工程化乙型肝炎病毒中和抗体和其用途的制作方法

背景技术：

1、乙型肝炎病毒导致潜在危及生命的急性和慢性肝感染。急性乙型肝炎的特征是有或没有症状、有发生暴发性肝炎的风险的病毒血症(liang tj,block tm,mcmahon bj,ghany mg,urban s,guo jt,locarnini s,zoulim f,chang km,lok as.乙型肝炎目前和未来疗法：从发现到治愈(present and future therapies of hepatitis b:fromdiscovery to cure)，《肝病学(hepatology)》2015年8月3日.doi:10.1002/hep.28025.[电子版先于印刷版])。尽管自1982年以来就有可用的针对乙型肝炎的有效疫苗，但who报道，仍有2.4亿人慢性感染乙型肝炎，并且每年有超过780,000人死于乙型肝炎并发症。大约三分之一的慢性乙型肝炎(chb)患者患有肝硬化、肝功能衰竭和肝细胞癌，每年导致600,000人死亡(liang tj,block tm,mcmahon bj,ghany mg,urban s,guo jt,locarnini s,zoulim f,chang km,lok as.乙型肝炎目前和未来疗法：从发现到治愈,《肝病学》2015年8月3日.doi:10.1002/hep.28025.[电子版先于印刷版])。

2、对于感染hbv的患者，可能由于共同感染或重复感染hdv而出现严重并发症。根据who，丁型肝炎感染全世界约1500万人。hdv被视为亚病毒卫星，因为其仅可在存在hbv的情况下传播。hdv为已知的最小动物病毒(40nm)之一，由此其基因组仅为1.6kb并且编码s和lhdag。hdv基因组复制所需的所有其它蛋白质(包括rna聚合酶)由宿主细胞提供，并且hdv包膜由hbv提供。当引入到受纳细胞中时，hdv rna基因组复制hdv编码的蛋白质的多个拷贝并且与其缔合，以组装核糖核蛋白(rnp)复合物。rnp由hbv包膜蛋白从细胞中导出，所述hbv包膜蛋白能够组装脂蛋白囊泡，所述脂蛋白囊泡在分泌之前出芽到前高尔基体隔室的内腔中。此外，hbv包膜蛋白还提供将hdv靶向到未感染细胞的机制，由此确保hdv传播。

3、由hdv引起的并发症包括在急性感染中发生肝衰竭的可能性更大并迅速发展为肝硬化，在慢性感染中患肝癌的机会增加。结合乙型肝炎病毒，丁型肝炎在所有肝炎感染中的死亡率最高，为20％(fattovich g，giustina g,christensen e,pantalena m,zagni i,realdi g,schalm sw.丁型肝炎病毒感染对代偿期乙型肝硬化发病率和死亡率的影响(influence of hepatitis delta virus infection on morbidity and mortality incompensated cirrhosis type b)《肠道(gut)》.2000年3月；46(3):420-6)。慢性hdv感染的唯一批准疗法为干扰素-α。然而，用干扰素-α治疗hdv相对低效且耐受不良。用干扰素-α治疗导致四分之一的患者在治疗后六个月产生持续的病毒学应答。此外，核苷(酸)类似物(na)已在丁型肝炎中进行广泛测试，但其似乎无效。使用na与干扰素的组合治疗也被证明是令人失望的(zaigham abbas,minaam abbas,丁型肝炎管理：需要新型治疗选项(management of hepatitis delta:need for novel therapeutic options)《世界胃肠病学杂志(world j gastroenterol.)》2015年8月28日；21(32):9461-9465)。

4、因此，需要新的治疗选择，如针对乙型肝炎和/或丁型肝炎感染的具有中和活性的新疗法。

技术实现思路

技术特征：

1.一种抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包括：

2.根据权利要求1所述的抗体或抗原结合片段，其包括：

3.一种抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包括：

4.根据权利要求3所述的抗体或抗原结合片段，其中所述cdrh1、cdrh2、cdrh3、cdrl1、cdrl2和cdrl3氨基酸序列如以下所示：

5.一种抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包括重链可变区(vh)和轻链可变区(vl)，其中所述vh和所述vl分别包括cdrh1、cdrh2、cdrh3和cdrl1、cdrl2、cdrl3，如以下所示：hbc34-v40；hbc34-v36；hbc34-v37；hbc34-v38；hbc34-v39；hbc34-v41；hbc34-v42；hbc34-v43；hbc34-v44；hbc34-v45；hbc34-v46；hbc34-v47；hbc34-v48；hbc34-v49；或hbc34-v50，

6.一种抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包括重链可变区(vh)和轻链可变区(vl)，其中所述vh和所述vl分别包括如以下所示的cdrh1、cdrh2、cdrh3和cdrl1、cdrl2、cdrl3：hbc34-v40；hbc34-v36；hbc34-v37；hbc34-v38；hbc34-v39；hbc34-v41；hbc34-v42；hbc34-v43；hbc34-v44；hbc34-v45；hbc34-v46；hbc34-v47；hbc34-v48；hbc34-v49；或hbc34-v50，

7.根据权利要求1至6中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其中：

8.根据权利要求1至7中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其中：

9.根据权利要求1至8中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其中所述vh和所述vl包括与以下中所示的氨基酸序列具有至少90％(即，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或其间任何非整数值)同一性的氨基酸序列或由其组成：(i)分别为seq idno:38和62；(ii)分别为seq id no:38和59；(iii)分别为seq id no:38和60；(iv)分别为seq id no:38和61；(v)分别为seq id no:38和58；(vi)分别为seq id no:38和63；(vii)分别为seq id no:38和64；(viii)分别为seq id no:38和65；(ix)分别为seq id no:38和66；(x)分别为seq id no:38和71；或(xi)分别为seq id no:38和72。

