杂交瘤细胞株L025及Taq酶抗体的制作方法

本申请涉及生物，尤其涉及杂交瘤细胞株l025及taq酶抗体。

背景技术：

1、多聚酶链式反应简称pcr，是体外酶促合成特定dna片段的一种方法，它能将目的基因或dna片段在数小时内扩增十万至数百万倍。在传统的pcr反应体系中，各组分均是一次加入并进入循环，反应温度由室温(25℃)上升至高温(94～95℃)过程中，可能发生引物错配和二聚体的形成。若引物与模板中一些非靶位点的错配和引物之间形成了二聚体，其在taq酶的作用下亦可延伸。这些非特异性产物也可在后续的pcr循环中继续扩增，使得非特异性产物不断积累。同时，也消耗了反应体系的各组分，最终使得pcr扩增的特异性产物大量减少。

2、热启动是一种在pcr反应中优化目标扩增产物，同时抑制非特异扩增的方法。目前常用的热启动pcr方法包括：其通过各种物理和化学方法，控制pcr反应的必须组分，如dna聚合酶，使其直到反应混合物被加热到可以阻止非特异引导和引物聚合的温度后，再启动pcr来实现的达到有效扩增特异性pcr产物的目的。

3、taq酶抗体可用于热启动pcr，其与taq酶结合后抑制其dna聚合酶活性。在进行pcr扩增体系中加入taq酶抗体后，在高温变性前，taq酶抗体会与taq酶结合，抑制dna聚合酶活性，能够在低温条件下有效地抑制引物的非特异性退火及引物二聚体引起的非特异性扩增。当pcr反应体系温度到达最初的dna变性温度，taq酶抗体发生变性，dna聚合酶活性恢复，以达到热启动pcr效果。

4、目前制备该抗体主要方法有免疫动物法，杂交瘤制备法，基因工程重组蛋白表达等。其中免疫动物法，耗时长，步骤及操作复杂，无法满足现代工业需求。基因工程重组蛋白表达法，获得的重组taq酶抗体，稳定性较低。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供杂交瘤细胞株l025，本发明的杂交瘤细胞株l025是由骨髓瘤细胞和小鼠脾脏细胞在饲养细胞中培养获得的。

2、为了解决上述技术问题，本申请实施例提供一种杂交瘤细胞株l025，采用了如下所述的技术方案：

3、一种杂交瘤细胞株l025，所述杂交瘤细胞株l025的单抗包括重链可变区vh和轻链可变区vl，其中：

4、vh重链可变区的氨基酸如下：

5、dvhlvesggglvqpggsrklscaasgftfsnfglhwvrqsperglewvayisngssniyyadtvkgrftisrdnpkntlflqmtslrsedtamyycarserpffdgwgqgttltvss；

6、vl轻链可变区的氨基酸如下：

7、diqmtqttsslsaslgdrvtiscsasqgisnylnwyqqkpdgtvklliyytsnlhsgvpsrfsgsgsgtdysltisnlepediatyycqqysnlpwsfgggtkleik。

8、进一步的，单抗的氨基酸序列中包括八个可变区，具体如下：

9、vh重链可变区中的四个可变区分别为：

10、aafr1：dvhlvesggglvqpggsrklscaas；

11、aafr2：lhwvrqsperglewvay；

12、aafr3：yyadtvkgrftisrdnpkntlflqmtslrsedtamyyc；

13、aafr4：wgqgttltvss；

14、vl轻链可变区中的四个可变区分别为：

15、aafr1：diqmtqttsslsaslgdrvtiscsas；

16、aafr2：lnwyqqkpdgtvklliy；

17、aafr3：nlhsgvpsrfsgsgsgtdysltisnlepediatyyc；

18、aafr4：fgggtkleik。

19、为了解决上述技术问题，本申请实施例还提供一种taq酶抗体，采用了如下所述的技术方案：

20、一种taq酶抗体，所述taq酶抗体包括上述的杂交瘤细胞株l025。

21、与现有技术相比，本申请实施例主要有以下有益效果：

22、本发明克服了通过免疫动物得到多克隆taq抗体特异性较差，灵敏度较低的缺陷，同时也克服了通过基因工程重组蛋白表达taq抗体稳定性较差的问题。本发明通过以天然taq酶免疫小鼠，并通过杂交瘤技术制备杂交瘤细胞能够稳定的分泌抗体，且该杂交瘤细胞分泌的抗体属天然蛋白，稳定性较好。并对该抗体进行蛋白测序，获得其蛋白序列。得到taq酶抗体的天然蛋白序列。

技术特征：

1.一种杂交瘤细胞株l025，其特征在于，所述杂交瘤细胞株l025的单抗包括重链可变区vh和轻链可变区vl，其中：

2.根据权利要求1所述的杂交瘤细胞株l025，其特征在于，所述单抗的氨基酸序列中包括八个可变区，具体如下：

3.一种taq酶抗体，其特征在于，所述taq酶抗体包括权利要求1所述的杂交瘤细胞株l025。

技术总结
本申请实施例属于生物技术领域，涉及杂交瘤细胞株L025及Taq酶抗体。本申请杂交瘤细胞株L025的单抗包括重链可变区VH和轻链可变区VL。本申请通过以天然Taq酶免疫小鼠，并通过杂交瘤技术制备杂交瘤细胞能够稳定的分泌抗体，且该杂交瘤细胞分泌的抗体属天然蛋白，稳定性较好。本申请对该抗体进行蛋白测序，获得其蛋白序列，最终得到Taq酶抗体的天然蛋白序列。

技术研发人员：蒋析文,黄黉,梁国立,卢杰锋,何祖强,张盈盈
受保护的技术使用者：广州达安基因股份有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15