饰这样的tgfβ配体陷阱中的一个或多个接头(例如，将两个tgfβr-lbd连接在一起的接头和/或将tgfβr-lbd连接至多聚化结构域的接头)区别性地影响结合剂对不同tgfβ同种型的抑制效力。本文表明，在一些情况下，修饰一个或两个接头可以使tgfβ3:tgfβ1ic50比率降低或相等(表明对两种同种型的抑制效力相似或相等)，而不增加不希望的tgfβ2抑制，并且不显著降低总体效力(例如，ic50保持在低皮摩尔范围内)。

7、本文提供的tgfβ结合剂通常包含经由多聚化结构域缔合在一起的第一多肽和第二多肽，每个多肽在n-末端至c-末端定向上包含：n-末端区域、第一tgfβ受体配体结合结构域(tgfβr-lbd)、第一接头、第二tgfβr-lbd、第二接头、和多聚化结构域。tgfβ结合剂的一个实施例示意性地显示在图1(其显示了tgfβ结合剂是同二聚体(即第一多肽和第二多肽是相同的)的实施例)中。第一多肽和第二多肽可以通过它们各自的多聚化结构域例如通过二硫键(半胱氨酸桥)、卷曲螺旋相互作用等彼此结合。

8、已将本技术的tgfβ结合剂设计为使tgfβ3:tgfβ1ic50比率降低或相等。也就是说，与其他已知的tgfβ陷阱相比，它们已被设计为显示出降低的tgfβ1优先抑制。因此，本文提供的tgfβ结合剂的特征在于其对同种型抑制的特异性谱：特别地，对tgfβ1和tgfβ3同种型的相对抑制效力(本文表示为tgfβ3:tgfβ1ic50比率)不大于约2.5:1，并且抑制tgfβ3同种型和tgfβ1同种型两者的活性效力远大于抑制tgfβ2同种型的效力(例如，tgfβ3和tgfβ1在皮摩尔范围内，并且tgfβ2在纳摩尔范围内)。

9、另外，在一些实施例中，除了定制的同种型特异性，本技术的多肽和tgfβ结合剂还可以提供某些优点。例如并且不限于这些多肽和tgfβ结合剂可以提供例如由于糖基化减少、均匀性增加、表达容易等导致的改善的可制造性。因此，在一些实施例中，相对于先前的tgfβ结合剂，本技术的多肽和tgfβ结合剂提供以下优点的一个或多个：改善特定疾病适应证(例如tgfβ3介导的病症)的治疗性效果；减少糖基化；增加均匀性；改善可制造性；以及增加产量。

10、在本技术的多肽和tgfβ结合剂的一些实施例中，设计第一接头和第二接头以提供希望的相对同种型特异性抑制。例如，在一些实施例中，选择第一接头和第二接头的长度，使得tgfβ3:tgfβ1ic50比率不大于约2.5:1，并且抑制tgfβ3同种型和tgfβ1同种型活性两者的效力远大于抑制tgfβ2同种型活性的效力(例如，tgfβ3和tgfβ1在皮摩尔范围内，并且tgfβ2在纳摩尔范围内)。

11、在本技术的多肽和tgfβ结合剂的一些实施例中，选择第一接头和第二接头使得tgfβ3:tgfβ1ic50比率为约2.5:1或更低。在一些实施例中，tgfβ3:tgfβ1的ic50比率小于约2.5:1、约2.3:1或更低、约2:1或更低、约1.8:1或更低、约1.5:1或更低、约1.3:1或更低、约1.1:1或更低、约1:1或更低、约0.8:1或更低、或约0.5:1或更低。在一些实施例中，tgfβ结合剂的tgfβ3:tgfβ1ic50比率为约1:1至约2:1，或为约1.1:1、1.2:1、1.3:1、1.4:1、1.5:1、1.6:1、1.7:1、1.8:1、或1.9:1。在一些实施例中，tgfβ结合剂的tgfβ3:tgfβ1ic50比率为约1:1至约1.5:1或约1.4:1至约1.6:1，或约1.4:1、1.5:1、或1.6:1。在一些这样的实施例中，tgfβ结合剂抑制tgfβ1同种型活性和tgfβ3同种型活性两者的效力比抑制tgfβ2同种型活性的效力高至少20倍、100倍、200倍、300倍、400倍、500倍、600倍、700倍、800倍、900倍、或1000倍。

