deathprotein-1,pd-1)。12.本发明的另一目的为提供一种经分离的核酸，其编码一如前所述的免疫调控奈米抗体的胺基酸序列，该经分离的核酸包含一选自于下列所组成的群组中的核苷酸序列：seqidno.4、seqidno.5、seqidno.4，及seqidno.4、seqidno.5和seqidno.6的任意组合。13.本发明的另一目的为提供一种医药组成物，包含一如前所述的免疫调控奈米抗体及一医药学上可接受的载剂。14.本发明的另一目的为提供一种如前所述的免疫调控奈米抗体用于制备一治疗癌症及免疫相关疾病的医药品的用途。15.本发明的另一目的为提供一种用于检测pd-l1表现量的方法，包含对一待测样品投予一如前所述的免疫调控奈米抗体。16.在本发明的一实施例中，该待测样品是血液、尿液、痰液、唾液或体液。17.综上所述，本发明免疫调控奈米抗体的功效在于：藉由表面电浆子共振结合分析(surfaceplasmonresonancebindingassay,sprbindingassay)证明抗-pd-l1奈米抗体分别以0.27及0.41nm内的kd有效结合pd-l1蛋白质、由pd-1/pd-l1阻断生物分析套组(blockadebioassaykit)测定抗-pd-l1奈米抗体的pd-1/pd-l1轴阻断(axisblockade)证明抗-pd-l1奈米抗体在pd-l1、apc/pd-1效应子共培养系统中阻断pd-l1/pd-1讯号传递、抗-pd-l1奈米抗体增强γδt细胞-诱导的对肿瘤细胞(mda-mb-231)的细胞毒性、藉由西方墨点分析(westernblotting)证明抗-pd-l1奈米抗体在pd-l1接合后恢复okt3(抗-cd3单株抗体)-诱导的t细胞增殖，及藉由流动式细胞测量分析及免疫细胞化学(immunocytochemistry)分析证明抗-pdl-1奈米抗体可用来侦测细胞样品中pd-l1的表现，藉此可达到治疗癌症及免疫相关疾病的效用。特别地，相较于习知的抗体必须藉由载体将基因转染至细胞中表现抗体功能而有低产量及效果不彰的缺点，本发明免疫调控奈米抗体可在体外大规模制备后直接投药至需要的个体内进行治疗。另外，本发明也可达到检测pd-l1表现量的效用。18.以下将进一步说明本发明的实施方式，下述所列举的实施例是用以阐明本发明，并非用以限定本发明的范围，任何熟习此技艺者，在不脱离本发明的精神和范围内，当可做些许更动与润饰，因此本发明的保护范围当视权利要求书所界定者为准。19.【图式简单说明】20.图1a及图1b显示抗-pd-l1奈米抗体的表面电浆子共振结合分析结果，其中clone表示选殖株，nb表示奈米抗体，ru表示反应单元(responseunit)，即涂覆的pd-l1重组蛋白质(sinobiological,cat:10084-h05h)的cm5晶片。21.图2显示由pd-1/pd-l1阻断生物分析套组(blockadebioassaykit)测定抗-pd-l1奈米抗体的pd-1/pd-l1轴阻断(axisblockade)的结果，其中clone表示选殖株，pd-l1nb表示抗-pd-l1奈米抗体，阿替利珠单抗(atezolizumab)是一种用于治疗尿路上皮癌、非小细胞肺癌(nsclc)、三阴性乳腺癌、小细胞肺癌及肝细胞癌的igg1同种型完全人源化抗pd-l1单株抗体。22.图3显示抗-pd-l1奈米抗体的t细胞增殖分析结果，其中**表示p《0.01；***表示p《0.001。23.图4显示抗-pd-l1奈米抗体增强对人类乳癌细胞株mda-mb-231的γδt(gdt)-诱导的细胞毒杀作用，其中最左边组别表示单纯γ-δt细胞处理组，未与任何抗体合并；*表示p《0.05；**表示p《0.01。24.图5显示抗-pd-l1奈米抗体的西方墨点分析(westernblotting)结果，其中箭头表示pd-l1蛋白位置，与商用抗体一致的分子量位置；所用细胞株为非小细胞肺癌细胞株h1975(nci-h1975[h-1975,h1975],atcc)，mab表示单株抗体，nb表示奈米抗体；商用抗体为pd-l1单株抗体(66248-1-ig,proteintech)，商用抗体组的初级抗体为pd-l1单株抗体(1:2500)，二级抗体为抗-兔子-辣根过氧化酶(anti-rabbit-horseradishperoxidase,anti-rab-hrp)(1:10000)；实验组抗-pd-l1奈米抗体的浓度为1ng/ml，二级抗体为抗-vhh-hrp(1:10000)。