10.一种抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包括重链可变区(vh)和轻链可变区(vl)，所述vh包括seq id no:38或39的氨基酸序列或由其组成，所述vl包括seqid no:62、57-61和63-72中的任一者的变体，其中所述变体包括以下突变中的任何一个或多个突变：r60a；r60n；r60k；s64a；和i74a，并且其中任选地，所述vl变体不包括分别相对于seq id no:62、57-61和63-72的任何另外的突变。

11.一种抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包括重链可变区(vh)和轻链可变区(vl)，所述vh包括seq id no:38或39的氨基酸序列或由其组成，所述vl包括seqid no:62、57-61和63-72中的任一者的变体，其中所述变体包括在q78、d81或两者处的取代突变(例如，保守氨基酸取代，或种系编码的氨基酸的突变)，并且其中任选地，所述vl变体不包括分别相对于seq id no:62、57-61和63-72的任何另外的突变。

12.根据权利要求1至9中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其中：所述vh包括seq idno:38或39中所示的氨基酸序列或由其组成；和/或所述vl包括seq id no:62、58-61、63-66、69、71或72中的任一者中所示的氨基酸序列或由其组成。

13.根据权利要求1至9和12中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其中所述vh和所述vl包括以下中所示的氨基酸序列或由其组成：

14.一种抗体或抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段包括重链可变区(vh)和轻链可变区(vl)，其中所述vh和所述vl包括以下中所示的氨基酸序列或由其组成：

15.根据权利要求1至14中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其能够中和由丁型肝炎病毒(hdv)引起的感染。

16.根据权利要求1至15中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其中在包括多个所述抗体或抗原结合片段的样品中，当所述样品已在约40℃下温育持续约120小时至约168小时时，所述多个中的少于12％、11％或更少、10％或更少、9％或更少、8％或更少、7％或更少、6％或更少、5％或更少、4％或更少、3％或更少或2％或更少是包含在二聚体中，其中任选地，通过绝对尺寸排阻色谱法确定二聚体的存在。

17.根据权利要求1至16中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其中与温育多个参考抗体或抗原结合片段相比，温育多个所述抗体或抗原结合片段使二聚体形成减少，

18.根据权利要求1至17中任一项所述的抗体或抗原结合片段，与参考抗体相比，在以下条件下所述抗体或抗原结合片段形成更低量的二聚体，和/或以减少的频率和/或以样品或组合物中总抗体或抗原结合片段分子的更低百分比形成二聚体，

19.根据权利要求1至18中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其中在组合物中包含在二聚体中的抗体或抗原结合片段分子的百分比分别是在组合物中包含在二聚体中的参考抗体分子的百分比的少于4/5、少于3/4、少于1/2、少于1/3、少于1/4、少于1/5、少于1/6、少于1/7、少于1/8、少于1/9或少于1/10。

20.根据权利要求1至19中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其中相较于用编码参考抗体或抗原结合片段的多核苷酸转染的参考宿主细胞，用编码所述抗体或抗原结合片段的多核苷酸转染的宿主细胞分别提供了1.5倍或更多倍、2倍或更多倍、3倍或更多倍或4倍或更多倍的抗体或抗原结合片段的量，其中所述参考抗体或抗原结合片段包括分别如seq idno:34、35、37、41、44和55中所示的氨基酸序列的cdrh1、cdrh2、cdrh3、cdrl1、cdrl2和cdrl3氨基酸序列，并且任选地包括seq id no:38中所示的vh氨基酸序列和seq id no:57中所示的vl氨基酸序列。

21.根据权利要求1至20中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其中与在参考转染细胞中产生的参考抗体或抗原结合片段相比，所述抗体或其抗原结合片段以更高的滴度在转染细胞中产生，其中所述参考抗体或抗原结合片段包括分别如seq id no:34、35、37、41、44和55中所示的氨基酸序列的cdrh1、cdrh2、cdrh3、cdrl1、cdrl2和cdrl3氨基酸序列，并且任选地包括seq id no:38中所示的vh氨基酸序列和seq id no:57中所示的vl氨基酸序列。

22.根据权利要求1至21中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段以一定滴度在转染细胞中产生，所述滴度是产生参考抗体或抗原结合片段的滴度的至少1.5倍、至少2倍、至少3倍或至少4倍，其中所述参考抗体或抗原结合片段包括分别如seq id no:34、35、37、41、44和55中所示的氨基酸序列的cdrh1、cdrh2、cdrh3、cdrl1、cdrl2和cdrl3氨基酸序列，并且任选地包括seq id no:38中所示的vh氨基酸序列和seq id no:57中所示的vl氨基酸序列。

23.根据权利要求1至22中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段能够以约3.2或更小、小于3.0、小于2.5、小于2.0、小于1.5或小于1.0的ec50(ng/ml)与hbsag(adw)结合。

24.根据权利要求1至23中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段能够以小于3.5、小于3.4、小于3.3、小于3.2、小于3.1、小于3.0、小于2.9、小于2.8、小于2.7、小于2.6、小于2.5、小于2.4、小于2.3、小于2.1、小于2.0、小于1.9、小于1.8、小于1.7、小于1.6、小于1.5、小于1.4、小于1.3、小于1.2、小于1.1或小于1.0的ec50(ng/ml)与hbsag(例如，亚型adw的hbsag)结合。