12、在一些实施例中，第一接头为33个氨基酸或更短。在实施例中，第一接头的长度为约10至33个氨基酸。在实施例中，第一接头的长度可为约15至33个氨基酸，或长度为约18至约30个氨基酸。在实施例中，第一接头的长度为16、18、30、或32个氨基酸。在特定的实施例中，第一接头的长度为16个氨基酸。在另一特定的实施例中，第一接头的长度为18个氨基酸。在另一特定的实施例中，第一接头的长度为30个氨基酸。在另一特定的实施例中，第一接头的长度为32个氨基酸。

13、在一些实施例中，第二接头为10个氨基酸或更长。在实施例中，第二接头的长度为约10至约35个氨基酸。在实施例中，第二接头的长度可为约10至约34个或约15至约34个氨基酸。在实施例中，第二接头的长度为16、30、32、或34个氨基酸。在特定的实施例中，第二接头的长度为30个氨基酸。在另一特定的实施例中，第二接头的长度为16个氨基酸。在另一特定的实施例中，第二接头的长度为32个氨基酸。在另一特定的实施例中，第二接头的长度为34个氨基酸。

14、在实施例中，第一接头为18个氨基酸，并且第二接头为16个氨基酸。在另一实施例中，第一接头为18个氨基酸，并且第二接头为30个氨基酸。在另一实施例中，第一接头为18个氨基酸，并且第二接头为10个氨基酸。在另一实施例中，第一接头为18个氨基酸，并且第二接头为32个氨基酸。在另一实施例中，第一接头为18个氨基酸，并且第二接头为34个氨基酸。在另一实施例中，第一接头为16个氨基酸，并且第二接头为18个氨基酸。在另一实施例中，第一接头为16个氨基酸，并且第二接头为16个氨基酸。在另一实施例中，第一接头为16个氨基酸，并且第二接头为30个氨基酸。在另一实施例中，第一接头为16个氨基酸，并且第二接头为32个氨基酸。在另一实施例中，第一接头为26个氨基酸，并且第二接头为26个氨基酸。在另一实施例中，第一接头为32个氨基酸，并且第二接头为32个氨基酸。在另一实施例中，第一接头为32个氨基酸，并且第二接头为34个氨基酸。应当理解，只要实现希望的同种型特异性抑制，许多其他排列是可能的。

15、在一些实施例中，第一接头和第二接头中的一个或多个包含本文披露的idr接头、idr接头变体、杂交接头、杂交接头变体、截短接头、截短接头变体或延伸接头，或由其组成。例如，第一接头和第二接头中的一个或多个可独立地包含seq id no:4或8-26的任一个中所示的氨基酸序列或与其具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的序列，或由其组成。在一些实施例中，第一接头包含seqid no:8、9、10、11、12、13、14、16、21、22、23和26的任一个中所示的氨基酸序列或与其具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的序列，或由其组成。在一些实施例中，第二接头包含seq id no:4、9、11、15、17、18、19、20、22、23、24、25和26的任一个中所示的氨基酸序列或与其具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的序列，或由其组成。

16、在代表性实施例中，第一接头包含seq id no:12所示的氨基酸序列或由其组成，并且/或者第二接头包含seq id no:11所示的氨基酸序列或由其组成。在另一代表性实施例中，第一接头包含seq id no:8所示的氨基酸序列或由其组成，并且/或者第二接头包含seq id no:9所示的氨基酸序列或由其组成。应当理解，只要实现希望的同种型特异性抑制，也涵盖使用本文提供的接头的组合的其他实施例。