[0025]图6a及图6b显示抗-pd-l1奈米抗体的流动式细胞测量分析结果，其中图6a的(a)中nb表示奈米抗体，ab表示抗体，fitc表示萤光异硫氰酸盐(fluoresceinisothiocyanate)，图6a的(b)中mab表示单株抗体，h1975是一种非小细胞肺癌细胞株，alexafluor488-h是一种明亮的绿色萤光染料，其激发于488nm波长的雷射光线，图6b的(a)中a549是人类非小细胞肺癌细胞株，图6b的(b)中mda-mb-231是人类乳癌细胞株。[0026]图7显示抗-pd-l1奈米抗体的免疫细胞化学分析结果，其中h1975是一种非小细胞肺癌细胞株，clone表示选殖株，抗-pdl-1奈米抗体的浓度为1ng/ml，二级抗体为抗-vhh-萤光素(fluorescein,fitc)(1:5000)，pan-钙黏素(pan-cadherin)是一种细胞膜标志，pan-钙黏素与pd-l1的共定位可用来解释膜结合(membranebound)的pd-l1是藉由专一性奈米抗体来侦测。[0027]【实施方式】[0028]定义[0029]本文中所使用数值为近似值，所有实验数据皆表示在±20％的范围内，较佳为在±10％的范围内，最佳为在±5％的范围内。[0030]如本文中所使用的，用语“抗-程序性细胞死亡配体1(programmedcelldeathligand1,pd-l1)奈米抗体(nanobody,nb)”与“免疫调控奈米抗体”可交换使用。[0031]如本文中所使用的，用语“第二抗体”意指可与奈米抗体缀合以形成双特异性t细胞连接(bispecifict-cellengager,bite)、三特异性t-细胞连接(triplespecifict-cellengager,trite)、双特异性杀手细胞连接(bispecifickillercellenager,bike)、三特异性杀手细胞连接(triplespecifickillercellengager,trike)，或任一双特异性抗体的抗体。较佳地，第二抗体可包括，但不限于：抗cd3ε、cd3、人类白血球抗原-g(humanleukocyteantigen-g,hla-g)、程序性细胞死亡配体2(programmedcelldeathligand2,pd-l2)、t细胞免疫球蛋白结构域及黏蛋白结构域3(t-cellimmunoglobulindomainandmucindomain3,tim3)、表皮生长因子受体(epidermalgrowthfactorreceptor,egfr)、egfrviii、人类表皮生长因子受体2(humanepidermalgrowthfactorreceptor2,her2)、b细胞成熟抗原(b-cellmaturationantigen,bcma)、cd19、cd20、cd34、cd16、fc、上皮细胞黏附分子(epithelialcelladhesionmolecule,epcam)、间皮素(mesothelin)、纽约食道鳞状上皮细胞癌-1(newyorkesophagealsquamouscellcarcinoma-1,ny-eso-1)、糖蛋白100(glycoprotein100,gp100)及黏蛋白1(muc1)抗体。[0032]如本文中所使用的，“治疗(treating)”或“治疗(treatment)”意指缓解(alleviating)、减少(reducing)、改善(ameliorating)、减轻(relieving)或控制(controlling)一疾病(disease)或障碍(disorder)的一或多个临床征兆(clinicalsign)，以及降低(lowering)、停止(stopping)或逆转(reversing)一正在被治疗中的病况(condition)或症状(symptom)的严重性(severity)的进展(progression)。[0033]依据本发明的医药品可利用熟习此技艺者所详知的技术而被制造成一适合于非经肠道地(parenterally)投药的剂型(dosageform)，这包括，但不限于：注射品(injection)[例如，无菌的水性溶液(sterileaqueoussolution)或分散液(dispersion)]、无菌的粉末(sterilepowder)、锭剂(tablet)、片剂(troche)、口含锭(lozenge)、丸剂(pill)、胶囊(capsule)、分散性粉末(dispersiblepowder)或细颗粒(granule)、溶液、悬浮液(suspension)、乳剂(emulsion)、糖浆(syrup)、酏剂(elixir)、浓浆(slurry)以及类似之物。