金黄紫堇碱和千金藤啶碱的氘代衍生物及其制备方法与流程

1.本发明涉及金黄紫堇碱和千金藤啶碱的氘代衍生物及其制备方法，以及其用于治疗疾病的用途。
2.发明背景
3.目前许多药物具有不佳的吸收、分布、代谢和/或排泄(adme)性质，这阻碍其更广泛的使用或限制其在某些适应症中的使用。adme性质不佳也为临床试验中候选药物失败的主要原因。尽管在某些情况下可采用制剂技术和前药策略来改善某些adme性质，但是这些方法通常无法解决许多药物和候选药物存在的基础性adme问题。
4.用于改善药物代谢性质的潜在有吸引力的策略为氘修饰。在该方法中，试图通过用氘原子置换一个或多个氢原子来减缓cyp介导的药物代谢或减少不期望的代谢物形成。氘是一种安全、稳定、非放射性的氢同位素。与氢相比，氘与碳形成更强的键。在选定情况下，由氘赋予的键强度增加可积极地影响药物的adme性质，产生改善的药效、安全性和/或耐受性的可能性。同时，因为氘的大小和形状与氢基本相同，所以与仅含有氢的初始化学实体相比，用氘置换氢预计不会影响药物的生物化学效力和选择性。


技术实现要素：

5.在一个方面，本发明提供了一种氘代化合物，其具有下式i所示的结构：
[0006][0007]
其中r1和r2独立地选自h和c(y4)3，y1、y2、y3和y4独立地选自h或d，且所示化合物中至少一个氢被氘取代。
[0008]
在一个实施方式中，r1为h和r2为ch3或cd3，或者r1为ch3和r2为h或cd3。
[0009]
在一个实施方式中，所述化合物包含1-8个氘代。
[0010]
在一个实施方式中，所述化合物选自：
[0011]
[0012]
[0013][0014]
在另一个方面，本发明涉及包含上述氘代化合物的药物组合物。
[0015]
在另一个方面，涉及本发明的化合物在制备用于治疗精神分裂症、焦虑、抑郁、分裂情感性精神病、自闭症、儿童抽动秽语综合症、注意缺陷综合症、疼痛(包括神经病理性疼痛或血管性疼痛)、失眠、细菌感染、病毒性感染的药物中的用途。
具体实施方式
[0016]
以下是为帮助本领域技术人员实施本发明而提供的详细描述。本领域普通技术人员可以在不脱离本公开的精神或范围的情况下对本文所述的实施方案进行修改和变化。
[0017]
非另有定义，本文中使用的所有科技术语具有与本公开所属领域的普通技术人员通常理解的相同的含义。说明书中使用的术语仅用于描述特定实施方案，并不旨在限制本公开。
[0018]
在提供值的范围的情况下，应当理解，除非上下文另有明确规定，在该范围的上限和下限之间的每一个中间值(至该下限单位的十分之一)以及在该所述范围内的任何其他
阐述或中间值包含在本公开中(例如，在包含多个碳原子的组的情况下，提供落入该范围内的每一个碳原子数)。本公开也设想，这些较小范围的上限和下限可独立地包含在较小范围内，但受限于所述范围内的任何明确排除的限制。当所述范围包括一个或两个限制时，本公开中也包括排除这两个限制之一或两者的范围。
[0019]
以下术语用于描述本公开。除非另有定义，本技术中使用的所有科技术语具有与本公开所属领域的普通技术人员通常理解的相同的含义。说明书中使用的术语仅用于描述特定实施方案，并不旨在限制本公开。
[0020]
如本文在说明书和权利要求书中使用的，关于本文中使用的物质的术语“药学上可接受的”是指在合理的医学判断范围内适合用于与人和低等动物的组织接触而没有过度毒性、刺激、过敏反应等的物质，其与合理的利益/风险比相称，并且当该物质用于药物组合物中时对预期用途是有效的。
[0021]
如本文在说明书和权利要求书中使用的，术语“治疗”、“处理”和“疗法”指疾病或障碍和/或其至少一种伴随症状的减轻。
[0022]
应该认识到，在合成化合物中发生天然同位素丰度的一些变化，这取决于合成中使用的化学材料的来源。因此，依伐卡托的制备将固有地含有少量氘化同位素体(isotopologue)。尽管存在这种变化，但是天然丰富稳定的氢和碳同位素的浓度与本发明化合物的稳定同位素取代程度相比小且不重要。参见例如wada，e等人，seikagaku,1994，66:15；gannes，lz等人，comp biochem physiol mol integr physiol,1998，119:725。
[0023]“d”和“d”两者指的是氘。“立体异构体”指的是对映体和非对映体两者。
[0024]“取代”指的是用相应数目的氘原子置换一个或多个氢原子。
[0025]
在本发明的化合物中，没有具体标示为特定同位素的任何原子意指表示所述原子的任何稳定同位素。除非另外说明，当位置被具体标示为“h”或“氢”时，该位置被理解为以其天然丰度同位素组成具有氢。同样除非另外说明，当位置被具体标示为“d”或“氘”时，该位置被理解为以氘的天然丰度(其为0.015％)的至少3000倍大的丰度具有氘(即掺入至少45％的氘)。
[0026]
本发明还提供本发明的化合物的盐。本发明化合物的盐在酸和化合物的碱性基团(比如氨基官能团)之间，或者在碱和化合物的酸性基团(比如羧基官能团)之间形成。根据另一个实施方案，化合物为药学上可接受的酸加成盐。
[0027]
通常用于形成药学上可接受的盐的酸包括无机酸如盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸和磷酸，以及有机酸比如对甲苯磺酸、水杨酸、酒石酸、酸式酒石酸、抗坏血酸、马来酸、苯磺酸、富马酸、葡糖酸、葡糖醛酸、甲酸、谷氨酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、乳酸、草酸、对溴苯磺酸、碳酸、琥珀酸、枸橼酸、苯甲酸和乙酸，以及相关的无机和有机酸。因此这种药学上可接受的盐包括硫酸盐、焦硫酸盐、硫酸氢盐、亚硫酸盐、亚硫酸氢盐、磷酸盐、磷酸一氢盐、磷酸二氢盐、偏磷酸盐、焦磷酸盐、氯化物、溴化物、碘化物、乙酸盐、丙酸盐，癸酸盐、辛酸盐、丙烯酸盐、甲酸盐、异丁酸盐、癸酸盐、庚酸盐、丙炔酸盐、草酸盐、丙二酸盐、琥珀酸盐、辛二酸盐、癸二酸盐、富马酸盐、马来酸盐、丁炔-1,4-二酸盐，己炔-1,6-二酸盐、苯甲酸盐、氯苯甲酸盐、甲基苯甲酸盐、二硝基苯甲酸盐、羟基苯甲酸盐、甲氧基苯甲酸盐、邻苯二甲酸盐、对苯二甲酸盐、磺酸盐、二甲苯磺酸盐、苯乙酸盐、苯丙酸盐、苯丁酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、羟基丁酸盐、乙醇酸盐、马来酸盐、酒石酸盐、甲磺酸盐、丙磺酸盐、萘-1-磺酸盐、萘-2-磺酸
盐、扁桃酸盐和其他盐。在一个实施方案中，药学上可接受的酸加成盐包括与矿物酸比如盐酸和氢溴酸形成的那些盐，并且尤其是与有机酸比如马来酸形成的那些盐。
[0028]
本发明的药物以已知的方法制备并且制备为适合的剂量、使用与期望的应用类型相对应的通常的固体或液体赋形剂或稀释剂和通常使用的药学工业佐剂。优选的制备物包括适合于口服应用的给药形式。这种给药形式包括例如片剂、含片、薄膜片、糖衣丸、胶囊、丸剂、粉剂、溶液、气雾剂、或混悬液或缓释形式。
[0029]
给出以下实施例用于更详细地阐明本发明，但是不应理解为限制本发明的范围。
[0030]
制备实施例
[0031]
制备实施例1
[0032]
化合物01-0q和01-0h的合成
[0033][0034]
合成路线1
[0035][0036]
实验部分
[0037]
1. 2-(3-溴-4-羟基苯基)乙酸甲酯
[0038][0039]
氮气保护下，在0℃将液溴(3.30ml,64.41mmol)分批加入到2-(4-羟基苯基)乙酸甲酯(10.00g,60.18mmol)的二氯甲烷溶液中并搅拌0.5小时。该反应恢复至室温后继续搅拌2小时。在减压下蒸干反应液。用水(100ml)稀释残留物后用二氯甲烷(3x100ml)萃取。有机相合并后，用饱和氯化钠水溶液(2x150ml)洗涤，无水硫酸钠干燥并过滤。在减压下将滤液蒸干，得到淡黄色的油状2-(3-溴-4-羟基苯基)乙酸甲酯(14.7g,99％)。该产物没有进一步纯化，直接用于下一步反应。ms esi计算值c9h9bro3[m-h]-,243.0,245.0,实验测得243.1,245.1；1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ10.15(s,1h),7.39(d,j＝2.1hz,1h),7.09-7.06(m,1h),6.90(d,j＝8.3hz,1h),3.61(s,3h),3.58(s,2h)。
[0040]
2. 2-(3-溴-4-(甲氧基-d3)苯基)乙酸甲酯
[0041][0042]
氮气保护下，在室温下将氘代碘甲烷(19.52g,134.66mmol)加入到2-(3-溴-4-羟基苯基)乙酸甲酯(30.00g,122.41mmol)和碳酸钾(25.38g,183.65mmol)的丙酮(300ml)悬浊液中。该反应在60℃搅拌16小时。在减压下蒸干有机溶剂。用水(300ml)稀释残留物并用乙酸乙酯(3x300ml)萃取。合并有机相，用饱和氯化钠水溶液(2x500ml)洗涤，无水硫酸钠干燥并过滤。减压蒸干滤液得到淡黄色的油状2-(3-溴-4-(甲氧基-d3)苯基)乙酸甲酯(32.00g,99％)。该产物没有进一步纯化，直接用于下一步反应。ms esi计算值c
10
h8d3bro3[m+h]
+
,262.0,264.0,实验测得262.0,264.0；1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ7.50(d,j＝2.1hz,1h),7.26-7.24(m,1h),7.06(d,j＝8.4hz,1h),3.64(s,2h),3.62(s,3h)。
[0043]
3. 2-(3-羟基-4-(甲氧基-d3)苯基)乙酸
[0044][0045]
将双(8-喹啉酸)铜(ii)(2.01g,5.72mmol)加入到2-(3-溴-4-(甲氧基-d3)苯基)乙酸甲酯(10.00g,38.15mmol)的30％氢氧化钠(60ml)水溶液中。氮气保护下，反应在120℃搅拌16小时。反应液冷却至室温后用浓盐酸中和。过滤反应液，用1n盐酸将滤液的ph值调至2后再用乙酸乙酯(3x500ml)萃取。合并有机相，用饱和氯化钠水溶液(2x300ml)洗涤，无水硫酸钠干燥并过滤。在减压下将滤液蒸干，得到黄色的2-(3-羟基-4-(甲氧基-d3)苯基)乙酸(6.60g,93％)固体。该产物没有进一步纯化，直接用于下一步反应。ms esi计算值c9h7d3o4[m-h]-,184.1,实验测得184.1；1h nmr(400mhz,cdcl3)δ6.89(d,j＝2.1hz,1h),6.83(d,j＝8.2hz,1h),6.82-6.76(m,1h),5.63(s,1h),3.58(s,2h)。
[0046]
4. 8-羟基-7-(甲氧基-d3)异色-3-酮
nmr(400mhz,cdcl3)δ7.97(d,j＝13.6hz,1h),7.54(d,j＝13.6hz,1h),7.48-7.34(m,5h),7.14-7.11(m,1h),7.05(d,j＝2.1hz,1h),6.95(d,j＝8.3hz,1h),5.25(s,2h),3.96(s,3h)。
[0055]
7. 2-(4-(苄氧基)-3-甲氧基苯基)乙烷-1-胺
[0056][0057]
氮气保护下，在0℃下将(e)-1-(苄氧基)-2-甲氧基-4-(2-硝基乙烯基)苯(20.00g,70.1mmol)的四氢呋喃(40ml)溶液加入到四氢锂铝(13.30g,350.4mmol)的四氢呋喃(60ml)悬浊液中。该反应在0℃搅拌1小时后在室温下搅拌0.5小时，然后在60℃下继续搅拌16小时。将反应液冷却至0℃，逐滴加入水(13.30ml)后依次慢慢加入15％的naoh水溶液(13.30ml)和水(40ml)。将反应恢复至室温后继续搅拌0.5小时。用乙酸乙酯(3x100ml)萃取反应混合液。合并有机相，无水硫酸镁干燥并过滤。滤液在减压下蒸干，得到暗黄色的油状2-(4-(苄氧基)-3-甲氧基苯基)乙烷-1-胺(14g,粗品)。该产物没有进一步纯化，直接用于下一步反应。ms esi计算值c
