一种1H-吲哚-2-羧酸衍生物及药物组合物与应用的制作方法

本发明属于药物化学领域，具体地，涉及一种1h-吲哚-2-羧酸衍生物，包括该1h-吲哚-2-羧酸衍生物的药物组合物，以及该1h-吲哚-2-羧酸衍生物和药物组合物的应用。

背景技术：

1、肝细胞癌是肝癌的主要形式(90％以上)，也是最常见的恶性肿瘤之一，在我国，肝癌每年的新增发病人数和死亡人数在所有癌症中位居前列。整体来看，早、中期肝癌的治愈难度明显低于晚期，肝癌早期患者若接受肝切除或肝移植等标准治疗方法，是有一定几率根治肝癌的。此外，还有放射疗法、经导管动脉化疗栓塞和分子靶向治疗等临床治疗手段。与诸多恶性肿瘤类似，肝癌早期的症状不明显，同时肝癌细胞发展较快、容易转移，当病人察觉时往往已处于更难治疗的晚期，此时多数病人已失去了根治性治疗的机会，且接受根治性手术的患者仍有一定几率复发。因此，分子靶向治疗等非手术疗法对于救治肝癌患者有着重要意义。

2、作为高度血管化的恶性肿瘤，干预肿瘤细胞增殖和肿瘤血管增长是肝癌的一线治疗方案，如口服靶向药物索拉非尼，即第一款上市的抗肝癌靶向药物sorafenib，其主要靶点为raf和vegfr，可以同时靶向肝癌细胞和肿瘤血管。然而，长期服药患者体内的肝癌细胞会产生耐药性，这是因为肿瘤细胞在生长、侵袭转移过程中多次分裂，其子代不断发生基因或表观遗传层面的改变，而索拉非尼在对肿瘤和/或肿瘤血管产生杀伤作用的同时也筛选出了更加耐药的细胞亚群，使得靶向药物疗效降低。近几年来，乐伐替尼(2018)、卡博替尼(2019)、瑞戈非尼(2017)等多款用于肝癌一、二线治疗的小分子靶向药物接连上市，为肝癌患者提供了更多的治疗选择，但是考虑到肿瘤细胞强大的增殖能力和多药耐药性的不断发展，寻找新的肝癌作用靶标和具有更好的肝癌细胞(尤其是耐药肝癌细胞)抑制活性的靶向药物仍然具有重要意义。

3、14-3-3蛋白家族是一类在真核细胞体内广泛表达的分子量在28-33kda的酸性调控蛋白家族，其在哺乳动物中存在7种亚型(α/β，γ，σ，ε，ζ，η和θ/τ)，且不同亚型之间的氨基酸序列存在高度的一致性和保守性。14-3-3蛋白通常和靶蛋白通过蛋白-蛋白相互作用(ppis)，参与了许多信号传导通路的抑制或激活，从而改变靶细胞的亚定位、磷酸化状态或活化状态，如通过磷酸丝氨酸和磷酸苏氨酸的结合与细胞内蛋白相互作用，来调节多种细胞功能，参与许多重要的生命过程，包括转录翻译、细胞内信号传导、物质运输、dna损伤检查点、细胞周期进程和细胞凋亡等。14-3-3蛋白可以调节癌细胞的增殖、存活和迁移/侵袭，并作为潜在的癌症治疗靶标发挥作用，其中α/β，γ，σ，ε，ζ等亚型的研究较为充分，并且σ和ζ亚型已有小分子抑制剂报道。尽管对14-3-3η蛋白的研究相对较少，但已有研究成果表明其在肝癌形成与发展，特别是肝癌细胞耐药性产生中的重要作用。

4、首先，14-3-3η对于肿瘤发展中常见的ras/raf/mapk通路的激活有促进作用，14-3-3η可以在没有胞外信号的情况下与raf蛋白激酶结合，保持其活性构象，进而引发下游mek1/2和erk1/2等蛋白激酶的激活。14-3-3η还可以与磷酸化的erk1/2激酶形成正反馈通路，进一步引起erk1/2的异常磷酸化，最后促进肿瘤生长和肿瘤血管的形成，这与索拉非尼对这一信号通路的抑制作用正好相反。