[0034]依据本发明的医药品可以一选自于由下列所构成的群组中的非经肠道途径(parenteralroutes)来投药：腹膜内注射(intraperitonealinjection)、皮下注射(subcutaneousinjection)、表皮内注射(intraepidermalinjection)、皮内注射(intradermalinjection)、肌肉内注射(intramuscularinjection)、静脉内注射(intravenousinjection)以及病灶内注射(intralesionalinjection)。[0035]依据本发明的医药品可包含有一被广泛地使用于药物制造技术的医药学上可接受的载剂。例如，该医药学上可接受的载剂可包含一或多种选自于由下列所构成的群组中的试剂：溶剂(solvent)、乳化剂(emulsifier)、悬浮剂(suspendingagent)、分解剂(decomposer)、黏结剂(bindingagent)、赋形剂(excipient)、安定剂(stabilizingagent)、螯合剂(chelatingagent)、稀释剂(diluent)、胶凝剂(gellingagent)、防腐剂(preservative)、润滑剂(lubricant)、吸收延迟剂(absorptiondelayingagent)、脂质体(liposome)以及类似之物。有关这些试剂的选用与数量是落在熟习此项技术之人士的专业素养与例行技术范畴内。[0036]依据本发明的该医药学上可接受的载剂包含有一选自于由下列所构成的群组中的溶剂：水、生理盐水(normalsaline)、磷酸盐缓冲生理盐水(phosphatebufferedsaline,pbs)、含糖溶液、含有醇的水性溶液(aqueoussolutioncontainingalcohol)，以及它们的组合。[0037]如本文中所用的，“核酸”、“核酸序列”或“核酸片段”等术语意指呈单股或双股形式的去氧核糖核苷酸序列或核糖核苷酸序列，且当中包含有已知的天然存在的核苷酸(naturallyoccurringnucleotides)或人造化学仿效物。如本文中所用的，“核酸”此术语可与“基因”、“cdna”、“mrna”、“寡核苷酸”和“聚核苷酸”交换使用。[0038]实施例1.抗-pd-l1奈米抗体的制备[0039]在本实施例中，抗-程序性细胞死亡配体1(programmedcelldeathligand1,pd-l1)奈米抗体(nanobody,nb)的制备流程如下。关于重链可变域(heavychainvariabledomain,vhh)的生产流程如下。vhh基因建构于表现载体pet22b(amp抗性)或psb-init(cmr抗性)中；质体经限制性内切酶消化及定序验证鉴定。将1μl经鉴定的质体(约50ng)加入bl21(de3)中，37℃作用过夜。用单菌落接种含有抗性的lb培养基，并在37℃、220r/min下培育培养物过夜。隔夜培养物以1:100的比例接种于含抗性的新鲜lb培养基(10l-20l)中，并于37℃、220r/min培养。当od600达至0.8时，冷却至室温。加入最终浓度为0.1mm的异丙基-β-d-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-d-thiogalactopyranoside,iptg)，20℃、220r/min诱导过夜。藉由离心(20mmtrisph8.0、150mmnacl)在细胞破裂后获取细胞及上清液。上清液藉由流通(flow-through)与ni-nta珠粒(1ml)结合。用含有合适梯度咪唑(imidazole)(10mm、20mm、50mm、100mm、250mm及500mm)的缓冲液清洗并洗脱ni-nta珠粒。用sds-page分析洗脱部分，根据蛋白质的纯度及产量(离子交换层析或凝胶过滤层析)确定后续的纯化方案。符合要求的蛋白质藉由凝胶过滤层析分离纯化，缓冲液更换为pbs缓冲液。用sds-page分析蛋白质组分，将符合要求的组分合并浓缩，用0.22μm滤膜过滤、分装。