16h19
no2[m+h]
+
,258.1,实验测得258.1；1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ7.47-7.34(m,5h),6.96(d,j＝8.1hz,1h),6.88(d,j＝2.0hz,1h),6.74-6.71(m,1h),5.06(s,2h),3.78(s,3h),2.95-2.92(m,2h),2.76-2.72(m,2h)。
[0058]
8. 2-(3-(苄氧基)-2-(羟甲基)-4-(甲氧基-d3)苯基)-n-(4-(苄氧基)-3-甲氧基苯乙基)乙酰胺
[0059][0060]
室温下，将2-(4-(苄氧基)-3-甲氧基苯基)乙烷-1-胺(3.36g,13.05mmol)加入到8-(苄氧基)-7-(甲氧基-d3)异色-3-酮(2.50g,8.70mmol)的乙醇(30ml)溶液中。氮气保护下，该反应在85℃下搅拌16小时。在减压下蒸干反应液。残留物用硅胶柱色谱层析法纯化，洗脱剂为石油醚/(乙酸乙酯:乙醇(体积比为3:1))(2/1)。将包含产物的馏分收集减压蒸干，得到纯白色的2-(3-(苄氧基)-2-(羟甲基)-4-(甲氧基-d3)苯基)-n-(4-(苄氧基)-3-甲氧基苯乙基)乙酰胺(3.1g,65％)固体。ms esi计算值c
33h32
d3no6[m+h]
+
,545.3,实验测得545.4；1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.21-8.17(m,1h),7.53-7.47(m,2h),7.47-7.30(m,9h),6.98-6.94(m,2h),6.92(d,j＝8.2hz,1h),6.82(d,j＝2.0hz,1h),6.66(dd,j＝8.2,2.0hz,1h),5.04(s,2h),4.93(s,2h),4.54(d,j＝5.8hz,2h),3.75(s,3h),3.51(s,2h),3.31-3.23(m,2h),2.67-2.60(m,2h)。
[0061]
9. 2-(苄氧基)-6-(2-((4-(苄氧基)-3-甲氧基苯乙基)氨基)-2-氧乙基)-3-(甲氧基-d3)乙酸苄酯
[0062][0063]
氮气保护下，将乙酰氯(0.35ml,4.51mmol)在0℃加入到2-(3-(苄氧基)-2-(羟甲基)-4-(甲氧基-d3)苯基)-n-(4-(苄氧基)-3-甲氧基苯乙基)乙酰胺(1.80g,3.31mmol)和4-二甲氨基吡啶(0.61g,4.96mmol)的二氯甲烷(20ml)溶液中。该反应在室温下搅拌1小时。反应用水(30ml)和盐酸(5ml,1n)在室温下淬灭。混合液用二氯甲烷(2x100ml)萃取。合并有机相，饱和氯化钠水溶液(3x100ml)洗涤，无水硫酸钠干燥并过滤。滤液在减压下蒸干。残留物用硅胶柱色谱层析法纯化，洗脱剂石油醚/(乙酸乙酯:乙醇(体积比为3:1))(2/1)。将包含产物的馏分减压蒸干，得到黄色的2-(苄氧基)-6-(2-((4-(苄氧基)-3-甲氧基苯乙基)氨基)-2-氧乙基)-3-(甲氧基-d3)乙酸苄酯(1.85g,95％)固体。ms esi计算值c
35h34
d3no7[m+h]
+
,587.3,实验测得587.5；1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ7.93-7.90(m,1h),7.46-7.29(m,10h),7.06(d,j＝8.5hz,1h),6.99(d,j＝8.5hz,1h),6.92(d,j＝8.2hz,1h),6.82(d,j＝2.0hz,1h),6.67-6.64(m,1h),5.10(s,2h),5.04(s,2h),4.95(s,2h),3.75(s,3h),3.43(s,2h),3.28-3.23(m,2h),2.64(t,j＝7.3hz,2h),1.93(s,3h)。
[0064]
10. 2-(苄氧基)-6-((7-(苄氧基)-6-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-1-基)甲基)-3-(甲氧基-d3)乙酸苄酯
[0065][0066]
氮气保护下，将三氯氧磷(2.86ml,18.65mmol)在室温下加入到2-(苄氧基)-6-(2-((4-(苄氧基)-3-甲氧基苯乙基)氨基)-2-氧乙基)-3-(甲氧基-d3)乙酸苄酯(3.00g,5.11mmol)的乙腈(50ml)溶液中。该反应在85℃搅拌1小时。反应液在减压下蒸干。用二氯甲烷(200ml)溶解残留物并分别用饱和碳酸氢钠水溶液(200ml)和饱和氯化钠水溶液(3x100ml)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥并过滤。滤液在减压下蒸干。残留物用硅胶柱色谱层析法纯化，洗脱剂石油醚/(乙酸乙酯:乙醇(体积比为3:1))(1/1)。将包含产物的馏分收集减压蒸干，得到黄色的2-(苄氧基)-6-((7-(苄氧基)-6-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-1-基)甲基)-3-(甲氧基-d3)乙酸苄酯(2.19g,75％)固体。ms esi计算值c
35h32
d3no6[m+h]
+
,569.3,实验测得569.4；1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ7.43-7.30(m,10h),7.22(s,1h),6.97(d,j＝8.5hz,1h),6.90(s,1h),6.86(d,j＝8.5hz,1h),5.10(s,2h),5.04(s,2h),4.94(s,2h),4.01-3.98(m,2h),3.81(s,3h),3.49(t,j＝7.5hz,2h),2.57-2.55(m,2h),1.90(s,3h)。
[0067]
11. 2-(苄氧基)-6-((7-(苄氧基)-6-甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-基)甲基)-3-(甲氧基-d3)乙酸苄酯
[0068][0069]
氮气保护下，将三乙胺(6.00ml,43.17mmol)在0℃加入到无水甲酸(15.00ml,397.61mmol)中。然后将2-(苄氧基)-6-((7-(苄氧基)-6-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-1-基)甲基)-3-(甲氧基-d3)乙酸苄酯(1.80g,3.17mmol)和氯{[(1r,2r)-(-)-2-氨-1,2-二苯乙基](4-甲苯磺酰)氨}(p-异丙基甲苯)钌(ii)(rucl[(r,r)-tsdpen](p-cymene),0.72g,1.13mmol)的n,n-二甲基甲酰胺(18ml)溶液在0℃加入到上面的混合液中。该反应在室温下搅拌24小时。用饱和碳酸氢钠水溶液将反应液的ph值调至8。用乙酸乙酯(3x200ml)萃取反应混合液。有机相合并，用饱和氯化钠水溶液(2x200ml)洗涤，无水硫酸钠干燥并过滤。滤液在减压下蒸干。残留物用硅胶柱色谱层析法纯化，洗脱剂石油醚/(乙酸乙酯:乙醇(体积比为3:1))(1/1)。将包含产物的馏分收集减压蒸干，得到淡黄色的油状2-(苄氧基)-6-((7-(苄氧基)-6-甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-基)甲基)-3-(甲氧基-d3)乙酸苄酯(1.24g,68％)。ms esi计算值c
35h34
d3no6[m+h]
+
,571.3,实验测得571.4；1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.51-7.29(m,10h),7.03-6.93(m,2h),6.64(s,1h),6.57(s,1h),5.28(d,j＝11.6hz,1h),5.17(d,j＝11.6hz,1h),5.08-5.06(m,4h),4.10-4.05(m,1h),3.88(s,3h),3.30-3.22(m,1h),3.15-3.07(m,1h),3.05-3.01(m,1h),2.96-2.90(m,1h),2.84-2.78(m,2h),1.97(s,3h)。
[0070]
12.(2-(苄氧基)-6-((7-(苄氧基)-6-甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-基)甲基)-3-(甲氧基-d3)苯基)甲醇
[0071][0072]
室温下，将氢氧化钠(480.0mg,12.00mmol)和水(4.00ml)加入到2-(苄氧基)-6-((7-(苄氧基)-6-甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-基)甲基)-3-(甲氧基-d3)乙酸苄酯(1.24g,2.17mmol)的乙醇(10ml)溶液中。该反应在室温下搅拌1小时。将水(40ml)加入上面的混合液后继续搅拌15分钟。反应液过滤，用正己烷(30ml)和乙醚(50ml)洗涤滤饼。滤饼在空气中干燥后，得到暗灰色(2-(苄氧基)-6-((7-(苄氧基)-6-甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-基)甲基)-3-(甲氧基-d3)苯基)甲醇(0.96g,84％)固体。ms esi计算值c
33h32
d3no5[m+h]
+
,529.3,实验测得529.4；1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.60-7.53(m,2h),7.53-7.47(m,2h),7.45-7.37(m,5h),7.36-7.31(m,1h),6.96-6.85(m,2h),6.83(s,1h),6.64(s,1h),5.26-5.15(m,2h),5.13(d,j＝10.7hz,1h),5.06(d,j＝10.7hz,1h),4.88(d,j＝11.6hz,1h),4.46(d,j＝11.7hz,1h),4.09-4.01(m,1h),3.91(s,3h),3.12-3.00(m,2h),2.96-2.87(m,2h),2.85-2.73(m,1h),2.66-2.57(m,1h)。
[0073]
13和14. 2,9-双(苄氧基)-3-甲氧基-10-(甲氧基-d3)-5,8,13,13a-四氢-6h-异
喹啉[3,2-a]异喹啉
[0074][0075]
氮气保护下，将氯化亚砜(0.79ml,10.89mmol)在0℃加入到(2-(苄氧基)-6-((7-(苄氧基)-6-甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-基)甲基)-3-(甲氧基-d3)苯基)甲醇(0.96g,1.82mmol)的二氯甲烷(15ml)溶液中。该反应在室温下搅拌1小时。将饱和碳酸氢钠水溶液(30ml)在0℃加入上面的混合液后再搅拌1小时。用二氯甲烷(3x100ml)萃取反应混合液。合并有机相，用饱和氯化钠水溶液(2x100ml)洗涤，无水硫酸钠干燥并过滤。滤液在减压下蒸干。残留物用硅胶柱色谱层析法纯化，洗脱剂二氯甲烷/甲醇(15/1)。将包含产物的馏分收集减压蒸干，得到淡黄色2,9-双(苄氧基)-3-甲氧基-10-(甲氧基-d3)-5,8,13,13a-四氢-6h-异喹啉[3,2-a]异喹啉(0.84g,90.5％)固体。ms esi计算值c
