circNCAPH的应用、银屑病诊断/或者治疗制剂

本发明属于银屑病诊断与治疗，具体涉及circncaph的应用、银屑病诊断/或者治疗制剂。

背景技术：

1、银屑病是一种世界范围内常见的慢性炎症性皮肤病，任何年龄都可发病，全球有6000多万人口受到影响，主要表现为正常皮肤上出现边界清晰、覆有银白色鳞屑的红斑，伴有明显瘙痒。目前银屑病的病因尚不明确，且易复发，难以彻底治愈，过去三十多年来，银屑病的发病率一直在上升，给个人和社会带来了极大的负担。

2、作为皮肤表皮的主要成分，角质形成细胞在银屑病的发病过程中也起到了非常重要的作用。角质形成细胞过度增殖和异常分化是银屑病最主要的病理特点。正常情况下角质形成细胞从基底层移行至角质形成细胞表面并脱落的时间约28天，而银屑病患者这一时间缩短为3-4天。此外，角质形成细胞的凋亡异常也参与了银屑病的发病。

3、环状rna(circular rna,circrna)是一类新的具有调控功能的非编码rna，具有闭合环状结构，大量存在于真核转录组中。circrna由前体rna(pre-mrna)反向剪切，形成没有5’端帽子和3’端polya尾，共价键结合的环形转录本。大部分的环状rna是由外显子序列构成，在不同的物种中具有保守性，同时存在组织及不同发育阶段的表达特异性。由于环状rna对核酸酶不敏感，所以比线性rna更为稳定，这使得环状rna在作为新型临床诊断标记物的开发应用上具有明显优势。

4、随着高通量测序技术的发展，越来越多的circrna分子被发现，circrna在开发新的诊断和治疗方法方面显示出了巨大的潜力。我们在银屑病皮损和正常人皮肤组织的circrna测序中检测到长度379bp的circncaph，通过试验发现该circrna与银屑病的发生发展存在关联，有可能作为银屑病的诊断标记物，以及治疗的靶点。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明的目的是针对以上要解决的技术问题，提供检测circncaph含量的试剂在制备银屑病诊断制剂中的应用，以及抑制circncaph表达的试剂在制备银屑病治疗制剂中的应用，还有相应的诊断和治疗制剂。

2、为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：

3、本发明提供了检测circncaph表达量的试剂在制备诊断银屑病的产品中的应用；所述的circncaph的序列如seq no.1所示。

4、进一步地，所述检测circncaph表达量的试剂包括针对circncaph环化位点的qrt-pcr检测试剂，

5、qrt-pcr引物序列为

6、上游引物：5’-aaaccaggcaccaggggaa-3’如seq no.2所示；

7、下游引物：5’-tctgattgggaaggagcatcttg-3’，如seq no.3所示。

8、本发明还提供了一种银屑病诊断试剂盒，包括：上述的检测circncaph表达量的试剂。

9、本发明提供了抑制circncaph表达的试剂在制备银屑病治疗制剂中的应用，

10、所述的circncaph的序列如seq no.1所示。

11、进一步地，所述的抑制环状rna circncaph表达的试剂包括sirna。

12、更进一步地，所述的sirna如下：

13、正义链(5’-3’)aaccaggcaccaggggaagaatt，如seq no.4所示。

14、反义链(5’-3’)uucuuccccuggugccugguutt，如seq no.5所示。

15、所述的抑制circncaph的试剂包括阴性对照：

16、正义链(5’-3’)uucuccgaacgugucacgutt，如seq no.6所示；

17、反义链(5’-3’)acgugacacguucggagaatt，如seq no.7所示。

18、本发明提供了一种银屑病治疗制剂，包括所述的抑制环状rna circncaph表达的试剂。但本发明不仅仅限于上述提供的sirna和阴性对照。

19、银屑病治疗制剂还包括转染sirna所需的试剂。

20、本发明提供了所述的抑制circncaph表达的试剂在制备减慢角质形成细胞增殖及促进角质形成细胞凋亡的制剂；所述的circncaph的序列如seq no.1所示。

21、本发明还提供了一种减慢角质形成细胞增殖的制剂，包括上述的抑制

22、环状rna circncaph表达的试剂。

23、本发明所述的环状rna circncaph的序列如下：

24、ggaagaaatgatttcccttggggatggagacatcaggaccatgtgcccccttctgtctatgaaacctggagaatattcttatttcagtcctcggaccatgtcgatgtgggctggcccggatcactggcgctttaggcctcgacgcaaacaagatgctccttcccaatcagaaaacaaaaagaagagtacaaaaaaagattttgaaattgactttgaagatgatattgactttgatgtatattttagaaaaacaaaggctgctactattctgaccaagtccactttggagaaccagaattggagagctaccacccttcctacagatttcaactacaatgttgacactctggtccagcttcacctcaaaccaggcaccagg

25、本发明通过qrt-pcr检测到circncaph在银屑病皮损中异常高表达，抑制其在角质形成细胞中的表达可抑制细胞增殖及促进细胞凋亡。上述发现提示，circncaph有望作为银屑病的诊断标记物以及治疗新靶点。

技术特征：

1.一种银屑病诊断试剂盒，包括：检测circncaph表达量的试剂；所述的circncaph的序列如seq no.1所示。

2.根据权利要求1所述的银屑病诊断试剂盒，其特征在于，所述检测circncaph表达量的试剂包括针对circncaph环化位点的qrt-pcr检测试剂；

3.检测circncaph表达量的试剂在制备诊断银屑病产品中的应用；所述的circncaph的序列如seq no.1所示。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述检测circncaph表达量的试剂包括针对circncaph环化位点的qrt-pcr检测试剂；

5.一种银屑病治疗制剂，包括所述的抑制环状rna circncaph表达的试剂；所述的circncaph的序列如seq no.1所示。

6.根据权利要求5所述的银屑病治疗制剂，其特征在于，所述的抑制环状rnacircncaph表达的试剂包括sirna；

7.抑制circncaph表达的试剂在制备银屑病治疗制剂中的应用，所述的circncaph的序列如seq no.1所示。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述的抑制环状rna circncaph表达的试剂包括sirna；

9.抑制circncaph表达的试剂在制备减慢角质形成细胞增殖及促进角质形成细胞凋亡的制剂；所述的circncaph的序列如seq no.1所示。

10.一种减慢角质形成细胞增殖及促进角质形成细胞凋亡的制剂，包括抑制环状rnacircncaph表达的试剂；所述的circncaph的序列如seq no.1所示。

技术总结
本发明属于银屑病诊断与治疗技术领域，具体涉及circNCAPH的应用、银屑病诊断/或者治疗制剂。通过qRT‑PCR检测到circNCAPH在银屑病皮损中异常高表达，提示，circNCAPH有望作为银屑病的诊断标记物。由于siRNA具有良好的沉默效果，本发明在确保circNCAPH被干扰掉后，在沉默了circNCAPH的角质形成细胞HaCaT细胞系中进行CCK8实验和凋亡实验，相对于NC组，siRNA组细胞的增殖速度明显减慢，晚期凋亡细胞比例明显增加，即沉默circNCAPH抑制了角质形成细胞的增殖。即抑制circNCAPH能治疗银屑病，具有深远的临床意义和重要的推广应用前景。

技术研发人员：李思颖,朱艳珊,武瑞芳,沈玮云,张鹏,苏玉文,邓敏,张甦菡,汤归绍,罗鑫,匡琪琪
受保护的技术使用者：中南大学湘雅二医院
技术研发日：
技术公布日：2024/1/12