之后，将蛋白质储存于-20℃或更低温度。[0040]关于奈米抗体是生产及纯化自大肠杆菌(e.coli)。为了生产奈米抗体形式的大肠杆菌，参考文献microbcellfact.2019mar11；18(1):47来进行。简言之，使用大肠杆菌菌株hb2151。编码胺苄青霉素(ampicillin)抗性的质体pet(creativebiolab)被用于细胞质蛋白生产。用pd-l1或pd-l1多专一性奈米抗体质体新转化的大肠杆菌hb2151被接种在5ml含有50μg/ml胺苄青霉素的培养基中，并在37℃培养过夜。之后，将1ml这种预培养物接种到100ml培养基中并在37℃下生长。过夜培养后，每100ml培养物中加入两片enpresso加强片及额外剂量的葡萄糖释放酶(0.6u/l)。同时，藉由加入1mmiptg持续24小时诱导重组奈米抗体蛋白质表现。然后收集培养物并在冰上冷却5分钟，然后在6,000×g及4℃下离心15分钟。去除上清液后，细胞沉淀物藉由高容量myc-tag结合树脂使用固定化金属亲和层析(immobilizedmetalaffinitychromatography,imac)进行纯化。根据制造商操作流程(clontechlaboratories)在天然条件下进行基于重力流的层析(gravity-flow-basedchromatography)。藉由向每个200mg细菌细胞沉淀物添加1mlxtractor细胞裂解缓冲液(clontechlaboratories)，并辅以不含edta的蛋白酶抑制剂混合物(rochediagnostics)及25u核酸内切酶(thermoscientificpierce)，可实现有效的细胞裂解。在冰上作用15分钟、10,000×g及4℃离心20分钟以去除细胞碎片后，将澄清的上清液加到含有1ml预装树脂的重力流管柱上，并在室温下作用30分钟。在藉由添加含有300mm咪唑的洗脱缓冲液洗脱奈米抗体之前，用20及40mm的咪唑浓度清洗管柱两次。使用截留分子量为3.5-5kda的纤维素酯膜(celluloseestermembrane)(laboratories)藉由对pbs进行透析来去除咪唑及更换缓冲液。[0041]关于抗-pd-l1奈米抗体各选植株的互补决定区(complementaritydeterminingregion,cdr)的排列(alignment)及胺基酸序列显示于表1。抗-pd-l1奈米抗体选殖株#1的胺基酸序列为seqidno.1；抗-pd-l1奈米抗体选殖株#14的胺基酸序列为seqidno.2；抗-pd-l1奈米抗体选殖株#67的胺基酸序列为seqidno.3；编码抗-pd-l1奈米抗体选殖株#1的胺基酸序列的核苷酸序列为seqidno.4；编码抗-pd-l1奈米抗体选殖株#14的胺基酸序列的核苷酸序列为seqidno.5；编码抗-pd-l1奈米抗体选殖株#67的胺基酸序列的核苷酸序列为seqidno.6。[0042]表1[0043][0044]实施例2.抗-pd-l1奈米抗体的表面电浆子共振结合分析(surfaceplasmonresonancebindingassay,sprbindingassay)结果[0045]在本实施例中，抗-pd-l1奈米抗体的表面电浆子共振结合分析(surfaceplasmonresonancebindingassay,sprbindingassay)的操作流程如下。将cm5或nta晶片由biacoret200(biacore-gehealthcare,piscataway,nj)进行spr分析。简言之，在10mm缓冲溶液(ph4.0、5.5或6.0)中以20μg/ml的浓度范围稀释蛋白质(pd-l1重组蛋白质)样品，以获得最大的表面保留用于固定在晶片上，遵循表面制备过程并选择配体(pd-l1或pd-l1多专一性奈米抗体、25、12.5、6.25、3.125、1.5625及0.78125nm)涂覆在晶片上。然后是再生探索(regenerationscouting)及表面性能测试(surfaceperformancetest)，在再生探索及表面性能测试之后，然后选择再生方法来运行实验。然后选择结合分析(bindinganalysis)及直接结合(directbinding)来研究蛋白质结合。选择动力学分析(kineticanalysis)并选择质量转移(masstransfer)进行结合实验的动力学分析。之后，进行数据分析及动力学常数确定。