17、在本技术的多肽和tgfβ结合剂的一些实施例中，n-末端区域包含idr接头、idr接头变体、杂交接头、杂交接头变体、截短接头、截短接头变体或延伸接头，或由其组成。例如，n-末端区域可以包含seq id no:3所示的氨基酸序列或与其具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的序列，或由其组成。

18、在本技术的多肽和tgfβ结合剂的一些实施例中，第一tgfβr-lbd和/或第二tgfβr-lbd包含seq id no:2所示的氨基酸序列或与其具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的序列，或由其组成。在一些实施例中，第一tgfβr-lbd和第二tgfβr-lbd相同或基本上相同。在其他实施例中，第一tgfβr-lbd和第二tgfβr-lbd可以具有不同的氨基酸序列。

19、在本技术的多肽和tgfβ结合剂的一些实施例中，多聚化结构域允许根据本披露的两个多肽以非共价方式(例如，通过卷曲螺旋相互作用等)二聚化。

20、在其他实施例中，多聚化结构域允许根据本披露的两个多肽以共价方式(例如，通过二硫桥接等)二聚化。

21、在一些实施例中，多聚化结构域包含抗体的一个或多个恒定区，例如抗体重链的第二恒定结构域(ch2)和/或第三恒定结构域(ch3)、或抗体重链的fc区。抗体可以是例如并且不限于igg抗体，如igg1、igg2、igg3或igg4抗体。在特定的实施例中，抗体是人抗体，例如，多聚化结构域包含人igg1、igg2、igg3或igg4的重链恒定区。在一些实施例中，多聚化结构域与人igg1、igg2、igg3或igg4恒定区具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的序列同一性。在特定的实施例中，多聚化结构域包含人igg1抗体的fc区或由其组成。在另一特定的实施例中，多聚化结构域包含人igg4抗体的fc区或由其组成。

22、在一些实施例中，多聚化结构域包含一个或多个用于使第一多肽构建体与第二多肽构建体交联的半胱氨酸残基。例如，多聚化结构域可以包括至少两个半胱氨酸残基，这些半胱氨酸残基用于在两个多肽构建体之间形成二硫桥，从而形成二聚体。

23、在一些实施例中，多聚化结构域经工程化以减少多肽构建体的二聚体或多聚体的聚集或调节其稳定性。例如，与天然存在的fc序列相比，fc区可以含有一个或多个减少tgfβ结合剂的聚集并且/或者增加其稳定性的氨基酸取代。在一些实施例中，选择多聚化结构域以提供一种或多种效应子功能，如抗体依赖性细胞毒性(adcc)、补体激活(补体依赖性细胞毒性或cdc)、调理作用等。

24、在一些实施例中，多聚化结构域包含seq id no:49-80的任一个中所示的氨基酸序列或与其具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的序列，或由其组成。在特定的实施例中，多聚化结构域包含seq id no:49所示的氨基酸序列或与其具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的序列，或由其组成。在另一特定的实施例中，多聚化结构域包含seq id no:50所示的氨基酸序列或与其具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的序列，或由其组成。

25、在本技术的多肽和tgfβ结合剂的一些实施例中，tgfβ结合区(包含n-末端结构域、两个lbd和两个接头)包含seq id no:27-48的任一个中所示的序列或与其具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的序列，或由其组成。在特定的实施例中，tgfβ结合区包含seq id no:27所示的氨基酸序列或由其组成。在另一特定的实施例中，tgfβ结合区包含seq id no:29所示的氨基酸序列或由其组成。在另一特定的实施例中，tgfβ结合区包含seq id no:32所示的氨基酸序列或由其组成。在另一特定的实施例中，tgfβ结合区包含seq id no:41所示的氨基酸序列或由其组成。