33h30
d3no4[m+h]
+
,511.3,实验测得511.4；1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.53-7.45(m,4h),7.45-7.30(m,6h),6.88-6.84(m,2h),6.76(s,1h),6.66(s,1h),5.16(s,2h),5.11(d,j＝11.1hz,1h),5.01(d,j＝11.1hz,1h),4.26-4.17(m,1h),3.90(s,3h),3.49-3.40(m,2h),3.23-3.03(m,3h),2.81-2.51(m,3h)。
[0076]
15. 3-甲氧基-10-(甲氧基-d3)-5,8,13,13a-四氢-6h-异喹啉基[3,2-a]异喹啉-2,9-二醇
[0077][0078]
室温下，将pd(oh)2/c(0.40g,2.85mmol)和甲醇(3ml)加入到2,9-双(苄氧基)-3-甲氧基-10-(甲氧基-d3)-5,8,13,13a-四氢-6h-异喹啉[3,2-a]异喹啉(0.80g,1.57mmol)的乙酸乙酯(12ml)溶液中。反应液用氢气置换3次，在室温下搅拌16小时。反应液过滤，乙酸乙酯(3x20ml)冲洗滤饼。滤液在减压下蒸干，得到粉色3-甲氧基-10-(甲氧基-d3)-5,8,13,13a-四氢-6h-异喹啉基[3,2-a]异喹啉-2,9-二醇(0.40g,77％)固体。ms esi计算值c
19h18
d3no4[m+h]
+
,331.2,实验测得331.1。
[0079]
16.(r)-3-甲氧基-10-(甲氧基-d3)-5,8,13,13a-四氢-6h-异喹啉基[3,2-a]异喹啉-2,9-二醇和(s)-3-甲氧基-10-(甲氧基-d3)-5,8,13,13a-四氢-6h-异喹啉基[3,2-a]异喹啉-2,9-二醇
[0080]
[0081]
外消旋产物(0.5g)用手性高效液相色谱分离，条件如下(色谱柱:chiral art cellulose-sb,2x25cm,5μm；流动相a:正己烷:二氯甲烷＝3:1(外加10mm氨气甲醇溶液)；流动相b:乙醇；流速:20ml/min；等梯度:10％b 13分钟；检测波长：254/220nm；保留时间1:6.595分钟；保留时间2:10.793分钟。前峰收集减压蒸干，得到粉色(r)-或(s)3-甲氧基-10-(甲氧基-d3)-5,8,13,13a-四氢-6h-异喹啉基[3,2-a]异喹啉-2,9-二醇(0.16g,40％)固体。ms esi计算值c
19h18
d3no4[m+h]
+
,331.17,实验测得331.10；1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.66(s,1h),8.56(s,1h),6.78(d,j＝8.2hz,1h),6.70(s,1h),6.64(s,1h),6.59(d,j＝8.3hz,1h),4.01(d,j＝15.7hz,1h),3.75(s,3h),3.38-3.34(m,1h),3.30-3.23(m,1h),3.20-3.12(m,1h),3.11-3.04(m,1h),2.96-2.85(m,1h),2.70-2.41(m,3h)；α＝+305(c＝0.2in meoh)；ee》99％；d3＝99.48％。
[0082]
后峰收集减压蒸干，得到粉色(s)-或(r)-3-甲氧基-10-(甲氧基-d3)-5,8,13,13a-四氢-6h-异喹啉基[3,2-a]异喹啉-2,9-二醇(0.16g,41％)固体。ms esi计算值c
19h18
d3no4[m+h]
+
,331.17,实验测得331.15；1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.66(s,1h),8.56(s,1h),6.79(d,j＝8.2hz,1h),6.70(s,1h),6.65(s,1h),6.59(d,j＝8.3hz,1h),4.01(d,j＝15.7hz,1h),3.75(s,3h),3.38-3.34(m,1h),3.30-3.22(m,1h),3.21-3.12(m,1h),3.12-3.04(m,1h),2.98-2.85(m,1h),2.63-2.40(m,3h)；α＝-308.5(c＝0.2in meoh)；ee》99％；d3＝99.55％。
[0083]
制备实施例2
[0084]
化合物02-0q和02-0h的合成
[0085][0086]
合成路线2
[0087][0088]
实验部分
[0089]
1. 8-羟基-7-甲氧基异色-3-酮
[0090][0091]
以2-(3-羟基-4-甲氧基苯基)乙酸(30.0g,164.68mmol)，苯基硼酸(40.16g,329.35mmol)和多聚甲醛(27.23g,907.67mmol)为原料，按照制备实施例1中第4步的实验操作得到白色的8-羟基-7-甲氧基异色-3-酮(22.8g,71％)固体。ms esi计算值c
10h10
o4[m-h]-,193.1,实验测得193.1；1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.16(s,1h),6.93(d,j＝8.2hz,1h),6.72-6.70(m,1h),5.32(s,2h),3.80(s,3h),3.66(s,2h)。
[0092]
2. 8-(苄氧基)-7-甲氧基异色-3-酮
[0093][0094]
以8-羟基-7-甲氧基异色-3-酮(22.80g,117.41mmol)和溴化苄(24.10g,140.90mmol)为原料，按照制备实施例1中第5步的实验操作得到白色8-(苄氧基)-7-甲氧基异色-3-酮(30.0g,90％)固体。ms esi计算值c
17h16
o4[m+h]
+
,285.1,实验测得285.2；1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ7.46-7.32(m,5h),7.08(d,j＝8.3hz,1h),7.01(d,j＝8.3hz,1h),5.19(s,2h),5.01(s,2h),3.87(s,3h),3.67(s,2h)。
[0095]
3. 4-(苄氧基)-3-(甲氧基-d3)苯甲醛
[0096][0097]
氮气保护下，将氘代碘甲烷(48.90g,337.35mmol)滴加到4-(苄氧基)-3-羟基苯甲醛(70.00g,306.69mmol)和碳酸钾(63.58g,460.03mmol)的丙酮(700.00ml)悬浊液中。该反应在60℃搅拌过夜。反应液过滤。滤液在减压下蒸干。残留物用水(400ml)稀释，乙酸乙酯(2x500ml)萃取。合并有机相，用饱和氯化钠水溶液(2x400ml)洗涤，无水硫酸钠干燥并过滤。滤液在减压下蒸干得到白色4-(苄氧基)-3-(甲氧基-d3)苯甲醛(68.0g,90％)固体。ms esi计算值c
15h11
d3o3[m+h]
+
,246.1,实验测得246.2；1hnmr(400mhz,cdcl3)δ9.84(s,1h),7.48-7.41(m,3h),7.40-7.37(m,3h),7.35-7.29(m,1h),6.99(d,j＝8.2hz,1h),5.25(s,2h)。
[0098]
4.(e)-1-(苄氧基)-2-(甲氧基-d3)-4-(2-硝基乙烯基)苯
[0099][0100]
以4-(苄氧基)-3-(甲氧基-d3)苯甲醛(46.0g,187.53mmol)，硝基甲烷(375ml)和醋酸铵(14.46g,187.53mmol)为原料，按照制备实施例1中第6步的实验操作得到黄色(e)-1-(苄氧基)-2-(甲氧基-d3)-4-(2-硝基乙烯基)苯(35.0g,64.7％)固体。1h nmr(300mhz,cdcl3)δ7.97(d,j＝13.6hz,1h),7.56-7.51(m,1h),7.49-7.31(m,5h),7.14-7.11(m,1h),7.05(d,j＝2.0hz,1h),6.95(d,j＝8.3hz,1h),5.25(s,2h)。
[0101]
5. 2-(4-(苄氧基)-3-(甲氧基-d3)苯基)乙烷-1-胺
[0102][0103]
以(e)-1-(苄氧基)-2-(甲氧基-d3)-4-(2-硝基乙烯基)苯(42.00g,145.67mmol)和四氢锂铝(27.64g,728.36mmol)为原料，按照制备实施例1中第7步的实验操作得到褐色
2-(4-(苄氧基)-3-(甲氧基-d3)苯基)乙烷-1-胺(35.0g,粗产物)油状物。ms esi计算值c
16h16
d3no2[m+h]
+
,261.16,实验测得261.2；1h nmr(300mhz,cdcl3)δ7.48-7.44(m,2h),7.42-7.30(m,3h),6.84(d,j＝8.1hz,1h),6.77(d,j＝2.0hz,1h),6.71-6.68(m,1h),5.16(s,2h),2.97(t,j＝6.8hz,2h),2.71(t,j＝6.8hz,2h)。
[0104]
6. 2-(3-(苄氧基)-2-(羟甲基)-4-甲氧基苯基)-n-(4-(苄氧基)-3-(甲氧基-d3)苯乙基)乙酰胺
[0105][0106]
以8-(苄氧基)-7-甲氧基异色-3-酮(1.70g,5.98mmol)和2-(4-(苄氧基)-3-(甲氧基-d3)苯基)乙烷-1-胺(1.84g,7.07mmol)为原料，按照制备实施例1中第8步的实验操作得到黄色2-(3-(苄氧基)-2-(羟甲基)-4-甲氧基苯基)-n-(4-(苄氧基)-3-(甲氧基-d3)苯乙基)乙酰胺(2.80g,85.9％)油状物。ms esi计算值c
33h32
d3no6[m+h]
+
,545.3,实验测得545.4；1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.50-7.45(m,5h),7.41-7.31(m,5h),6.95(d,j＝8.4hz,1h),6.87(d,j＝8.4hz,1h),6.77(d,j＝8.2hz,1h),6.68(d,j＝2.0hz,1h),6.50-6.48(m,1h),6.11(s,1h),5.14(s,2h),5.09(s,2h),4.62(s,2h),3.91(s,3h),3.53(s,2h),3.47-3.42(m,2h),2.68(t,j＝6.9hz,2h)。
[0107]
7. 2-(苄氧基)-6-(2-((4-(苄氧基)-3-(甲氧基-d3)苯乙基-d3)氨基)-2-氧乙基)-3-甲氧基苄基乙酸酯
[0108][0109]
以2-(3-(苄氧基)-2-(羟甲基)-4-甲氧基苯基)-n-(4-(苄氧基)-3-(甲氧基-d3)苯乙基)乙酰胺(2.80g,5.14mmol)和乙酰氯(605.31mg,7.71mmol)为原料，按照制备实施例1中第9步的实验操作得到淡黄色2-(苄氧基)-6-(2-((4-(苄氧基)-3-(甲氧基-d3)苯乙基-d3)氨基)-2-氧乙基)-3-甲氧基苄基乙酸酯(2.54g,84.2％)固体。ms esi计算值c
35h34
d3no7[m+h]
+
,587.28,实验测得587.3；1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.50-7.41(m,4h),7.41-7.30(m,6h),6.93-6.89(m,2h),6.76(d,j＝8.2hz,1h),6.65(d,j＝2.0hz,1h),6.49-6.46(m,1h),5.42(s,1h),5.14-5.10(m,4h),5.05(s,2h),3.91(s,3h),3.55(s,2h),3.45-3.41(m,2h),2.66(t,j＝7.0hz,2h),1.95(s,3h)。