25.根据权利要求1至24中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段能够以介于0.9与2.0之间、或介于0.9与1.9之间、或介于0.9与1.8之间、或介于0.9与1.7之间、或介于0.9与1.6之间、或介于0.9与1.5之间、或介于0.9与1.4之间、或介于0.9与1.3之间、或介于0.9与1.2之间、或介于0.9与1.1之间、或介于0.9与1.0之间、或介于1.0与2.0之间的ec50(ng/ml)与hbsag(例如，亚型adw的hbsag)结合。

26.根据权利要求1至25中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段能够以2.0或更小的ec50(ng/ml)与hbsag(adw)结合。

27.根据权利要求1至26中任一项所述的抗体或抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段具有小于20ng/ml，优选地15ng/ml或更小，更优选地10ng/ml或更小的乙型肝炎病毒感染中和ec50。

28.根据权利要求1至27中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段能够以18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8或7ng/ml的感染中和ec50中和乙型肝炎病毒感染。

29.根据权利要求1至28中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段能够以比参考抗体或抗原结合片段的感染中和ec50更低的感染中和ec50来中和乙型肝炎病毒感染，所述参考抗体或抗原结合片段包括分别如seq id no:34、35、37、41、44和55中所示的氨基酸序列的cdrh1、cdrh2、cdrh3、cdrl1、cdrl2和cdrl3氨基酸序列，并且任选地包括seq id no:38中所示的vh氨基酸序列和seq id no:57中所示的vl氨基酸序列。

30.根据权利要求1至29中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包括人抗体、单克隆抗体、纯化抗体、单链抗体、fab、fab'、f(ab')2、fv或scfv。

31.根据权利要求1至30中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段是多特异性抗体或抗原结合片段。

32.根据权利要求1至31中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段是双特异性抗体或抗原结合片段。

33.根据权利要求1至32中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或所述抗原结合片段包括fc部分。

34.根据权利要求33所述的抗体或抗原结合片段，其中与不包括所述突变的参考fc部分相比，所述fc部分包括增强与fcrn的结合的突变。

35.根据权利要求33或34所述的抗体或抗原结合片段，其中与不包括所述突变的参考fc部分相比，所述fc部分包括增强与fcγr，优选地fcγriia和/或fcγriiia结合的突变。

36.根据权利要求33至35中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其中所述fc部分是igg同种型，如igg1，或源自igg同种型，如igg1。

37.根据权利要求33至36中任一项所述的抗体或抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段包括或源自ig g1m17,1(ighg1*01)。

38.根据权利要求34至37中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其中所述增强与fcrn的结合的突变包括：

39.根据权利要求38所述的抗体或抗原结合片段，其中所述增强与fcrn的结合的突变包括m428l/n434s。

40.根据权利要求35至39中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其中所述增强与fcγr的结合的突变包括：s239d；i332e；a330l；g236a；或其任何组合，其中所述fc部分的氨基酸编号是根据eu编号系统的。

41.根据权利要求40所述的抗体或抗原结合片段，其中所述增强与fcγr的结合的突变包括：

42.根据权利要求40或41所述的抗体或抗原结合片段，其中所述增强与fcγr的结合的突变包括g236a/a330l/i332e或由其组成，并且任选地，其中所述抗体或抗原结合片段不包括s239d，并且其中所述抗体或抗原结合片段进一步任选地包括在位置239处的天然s。

43.根据权利要求33至42中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其中所述fc部分包括以下氨基酸取代突变：m428l；n434s；g236a；a330l；以及i332e，并且任选地不包括s239d。

44.根据权利要求1至43中任一项所述的抗体或抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段包括轻链恒定区(cl)，所述cl包括与seq id no:79的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列或由其组成。

45.根据权利要求1至44中任一项所述的抗体或抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段包括ch1-ch2-ch3，所述ch1-ch2-ch3包括与seq id no:73的氨基酸序列具有90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列或其变体或由其组成，所述变体包括以下氨基酸取代中的一个或多个(eu编号)：g236a；a330l；i332e；m428l；n434s。

46.根据权利要求45所述的抗体或抗原结合片段，其中所述ch1-ch2-ch3的c末端赖氨酸被去除。

47.一种抗体，其包括：重链(hc)，所述hc包括seq id no:75中所示的氨基酸序列或由其组成，任选地c末端赖氨酸被去除；以及轻链(lc)，其中所述lc包括以下或由以下组成：(i)seq id no:62、58-61和63-72中的任一者中所示的vl氨基酸序列；以及(ii)seq id no:79中所示的cl氨基酸序列。

48.根据权利要求47所述的抗体，其中所述lc包括seq id no:62、66、67和72中的任一者中所示的vl氨基酸序列。

49.一种抗体，其包括：重链(hc)，所述hc包括seq id no:76中所示的氨基酸序列或由其组成，任选地c末端赖氨酸被去除；以及轻链(lc)，其中所述lc包括以下或由以下组成：(i)seq id no:62、58-61和63-72中的任一者中所示的vl氨基酸序列；以及(ii)seq id no:79中所示的cl氨基酸序列。