5、此外，14-3-3η通过激活缺氧诱导因子(hif)-1α，诱导并维持肝癌细胞的类肿瘤干细胞(csc)特性和索拉非尼耐药性。hif-1α是具有转录活性的一类核蛋白，其靶基因包括与缺氧适应、肿瘤生长相关的100多种基因，在缺氧环境下，hif-1α的激活促进了相关基因表达，引发血管生成、细胞分化、组织修复等生命活动。在肝癌治疗中，索拉非尼促进了肝癌细胞的微环境缺氧，同时发挥抗肿瘤作用，但也通过激活hif-1α诱导增强肝癌细胞的csc特性，从而导致肝癌细胞耐药性的产生。在肝癌细胞中，敲低14-3-3η的表达水平可以显著降低hif-1α的蛋白水平，而14-3-3η的过表达则增加了hif-1α的表达/核易位，分子对接的结果也发现了14-3-3η可以与hif-1α结合，其潜在的分子机制为14-3-3η通过抑制泛素化蛋白酶体的降解作用来稳定hif-1α，从而维持了csc特性。

6、14-3-3η还可以与nf-κb形成正反馈回路，维持肝癌的多药耐药性(mdr)。肿瘤细胞的活性氧簇(ros)水平相对于正常细胞有显著提升，而耐药细胞则表现出更高的ros水平，具有更好的抗氧化能力，其细胞内的活性氧存在着较高水平的动态平衡。细胞内ros水平的升高激活了nf-κb信号传导，这引起了14-3-3η的转录上调，nf-κb的激活也可以保持14-3-3η的高表达水平，从而形成了nf-κb/14-3-3η正反馈回路，14-3-3η表达水平的提高则可以降低细胞内的ros水平，以诱导/维持肝癌细胞的mdr表型。同时这一正反馈体系也可能参与调节肿瘤血管的生成和侵袭，以及介导下游的信号通路。

7、综上，14-3-3η有着成为肝癌治疗靶标的潜力，若能开发出相关的小分子抑制剂，则有望为晚期肝癌患者，特别是长期服用索拉非尼等药物的病患提供新的治疗手段。

技术实现思路

1、为此，针对研发14-3-3η蛋白小分子抑制剂的重要意义，本发明的发明人在之前研究的基础上，通过进一步改造得到了一系列生物活性更优的14-3-3η小分子抑制剂，有助于开发全新而高效的肝癌治疗药物。

2、本发明的第一方面提供一种1h-吲哚-2-羧酸衍生物，所述1h-吲哚-2-羧酸衍生物为式(i)所示的化合物、或其药学上可接受的盐、溶剂化物、代谢产物或立体、互变异构体；

