1.本发明涉及生物与食品技术领域，尤其涉及一种花生红衣绿原酸的提取及纯化方法。
背景技术：
2.随着消费升级，在饮食方面，营养功能健康逐渐替代口感，成为主导消费者消费方向的最主要因素。花生红衣又名花生种衣、花生皮等，是豆科植物花生的种皮，是一味传统中药，被记录在《全国中草药汇编》中，其“性味甘、微苦、温平，具有止血、散瘀、消肿的功效，用于治疗多种出血症状”。花生红衣为红棕色膜质，主要成分有5％～9％水分、11％～18％蛋白质、10％～14％脂肪、37％～42％粗纤维、12％～28％碳水化合物、8％～12％灰分、7％单宁，富含多种色素和硒、锌、钙、钾、铁等元素，同时富含维生素、多酚类、黄酮类、花色苷及其他有益健康的化合物具有抗氧化清除自由基的功能，对动物无毒，可提取用于食品工业应用。花生红衣是花生产品的副产物，我国每年都能产生约600t，除了少量用于制药外，其余都用作饲料。
3.绿原酸是植物在有氧呼吸过程中形成的一种苯丙素类物质，是由咖啡酸与奎尼酸组成的缩酚酸。绿原酸类物质具有抗氧化清除体内自由基、抗菌、抗病毒、抗肿瘤、降血糖、降血脂、降血压、保肝利胆、保护心血管和兴奋中枢神经系统等多种生物活性，广泛应用于食品、药品、化妆品等领域。
4.目前，绿原酸提取方法常用的提取方法有水提法和醇提法，这两中提取方法虽然操作简单，但提取率较低且提取时间较长，无法有效提高花生红衣的利用价值。
5.为此，本发明提供一种花生红衣绿原酸的提取及纯化方法。
技术实现要素：
6.为了解决上述现有技术中的不足，本发明提供一种花生红衣绿原酸的提取及纯化方法。本发明采用微波超声的复合处理方法提取花生红衣绿原酸，且本发明的提取及纯化方法操作方便、无有害溶剂、得率高、纯度高，适用于工业化大批量生产，最后制得的绿原酸可应用于医药、保健食品等行业
7.本发明的一种花生红衣绿原酸的提取及纯化方法是通过以下技术方案实现的：
8.一种花生红衣绿原酸的提取及纯化方法，包括以下步骤：
9.步骤1，向红衣粉末中加入石油醚进行抽提脱脂处理，获得脱脂后的花生红衣粉末；
10.步骤2，向所述脱脂后的花生红衣粉末中加入提取溶剂，并通过胶体磨处理混合均匀，随后经超声微波协同提取处理，获得花生红衣绿原酸粗提取液；
11.步骤3，将所述花生红衣绿原酸粗提取液进行固液分离处理，并将分离后的提取液经浓缩处理后，于色谱柱进行柱层析，收集柱层析后的产物经冷冻干燥，即获得纯化后的花生红衣绿原酸。
12.进一步地，步骤2中，所述超声微波协同提取处理的条件为：
13.超声时间为8～15min，超声功率为350-400w；
14.微波30～50s，微波功率为500-600w；
15.所述超声微波联合处理是在微波光波超声波萃取仪中进行的。
16.进一步地，步骤2中，所述胶体磨处理时，胶体磨中定子与转子的间隙为 25～40μm，胶体磨时间为20～40min，胶体磨处理的次数不少于2次。
17.进一步地，步骤2中，所述提取溶剂为质量浓度为50～70％的，且所述提取溶剂的ph为6～8；
18.所述提取溶剂与所述花生红衣粉末的用量比为50～70ml/g。
19.进一步地，步骤3中，所述浓缩是在真空旋转蒸发仪中进行的，且所述浓缩处理的条件为：
20.浓缩温度为35～45℃，浓缩前后体积比为4～3:1，真空度为0.09～0.14mpa。
21.进一步地，步骤3中，柱层析的条件为：
22.层析柱为hpd826大孔树脂柱；
23.洗脱液为乙醇，洗脱速率为1～5ml/min；
24.其中，乙醇的质量浓度为60～80％，ph为5～7。
25.进一步地，柱层析时，hpd826大孔树脂与红衣绿原酸浓缩液质量比例为 1:9～11，上样液流速为2.0～4.0ml/min。
26.进一步地，步骤3中，所述固液分离采用离心方式，其离心的转速为 4000～5500r/min，离心时间为8～12min。
27.进一步地，步骤1中，所述花生红衣的干燥温度为35～45℃，干燥至含水量为6％～8％；
28.所述花生红衣粉末的粒径为30～60目。