50.根据权利要求49所述的抗体，其中所述lc包括seq id no:62、66、67和72中的任一者中所示的vl氨基酸序列。

51.一种抗体，其包括：重链(hc)，所述hc包括seq id no:77中所示的氨基酸序列或由其组成，任选地c末端赖氨酸被去除；以及轻链(lc)，其中所述lc包括以下或由以下组成：(i)seq id no:62、58-61和63-72中的任一者中所示的vl氨基酸序列；以及(ii)seq id no:79中所示的cl氨基酸序列。

52.根据权利要求51所述的抗体，其中所述lc包括seq id no:62、66、67和72中的任一者中所示的vl氨基酸序列。

53.一种抗体，其包括：重链(hc)，所述hc包括seq id no:78中所示的氨基酸序列或由其组成，任选地c末端赖氨酸被去除；以及轻链(lc)，其中所述lc包括以下或由以下组成：(i)seq id no:62、58-61和63-72中的任一者中所示的vl氨基酸序列；以及(ii)seq id no:79中所示的cl氨基酸序列。

54.根据权利要求53所述的抗体，其中所述lc包括seq id no:62、66、67和72中的任一者中所示的vl氨基酸序列。

55.根据权利要求1至54中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或所述抗原结合片段能够与选自hbsag基因型a、b、c、d、e、f、g、h、i和j或其任何组合的基因型的hbsag结合。

56.根据权利要求1至55中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段能够降低患有hbv感染的哺乳动物中hbv dna的血清浓度。

57.根据权利要求1至56中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段能够降低患有hbv感染的哺乳动物中hbsag的血清浓度。

58.根据权利要求1至57中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段能够降低患有hbv感染的哺乳动物中hbeag的血清浓度。

59.根据权利要求1至58中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段能够降低患有hbv感染的哺乳动物中hbcrag的血清浓度。

60.一种多核苷酸，其包括编码根据权利要求1至59中任一项所述的抗体或抗原结合片段的核苷酸序列。

61.一种多核苷酸，其编码根据权利要求1至59中任一项所述的抗体或抗原结合片段的轻链可变区(vl)，以及任选地轻链恒定结构域(cl)。

62.根据权利要求60或61所述的多核苷酸，其中编码所述抗体或所述抗原结合片段的所述核苷酸序列被密码子优化以在宿主细胞中表达。

63.根据权利要求62所述的多核苷酸，其包括与如seq id no:89、85-88和90-99中的任一者所示的核苷酸序列具有至少50％同一性的核苷酸序列。

64.根据权利要求60至63中任一项所述的多核苷酸，其包括：(i)seq id no:81或seqid no:82中所示的多核苷酸序列；以及(ii)seq id no:89、85-88和90-99中的任何一者或多者中所示的多核苷酸序列。

65.根据权利要求60至63中任一项所述的多核苷酸，其包括：(i)seq id no:83中所示的多核苷酸序列；以及(ii)seq id no:89、85-88和90-99中的任何一者或多者中所示的多核苷酸序列。

66.根据权利要求60至63中任一项所述的多核苷酸，其包括：(i)seq id no:84中所示的多核苷酸序列；以及(ii)seq id no:89、85-88和90-99中的任何一者或多者中所示的多核苷酸序列。

67.一种载体，其包括根据权利要求60至66中任一项所述的多核苷酸。

68.根据权利要求67所述的载体，其中所述载体包括慢病毒载体或逆转录病毒载体。

69.一种宿主细胞，其包括根据权利要求60至66中任一项所述的多核苷酸和/或根据权利要求67或68所述的载体。

70.一种药物组合物，其包含：

71.一种试剂盒，其包括：

72.根据权利要求70所述的药物组合物或根据权利要求71所述的试剂盒，其进一步包括：

73.根据权利要求72所述的组合物或试剂盒，其中所述聚合酶抑制剂包含拉米夫定。

74.一种产生根据权利要求1至59中任一项所述的抗体或抗原结合片段的方法，所述方法包括在足以产生所述抗体或抗原结合片段的条件下培养根据权利要求69所述的宿主细胞，并且持续足以产生所述抗体或抗原结合片段的时间。

75.一种(i)根据权利要求1至59中任一项所述的抗体或抗原结合片段；(ii)根据权利要求60至66中任一项所述的多核苷酸；(iii)根据权利要求67或68所述的载体；(iv)根据权利要求69所述的宿主细胞；和/或(v)根据权利要求70、72或73所述的药物组合物在制备用于预防、治疗、减轻和/或诊断受试者的乙型肝炎感染和/或丁型肝炎感染的药物中的用途。

76.一种治疗、预防和/或减轻受试者的乙型肝炎和/或丁型肝炎感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的：(i)根据权利要求1至59中任一项所述的抗体或抗原结合片段；(ii)根据权利要求60至66中任一项所述的多核苷酸；(iii)根据权利要求67或68所述的载体；(iv)根据权利要求69所述的宿主细胞；和/或(v)根据权利要求70、72或73所述的药物组合物。

77.根据权利要求76所述的方法，其进一步包括向所述受试者施用以下中的一种或多种：(vi)聚合酶抑制剂，其中所述聚合酶抑制剂任选地包括拉米夫定、阿德福韦、恩替卡韦、替比夫定、替诺福韦或其任何组合；(vii)干扰素，其中所述干扰素任选地包括ifnβ和/或ifnα；(viii)检查点抑制剂，其中所述检查点抑制剂任选地包括抗pd-1抗体或其抗原结合片段、抗pd-l1抗体或其抗原结合片段和/或抗ctla4抗体或其抗原结合片段；(ix)刺激性免疫检查点分子的激动剂；或(x)(vi)-(ix)的任何组合。