[0046]抗-pd-l1奈米抗体的表面电浆子共振结合分析结果显示于图1a及图1b，其中clone表示选殖株，nb表示奈米抗体，ru表示反应单元(responseunit)。由图1a及图1b可见，抗-pd-l1奈米抗体分别以0.27及0.41nm内的kd有效结合pd-l1蛋白质。[0047]实施例3.由pd-1/pd-l1阻断生物分析套组(blockadebioassaykit)测定抗-pd-l1奈米抗体的pd-1/pd-l1轴阻断(axisblockade)[0048]在本实施例中，由pd-1/pd-l1阻断生物分析套组(blockadebioassaykit)测定抗-pd-l1奈米抗体的pd-1/pd-l1轴阻断(axisblockade)的操作流程如下。将1x104的pd-l1aapc/cho-k1细胞接种在96孔盘上过夜。隔天，将1x104的pd-1效应细胞加入含有pd-l1aapc/cho-k1细胞的孔中。之后，添加不同浓度的抗-pd-l1奈米抗体(选殖株#1或选殖株#67)或阿替利珠单抗(atezolizumab)(一种用于治疗尿路上皮癌、非小细胞肺癌(nsclc)、三阴性乳腺癌、小细胞肺癌及肝细胞癌的igg1同种型完全人源化抗pd-l1单株抗体)。6小时后，加入bio-glotm试剂并使用glodiscover系统测量发光，并使用sigmaplot软体将数据拟合到4pl曲线。[0049]本实施例的结果显示于图2，其中clone表示选殖株，阿替利珠单抗(atezolizumab)是一种用于治疗尿路上皮癌、非小细胞肺癌(nsclc)、三阴性乳腺癌、小细胞肺癌及肝细胞癌的igg1同种型完全人源化抗pd-l1单株抗体。由图2可见，抗-pd-l1奈米抗体选殖株#1及#67在pd-l1、apc/pd-1效应子共培养系统中阻断pd-l1/pd-1讯号传递。[0050]实施例4.抗-pd-l1奈米抗体的t细胞增殖分析(tcellproliferationassay)结果[0051]在本实施例中，抗-pd-l1奈米抗体的t细胞(即周边血液单核细胞)增殖分析(tcell(i.e.,peripheralbloodmononuclearcell,pbmc)proliferationassay)的操作流程如下。将1x106的pbmc细胞接种在12孔盘中，存在或不存在重组人类pd-l1(10μg/ml,sinobiological,cat.10084-h05h)。接着，添加1μg/ml的抗-pd-l1奈米抗体(选殖株#1或选殖株#67)。7天后，记录总细胞数，然后用fitc-缀合的cd3单株抗体(cat#11-0037-42)染色，然后藉由流动式细胞测量术进行分析。cd3阳性细胞数计算为cd3细胞百分比(％)×总细胞数，cd3单株抗体单独组为100％。[0052]抗-pd-l1奈米抗体的t细胞增殖分析结果显示于图3，其中**表示p《0.01；***表示p《0.001。由图3可见，抗-pd-l1奈米抗体选殖株#1及#67增强γδt细胞-诱导的对肿瘤细胞(mda-mb-231)的细胞毒性。[0053]实施例5.抗-pd-l1奈米抗体在增强对人类乳癌细胞株mda-mb-231的gammadeltat(gdt)-诱导的细胞毒杀作用上的效用评估[0054]在本实施例中，抗-pd-l1奈米抗体增强对人类乳癌细胞株mda-mb-231(购自美国类型培养物收集中心(americantypeculturecollection,atcc))的γδt(gdt)-诱导的细胞毒杀作用的实验操作流程如下。周边血液单核细胞(peripheralbloodmononuclearcells,pbmcs)、自然杀手细胞或γδt细胞用作效应细胞(effectorcell)。标的细胞(肿瘤细胞株)与效应细胞以指定的效应/标的(e:t)比从1:1到50:1在37℃下共培养24到72小时。对于活/死细胞可活性分析，共培养前将所有肿瘤细胞用绿色萤光钙黄绿素-am(green-fluorescentcalcein-am)染色，然后在共培养后用红色萤光乙硫胺酸同二聚体-1(red-fluorescentethidiumhomodimer-1)染色标记死细胞，根据制造商的操作指南(thermofisherscientific)，死亡的肿瘤细胞被确定为绿色萤光+/红色萤光+细胞。细胞杀死率表示为总细胞群的百分比。[0055]有关初代γδt细胞扩增的操作流程如下。