29.进一步地，步骤3中，所述冷冻干燥的温度为-45～-55℃，真空度为0.098mpa，冷冻干燥时间为12～60h。
30.本发明与现有技术相比，具有以下有益效果：
31.本发明提供的花生红衣绿原酸的提取及纯化方法中，采用了超声微波联合萃取技术，得到的绿原酸产品较其他提取方法其抗氧化活性高，且提取量稍高，可应用于医药与功能食品等领域。
32.本发明制备的花生红衣绿原酸粗提液花生红衣粗提液在0.1mg/ml时，其
·
dpph清除率是94.9％。
33.本发明花生红衣绿原酸纯化方法简单方便，易于操作，适合工厂化生产，制得的绿原酸的纯度达到98％以上。
具体实施方式
34.下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。
35.下述试验方法和检测方法，如没有特殊说明，均为常规方法；所述试剂和原料，如没有特殊说明，均为市售。
36.实施例1
37.本实施例提供一种花生红衣绿原酸的提取及纯化方法，包括以下步骤：
38.步骤1，脱脂处理：
39.将花生红衣于35℃的温度下烘干至含水量为7％，将其粉碎后过30目筛，获得花生红衣粉末，然后向获得的花生红衣粉末中加入石油醚使石油醚没过花生红衣粉末并浸泡8h进行脱脂，抽滤获得脱脂后的花生红衣粉末，并将脱脂后的花生红衣粉末于35℃温度下烘干至含水量为7％，获得脱脂后的花生红衣粉末。
40.步骤2，提取处理：
41.将脱脂后的花生红衣粉末与乙醇提取液按照1g:50ml的用量比泵入胶体磨中，调节胶体磨中定子与转子的间隙为25μm，处理2次，每次处理时间为30 名，转子的转速为100r/min，获得第一混合物；乙醇提取液的质量浓度为50％，且ph为6。
42.将获得的第一混合物置于scientz-iidm微波光波超声波萃取仪中进行超声微波联合提取，设置超声时间为8min，超声功率为380w，微波时间为30s，微波功率为550w，获得第二混合物。
43.步骤3，纯化处理：
44.将第二混合物于4000r/min的转速下离心8min，将第二混合物的固液分离，取上清液获得花生红衣绿原酸的提取液。
45.将获得的花生红衣绿原酸的提取液与真空旋转蒸发仪中进行低温浓缩，旋转蒸发温度35℃，真空度为0.098mpa，浓缩至体积为浓缩前体积的1/4，获得浓缩后的花生红衣绿原酸提取液，且浓缩后的花生红衣绿原酸提取液的ph为5。
46.将浓缩后的花生红衣绿原酸提取液采用hpd826大孔树脂进行层析纯化，上样液流速2ml/min，以质量浓度为65％，ph为5的乙醇溶液为洗脱液，洗脱液流速为2ml/min，同时采用紫外分光光度计测定洗脱液吸光度，从327nm处开始收集目标洗脱液至洗脱液无色停止收集，获得目标洗脱液，即柱层析后的产物，将柱层析后的产物于-45℃的温度下冷冻干燥48h得到纯化后的花生红衣绿原酸。
47.实施例2
48.本实施例提供一种花生红衣绿原酸的提取及纯化方法，包括以下步骤：
49.步骤1，脱脂处理：
50.将花生红衣于35℃的温度下烘干至含水量为6％，将其粉碎后过50目筛，获得花生红衣粉末，然后向获得的花生红衣粉末中加入石油醚使石油醚没过花生红衣粉末并浸泡9h进行脱脂，抽滤获得脱脂后的花生红衣粉末，并将脱脂后的花生红衣粉末于35℃温度下烘干至含水量为6％，获得脱脂后的花生红衣粉末。
51.步骤2，提取处理：
52.将脱脂后的花生红衣粉末与乙醇提取液按照1g:50ml的用量比泵入胶体磨中，调节胶体磨中定子与转子的间隙为25μm，处理2次，每次处理时间为40min，转子的转速为80r/min，获得第一混合物；乙醇提取液的质量浓度为60％，且ph 为7。
53.将获得的第一混合物置于scientz-iidm微波光波超声波萃取仪中进行超声微波联合提取，设置超声时间为10min，超声功率为350w，微波时间为40s，微波的功率为500w，获得第二混合物。
54.步骤3，纯化处理：