78.根据权利要求76或77所述的方法，其中所述乙型肝炎感染是慢性乙型肝炎感染。

79.根据权利要求76至78中任一项所述的方法，其中所述受试者已接受肝移植。

80.根据权利要求76至79中任一项所述的方法，其中所述受试者未针对乙型肝炎进行免疫。

81.根据权利要求76至80中任一项所述的方法，其中所述受试者是新生儿。

82.根据权利要求76至81中任一项所述的方法，其中所述受试者正在经历或已经经历血液透析。

83.根据权利要求76至82中任一项所述的方法，其中所述方法包括向所述受试者施用单剂量的包含所述抗体或抗原结合片段的药物组合物。

84.根据权利要求83所述的方法，其中所述药物组合物的所述单剂量包括范围为2至18mg/kg(受试者体重)的所述抗体。

85.根据权利要求83或84所述的方法，其中所述药物组合物的所述单剂量包括至多6mg、至多10mg、至多15mg、至多18mg、至多25mg、至多30mg、至多35mg、至多40mg、至多45mg、至多50mg、至多55mg、至多60mg、至多75mg、至多90mg、至多300mg、至多900mg或至多3000mg的所述抗体，

86.根据权利要求83至85中任一项所述的方法，其中所述药物组合物的所述单剂量包括浓度在100mg/ml至200mg/ml的范围内，如100mg/ml、110mg/ml、120mg/ml、130mg/ml、140mg/ml、150mg/ml、160mg/ml、170mg/ml、180mg/ml、190mg/ml或200mg/ml，优选地150mg/ml的所述抗体。

87.根据权利要求83至86中任一项所述的方法，其中所述药物组合物的所述单剂量包括约75mg的所述抗体。

88.根据权利要求83至87中任一项所述的方法，其中所述药物组合物的所述单剂量包括约90mg的所述抗体。

89.根据权利要求83至88中任一项所述的方法，其中所述药物组合物的所述单剂量包括至多300mg的所述抗体。

90.根据权利要求83至89中任一项所述的方法，其中所述药物组合物的所述单剂量包括至多900mg的所述抗体。

91.根据权利要求83至90中任一项所述的方法，其中所述药物组合物的所述单剂量包括至多3,000mg的所述抗体。

92.根据权利要求83至91中任一项所述的方法，其中所述方法包括通过皮下注射施用所述单剂量，任选地其中所述单剂量包括6mg的所述抗体或18mg的所述抗体或由其组成。

93.根据权利要求83至92中任一项所述的方法，其中所述方法包括通过静脉内注射施用所述单剂量。

94.根据权利要求83至93中任一项所述的方法，其中所述药物组合物进一步包含水，任选地usp水。

95.根据权利要求83至94中任一项所述的方法，其中所述药物组合物进一步包含组氨酸，任选地在所述药物组合物中浓度范围为10mm至40mm，如20mm。

96.根据权利要求83至95中任一项所述的方法，其中所述药物组合物进一步包含二糖，如蔗糖，任选地以5％、6％、7％、8％或9％，优选地约7％(w/v)。

97.根据权利要求83至96中任一项所述的方法，其中所述药物组合物进一步包含表面活性剂或三嵌段共聚物，任选地聚山梨醇酯或泊洛沙姆-188，优选地聚山梨醇酯80(ps80)，其中任选地所述聚山梨醇酯或泊洛沙姆-188以0.01％至0.05％(w/v)的范围，优选地0.02％(w/v)存在。

98.根据权利要求83至97中任一项所述的方法，其中所述药物组合物的ph在5.8至6.2的范围内、在5.9至6.1的范围内，或为5.8、为5.9、为6.0、为6.1或为6.2。

99.根据权利要求98所述的方法，其中所述药物组合物包含：

100.根据权利要求83至99中任一项所述的方法，其中所述受试者是成人。

101.根据权利要求100所述的方法，其中所述受试者的年龄范围为18岁至65岁。

102.根据权利要求83至101中任一项所述的方法，其中所述受试者的体重为40kg至125kg，和/或所述受试者的体质指数(bmi)为18至35kg/m2。

103.根据权利要求83至102中任一项所述的方法，其中所述受试者患有慢性hbv感染；例如，由2次血清hbsag、hbv dna和/或hbeag阳性定义，其中所述2次相隔至少6个月。

104.根据权利要求83至103中任一项所述的方法，其中所述受试者未患有肝硬化。

105.根据权利要求104所述的方法，其中不存在肝硬化由以下确定：

106.根据权利要求83至105中任一项所述的方法，其中在施用所述单剂量之前，所述受试者已经任选地在120天内，进一步任选地在60天内接受核苷(酸)逆转录酶抑制剂(nrti)。

107.根据权利要求106所述的方法，其中所述nrti包括以下中的一种或多种：替诺福韦；替诺福韦二吡呋酯(例如，富马酸替诺福韦二吡呋酯)；替诺福韦艾拉酚胺；恩替卡韦；拉米夫定；阿德福韦；以及阿德福韦酯。

108.根据权利要求83至107中任一项所述的方法，其中在施用所述单剂量之前不超过28天，所述受试者的血清hbv dna浓度低于100iu/ml。

109.根据权利要求83至108中任一项所述的方法，其中在施用所述单剂量之前，所述受试者的血清hbsag浓度低于3,000iu/ml，并且任选地，在施用所述单剂量之前，所述受试者的血清hbsag浓度低于1,000iu/ml。