3、

4、其中，

5、r1选自c1-c4的直链或支链的烷基或卤代烷基；

6、r2选自羧基、含2～4个碳原子的酰胺基或含2～4个碳原子的酯基；

7、a单元为芳基，所述芳基任选地被一个或多个选自羟基、c1-c4的直链或支链烷氧基的取代基取代；

8、b单元为芳基，所述芳烷基任选地被一个或多个选自卤素、羟基、胺基、c1-c4的直链或支链烷基、c1-c4的直链或支链烷氧基的取代基取代；

9、x选自c1-c4的亚烷基；

10、y选自仲胺基或甲基叔胺基。

11、根据本发明一种优选实施方式，r1选自-ch3、ch(ch3)2、-chf2或-cf3；优选地，r1为-ch3或ch(ch3)2。

12、根据本发明一种优选实施方式，r2选自-conhch2ch3、-cooch2ch3、-cooh；优选地，r2为-cooh。

13、根据本发明一种优选实施方式，a单元的结构如下：

14、

15、其中，r3选自-och3或-oh，r4选自-h或-oh；优选地，r4为-h。

16、根据本发明一种优选实施方式，b单元的结构如下：

17、

18、其中，r5选自-h，-f，-ch3，-oh，-nh2或-och3；优选地，r5为-h，-ch3，-oh或-och3。

19、根据本发明一种优选实施方式，x为-ch2-，y选自-nh-或-n(ch3)-；优选地，y为-nh-。

20、更具体地，所述式(i)所示的化合物选自以下化合物：

21、

22、本发明的第二方面提供一种药物组合物，包括所述的1h-吲哚-2-羧酸衍生物与其他抗肿瘤活性物质；

23、优选地，所述其他抗肿瘤活性物质选自索拉非尼(sorafenib)、乐伐替尼(lenvatinib、卡博替尼(cabozantinib)、瑞戈非尼(regofenib)、雷莫芦单抗(ramucirumab)、纳武单抗(nivolumab)、folfox4、贝伐单抗(bevacizumab)、利尼伐尼(linifanib)、替万替尼(tivantinib)和阿昔替尼(axitinib)中的一种或多种。

24、本发明的第三方面提供所述的1h-吲哚-2-羧酸衍生物或所述的药物组合物在制备用于预防和/或治疗恶性肿瘤的药物中的用途。

25、具体地，所述恶性肿瘤选自乳腺癌、肺癌、前列腺癌、皮肤癌、结肠癌、胃癌、肝癌、直肠癌、白血病、宫颈癌、食管癌、甲状腺癌、膀胱癌、淋巴癌、胰腺癌、肾癌、子宫癌、口腔癌、皮肤黑色素瘤、卵巢癌、脑癌、多发性骨髓瘤、鼻咽癌、胆囊癌、胶质母细胞瘤和睾丸癌中的一种或多种；优选为肝癌。

26、此外，所述肿瘤可以为耐药肿瘤，优选为动脉化栓塞化疗和/或索拉非尼耐药肝癌。

27、相应地，本发明提供了一种预防和/或治疗肿瘤的方法，其包括给予有需要的对象预防和/或治疗有效量的本发明的式(i)所示的化合物、或其药学上可接受的盐、溶剂化物、代谢产物或立体、互变异构体。

28、本发明提供所述的1h-吲哚-2-羧酸衍生物或所述的药物组合物在制备用于预防和/或治疗14-3-3η过表达相关疾病的药物中的用途。优选地，与14-3-3η过表达相关的疾病为肿瘤，特别是恶性肿瘤及相应的耐药肿瘤。所述恶性肿瘤和耐药肿瘤的类型如前所述，在此不再赘述。

29、相应地，本发明提供了一种预防和/或治疗与14-3-3η过表达相关疾病的方法，其包括给予有需要的对象预防和/或治疗有效量的本发明的式(i)所示的化合物、或其药学上可接受的盐、溶剂化物、代谢产物或立体、互变异构体。

30、本发明的第四方面提供所述的1h-吲哚-2-羧酸衍生物在制备14-3-3η蛋白抑制剂和/或肝癌细胞增殖抑制剂中的用途，所述肝癌细胞优选为smmc-7721、bel-7402、bel/5-fu、snu-387、hepg2和hep3b中的至少一种。

31、本发明所述的式(i)所示的化合物及其任意优选形式均涵盖了其互变异构体、内消旋异构体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、氘代化合物、前药或其混合物形式，或式(i)所示的化合物及其任意优选形式均涵盖了其互变异构体、内消旋异构体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、氘代化合物、前药或其混合物的药学上可以接受的盐或溶剂化物。

32、本发明所述基团和化合物中所涉及的元素碳、氢、氧、硫、氮或卤素均包括它们的同位素情况，本发明所述基团和化合物中所涉及的元素碳、氢、氧、硫、氮或卤素任选地进一步被一个或多个它们对应的同位素所替代，其中碳的同位素包括12c、13c和14c，氢的同位素包括氕(h)、氘(d，又称重氢)和氚(t，又称超重氢)，氧的同位素包括16o、17o和18o，氮的同位素包括14n和15n，氟的同位素19f。

33、本发明的化合物能够与14-3-3η蛋白有效结合，且对于一系列人肝癌细胞系的杀伤作用强于阳性药物索拉非尼，具备较大的临床应用潜力。

34、本发明的其它特征和优点将在随后具体实施方式部分予以详细说明。