26、在另一特定的实施例中，tgfβ结合区包含seq id no:40所示的氨基酸序列或由其组成。

27、在本技术的多肽和tgfβ结合剂的一些实施例中，多肽构建体包含seq id no:81至103和105的任一个中所示的氨基酸序列或与其具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的序列，或由其组成。在特定的实施例中，多肽构建体包含seq id no:81所示的氨基酸序列或由其组成。在另一特定的实施例中，多肽构建体包含seq id no:84所示的氨基酸序列或由其组成。在另一特定的实施例中，多肽构建体包含seq id no:87所示的氨基酸序列或由其组成。在另一特定的实施例中，多肽构建体包含seq id no:96所示的氨基酸序列或由其组成。

28、在另一特定的实施例中，多肽构建体包含seq id no:95所示的氨基酸序列或与其具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的序列，或由其组成。在另一特定的实施例中，多肽构建体包含seq id no:95所示的氨基酸序列或由其组成。

29、在一些实施例中，本文提供的多肽构建体是n-末端至c-末端包含以下的多肽构建体：(i)由seq id no:40的氨基酸序列组成的氨基酸序列；和(ii)人igg1的fc区。

30、在本技术的一些实施例中，tgfβ结合剂是异二聚体，即第一多肽与第二多肽不同。在这样的实施例中，第一多肽和第二多肽可以差异一个或多个区域或结构域，例如差异第一接头、第二接头、lbd、多聚化结构域等的序列及其组合。因此，以下中的每一个在两个多肽中可以独立地是相同的或不同的：n-末端区域、第一接头、第二接头、第一lbd、第二lbd、和多聚化结构域。只要提供希望的同种型特异性抑制，许多组合是可能的。

31、在tgfβ结合剂的一些实施例中，第一多肽构建体和第二多肽构建体包含seq idno:95所示的序列或与其具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的序列，或由其组成。在tgfβ结合剂的一些实施例中，第一多肽构建体和第二多肽构建体包含seq id no:95所示的序列或由其组成。

32、在tgfβ结合剂的一些实施例中，不同的tgfβ结合区包含seq id no:95所示的氨基酸序列或与其具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的序列，或由其组成。

33、在tgfβ结合剂的一些实施例中，tgfβ结合剂包含：

34、第一多肽构建体，该第一多肽构建体从n-末端至c-末端包含：(i)由seq id no:40的氨基酸序列组成的氨基酸序列；和(ii)人igg1的第一fc区，以及

35、第二多肽构建体，该第二多肽构建体从n-末端至c-末端包含：(i)由seq id no:40的氨基酸序列组成的氨基酸序列；和(ii)人igg1的第二fc区；

36、其中该第一多肽构建体和该第二多肽构建体通过人igg1的第一fc区和第二fc区连接在一起。

37、在一些实施例中，tgfβ结合剂针对tgfβ1同种型活性和tgfβ3同种型活性两者的抑制性效力比针对tgfβ2同种型活性的抑制性效力高；并且其中tgfβ结合剂针对与tgfβ1同种型活性相比的tgfβ3同种型活性的相对抑制性效力(针对tgfβ3tgfβ1的ic50比率)为约2.5:1或更低。

38、在一些实施例中，本文提供的tgfβ结合剂是本文提供的多肽构建体的同二聚体。

39、在可替代的实施例中，tgfβ结合剂是同二聚体的，即第一多肽和第二多肽相同或基本上相同。

40、在一些实施例中，多肽或tgfβ结合剂可以与靶向剂、治疗性部分、可检测部分和/或诊断部分缀合。

41、在另一广泛的方面，提供了编码本技术的多肽和tgfβ结合剂的核酸。还提供了包含这样的核酸和/或用于表达这些多肽和tgfβ结合剂的载体和质粒。例如，在实施例中，提供了具有seq id no:106-109的任一个中所示的序列的核酸以及包含这些核酸的载体和质粒。在另一实施例中，提供了一种核酸，该核酸与seq id no:106-109具有至少80％的序列同一性、至少85％的序列同一性、至少90％的序列同一性、至少95％的序列同一性、至少98％的序列同一性或至少99％的序列同一性，或能够在高严格性条件下与其杂交。还提供了表达本技术的多肽和tgfβ结合剂的细胞。