110.根据权利要求83至109中任一项所述的方法，其中在施用所述单剂量之前不超过28天，所述受试者的血清hbsag浓度高于或等于3,000iu/ml，并且任选地，在施用所述单剂量之前不超过28天，所述受试者的血清hbsag浓度高于或等于1,000iu/ml。

111.根据权利要求83至110中任一项所述的方法，其中在施用所述单剂量之前不超过28天，所述受试者对hbe抗原(hbeag)呈阴性。

112.根据权利要求83至111中任一项所述的方法，其中在施用所述单剂量之前不超过28天，所述受试者对抗hb抗体呈阴性。

113.根据权利要求83至112中任一项所述的方法，其中在施用所述单剂量之前：

114.根据权利要求83至113中任一项所述的方法，其中与在施用所述单剂量之前0天至28天所述受试者的血清hbsag(例如，血清中hbsag的浓度，例如，如使用雅培公司architect测定所确定的)相比，在施用所述单剂量之后56天，所述受试者的所述血清hbsag减少>2倍。

115.根据权利要求83至114中任一项所述的方法，其中在施用所述单剂量之后(例如，在施用所述单剂量之后56天)：

116.根据权利要求83至115中任一项所述的方法，其中所述受试者是男性。

117.根据权利要求83至115中任一项所述的方法，其中所述受试者是女性。

118.一种药物组合物，其包含浓度范围为100mg/ml至200mg/ml，如100mg/ml、110mg/ml、120mg/ml、130mg/ml、140mg/ml、150mg/ml、160mg/ml、170mg/ml、180mg/ml、190mg/ml或200mg/ml，优选地150mg/ml的根据权利要求1至59中任一项所述的抗体或抗原结合片段，

119.根据权利要求118所述的药物组合物，其中所述药物组合物包含至多6mg、至多18mg、至多75mg、至多90mg、至多300mg、至多900mg或至多3000mg的所述抗体。

120.根据权利要求118或119所述的药物组合物，其中所述药物组合物包含约75mg的所述抗体。

121.根据权利要求118或119所述的药物组合物，其中所述药物组合物包含约90mg的所述抗体。

122.根据权利要求118或119所述的药物组合物，其中所述药物组合物包含约300mg的所述抗体。

123.根据权利要求118或119所述的药物组合物，其中所述药物组合物包含约900mg的所述抗体。

124.根据权利要求118或119所述的药物组合物，其中所述药物组合物包含约3,000mg的所述抗体。

125.根据权利要求118至124中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物包含水，任选地usp水。

126.根据权利要求118至125中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物包含组氨酸，任选地在所述药物组合物中浓度为10mm至40mm，如20mm。

127.根据权利要求118至126中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物包含二糖，如蔗糖，任选地以5％、6％、7％、8％或9％，优选地约7％(w/v)。

128.根据权利要求118至127中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物包含表面活性剂，任选地聚山梨醇酯，优选地聚山梨醇酯80(ps80)，其中任选地所述聚山梨醇酯以0.01％至0.05％(w/v)的范围，优选地0.02％(w/v)存在。

129.根据权利要求118至128中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物的ph在5.8至6.2的范围内、在5.9至6.1的范围内，或为5.8、为5.9、为6.0、为6.1或为6.2。

130.根据权利要求118至129中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物包含：

131.根据权利要求83至117中任一项所述的方法，其中在施用所述单剂量之后，相较于基线，所述受试者的血清hbsag减少了1.0log10 iu/ml、1.5log10 iu/ml或更多，其中任选地，在施用所述单剂量之后，所述减少持续1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天或更多天。

132.根据权利要求83至117和131中任一项所述的方法，其中在施用所述单剂量之后，相较于基线，所述受试者的血清hbsag减少持续至少8天、至少15天、至少22天或至少29天。

133.一种用于体外诊断乙型肝炎和/或丁型肝炎感染的方法，所述方法包括：

134.根据权利要求133所述的方法，其中所述样品包括从所述受试者中分离的血液。

135.一种用于检测抗乙型肝炎和/或抗丁型肝炎疫苗中呈正确构象的表位的存在或不存在的方法，所述方法包括：

136.根据权利要求1至59中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其中：

137.一种治疗有需要的受试者的慢性hbv感染的方法，所述方法包括：

138.一种治疗有需要的受试者的慢性hbv感染的方法，所述方法包括：

139.根据权利要求137或138所述的方法，其中rnai药剂包括形成双链区的正义链和反义链，其中所述正义链包括与seq id no:116的核苷酸1579-1597相差不超过3个核苷酸的至少15个连续核苷酸。

140.根据权利要求137至139中任一项所述的方法，其中所述rnai药剂包括正义链和反义链，其中所述正义链包括seq id no:116的核苷酸1579-1597。

