技术特征：
1.一种基于ilvc突变体高产d-泛酸的基因工程菌，由如下方法构建：运用基因编辑技术，对ilvc基因413号密码子进行定点突变，将异亮氨酸突变为丙氨酸，并通过中高拷贝质粒ptrc99a使其在底盘菌dpan15中过表达，得到dpan15/ptrc99a-ilvc
i413a
，即所述基于ilvc突变体高产d-泛酸的基因工程菌。2.构建权利要求1所述基因工程菌的方法，所述方法包括：(1)运用基因编辑技术，对ilvc基因413号密码子进行定点突变，将异亮氨酸突变为丙氨酸，得到运用基因编辑技术，得到ilvc
i413a
；(2)运用基因编辑技术，通过中高拷贝质粒ptrc99a使ilvc
i413a
在底盘菌dpan15中过表达，得到dpan15/ptrc99a-ilvc
i413a
，即所述基于ilvc突变体高产d-泛酸的基因工程菌。3.权利要求1所述基因工程菌在微生物发酵制备d-泛酸中的应用。4.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述应用为：将所述基因工程菌菌株接种至含有kan抗性的发酵培养基中，25～30℃、100～200rpm条件下进行发酵培养至od600＝0.8～1.0时，添加终浓度为0.2mm的iptg，之后转至30℃，180rpm下继续培养48h，发酵结束后取发酵液上清分离纯化得到d-泛酸。5.如权利要求4所述的应用，其特征在于所述发酵培养基组成如下：葡萄糖24g/l、(nh4)2so
4 12g/l、kh2po
4 1g/l、mgso
4 0.5g/l、酵母提取物2g/l、caco310g/l，1ml/l微量元素溶液，溶剂为去离子水，ph值自然；微量元素溶液组成为：10g/l cucl2、10g/l feso4·
7h2o、1g/l znso4·
7h2o、0.20g/l cuso4、0.02g/l nicl2·
7h2o，溶剂为去离子水。6.如权利要求5所述的应用，其特征在于所述基因工程菌发酵前，先接种至lb培养基中，于37℃、200rpm的摇床上过夜培养，之后以体积浓度2％接种量接种到发酵培养基中进行发酵培养。
技术总结
本发明涉及一种基于ilvC突变体高产D-泛酸的基因工程菌及其构建方法，以及该基因工程菌在微生物发酵制备D-泛酸中的应用。运用代谢工程改造、酶改造、代谢通量的优化等方式，构建了一株性能更优的D-泛酸生产菌株，在提高酶对底物2-酮泛解酸的亲和力同时，促进了前体D-泛解酸的合成，并且相对于出发菌株，L-缬氨酸的积累量基本没变，最终使D-泛酸的效价从4.72g/L提高至5.30g/L。L提高至5.30g/L。
技术研发人员：张博 刘平 金洁漪 杨玉凤 柳志强 郑裕国
受保护的技术使用者：浙江工业大学
技术研发日：2022.06.02
技术公布日：2022/9/27