42、在另外的方面，提供了制造本技术的多肽和tgfβ结合剂的方法，这些方法包括在细胞中表达本文提供的一种或多种多肽，随后是其分离和/或纯化。在一些实施例中，多肽构建体和tgfβ结合剂以可由细胞分泌的形式(例如，使用n-末端处的信号肽)表达，从而允许从培养基回收多肽或tgfβ结合剂。

43、在另一广泛的方面，提供了药物组合物，这些药物组合物包含根据本披露的多肽构建体或tgfβ结合剂以及药学上可接受的载剂、稀释剂或赋形剂。在一些实施例中，药物组合物经配制用于通过注射或输注施用，例如用于静脉内、皮下、腹膜内、或肌内施用。在一些实施例中，以单位剂型提供药物组合物。

44、在又另一广泛的方面，提供了预防或治疗tgfβ相关疾病或病症的方法，这些方法包括向受试者施用治疗有效量的本技术的多肽、tgfβ结合剂或药物组合物，从而预防或治疗该tgfβ相关疾病或病症。

45、根据本披露可预防或治疗的tgfβ相关疾病或病症的实例包括例如并且不限于：纤维化(例如，纤维化疾病、纤维化瘢痕形成、纤维增生性障碍)；癌症(例如，恶性肿瘤、实体瘤、转移瘤)；和骨髓衰竭(例如，shwachman-bodian-diamond综合征、范科尼贫血)。在一些实施例中，本文所述的多肽或tgfβ结合剂用于治疗或预防纤维化，包括例如并且不限于组织和/或器官的纤维化疾病、以及纤维化瘢痕形成，例如肺纤维化(例如，特发性肺纤维化)、肾纤维化、肝纤维化(例如，肝硬化)、系统性硬化、硬皮病、皮肤纤维化、心脏纤维化、骨髓纤维化(myelofibrosis)等。

46、在一些实施例中，提供了预防或治疗由tgfβ1和/或tgfβ3介导的疾病或病症的方法，这些方法包括向受试者施用治疗有效量的本技术的多肽、tgfβ结合剂或药物组合物，从而治疗该由tgfβ1和/或tgfβ3介导的疾病或病症。在实施例中，提供了一种在有需要的受试者中预防或治疗由tgfβ3介导的疾病或病症的方法，该方法包括向该受试者施用治疗有效量的本技术的多肽、tgfβ结合剂或药物组合物，从而预防或治疗该由tgfβ3介导的疾病或病症。

47、在一些实施例中，提供了在有需要的受试者中预防或治疗纤维化的方法，这些方法包括向该受试者施用治疗有效量的本技术的多肽、tgfβ结合剂或药物组合物，从而预防或治疗纤维化。

48、在另外的广泛的方面，提供了用于在有需要的受试者中治疗tgfβ相关疾病或病症的试剂盒和包装，这些试剂盒和包装包含根据本披露的多肽、tgfβ结合剂或药物组合物；任选地，一种或多种另外的组分(如酸、碱、缓冲剂、无机盐、溶剂、抗氧化剂、防腐剂、或金属螯合剂)和/或用于其施用的工具(如注射器、针等)。还可包括施用或使用说明。

49、在又另一方面，本文提供了制造本文提供的多肽构建体或tgfβ结合剂的方法，这些方法包括在适用于蛋白质表达的条件下培养如本文提供的宿主细胞；并且收获多肽构建体或tgfβ结合剂。

50、在又另一方面，本文提供了通过本文提供的制造方法产生的多肽构建体或tgfβ结合剂。

51、通过下文给出的非限制性详细描述，本披露的另外的范围、适用性和优点将变得显而易见。然而，应当理解，虽然参考附图指示了本披露的示例性实施例，但是该详细描述仅通过举例给出。