[0110]
8. 2-(苄氧基)-6-((7-(苄氧基)-6-(甲氧基-d3)-3,4-二氢异喹啉-1-基)甲基)-3-甲氧基苄基乙酸酯
[0111][0112]
以2-(苄氧基)-6-(2-((4-(苄氧基)-3-(甲氧基-d3)苯乙基-d3)氨基)-2-氧乙基)-3-甲氧基苄基乙酸酯(2.54g,4.33mmol)和三氯氧磷(2.42ml,15.79mmol)为原料，按照制备实施例1中第10步的实验操作得到黄色2-(苄氧基)-6-((7-(苄氧基)-6-(甲氧基-d3)-3,4-二氢异喹啉-1-基)甲基)-3-甲氧基苄基乙酸酯(1.95g,79％)固体。ms esi计算值c
35h32
d3no6[m+h]
+
,569.3,实验测得569.4；1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.50-7.44(m,2h),7.42-7.36(m,2h),7.36-7.30(m,6h),6.96(s,1h),6.82(d,j＝2.6hz,2h),6.71(s,1h),5.21(s,2h),5.06(s,2h),5.01(s,2h),4.00-3.96(m,2h),3.88(s,3h),3.72(t,j＝7.6hz,2h),2.70-2.65(m,2h),1.96(s,3h)。
[0113]
9. 2-(苄氧基)-6-((7-(苄氧基)-6-(甲氧基-d3)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-基)甲基)-3-甲氧基苄基乙酸酯
[0114][0115]
向2-(苄氧基)-6-((7-(苄氧基)-6-(甲氧基-d3)-3,4-二氢异喹啉-1-基)甲基)-3-甲氧基苄基乙酸酯(0.95g,1.67mmol)的甲醇(18ml)溶液中室温下加入硼氢化钠(94.80mg,2.51mmol)。室温搅拌1小时后再加入硼氢化钠(20mg，0.53mmol),室温搅拌1小时。反应完毕后加入冰水(100ml)淬灭，二氯甲烷(3x100ml)萃取。萃取液用饱和氯化钠水溶液洗涤(2x100ml),无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩得到黄色2-(苄氧基)-6-((7-(苄氧基)-6-(甲氧基-d3)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-基)甲基)-3-甲氧基苄基乙酸酯(0.87g,91％)固体。ms esi计算值c
35h34
d3no6[m+h]
+
,571.3,实验测得571.4；1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.51-7.44(m,4h),7.43-7.30(m,6h),7.01-6.95(m,2h),6.63(s,2h),5.31(d,j＝11.5hz,1h),5.17(d,j＝11.5hz,1h),5.09(s,4h),4.03-4.01(m,1h),3.92(s,3h),3.27-3.21(m,1h),3.12-3.08(m,1h),3.01-2.95(m,1h),2.90-2.82(m,1h),2.81-2.77(m,2h),1.97(s,3h)。
[0116]
10.(2-(苄氧基)-6-((7-(苄氧基)-6-(甲氧基-d3)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-基)甲基)-3-甲氧基苯基)甲醇
[0117]
[0118]
以2-(苄氧基)-6-((7-(苄氧基)-6-(甲氧基-d3)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-基)甲基)-3-甲氧基苄基乙酸酯(0.87g,1.52mmol)和氢氧化钠(0.36g,9.00mmol)为原料，按照制备实施例1中第12步的实验操作得到类白色(2-(苄氧基)-6-((7-(苄氧基)-6-(甲氧基-d3)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-基)甲基)-3-甲氧基苯基)甲醇(0.74g,91.8％)固体。ms esi计算值c
33h32
d3no5[m+h]
+
,529.3,实验测得529.4；1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.60-7.54(m,2h),7.52-7.46(m,2h),7.43-7.39(m,4h),7.37-7.30(m,2h),6.90(d,j＝1.2hz,2h),6.81(s,1h),6.63(s,1h),5.24-5.15(m,2h),5.15-5.03(m,2h),4.88(d,j＝11.6hz,1h),4.47(d,j＝11.6hz,1h),4.11-4.05(m,1h),3.90(s,3h),3.08-3.04(m,2h),2.98-2.87(m,2h),2.84-2.74(m,1h),2.67-2.59(m,1h)。
[0119]
11和12. 2,9-双(苄氧基)-10-甲氧基-3-(甲氧基-d3)-5,8,13,13a-四氢-6h-异喹啉基[3,2-a]异喹啉
[0120][0121]
以(2-(苄氧基)-6-((7-(苄氧基)-6-(甲氧基-d3)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-基)甲基)-3-甲氧基苯基)甲醇(0.92g,1.74mmol)和氯化亚砜(1.24g,10.44mmol)为原料，按照制备实施例1中第13步和第14步的实验操作得到黄色2,9-双(苄氧基)-10-甲氧基-3-(甲氧基-d3)-5,8,13,13a-四氢-6h-异喹啉基[3,2-a]异喹啉(0.84g,95％)固体。ms esi计算值c
33h30
d3no4[m+h]
+
,511.3,实验测得511.4；1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.52-7.48(m,4h),7.44-7.31(m,6h),6.89-6.83(m,2h),6.77(s,1h),6.65(s,1h),5.17(s,2h),5.11(d,j＝11.1hz,1h),5.01(d,j＝11.1hz,1h),4.26-4.20(m,1h),3.90(s,3h),3.48-3.42(m,2h),3.20-3.05(m,3h),2.82-2.53(m,3h)。
[0122]
13. 10-甲氧基-3-(甲氧基-d3)-5,8,13,13a-四氢-6h-异喹啉基[3,2-a]异喹啉-2,9-二醇
[0123][0124]
以2,9-双(苄氧基)-10-甲氧基-3-(甲氧基-d3)-5,8,13,13a-四氢-6h-异喹啉基[3,2-a]异喹啉(0.78g,1.53mmol)为原料，按照制备实施例1中第15步的实验操作得到粉色10-甲氧基-3-(甲氧基-d3)-5,8,13,13a-四氢-6h-异喹啉基[3,2-a]异喹啉-2,9-二醇(0.36g,71％)固体。ms esi计算值c
19h18
d3no4[m+h]
+
,331.2,实验测得331.2。
[0125]
14.(r)-和(s)-10-甲氧基-3-(甲氧基-d3)-5,8,13,13a-四氢-6h-异喹啉基[3,2-a]异喹啉-2,9-二醇
[0126][0127]
外消旋产物(0.35g)用手性高效液相色谱分离，条件如下(色谱柱:chiral art cellulose-sb,2x25cm,5μm；流动相a:正己烷:二氯甲烷＝3:1(外加10mm氨气甲醇溶液)；流动相b:乙醇；流速:20ml/min；等梯度:20％b 10分钟；检测波长：254/220nm；保留时间1:5.725分钟；保留时间2:8.332分钟。前峰收集减压蒸干，得到粉色(r)-或(s)-10-甲氧基-3-(甲氧基-d3)-5,8,13,13a-四氢-6h-异喹啉基[3,2-a]异喹啉-2,9-二醇(0.13g,37％)固体。ms esi计算值c
19h18
d3no4[m+h]
+
,331.17,实验测得331.10；1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.65(s,1h),8.56(s,1h),6.78(d,j＝8.2hz,1h),6.69(s,1h),6.63(s,1h),6.58(d,j＝8.3hz,1h),4.00(d,j＝15.7hz,1h),3.76(s,3h),3.36-3.34(m,1h),3.28-3.23(m,1h),3.20-3.12(m,1h),3.11-3.04(m,1h),2.96-2.86(m,1h),2.63-2.41(m,3h).α＝+300.5(c＝0.2in meoh)；ee》99％；d3＝99.58％。
[0128]
后峰收集减压蒸干，得到粉色(s)-或(r)10-甲氧基-3-(甲氧基-d3)-5,8,13,13a-四氢-6h-异喹啉基[3,2-a]异喹啉-2,9-二醇(0.13g,37％)固体。ms esi计算值c
19h18
d3no4[m+h]
+
,331.17,实验测得331.10；1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.65(s,1h),8.56(s,1h),6.78(d,j＝8.2hz,1h),6.69(s,1h),6.63(s,1h),6.58(d,j＝8.3hz,1h),4.00(d,j＝15.7hz,1h),3.76(s,3h),3.36-3.34(m,1h),3.28-3.23(m,1h),3.20-3.12(m,1h),3.11-3.05(m,1h),2.96-2.87(m,1h),2.63-2.42(m,3h).α＝-300(c＝0.2in meoh)；ee》99％；d3＝99.60％。
[0129]
制备实施例3
[0130]
化合物03-0q和03-0h的合成
[0131][0132]
合成路线3
[0133][0134]
实验部分
[0135]
1. 2-(4-(苄氧基)-3-甲氧基苯基)乙烷-1,1-d
2-1-胺盐酸盐
[0136][0137]
氮气保护下，在0℃下将bf3.et2o(85.00ml,598.88mmol)和2-(4-(苄氧基)-3-甲氧基苯基)乙腈(10.00g,39.48mmol)的四氢呋喃(150ml)溶液缓慢滴加到硼氘化钠(25.00g,597.31mmol)的四氢呋喃(100ml)悬浊液中。该反应液在室温搅拌1小时后，再在60℃搅拌2小时。反应液冷却到室温后，用20％的hcl水溶液(130ml)和水(400ml)在0℃淬灭。混合液用乙酸乙酯萃取(2x300ml)。合并有机相，用饱和氯化钠水溶液(2x300ml)洗涤，无水硫酸钠干燥并过滤。在减压下将滤液蒸干，得到白色2-(4-(苄氧基)-3-甲氧基苯基)乙烷-1,1-d
2-1-胺盐酸盐(11.0g,94％)固体。该产物没有进一步纯化，直接用于下一步反应。ms esi计算值c
16h18
d2clno2[m+h-hcl+acn]
+
,301.2,实验测得301.2；1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ7.69(brs,3h),7.46-7.37(m,4h),7.36-7.30(m,1h),6.98(d,j＝8.2hz,1h),6.89(d,j＝2.0hz,1h),6.75-6.73(m,1h),5.06(s,2h),3.79(s,3h),2.77(s,2h)。
[0138]
