技术特征：
1.一种隐性核不育水稻种质的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)以如seq id no.3所示的水稻ostkpr1基因序列为模板，根据crispr-cas9技术要求，以所述序列的第3434位点为靶位点，根据该靶位点及其上下游序列设计sgrna序列，将含有编码所述sgrna序列的dna片段连接至crispr-cas9基因编辑载体上，获得重组载体；(2)将重组载体转入农杆菌感受态细胞中，利用农杆菌介导侵染水稻愈伤组织，培养获得水稻植株；将水稻植株移栽至基质中，继续培养至开花结穗时期，筛选出只开花不结穗的植株即为所述隐性核不育水稻种质；(3)获得的隐性核不育水稻种质利用稻桩进行无性繁殖保存。2.根据权利要求1所述的一种隐性核不育水稻种质的构建方法，其特征在于，构建获得的隐性核不育水稻种质的ostkpr1基因序列经crispr-cas9技术编辑后，具有如seq id no.1所示的核苷酸序列，为水稻ostkpr1基因的截短突变体。3.根据权利要求1所述的一种隐性核不育水稻种质的构建方法，其特征在于，所述sgrna的核苷酸序列为：caaggacaggcgatgcagtg。4.一种如权利要求1-3任一所述的隐性核不育水稻种质的构建方法在水稻三系不育系的选育中的应用。5.根据权利要求4所述的隐性核不育水稻种质的构建方法在水稻三系不育系的选育中的应用，其特征在于，水稻三系不育系的选育方法，包括以下步骤：(1)以所述隐性核不育水稻种质作为母本，选择多种常规水稻三系恢复系为父本，分别进行杂交；(2)杂交后代经自交后，选择花粉不育且与父本农艺性状接近的单株为母本，与父本回交，回交后代再自交，选择花粉不育且与父本农艺性状接近的单株，经多次回交和自交后，再次回交，至bcmf1时，构建获得含有父本农艺性状接近的多种花粉不育系导入系；(3)将花粉不育系导入系经自交分离，获得多种不育单株，利用多种不育单株测定待选育水稻品种保持系的配合力，具体为：以多种不育单株为母本，以待选育水稻品种保持系为父本分别进行测交，获得的f1代测定配合力，淘汰配合力差的保持系株系，再利用常规方法选育获得不育系。6.一种如权利要求1-3任一所述的隐性核不育水稻种质的构建方法在在创制优异水稻种质中的应用。7.根据权利要求6所述的一种隐性核不育水稻种质的构建方法在在创制优异水稻种质中的应用，其特征在于，创制优异水稻种质的方法，包括以下步骤：(1)以所述隐性核不育水稻种质作为母本，选择多个含有不同优异遗传性状的水稻品种为父本，将母本与父本杂交，混合授粉，得f1代；(2)将f1代自交，得f2代，选择综合农艺性状优良且花粉不育的f2代单株为母本，继续与多个含有不同优异遗传形状的水稻品种作为父本回交，混合授粉，得bc1f1代，重复上述步骤，得bc2f1代，bc2f1代经自交，得bc2f2代；(3)bc2f2代中，选择综合农艺性状优良的单株，利用多个步骤(1)父本中含有的优异遗传性状调控基因为分子标记基因，进行分子标记检测，筛选纯合的含有优异遗传性状调控基因的单株；(4)将筛选的bc2f2代单株连续自交，筛选综合农艺性状优良的后代，至bc2fn代，n>6，
即得到含有多个优异遗传性状的优异水稻种质。
技术总结
本发明公开了一种隐性核不育水稻种质的构建方法及其应用，涉及水稻育种技术领域，以如SEQIDNO.3所示的水稻OsTKPR1基因序列为模板，根据CRISPR-Cas9技术要求，以所述序列的第3434位点为靶位点，根据该靶位点及其上下游序列设计sgRNA序列，将含有编码所述sgRNA序列的DNA片段连接至CRISPR-Cas9基因编辑载体上，获得重组载体。本发明利用常规CRISPR-Cas9基因定点突变技术对水稻OsTKPR1基因进行定向改造，获得突变体植株作为水稻隐性核不育植株，利用该水稻隐性核不育植株可以完成高配合水稻三系不育系的快速选育和优异水稻种质的快速创制，大大加速优异水稻品种的构建周期，在育种方面具有重要应用价值。育种方面具有重要应用价值。育种方面具有重要应用价值。
技术研发人员：周坤能 李泽福 刘峰 夏加发 杨慧婷 云鹏 王元垒 马廷臣 张彩娟
受保护的技术使用者：南京农业大学
技术研发日：2022.06.10
技术公布日：2022/9/27