经修饰的DAAO酶及其应用的制作方法

文档序号:34613151发布日期:2023-06-29 09:09阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种经修饰的d-氨基酸氧化酶(daao),

2.权利要求1的经修饰的daao,其中位置54取代为i或v,位置58取代为h,位置213取代为s。

3.权利要求1或2的经修饰的daao,其中所述经修饰的daao还包含位置210和/或221的氨基酸取代,其中位置210取代为a、g或p,位置p221取代为r。

4.权利要求3的经修饰的daao,其中位置210取代为a。

5.一种经修饰的daao,与其野生型daao相比,包含位置54、58、213和221的氨基酸取代,所述位置参照seq id no:2进行编号,其中位置54取代为v,位置58取代为q,位置213取代为s,位置221取代为r,且其中所述经修饰的daao具有催化d-草铵膦氧化为ppo的活性。

6.权利要求5的经修饰的daao,其中所述经修饰的daao还包含位置210和/或56的氨基酸取代,位置56取代为n,位置210取代为a。

7.权利要求1-6任一项的经修饰的daao,其中所述经修饰的daao还包含选自2、81、97、193、194、237、265、273、274、300、317、319、337和342的一或多个位置的取代,其中位置2取代为c或s,位置81取代为y,位置97取代为v,位置193取代为t,位置194取代为v或c,位置237取代为v,位置265取代为c,位置273取代为d,位置274取代为e,位置300取代为s或t,位置317取代为y或w,位置319取代为k,位置337取代为s,位置342取代为s或h。

8.权利要求1-6任一项的经修饰的daao,其中所述经修饰的daao还包含选自194、237、265、273、274、300、317和319的一或多个位置的取代,其中位置194取代为v或c,位置237取代为v,位置265取代为c,位置273取代为d,位置274取代为e,位置300取代为s,位置317取代为y或w,位置319取代为k。

9.权利要求1-6任一项的经修饰的daao,其中所述经修饰的daao还包含选自位置2、81、97、193、300、337和342的一或多个位置的取代,其中位置2取代为c或s,位置81取代为y,位置97取代为v,位置193取代为t,位置300取代为t,位置337取代为s,位置342取代为s或h。

10.一种经修饰的daao,包含seq id no:5-86之一的氨基酸序列或由seq id no:5-86之一的氨基酸序列组成,或者所述经修饰的daao与seq id no:5-30和66-76之一相比,在除位置54、56、58、194、210、213、221、237、265、273、274、300、317和319之外的位置包含1-10个氨基酸取代,与seq id no:31-57和77-86之一相比,在除位置2、54、56、58、81、97、193、210、213、221、300、337和342之外的位置包含1-10个氨基酸取代,或与seq id no:58-65之一相比,在除位置54、56、58、210、213和221之外的位置包含1-10个氨基酸取代,其中所述经修饰的daao具有催化d-草铵膦氧化为ppo的活性。

11.一种多核苷酸,编码权利要求1-10任一项的经修饰的daao。

12.一种表达载体,包含权利要求11的多核苷酸。

13.一种宿主细胞,包含权利要求1-10任一项的经修饰的daao、权利要求11多核苷酸或权利要求12的载体。

14.一种生产l-草铵膦的方法,包括使1-10任一项的经修饰的daao或权利要求13的宿主细胞与d-草铵膦接触。


技术总结
本发明涉及经修饰的D‑氨基酸氧化酶(DAAO)。具体而言,本发明的经修饰的DAAO具有催化D草铵膦氧化为PPO的活性。此外,本发明的经修饰的DAAO与SEQ ID NO:4相比具有提高的催化D草铵膦氧化为PPO的活性和/或提高的稳定性。本发明还涉及编码本发明的经修饰的DAAO的多核苷酸、表达本发明的经修饰的DAAO的载体和宿主细胞以及使用本发明的经修饰的DAAO和宿主细胞生产L‑草铵膦的方法。

技术研发人员:谢新开,徐伟,范俊英
受保护的技术使用者:湖南利尔生物科技有限公司
技术研发日:
技术公布日:2024/1/13
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