2. 2-(3-(苄氧基)-2-(羟甲基)-4-甲氧基苯基)-n-(2-(4-(苄氧基)-3-甲氧基苯基)乙基-1,1-d2)乙酰胺
[0139]
[0140]
氮气保护下，在室温下将n,n-二异丙基乙胺(6.55g,50.71mmol)加入到2-(4-(苄氧基)-3-甲氧基苯基)乙烷-1,1-d
2-1-胺盐酸盐(3.00g,10.14mmol)和8-(苄氧基)-7-甲氧基异色-3-酮(2.15g,7.57mmol)的乙醇(40ml)溶液中。该反应液在85℃搅拌2天。在减压下蒸干反应液。残留物用硅胶柱色谱层析法纯化，洗脱剂石油醚/(乙酸乙酯:乙醇(体积比为3:1))(2/1)。将包含产物的馏分收集减压蒸干，得到黄色的2-(3-(苄氧基)-2-(羟甲基)-4-甲氧基苯基)-n-(2-(4-(苄氧基)-3-甲氧基苯基)乙基-1,1-d2)乙酰胺(3.7g,90％)油状物。ms esi计算值c
33h33
d2no6[m+h]
+
,544.3,实验测得544.2；1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.51-7.47(m,2h),7.46-7.42(m,2h),7.42-7.30(m,5h),6.95(d,j＝8.4hz,1h),6.87(d,j＝8.4hz,1h),6.78(d,j＝8.1hz,1h),6.69(d,j＝2.0hz,1h),6.50-6.48(m,1h),6.06(s,1h),5.14(s,2h),5.09(s,2h),4.62(s,2h),3.91(s,3h),3.87(s,3h),3.53(s,2h),2.67(s,2h)。
[0141]
3. 2-(苄氧基)-6-(2-((2-(4-(苄氧基)-3-甲氧基苯基)乙基-1,1-d2)氨基)-2-氧乙基)甲氧基苄基乙酸酯
[0142][0143]
以2-(3-(苄氧基)-2-(羟甲基)-4-甲氧基苯基)-n-(2-(4-(苄氧基)-3-甲氧基苯基)乙基-1,1-d2)乙酰胺(3.70g,6.81mmol)和乙酰氯(0.80g,10.21mmol)为原料，按照制备实施例1中第9步的实验操作得到类白色2-(苄氧基)-6-(2-((2-(4-(苄氧基)-3-甲氧基苯基)乙基-1,1-d2)氨基)-2-氧乙基)甲氧基苄基乙酸酯(3.70g,93％)固体。ms esi计算值c
35h35
d2no7[m+h]
+
,586.3,实验测得586.2；1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.48-7.41(m,4h),7.41-7.31(m,6h),6.94-6.87(m,2h),6.76(d,j＝8.3hz,1h),6.66(d,j＝2.0hz,1h),6.49-6.46(m,1h),5.40(s,1h),5.15-5.10(m,4h),5.05(s,2h),3.91(s,3h),3.86(s,3h),3.54(s,2h),2.65(s,2h),1.95(s,3h)。
[0144]
4. 2-(苄氧基)-6-((7-(苄氧基)-6-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-1-基-3,3-d2)甲基)-3-甲氧基苄基乙酸酯
[0145][0146]
以2-(苄氧基)-6-(2-((2-(4-(苄氧基)-3-甲氧基苯基)乙基-1,1-d2)氨基)-2-氧乙基)甲氧基苄基乙酸酯(3.50g,5.98mmol)和三氯氧磷(3.50ml,37.55mmol)为原料，按照制备实施例1中第10步的实验操作得到粉色2-(苄氧基)-6-((7-(苄氧基)-6-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-1-基-3,3-d2)甲基)-3-甲氧基苄基乙酸酯(2.90g,85％)固体。ms esi计算值c
35h33
d2no6[m+h]
+
,568.3,实验测得568.1；1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.51-7.43(m,2h),7.43-7.26(m,8h),6.97(s,1h),6.87-6.78(m,2h),6.72(s,1h),5.21(s,2h),5.06(s,2h),5.01(s,2h),3.98(s,2h),3.93(s,3h),3.88(s,3h),2.66(s,2h),1.96(s,3h)。
[0147]
5. 2-(苄氧基)-6-((7-(苄氧基)-6-甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-基-3,3-d2)
甲基)-3-甲氧基苄基乙酸酯
[0148][0149]
以2-(苄氧基)-6-((7-(苄氧基)-6-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-1-基-3,3-d2)甲基)-3-甲氧基苄基乙酸酯(1.40g,2.47mmol)和硼氢化钠(0.112g,2.96mmol)为原料，按照制备实施例2中第9步的实验操作得到红色2-(苄氧基)-6-((7-(苄氧基)-6-甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-基-3,3-d2)甲基)-3-甲氧基苄基乙酸酯(1.38g,98％)半固体。ms esi计算值c
35h35
d2no6[m+h]
+
,570.27,实验测得570.25；1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.50-7.45(m,4h),7.44-7.32(m,5h),7.32-7.29(m,1h),7.02-6.94(m,2h),6.64(s,2h),5.36-5.29(m,1h),5.18(d,j＝11.6hz,1h),5.12-5.07(m,4h),4.03-3.98(m,1h),3.92(s,3h),3.89(s,3h),3.13-3.06(m,1h),2.89-2.80(m,1h),2.76(s,2h),1.97(s,3h)。
[0150]
6.(2-(苄氧基)-6-((7-(苄氧基)-6-甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-基-3,3-d2)甲基)-3-甲氧基苯基)甲醇
[0151][0152]
以2-(苄氧基)-6-((7-(苄氧基)-6-甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-基-3,3-d2)甲基)-3-甲氧基苄基乙酸酯(1.40g,2.46mmol)和氢氧化钠(0.40g,10.00mmol)为原料，按照制备实施例1中第12步的实验操作得到粉色(2-(苄氧基)-6-((7-(苄氧基)-6-甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-基-3,3-d2)甲基)-3-甲氧基苯基)甲醇(1.26g,97％)固体。ms esi计算值c
33h33
d2no5[m+h]
+
,528.3,实验测得528.3；1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.60-7.55(m,2h),7.53-7.48(m,2h),7.44-7.37(m,4h),7.37-7.30(m,2h),6.95-6.87(m,2h),6.83(s,1h),6.64(s,1h),5.20(d,j＝3.1hz,2h),5.15-5.02(m,2h),4.88(d,j＝11.6hz,1h),4.46(d,j＝11.6hz,1h),4.06-4.01(m,1h),3.91(s,3h),3.90(s,3h),3.08-3.01(m,1h),2.96-2.85(m,1h),2.78(d,j＝16.1hz,1h),2.60(d,j＝16.1hz,1h)。
[0153]
7和8. 2,9-双(苄氧基)-3,10-二甲氧基-5,8,13,13a-四氢-6h-异喹啉基[3,2-a]异喹啉-6,6-d2[0154][0155]
以((2-(苄氧基)-6-((7-(苄氧基)-6-甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-基-3,3-d2)甲基)-3-甲氧基苯基)甲醇(1.26g,2.39mmol)和氯化亚砜(1.04ml,8.74mmol)为原料，
按照制备实施例1中第13步和第14步的实验操作得到橙色2,9-双(苄氧基)-3,10-二甲氧基-5,8,13,13a-四氢-6h-异喹啉基[3,2-a]异喹啉-6,6-d2(1.10g,90％)半固体。ms esi计算值c
33h31
d2no4[m+h]
+
,510.3,实验测得510.3；1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.52-7.46(m,4h),7.45-7.31(m,6h),6.89-6.83(m,2h),6.77(s,1h),6.66(s,1h),5.17(s,2h),5.11(d,j＝11.1hz,1h),5.01(d,j＝11.2hz,1h),4.26-4.22(m,1h),3.90(2s,6h),3.52-3.39(m,2h),3.16-3.07(m,2h),2.82-2.60(m,2h)。
[0156]
9. 3,10-二甲氧基-5,8,13,13a-四氢-6h-异喹啉基[3,2-a]异喹啉-6,6-d
2-2,9-二醇
[0157][0158]
以2,9-双(苄氧基)-3,10-二甲氧基-5,8,13,13a-四氢-6h-异喹啉基[3,2-a]异喹啉-6,6-d2(0.98g,1.92mmol)为原料，按照制备实施例1中第15步的实验操作得到粉色3,10-二甲氧基-5,8,13,13a-四氢-6h-异喹啉基[3,2-a]异喹啉-6,6-d
2-2,9-二醇(0.45g,71％)固体。ms esi计算值c
19h19
d2no4[m+h]
+
,330.16,实验测得330.20。
[0159]
10.(r)-3,10-二甲氧基-5,8,13,13a-四氢-6h-异喹啉基[3,2-a]异喹啉-6,6-d
2-2,9-二醇和(s)-3,10-二甲氧基-5,8,13,13a-四氢-6h-异喹啉基[3,2-a]异喹啉-6,6-d
2-2,9-二醇
[0160][0161]
外消旋产物(0.5g)用手性高效液相色谱分离，条件如下(色谱柱:chiral art cellulose-sb,2x25cm,5μm；流动相a:正己烷:二氯甲烷＝3:1(外加10mm氨气甲醇溶液)；流动相b:乙醇；流速:20ml/min；等梯度:10％b 24分钟；检测波长：254/220nm；保留时间1:7.013分钟；保留时间2:11.323分钟。前峰收集减压蒸干，得到粉色(r)-或(s)3,10-二甲氧基-5,8,13,13a-四氢-6h-异喹啉基[3,2-a]异喹啉-6,6-d
2-2,9-二醇(0.2g,41％)固体。ms esi计算值c
19h19
d2no4[m+h]
+
,330.16,实验测得330.10；1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.66(s,1h),8.56(s,1h),6.78(d,j＝8.2hz,1h),6.69(s,1h),6.63(s,1h),6.58(d,j＝8.3hz,1h),4.00(d,j＝15.6hz,1h),3.76(s,3h),3.74(s,3h),3.37-3.34(m,1h),3.26(d,j＝15.7hz,1h),3.19-3.12(m,1h),2.89(d,j＝15.6hz,1h),2.61-2.53(m,2h)；α＝+300.5(c＝0.2in meoh)；ee》99％；d2＝99.25％。