将人类pbmcs(1x107)在含有唑来磷酸(zoledronicacid)(5μm)及1000iu/mlil-2并补充有10％富含血小板的血浆(platelet-richplasma,prp)的x-vivo15培养基(lonza，basel，switzerland)中培养2周。记录细胞数，并使用萤光缀合的cd3、vγ9、vδ2及nkg2d抗体藉由流动式细胞测量术测定纯度及效力。[0056]有关初代自然杀手细胞扩增的操作流程如下。根据制造商的操作指南(stemcelltechnologiesvancouvercanada)，藉由负向选择套组从pbmcs中分离出人类自然杀手细胞。将自然杀手细胞在含有cd355及cd2抗体(miltenyibiotec，bergischgladbach，德国)及500iu/mlil-2(peprotech，rockyhill，usa)的x-vivo15培养基(lonza，basel，switzerland)中培养3周并辅以10％的富含血小板的血浆(prp)。细胞数被记录下来，纯度藉由流动式细胞测量术确定，使用萤光缀合的cd56及cd16抗体用于自然杀手细胞。[0057]将1x105的mda-mb-231细胞接种在12孔盘上过夜。隔天，将3x105的初代γδt细胞加入含有mda-mb-231细胞的孔中。接着，添加1μg/ml抗-pd-l1奈米抗体(选殖株#1或选殖株#67)或10μg/ml阿替利珠单抗。48小时后，初代γδt细胞对mda-mb-231细胞的专一性溶解藉由活/死细胞-介导的细胞毒性分析使用流动式细胞测量术分析确定。[0058]抗-pd-l1奈米抗体增强对人类乳癌细胞株mda-mb-231的γδt(gdt)-诱导的细胞毒杀作用的结果显示于图4，其中最左边组别表示单纯γ-δt细胞处理组，未与任何抗体合并；*表示p《0.05；**表示p《0.01。本实施例的结果显示，抗-pd-l1奈米抗体可增强γδt细胞-诱导的对肿瘤细胞(mda-mb-231)的细胞毒性。[0059]实施例6.抗-pd-l1奈米抗体的西方墨点分析(westernblotting)结果[0060]在本实施例中，抗-pd-l1奈米抗体的西方墨点分析(westernblotting)的操作流程如下。在含有蛋白酶抑制剂混合物的pro-prep蛋白质萃取溶液(intron，台北市，中国台湾省)中获取细胞，并在4℃下剧烈振荡15分钟，然后离心。收集上清液，然后使用bio-radbca试剂(bio-radhercules，ca，usa)测定蛋白质浓度。将30μg的每个样品裂解物在sds-聚丙烯酰胺凝胶上进行电泳，然后电印迹到pvdf膜上。在tbst封阻中加入5％bsa后，将膜与初级抗体(溶于tbst中)在4℃下作用过夜。接着，清洗4次并以辣根过氧化酶(horseradishperoxidase,hrp)-缀合的山羊-抗小鼠或兔子igg(upstate,billerica,ma,usa)作用两小时。以tbst清洗4次后，印迹与supersignalwestpicoecl试剂(piercebiotechnology，rockford，il，usa)一起作用1分钟，然后藉由暴露于kodak-x-omat胶片来检测化学发光。[0061]抗-pd-l1奈米抗体的西方墨点分析结果显示于图5，其中箭头表示pd-l1蛋白位置，与商用抗体一致的分子量位置；所用细胞株为非小细胞肺癌细胞株h1975(nci-h1975[h-1975,h1975],atcc)，mab表示单株抗体，nb表示奈米抗体；商用抗体为pd-l1单株抗体(66248-1-ig,proteintech)，商用抗体组的初级抗体为pd-l1单株抗体(1:2500)，二级抗体为抗-兔子-辣根过氧化酶(anti-rabbit-horseradishperoxidase,anti-rab-hrp)(1:10000)；实验组抗-pd-l1奈米抗体的浓度为1ng/ml，二级抗体为抗-vhh-hrp(1:10000)。本实施例的结果显示，抗-pd-l1奈米抗体选殖株#1及#67在pd-l1接合后恢复okt3(抗-cd3单株抗体)-诱导的t细胞增殖。[0062]实施例7.抗-pd-l1奈米抗体的流动式细胞测量分析(flowcytometricanalysis)结果[0063]在本实施例中，抗-pd-l1奈米抗体的流动式细胞测量分析(flowcytometricanalysis)的操作流程如下。