141.根据权利要求137至140中任一项所述的方法，其中所述rnai药剂中的至少一个链包括至少1个核苷酸的3'突出端。

142.根据权利要求137至140中任一项所述的方法，其中所述rnai药剂中的至少一个链包括至少2个核苷酸的3'突出端。

143.根据权利要求137至142中任一项所述的方法，其中所述rnai药剂中的所述双链区的长度为15至30个核苷酸对。

144.根据权利要求137至142中任一项所述的方法，其中所述rnai药剂中的所述双链区的长度为17至23个核苷酸对。

145.根据权利要求137至142中任一项所述的方法，其中所述rnai药剂中的所述双链区的长度为17至25个核苷酸对。

146.根据权利要求137至142中任一项所述的方法，其中所述rnai药剂中的所述双链区的长度为23至27个核苷酸对。

147.根据权利要求137至142中任一项所述的方法，其中所述rnai药剂中的所述双链区的长度为19至21个核苷酸对。

148.根据权利要求137至142中任一项所述的方法，其中所述rnai药剂中的所述双链区的长度为21至23个核苷酸对。

149.根据权利要求137至142中任一项所述的方法，其中所述rnai药剂中的每条链具有15至30个核苷酸。

150.根据权利要求137至142中任一项所述的方法，其中所述rnai药剂中的每条链具有19至30个核苷酸。

151.根据权利要求137至150中任一项所述的方法，其中所述rnai药剂是sirna。

152.根据权利要求151所述的方法，其中所述sirna抑制hbv转录物的表达，所述hbv转录物编码hbsag蛋白、hbcag蛋白和hbx蛋白或hbv dna聚合酶蛋白。

153.根据权利要求151或权利要求152所述的方法，其中所述sirna与由以下编码的靶标的至少15个连续核苷酸结合：p基因，nc_003977.2的核苷酸2309-3182和1-1625；s基因(编码l、m和s蛋白)，nc_003977.2的核苷酸2850-3182和1-837；hbx，nc_003977.2的核苷酸1376-1840；或c基因，nc_003977.2的核苷酸1816-2454。

154.根据权利要求151或权利要求152所述的方法，其中所述sirna的所述反义链包括5'-ugugaagcgaagugcacacuu-3'(seq id no:119)的核苷酸序列中的至少15个连续核苷酸。

155.根据权利要求151或152所述的方法，其中所述sirna的所述反义链包括5'-ugugaagcgaagugcacacuu-3'(seq id no:119)的核苷酸序列中的至少19个连续核苷酸。

156.根据权利要求151或152所述的方法，其中所述sirna的所述反义链包括5'-ugugaagcgaagugcacacuu-3'(seq id no:119)的核苷酸序列。

157.根据权利要求151或152所述的方法，其中所述sirna的所述反义链由5'-ugugaagcgaagugcacacuu-3'(seq id no:119)的核苷酸序列组成。

158.根据权利要求154至157中任一项所述的方法，其中所述sirna的所述正义链包括5'-gugugcacuucgcuucaca -3'(seq id no:118)的核苷酸序列。

159.根据权利要求154至157中任一项所述的方法，其中所述sirna的所述正义链由5'-gugugcacuucgcuucaca -3'(seq id no:118)的核苷酸序列组成。

160.根据权利要求151或152所述的方法，其中所述sirna的所述反义链包括5'-uaaaauugagagaaguccaccac-3'(seq id no:121)的核苷酸序列的至少15个连续核苷酸。

161.根据权利要求151或152所述的方法，其中所述sirna的所述反义链包括5'-uaaaauugagagaaguccaccac-3'(seq id no:121)的核苷酸序列的至少19个连续核苷酸。

162.根据权利要求151或152所述的方法，其中所述sirna的所述反义链包括5'-uaaaauugagagaaguccaccac-3'(seq id no:121)的核苷酸序列。

163.根据权利要求151或152所述的方法，其中所述sirna的所述反义链由5'-uaaaauugagagaaguccaccac-3'(seq id no:121)的核苷酸序列组成。

164.根据权利要求154至157中任一项所述的方法，其中所述sirna的所述正义链包括5'-gguggacuucucucaauuuua -3'(seq id no:120)的核苷酸序列。

165.根据权利要求154至157中任一项所述的方法、供使用的组合物或用途，其中所述sirna的所述正义链由5'-gguggacuucucucaauuuua -3'(seq id no:120)的核苷酸序列组成。

166.根据权利要求151至165中任一项所述的方法，其中所述正义链的基本上所有核苷酸和所述反义链的基本上所有核苷酸都是经修饰的核苷酸，并且

167.根据权利要求166所述的方法，其中所述配体是通过单价接头、二价分支接头或三价分支接头附接的一种或多种galnac衍生物。

168.根据权利要求166或167所述的方法，其中所述配体是

169.根据权利要求168所述的方法，其中所述sirna与如下结构中所示的配体缀合：

170.根据权利要求151至169中任一项所述的方法，其中所述sirna中的至少一个核苷酸是经修饰的核苷酸，所述经修饰的核苷酸包括脱氧核苷酸、3'末端脱氧胸腺嘧啶(dt)核苷酸、2'-o-甲基修饰的核苷酸、2'-氟修饰的核苷酸、2'-脱氧修饰的核苷酸、锁定核苷酸、解锁核苷酸、构象限制性核苷酸、约束乙基核苷酸、非碱性核苷酸、2'-氨基修饰的核苷酸、2'-o-烯丙基修饰的核苷酸、2'-c-烷基修饰的核苷酸、2'-羟基修饰的核苷酸、2'-甲氧基乙基修饰的核苷酸、2'-o-烷基修饰的核苷酸、吗啉代核苷酸、氨基磷酸酯、包括核苷酸的非天然碱基、四氢吡喃修饰的核苷酸、1,5-脱水己醇修饰的核苷酸、环己烯基修饰的核苷酸、包括硫代磷酸酯基的核苷酸、包括甲基膦酸酯基的核苷酸、包括5'-磷酸酯的核苷酸、腺苷-乙二醇核酸或包括5'-磷酸酯模拟物的核苷酸。