[0162]
后峰收集减压蒸干，得到粉色(s)-或(r)3,10-二甲氧基-5,8,13,13a-四氢-6h-异喹啉基[3,2-a]异喹啉-6,6-d
2-2,9-二醇(0.2g,41％)固体。ms esi计算值c
19h19
d2no4[m+h]
+
,330.16,实验测得330.10；1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.66(s,1h),8.56(s,1h),6.78(d,j＝
7.35(m,4h),7.35-7.29(m,2h),6.95(d,j＝8.4hz,1h),6.86(d,j＝8.4hz,1h),6.77(d,j＝8.1hz,1h),6.68(d,j＝2.0hz,1h),6.50-6.48(m,1h),6.09-6.01(m,1h),5.14(s,2h),5.09(s,2h),4.62(s,2h),3.52(s,2h),3.47-3.42(m,2h),2.68(t,j＝6.9hz,2h)。
[0172]
2. 2-(苄氧基)-6-(2-((4-(苄氧基)-3-(甲氧基-d3)苯乙基)氨基)-2-氧乙基)-3-(甲氧基-d3)乙酸苄酯
[0173][0174]
以2-(3-(苄氧基)-2-(羟甲基)-4-(甲氧基-d3)苯基)-n-(4-(苄氧基)-3-(甲氧基-d3)苯乙基乙酰胺(3.70g,6.76mmol)和乙酰氯(0.79g,10.13mmol)为原料，按照制备实施例1中第9步的实验操作得到白色2-(苄氧基)-6-(2-((4-(苄氧基)-3-(甲氧基-d3)苯乙基)氨基)-2-氧乙基)-3-(甲氧基-d3)乙酸苄酯(3.70g,93％)固体。ms esi计算值c
35h31
d6no7[m+h]
+
,590.29,实验测得590.30；1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.47-7.41(m,4h),7.40-7.30(m,6h),6.95-6.87(m,2h),6.76(d,j＝8.1hz,1h),6.65(d,j＝2.0hz,1h),6.48(dd,j＝8.1,2.0hz,1h),5.42(t,j＝5.7hz,1h),5.14-5.10(m,4h),5.05(s,2h),3.54(s,2h),3.45-3.41(m,2h),2.66(t,j＝7.0hz,2h),1.95(s,3h)。
[0175]
3. 2-(苄氧基)-6-((7-(苄氧基)-6-(甲氧基-d3)-3,4-二氢异喹啉-1-基)甲基)-3-(甲氧基-d3)乙酸苄酯
[0176][0177]
以2-(苄氧基)-6-(2-((4-(苄氧基)-3-(甲氧基-d3)苯乙基)氨基)-2-氧乙基)-3-(甲氧基-d3)乙酸苄酯(3.00g,5.09mmol)和三氯氧磷(2.85ml,18.56mmol)为原料，按照制备实施例1中第10步的实验操作得到黄色2-(苄氧基)-6-((7-(苄氧基)-6-(甲氧基-d3)-3,4-二氢异喹啉-1-基)甲基)-3-(甲氧基-d3)乙酸苄酯(1.95g,79％)固体。ms esi计算值c
35h29
d6no6[m+h]
+
,572.3,实验测得572.3；1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.50-7.44(m,2h),7.43-7.36(m,2h),7.35-7.30(m,6h),6.96(s,1h),6.84-6.80(m,2h),6.71(s,1h),5.21(s,2h),5.06(s,2h),5.01(s,2h),3.98-3.94(m,2h),3.77-3.67(m,2h),2.67(t,j＝7.6hz,2h),1.96(s,3h)。
[0178]
4. 2-(苄氧基)-6-((7-(苄氧基)-6-(甲氧基-d3)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-基)甲基)-3-(甲氧基-d3)乙酸苄酯
[0179]
[0180]
以2-(苄氧基)-6-((7-(苄氧基)-6-(甲氧基-d3)-3,4-二氢异喹啉-1-基)甲基)-3-(甲氧基-d3)乙酸苄酯(1.05g,1.84mmol)和硼氢化钠(83.38mg,2.20mmol)为原料，按照制备实施例2中第9步的实验操作得到黄色2-(苄氧基)-6-((7-(苄氧基)-6-(甲氧基-d3)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-基)甲基)-3-(甲氧基-d3)乙酸苄酯(1.00g,95％)油状物。ms esi计算值c
35h31
d6no6[m+h]
+
,574.3,实验测得574.2；1h nmr(300mhz,cdcl3)δ7.53-7.45(m,4h),7.44-7.31(m,6h),7.03-6.93(m,2h),6.69-6.59(m,2h),5.37-5.28(m,1h),5.23-5.14(m,1h),5.13-5.05(m,4h),4.04-3.95(m,1h),3.30-3.17(m,1h),3.15-3.02(m,1h),3.00-2.90(m,1h),2.88-2.81(m,1h),2.80-2.72(m,2h),1.97(s,3h)。
[0181]
5.(2-(苄氧基)-6-((7-(苄氧基)-6-(甲氧基-d3)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-基)甲基)-3-(甲氧基-d3)苯基)甲醇
[0182][0183]
以2-(苄氧基)-6-((7-(苄氧基)-6-(甲氧基-d3)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-基)甲基)-3-(甲氧基-d3)乙酸苄酯(1.00g,1.74mmol)和氢氧化钠(0.40g,10.00mmol)为原料，按照制备实施例1中第12步的实验操作得到淡粉色(2-(苄氧基)-6-((7-(苄氧基)-6-(甲氧基-d3)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-基)甲基)-3-(甲氧基-d3)苯基)甲醇(0.89g,96％)固体。ms esi计算值c
33h29
d6no4[m+h]
+
,532.29,实验测得532.40；1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.61-7.54(m,2h),7.53-7.46(m,2h),7.44-7.38(m,4h),7.37-7.30(m,2h),6.94-6.90(m,2h),6.82(s,1h),6.63(s,1h),5.25-5.16(m,2h),5.16-5.03(m,2h),4.88(d,j＝11.6hz,1h),4.46(d,j＝11.6hz,1h),4.05-4.02(m,1h),3.10-3.01(m,2h),2.97-2.87(m,2h),2.86-2.74(m,1h),2.67-2.56(m,1h)。
[0184]
6和7. 2,9-双(苄氧基)-3,10-双(甲氧基-d3)-5,8,13,13a-四氢-6h-异喹啉基[3,2-a]异喹啉
[0185][0186]
以(2-(苄氧基)-6-((7-(苄氧基)-6-(甲氧基-d3)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-基)甲基)-3-(甲氧基-d3)苯基)甲醇(0.87g,1.64mmol)和氯化亚砜(0.71ml,5.99mmol)为原料，按照制备实施例1中第13步和第14步的实验操作得到红色2,9-双(苄氧基)-3,10-双(甲氧基-d3)-5,8,13,13a-四氢-6h-异喹啉基[3,2-a]异喹啉(0.76g,90％)半固体。ms esi计算值c
33h27
d6no4[m+h]
+
,514.3,实验测得514.3；1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.55-7.46(m,4h),7.44-7.31(m,6h),6.89-6.83(m,2h),6.77(s,1h),6.65(s,1h),5.17(s,2h),5.11(d,j＝11.2hz,1h),5.00(d,j＝11.2hz,1h),4.22(d,j＝15.8hz,1h),3.52-3.39(m,2h),3.19-3.06(m,3h),2.82-2.50(m,3h)。
[0187]
8. 3,10-双(甲氧基-d3)-5,8,13,13a-四氢-6h-异喹啉基[3,2-a]异喹啉-2,9-二
醇
[0188][0189]
以2,9-双(苄氧基)-3,10-双(甲氧基-d3)-5,8,13,13a-四氢-6h-异喹啉基[3,2-a]异喹啉(0.76g,1.48mmol)为原料，按照制备实施例1中第15步的实验操作得到粉色3,10-双(甲氧基-d3)-5,8,13,13a-四氢-6h-异喹啉基[3,2-a]异喹啉-2,9-二醇(0.36g,73％)固体。ms esi计算值c
19h15
d6no4[m+h]
+
,334.2,实验测得334.1。
[0190]
9.(r)-和(s)-3,10-双(甲氧基-d3)-5,8,13,13a-四氢-6h-异喹啉基[3,2-a]异喹啉-2,9-二醇
[0191][0192]
外消旋产物(0.36g)用手性高效液相色谱分离，条件如下(色谱柱:chiral art cellulose-sb,2x25cm,5μm；流动相a:正己烷(外加8mm氨气甲醇溶液)；流动相b:乙醇；流速:20ml/min；等梯度:50％b 13分钟；检测波长：254/220nm；保留时间1:5.014分钟；保留时间2:10.199分钟。前峰收集减压蒸干，得到粉色(r)-或(s)-3,10-双(甲氧基-d3)-5,8,13,13a-四氢-6h-异喹啉基[3,2-a]异喹啉-2,9-二醇(0.15g,41％)固体。ms esi计算值c
19h15
d6no4[m+h]
+
,334.18,实验测得334.15；1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.66(s,1h),8.56(s,1h),6.78(d,j＝8.2hz,1h),6.69(s,1h),6.63(s,1h),6.58(d,j＝8.3hz,1h),4.00(d,j＝15.7hz,1h),3.38-3.34(m,1h),3.30-3.22(m,1h),3.20-3.12(m,1h),3.11-3.04(m,1h),2.96-2.85(m,1h),2.64-2.40(m,3h)；α＝+291.5(c＝0.2in meoh)；ee》99％；d6＝99.78％。
[0193]
后峰收集减压蒸干，得到粉色(s)-或(r)-3,10-双(甲氧基-d3)-5,8,13,13a-四氢-6h-异喹啉基[3,2-a]异喹啉-2,9-二醇(0.17g,46％)固体。ms esi计算值c
19h15
d6no4[m+h]
+
,334.18,实验测得334.15；1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.66(s,1h),8.56(s,1h),6.78(d,j＝8.2hz,1h),6.69(s,1h),6.63(s,1h),6.58(d,j＝8.3hz,1h),4.00(d,j＝15.7hz,1h),3.38-3.34(m,1h),3.29-3.22(m,1h),3.20-3.12(m,1h),3.11-3.04(m,1h),2.96-2.85(m,1h),2.64-2.41(m,3h)；a＝-287.5(c＝0.2in meoh)；ee》99％；d6＝99.80％。