55.将第二混合物于4500r/min的转速下离心12min，将第二混合物的固液分离，取上清液获得花生红衣绿原酸的提取液。
56.将获得的花生红衣绿原酸的提取液与真空旋转蒸发仪中进行低温浓缩，旋转蒸发温度45℃，真空度为0.14mpa，浓缩至体积为浓缩前体积的1/3，获得浓缩后的花生红衣绿原酸提取液，且浓缩后的花生红衣绿原酸提取液的ph为5.5。
57.将浓缩后的花生红衣绿原酸提取液采用hpd826大孔树脂进行层析纯化，上样液流速2ml/min，以质量浓度为70％，ph为5.5的乙醇溶液为洗脱液，洗脱液流速为3ml/min，同时采用紫外分光光度计测定洗脱液吸光度，从327nm 处开始收集目标洗脱液至洗脱液无色停止收集，获得目标洗脱液，即为柱层析后的产物，将柱层析后的产物于-45℃的温度下冷冻干燥12h得到纯化后的花生红衣绿原酸。
58.实施例3
59.本实施例提供一种花生红衣绿原酸的提取及纯化方法，包括以下步骤：
60.步骤1，脱脂处理：
61.将花生红衣于45℃的温度下烘干至含水量为8％，将其粉碎后过60目筛，获得花生红衣粉末，然后向获得的花生红衣粉末中加入石油醚使石油醚没过花生红衣粉末并浸泡8h进行脱脂，抽滤获得脱脂后的花生红衣粉末，并将脱脂后的花生红衣粉末于45℃温度下烘干至含水量为7％，获得脱脂后的花生红衣粉末。
62.步骤2，提取处理：
63.将脱脂后的花生红衣粉末与乙醇提取液按照1g:70ml的用量比泵入胶体磨中，调节胶体磨中定子与转子的间隙为40μm，处理2次，每次处理时间为40min，转子的转速为120r/min，获得第一混合物；本实施例的乙醇提取液的质量浓度为 70％，且ph为8。
64.将获得的第一混合物置于scientz-iidm微波光波超声波萃取仪中进行超声微波联合提取，设置超声时间为15min，超声功率为400w，微波时间为50s，微波功率为600w，获得第二混合物。
65.步骤3，纯化处理：
66.将第二混合物于5500r/min的转速下离心10min，将第二混合物的固液分离，取上清液获得花生红衣绿原酸的提取液。
67.将获得的花生红衣绿原酸的提取液与真空旋转蒸发仪中进行低温浓缩，旋转蒸发温度40℃，真空度为0.1mpa，浓缩至体积为浓缩前体积的1/4，获得浓缩后的花生红衣绿原酸提取液，且浓缩后的花生红衣绿原酸提取液的ph为6.5。
68.将浓缩后的花生红衣绿原酸提取液采用hpd826大孔树脂进行层析纯化，上样液流速4ml/min，以质量浓度为80％，ph为7的乙醇溶液为洗脱液，洗脱液流速为5ml/min，同时采用紫外分光光度计测定洗脱液吸光度，从327nm处开始收集目标洗脱液至洗脱液无色停止收集，获得目标洗脱液，即为柱层析后的产物，将柱层析后的产物于-55℃的温度下冷冻干燥60h得到纯化后的花生红衣绿原酸。
69.对比例1
70.本对比例与实施例2的区别仅在于未经过胶体磨处理。
71.实验部分
72.针对上述实施例1～3以及对比例1纯化后的花生红衣绿原酸样品的提取量和纯度
进行测试，其结果如表1所示。
73.表1绿原酸提取量及纯度
[0074] 绿原酸提取量(mg/g)纯度(％)实施例15.3598.01实施例25.5798.54实施例35.6399.12对比例14.9497.28
[0075]
由表1可知，本发明制备的花生红衣绿原酸提取量为5.35～5.63mg/g，纯度为98.01～99.12％。
[0076]
本发明为了说明本发明提取方法的效果，按照实施例1中的方法，将实施例1中获得的花生红衣绿原酸的提取液浓缩至0.1mg/ml，并根据文献(柳萌，郜海燕，房祥军，等.不同成熟度杨梅酚酸的超声-微波协同优化提取及其抗氧化性对比[j].食品科学，2021，42(3):112-120.)中的方法对0.1mg/ml浓缩液的
·
dpph清除率进行测试，结果表明其
·
dpph清除率为94.9％。
[0077]
显然，上述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。