抗-pd-l1奈米抗体(1ng/ml)藉由fastlink萤光素标记套组(abnova)用fitc萤光素预染色，程序按照操作手册说明进行。使用fitc-缀合的pd-l1单株抗体(1:500，bdpharmingen，选殖株mih1，cat.:558065)或fitc-缀合的抗-pd-l1奈米抗体(1ng/ml)对mda-mb-231、a549或h1975细胞进行染色，在含有1％bsa的pbs中45分钟。用pbs清洗后，使用fl1通道藉由流动式细胞测量术分析细胞。[0064]抗-pd-l1奈米抗体的流动式细胞测量分析结果显示于图6a及图6b，其中图6a的(a)中nb表示奈米抗体，ab表示抗体，fitc表示萤光异硫氰酸盐(fluoresceinisothiocyanate)，图6a的(b)中mab表示单株抗体，h1975是一种非小细胞肺癌细胞株，alexafluor488-h是一种明亮的绿色萤光染料，其激发于488nm波长的雷射光线，图6b的(a)中a549是人类非小细胞肺癌细胞株，图6b的(b)中mda-mb-231是人类乳癌细胞株。本实施例的结果显示，藉由流动式细胞测量分析，抗-pdl-1奈米抗体的选殖株#1(标记有萤光素)可用来侦测细胞样品中pd-l1的表现。[0065]实施例8.抗-pd-l1奈米抗体的免疫细胞化学(immunocytochemistry)分析结果[0066]在本实施例中，抗-pd-l1奈米抗体的免疫细胞化学(immunocytochemistry)分析的操作流程如下。将肿瘤细胞(1×105)接种在6孔盘的盖玻片上，培育过夜。在指定的处理后，将细胞固定在1％多聚甲醛(paraformaldehyde)中，用pbs清洗，在含有0.5％bsa的pbs中使用0.1％tritonx-100透化30分钟，用2％bsa封阻，并与专一性抗体(配于2％bsa/含有0.05％tween-20的pbs(pbst)中)一起作用。在清洗之后，将细胞与萤光素缀合的二级抗体一起作用，用pbst清洗，并使用含有抗褪色剂及4',6-二脒基-2-苯基吲哚(4',6-diamidino-2-phenylindole,dapi)的水性封固剂封固。在leicatcssp8x共焦显微镜(leica)下分析影像。[0067]抗-pd-l1奈米抗体的免疫细胞化学分析结果显示于图7，其中h1975是一种非小细胞肺癌细胞株，clone表示选殖株，抗-pdl-1奈米抗体的浓度为1ng/ml，二级抗体为抗-vhh-萤光素(fluorescein,fitc)(1:5000)，pan-钙黏素(pan-cadherin)是一种细胞膜标志，pan-钙黏素与pd-l1的共定位可用来解释膜结合(membranebound)的pd-l1是藉由专一性奈米抗体来侦测。本实施例的结果显示，抗-pdl-1奈米抗体的选殖株#1可用来侦测细胞样品中pd-l1的表现。[0068]综上所述，本发明免疫调控奈米抗体(即抗-pd-l1抗体)藉由表面电浆子共振结合分析(surfaceplasmonresonancebindingassay,sprbindingassay)证明抗-pd-l1奈米抗体分别以0.27及0.41nm内的kd有效结合pd-l1蛋白质、由pd-1/pd-l1阻断生物分析套组(blockadebioassaykit)测定抗-pd-l1奈米抗体的pd-1/pd-l1轴阻断(axisblockade)证明抗-pd-l1奈米抗体在pd-l1、apc/pd-1效应子共培养系统中阻断pd-l1/pd-1讯号传递、抗-pd-l1奈米抗体增强γδt细胞-诱导的对肿瘤细胞(mda-mb-231)的细胞毒性、藉由西方墨点分析(westernblotting)证明抗-pd-l1奈米抗体在pd-l1接合后恢复okt3(抗-cd3单株抗体)-诱导的t细胞增殖，及藉由流动式细胞测量分析及免疫细胞化学(immunocytochemistry)分析证明抗-pdl-1奈米抗体可用来侦测细胞样品中pd-l1的表现，藉此可达到治疗癌症及免疫相关疾病的效用。特别地，相较于习知的抗体必须藉由载体将基因转染至细胞中表现抗体功能而有低产量及效果不彰的缺点，本发明免疫调控奈米抗体可在体外大规模制备后直接投药至需要的个体内进行治疗。另外，本发明也可达到检测pd-l1表现量的效用。[0069]以上所述仅为举例性，而非为限制性者。任何未脱离本发明的精神与范畴，而对其进行的等效修改或变更，均应包含于权利要求书中。当前第1页12当前第1页12