[0194]
制备实施例5
[0195]
化合物05-0q和05-0h的合成
[0196]
[0197]
合成路线5
[0198][0199]
实验部分
[0200]
1.(4-(苄氧基)-3-(甲氧基-d3)苯基)甲醇
[0201][0202]
氮气保护下，在0℃将硼氢化钠(3.85g,101.76mmol)分批加入到4-(苄氧基)-3-(甲氧基-d3)苯甲醛(20.8g,84.79mmol)的甲醇(200ml)溶液中。该反应液在0℃搅拌0.5小时后恢复至室温后继续搅拌2小时。反应液冷却至0℃并用冰水(200ml)在0℃淬灭。有机溶剂在减压下移除。剩下的混合物用乙酸乙酯(2x400ml)萃取。有机相合并后，用饱和氯化钠水溶液(2x400ml)洗涤，无水硫酸钠干燥并过滤。在减压下将滤液蒸干。残留物用硅胶柱色谱层析法纯化，洗脱剂石油醚/乙酸乙酯(体积比为6/1)。将包含产物的馏分收集减压蒸干，得到白色的(4-(苄氧基)-3-(甲氧基-d3)苯基)甲醇(18.8g,90％)固体。ms esi计算值c
15h13
d3o3[m+na]
+
,270.1,实验测得270.2；1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ7.48-7.36(m,4h),7.35-7.29(m,1h),7.00-6.93(m,2h),6.81-6.78(m,1h),5.09-5.05(m,3h),4.42(d,j＝5.7hz,2h)。
[0203]
2. 4-(苄氧基)-3-(甲氧基-d3)甲基磺酸苄酯
[0204][0205]
氮气保护下，在0℃将甲基磺酰氯(8.73ml,76.23mmol)滴加到(4-(苄氧基)-3-(甲
氧基-d3)苯基)甲醇(18.60g,75.21mmol)和三乙胺(31.36ml,309.9mmol)的二氯甲烷(200ml)溶液中。该反应液在室温搅拌2小时。反应液冷却至0℃并用冰水(100ml)在0℃淬灭。有机相分出后，剩下的混合物用二氯甲烷(2x200ml)萃取。有机相合并后，用饱和氯化钠水溶液(2x200ml)洗涤，无水硫酸钠干燥并过滤。在减压下将滤液蒸干得到黄色4-(苄氧基)-3-(甲氧基-d3)甲基磺酸苄酯(18.0g,粗产物)固体。该产物没有进一步纯化，直接用于下一步反应。
[0206]
3. 2-(4-(苄氧基)-3-(甲氧基-d3)苯基)乙腈
[0207][0208]
将氰化钠(3.00g,61.21mmol)加入到4-(苄氧基)-3-(甲氧基-d3)甲基磺酸苄酯(18.0g,55.32mmol)的n,n-二甲基甲酰胺(180ml)溶液中。该反应液室温搅拌16小时。在上述混合物中加入氢氧化钠水溶液(1m,180ml)。反应液继续搅拌15分钟，用水(500ml)稀释。混合物用乙酸乙酯(2x400ml)萃取。有机相合并后，用饱和氯化钠水溶液(2x400ml)洗涤，无水硫酸钠干燥并过滤。在减压下将滤液蒸干。残留物用硅胶柱色谱层析法纯化，洗脱剂石油醚/乙酸乙酯(体积比为5/1)。将包含产物的馏分收集减压蒸干，得到类白色的2-(4-(苄氧基)-3-(甲氧基-d3)苯基)乙腈(9.0g,63％)固体。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.49-7.43(m,2h),7.42-7.37(m,2h),7.36-7.31(m,1h),6.91-6.84(m,2h),6.81(dd,j＝8.2,2.2hz,1h),5.18(s,2h),3.70(s,2h)。
[0209]
4. 2-(4-(苄氧基)-3-(甲氧基-d3)苯基)乙烷-1,1-d
2-1-胺盐酸盐
[0210][0211]
以2-(4-(苄氧基)-3-(甲氧基-d3)苯基)乙腈(1.00g,3.90mmol)和硼氘化钠(2.45g,58.52mmol)为原料，按照制备实施例3中第1步的实验操作得到白色2-(4-(苄氧基)-3-(甲氧基-d3)苯基)乙烷-1,1-d
2-1-胺盐酸盐(1.20g,粗产物)固体。ms esi计算值c
16h15
d5clno2[m+h-hcl]
+
,263.2,实验测得263.3；1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ7.68(brs,3h),7.47-7.37(m,4h),7.36-7.30(m,1h),6.98(d,j＝8.2hz,1h),6.89(d,j＝2.0hz,1h),6.74(dd,j＝8.2,2.0hz,1h),5.07(s,2h),2.78(s,2h)。
[0212]
5. 2-(3-(苄氧基)-2-(羟甲基)-4-甲氧基苯基)-n-(2-(4-(苄氧基)-3-(甲氧基-d3)苯基)乙基-1,1-d2)乙酰胺
[0213][0214]
以2-(4-(苄氧基)-3-(甲氧基-d3)苯基)乙烷-1,1-d
2-1-胺盐酸盐(1.00g,
3.35mmol)和8-(苄氧基)-7-甲氧基异色-3-酮(0.72g,2.53mmol)为原料，按照制备实施例3中第2步的实验操作得到黄色2-(3-(苄氧基)-2-(羟甲基)-4-甲氧基苯基)-n-(2-(4-(苄氧基)-3-(甲氧基-d3)苯基)乙基-1,1-d2)乙酰胺(1.40g,77％)油状物。ms esi计算值c
33h30
d5no6[m+h]
+
,547.28,实验测得547.30；1h nmr(400mhz，cdcl3)δ7.52-7.42(m,5h),7.41-7.31(m,5h),6.95(d,j＝8.4hz,1h),6.87(d,j＝8.4hz,1h),6.77(d,j＝8.1hz,1h),6.68(d,j＝2.0hz,1h),6.49(dd,j＝8.1,2.0hz,1h),6.10(s,1h),5.14(s,2h),5.09(s,2h),4.63(s,2h),3.91(s,3h),3.53(s,2h),2.67(s,2h)。
[0215]
6. 2-(苄氧基)-6-(2-((2-(4-(苄氧基)-3-(甲氧基-d3)苯基)乙基-1,1-d2)氨基)-2-氧乙基)-3-甲氧基苄基乙酸酯
[0216][0217]
以2-(3-(苄氧基)-2-(羟甲基)-4-甲氧基苯基)-n-(2-(4-(苄氧基)-3-(甲氧基-d3)苯基)乙基-1,1-d2)乙酰胺(2.50g,4.57mmol)和乙酰氯(0.49ml,6.24mmol)为原料，按照制备实施例1中第9步的实验操作得到黄色2-(苄氧基)-6-(2-((2-(4-(苄氧基)-3-(甲氧基-d3)苯基)乙基-1,1-d2)氨基)-2-氧乙基)-3-甲氧基苄基乙酸酯(2.54g,84％)油状物。ms esi计算值c
35h32
d5no7[m+h]
+
,589.3,实验测得589.3；1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.49-7.41(m,4h),7.41-7.30(m,6h),6.94-6.87(m,2h),6.76(d,j＝8.2hz,1h),6.65(d,j＝2.0hz,1h),6.48(dd,j＝8.1,2.1hz,1h),5.14-5.10(m,4h),5.05(d,j＝2.2hz,2h),3.91(s,3h),3.54(s,2h),2.66(d,j＝5.7hz,2h),1.95(s,3h)。
[0218]
7. 2-(苄氧基)-6-((7-(苄氧基)-6-(甲氧基-d3)-3,4-二氢异喹啉-1-基-3,3-d2)甲基)-3-甲氧基苄基乙酸酯
[0219][0220]
以2-(苄氧基)-6-(2-((2-(4-(苄氧基)-3-(甲氧基-d3)苯基)乙基-1,1-d2)氨基)-2-氧乙基)-3-甲氧基苄基乙酸酯(2.00g,3.40mmol)和三氯氧磷(1.90ml,12.39mmol)为原料，按照制备实施例1中第10步的实验操作得到橙色2-(苄氧基)-6-((7-(苄氧基)-6-(甲氧基-d3)-3,4-二氢异喹啉-1-基-3,3-d2)甲基)-3-甲氧基苄基乙酸酯(1.40g,72％)固体。ms esi计算值c
35h30
d5no6[m+h]
+
,571.3,实验测得571.3；1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.51-7.44(m,2h),7.42-7.36(m,2h),7.36-7.29(m,6h),6.96(s,1h),6.86-6.78(m,2h),6.71(d,j＝0.9hz,1h),5.21(s,2h),5.06(s,2h),5.01(s,2h),3.96(d,j＝8.8hz,2h),3.88(s,3h),2.66(s,2h),1.96(s,3h)。
[0221]
8. 2-(苄氧基)-6-((7-(苄氧基)-6-(甲氧基-d3)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-基-3,3-d2)甲基)-3-甲氧基苄基乙酸酯
[0222][0223]
以2-(苄氧基)-6-((7-(苄氧基)-6-(甲氧基-d3)-3,4-二氢异喹啉-1-基-3,3-d2)甲基)-3-甲氧基苄基乙酸酯(1.00g,1.75mmol)和硼氢化钠(99.4mg,2.63mmol)为原料，按照制备实施例2中第9步的实验操作得到黄色2-(苄氧基)-6-((7-(苄氧基)-6-(甲氧基-d3)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-基-3,3-d2)甲基)-3-甲氧基苄基乙酸酯(0.90g,90％)油状物。ms esi计算值c
35h32
d5no6[m+h]
+
,573.3,实验测得573.4；1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.50-7.41(m,5h),7.41-7.30(m,5h),7.02-6.94(m,2h),6.63(s,1h),6.55(s,1h),5.27(d,j＝11.6hz,1h),5.16(d,j＝11.6hz,1h),5.08(s,2h),5.05(s,2h),4.11-4.08(m,1h),3.92(s,3h),3.11(dd,j＝14.1,4.9hz,1h),2.94(s,2h),2.81(s,2h),1.96(s,3h)。
[0224]
9.(2-(苄氧基)-6-((7-(苄氧基)-6-(甲氧基-d3)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-基-3,3-d2)甲基)-3-甲氧基苯基)甲醇
[0225][0226]
以2-(苄氧基)-6-((7-(苄氧基)-6-(甲氧基-d3)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-基-3,3-d2)甲基)-3-甲氧基苄基乙酸酯(1.08g,1.89mmol)和氢氧化钠(0.40g,10.00mmol)为原料，按照制备实施例1中第12步的实验操作得到粉色(2-(苄氧基)-6-((7-(苄氧基)-6-(甲氧基-d3)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-基-3,3-d2)甲基)-3-甲氧基苯基)甲醇(0.94g,94％)固体。ms esi计算值c
33h30
d5no5[m+h]
+