171.根据权利要求151至169中任一项所述的方法，其中所述sirna包括磷酸酯主链修饰、2'核糖修饰、5'三磷酸酯修饰或galnac缀合修饰。

172.根据权利要求171所述的方法，其中所述磷酸酯主链修饰包含硫代磷酸酯键。

173.根据权利要求171或权利要求172所述的方法，其中所述2'核糖修饰包括氟代或-o-甲基取代。

174.根据权利要求151至159和166至173中任一项所述的方法，其中所述sirna具有包括5'-gsusgugfcafcfufucgcuucacal96-3'(seq id no:122)的正义链和包括5'-usgfsugaafgcfgfaagugfcafcacsusu-3'(seq id no:123)的反义链，

175.根据权利要求151至159和166至173中任一项所述的方法，其中所述sirna具有包括5'-gsusgugfcafcfufucgcuucacal96-3'(seq id no:124)的正义链和包括5'-usgfsuga(agn)gcfgfaagugfcafcacsusu-3'(seq id no:125)的反义链，

176.根据权利要求151至153和160至173中任一项所述的方法、供使用的组合物或用途，其中所述sirna具有包括5'-gsgsuggacfuufcfufcucaafufuuual96-3'(seq id no:126)的正义链和包括5'-usafsaaaufugfafgagaafgufccaccsasc-3'(seq id no:127)的反义链，

177.根据权利要求137至176中任一项所述的方法，其中所述受试者是人，并且向所述受试者施用治疗有效量的rnai药剂或sirna；并且其中所述rnai药剂或sirna的所述有效量为约1mg/kg至约8mg/kg。

178.根据权利要求137至177中任一项所述的方法，其中向所述受试者每日两次、每日一次、每两天一次、每三天一次、每周两次、每周一次、每隔一周一次、每四周一次或每月一次施用所述rnai药剂或sirna。

179.根据权利要求137至177中任一项所述的方法，其中每四周一次向所述受试者施用所述rnai药剂或sirna。

180.根据权利要求151至179中任一项所述的方法，其中施用各自定向到hbv基因的两个sirna，并且第一sirna具有包括seq id no:119、seq id no:120或seq id no:126的反义链；并且第二sirna包括具有正义链的sirna，所述sirna包含seq id no:116的核苷酸2850-3182中的至少15个连续核苷酸。

181.根据权利要求151至179中任一项所述的方法，其中施用定向到hbv基因的两个sirna，其中所述两个sirna包括：定向到hbv x基因的sirna和定向到hbv s基因的sirna。

182.根据权利要求151至179中任一项所述的方法，其中施用各自定向到hbv基因的两个sirna，并且第一sirna具有包括seq id no:119、seq id no:123或seq id no:125的反义链，并且第二sirna具有包括seq id no:121或seq id no:127的反义链。

183.根据权利要求181所述的方法，其中所述第一sirna具有包括seq id no:118、seqid no:122或seq id no:124的正义链；并且所述第二sirna具有包括seq id no:120或seqid no:126的正义链。

184.根据权利要求179至183中任一项所述的方法，其中同时施用所述两个sirna。

185.根据权利要求137至184中任一项所述的方法，所述方法进一步包括向所述受试者施用核苷(酸)类似物，或者其中所述受试者还被施用核苷(酸)类似物。

186.根据权利要求185所述的方法、供使用的组合物或用途，其中所述核苷(酸)类似物是富马酸替诺福韦二吡呋酯(tdf)、替诺福韦艾拉酚胺(taf)、拉米夫定、阿德福韦酯、恩替卡韦(etv)、替比夫定、agx-1009、恩曲他滨(ftc)、克拉夫定、利托那韦、福韦酯、洛布卡韦、泛昔洛韦、n-乙酰基-半胱氨酸(nac)、pc1323、theradigm-hbv、胸腺肽-α以及更昔洛韦、贝西福韦(ana-380/lb-80380)或替诺福韦酯(tlx/cmx157)。

技术总结
本公开部分涉及抗体和其抗原结合片段，所述抗体和其抗原结合片段可以与乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的抗原环区结合，并且任选地可以中和乙型肝炎病毒(HBV)感染，以及进一步任选地丁型肝炎病毒(HDV)感染。本公开的抗体和抗原结合片段具有有利的生产特性，例如与参考抗体或抗原结合片段相比，在转化的宿主细胞中聚集体形成更少和/或生产滴度得以提高。本公开还涉及包括抗原结合片段的融合蛋白，并且涉及编码此类抗体、抗原结合片段和融合蛋白的核酸和产生此类抗体、抗原结合片段和融合蛋白的细胞。另外，本公开涉及本公开的抗体、抗原结合片段、融合蛋白以及相关的多核苷酸、载体、宿主细胞和组合物在诊断、预防和治疗乙型肝炎和丁型肝炎中的用途。还提供了组合疗法，所述组合疗法包括：(i)抗体或抗原结合片段；以及(ii)作为HBV基因表达抑制剂和/或降低HBV抗原负荷的药剂。

技术研发人员：L·罗森,N·丘德诺卓斯基,F·A·伦普,G·斯内尔,D·科蒂,E·卡梅罗尼
受保护的技术使用者：维尔生物科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13