,531.3,实验测得531.3；1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.60-7.54(m,2h),7.52-7.48(m,2h),7.41(m,4h),7.37-7.30(m,2h),6.96-6.87(m,2h),6.82(s,1h),6.63(s,1h),5.26-5.16(m,2h),5.15-5.02(m,2h),4.88(d,j＝11.5hz,1h),4.46(d,j＝11.6hz,1h),4.08-4.01(m,1h),3.90(d,j＝1.2hz,3h),3.09-3.05(m,1h),2.96-2.86(m,1h),2.78(d,j＝16.2hz,1h),2.60(d,j＝16.0hz,1h)。
[0227]
10和11. 2,9-双(苄氧基)-10-甲氧基-3-(甲氧基-d3)-5,8,13,13a-四氢-6h-异喹啉基[3,2-a]异喹啉-6,6-d2[0228][0229]
以(2-(苄氧基)-6-((7-(苄氧基)-6-(甲氧基-d3)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-基-3,3-d2)甲基)-3-甲氧基苯基)甲醇(0.94g,1.77mmol)和氯化亚砜(0.77ml,6.48mmol)为原料，按照制备实施例1中第13步和第14步的实验操作得到淡黄色2,9-双(苄氧基)-10-甲氧
基-3-(甲氧基-d3)-5,8,13,13a-四氢-6h-异喹啉基[3,2-a]异喹啉-6,6-d2(0.84g,95％)固体。ms esi计算值c
33h28
d5no4[m+h]
+
,513.3,实验测得513.3；1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.53-7.45(m,4h),7.45-7.31(m,6h),6.89-6.83(m,2h),6.76(s,1h),6.65(s,1h),5.17(s,2h),5.11(d,j＝11.1hz,1h),5.01(d,j＝11.1hz,1h),4.22(d,j＝15.8hz,1h),3.90(s,3h),3.53-3.38(m,2h),3.18-3.05(m,2h),2.83-2.59(m,2h)。
[0230]
12 10-甲氧基-3-(甲氧基-d3)-5,8,13,13a-四氢-6h-异喹啉基[3,2-a]异喹啉-6,6-d
2-2,9-二醇
[0231][0232]
以2,9-双(苄氧基)-10-甲氧基-3-(甲氧基-d3)-5,8,13,13a-四氢-6h-异喹啉基[3,2-a]异喹啉-6,6-d2(0.56g,1.09mmol)为原料，按照制备实施例1中第15步的实验操作得到粉色10-甲氧基-3-(甲氧基-d3)-5,8,13,13a-四氢-6h-异喹啉基[3,2-a]异喹啉-6,6-d
2-2,9-二醇(0.31g,84％)固体。ms esi计算值c
19h16
d5no4[m+h]
+
,333.2,实验测得333.2。
[0233]
13.(r)-10-甲氧基-3-(甲氧基-d3)-5,8,13,13a-四氢-6h-异喹啉基[3,2-a]异喹啉-6,6-d
2-2,9-二醇和(s)-10-甲氧基-3-(甲氧基-d3)-5,8,13,13a-四氢-6h-异喹啉基[3,2-a]异喹啉-6,6-d
2-2,9-二醇
[0234][0235]
外消旋产物(0.32g)用手性高效液相色谱分离，条件如下(色谱柱:chiral art cellulose-sb,2x25cm,5μm；流动相a:正己烷(外加0.5％2m氨气甲醇溶液)；流动相b:乙醇；流速:16ml/min；等梯度:50％b 18分钟；检测波长：254/220nm；保留时间1:6.47分钟；保留时间2:10.958分钟。前峰收集减压蒸干，得到粉色(r)-或(s)-10-甲氧基-3-(甲氧基-d3)-5,8,13,13a-四氢-6h-异喹啉基[3,2-a]异喹啉-6,6-d
2-2,9-二醇(0.14g,44％)固体。ms esi计算值c
19h16
d5no4[m+h]
+
,333.18,实验测得333.10；1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.66(s,1h),8.57(s,1h),6.78(d,j＝8.2hz,1h),6.69(s,1h),6.63(s,1h),6.58(d,j＝8.3hz,1h),4.00(d,j＝15.6hz,1h),3.76(s,3h),3.33-3.30(m,1h),3.30-3.14(m,2h),2.89(d,j＝15.6hz,1h),2.59-2.51(m,2h)；α＝+284.5(c＝0.2in meoh)；ee》99％；d5＝99.22％。
[0236]
后峰收集减压蒸干，得到粉色(s)-或(r)10-甲氧基-3-(甲氧基-d3)-5,8,13,13a-四氢-6h-异喹啉基[3,2-a]异喹啉-6,6-d
2-2,9-二醇(0.14g,45％)固体。ms esi计算值c
19h16
d5no4[m+h]
+
,333.18,实验测得333.10；1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.66(s,1h),8.56(s,1h),6.78(d,j＝8.2hz,1h),6.69(s,1h),6.63(s,1h),6.58(d,j＝8.3hz,1h),4.00(d,j＝15.6hz,1h),3.76(s,3h),3.33-3.30(m,1h),3.27-3.22(m,1h),3.17-3.13(m,1h),2.89(d,j＝15.6hz,1h),2.59-2.52(m,2h)；α＝-295.5(c＝0.2in meoh)；ee》99％；d5＝
6.47(m,1h),6.06(s,1h),5.13(s,2h),5.09(s,2h),4.62(s,2h),3.86(s,3h),3.52(s,2h),2.67(s,2h)。
[0246]
2. 2-(苄氧基)-6-(2-((2-(4-(苄氧基)-3-甲氧基苯基)乙基-1,1-d2)氨基)-2-氧乙基)-3-(甲氧基-d3)乙酸苄酯
[0247][0248]
以2-(3-(苄氧基)-2-(羟甲基)-4-(甲氧基-d3)苯基)-n-(2-(4-(苄氧基)-3甲氧基苯基)乙基-1,1-d2)乙酰胺(3.10g,5.67mmol)和乙酰氯(0.67g,8.51mmol)为原料，按照制备实施例1中第9步的实验操作得到类白色2-(苄氧基)-6-(2-((2-(4-(苄氧基)-3-甲氧基苯基)乙基-1,1-d2)氨基)-2-氧乙基)-3-(甲氧基-d3)乙酸苄酯(2.86g,86％)固体。ms esi计算值c
35h32
d5no7[m+h]
+
,589.3,实验测得589.3；1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.48-7.41(m,4h),7.40-7.31(m,6h),6.95-6.86(m,2h),6.76(d,j＝8.1hz,1h),6.66(d,j＝2.0hz,1h),6.50-6.47(m,1h),5.43-5.38(m,1h),5.14-5.10(m,4h),5.05(s,2h),3.86(s,3h),3.54(s,2h),2.65(s,2h),1.95(s,3h)。
[0249]
3. 2-(苄氧基)-6-((7-(苄氧基)-6-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-1-基-3,3-d2)甲基)-3-(甲氧基-d3)乙酸苄酯
[0250][0251]
以2-(苄氧基)-6-(2-((2-(4-(苄氧基)-3-甲氧基苯基)乙基-1,1-d2)氨基)-2-氧乙基)-3-(甲氧基-d3)乙酸苄酯(2.66g,4.52mmol)和三氯氧磷(2.53ml,16.48mmol)为原料，按照制备实施例1中第10步的实验操作得到黄色2-(苄氧基)-6-((7-(苄氧基)-6-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-1-基-3,3-d2)甲基)-3-(甲氧基-d3)乙酸苄酯(1.70g,66％)固体。ms esi计算值c
35h30
d5no6[m+h]
+
,571.3,实验测得571.3；1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.50-7.44(m,2h),7.42-7.36(m,2h),7.35-7.30(m,6h),6.97(s,1h),6.85-6.77(m,2h),6.72(s,1h),5.21(s,2h),5.06(s,2h),5.01(s,2h),3.99(s,2h),3.93(s,3h),2.67(s,2h),1.96(s,3h)。
[0252]
4. 2-(苄氧基)-6-((7-(苄氧基)-6-甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-基-3,3-d2)甲基)-3(甲氧基-d3)乙酸苄酯
[0253][0254]
以2-(苄氧基)-6-((7-(苄氧基)-6-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-1-基-3,3-d2)甲
6,6-d
2-2,9-二醇
[0262][0263]
以2,9-双(苄氧基)-3-甲氧基-10-(甲氧基-d3)-5,8,13,13a-四氢-6h-异喹啉基[3,2-a]异喹啉-6,6-d2(0.62g,1.21mmol)为原料，按照制备实施例1中第15步的实验操作得到粉色3-甲氧基-10-(甲氧基-d3)-5,8,13,13a-四氢-6h-异喹啉基[3,2-a]异喹啉-6,6-d
2-2,9-二醇(0.29g,72％)固体。ms esi计算值c
19h16
d5no4[m+h]
+
,333.2,实验测得333.2。
[0264]
9.(r)-和(s)-3-甲氧基-10-(甲氧基-d3)-5,8,13,13a-四氢-6h-异喹啉基[3,2-a]异喹啉-6,6-d
2-2,9-二醇
[0265][0266]
外消旋产物(0.27g)用手性高效液相色谱分离，条件如下(色谱柱:chiral art cellulose-sb,2x25cm,5μm；流动相a:正己烷(外加0.5％2m氨气甲醇溶液)；流动相b:乙醇；流速:20ml/min；等梯度:50％b 12分钟；检测波长：254/220nm；保留时间1:3.158分钟；保留时间2:8.062分钟。前峰收集减压蒸干，得到粉色(r)-或(s)-3-甲氧基-10-(甲氧基-d3)-5,8,13,13a-四氢-6h-异喹啉基[3,2-a]异喹啉-6,6-d
2-2,9-二醇(0.13g,46％)固体。ms esi计算值c
19h16
d5no4[m+h]
+
,333.18,实验测得333.15；1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.67(s,1h),8.57(s,1h),6.78(d,j＝8.2hz,1h),6.70(s,1h),6.64(s,1h),6.59(d,j＝8.2hz,1h),4.01(d,j＝15.7hz,1h),3.74(s,3h),3.38-3.22(m,2h),3.20-3.11(m,1h),2.89(d,j＝15.8hz,1h),2.64-2.53(m,2h)；α＝+282(c＝0.2in meoh)；ee》99％；d5＝99.37％。
[0267]
后峰收集加压蒸干，得到粉色(s)-或(r)3-甲氧基-10-(甲氧基-d3)-5,8,13,13a-四氢-6h-异喹啉基[3,2-a]异喹啉-6,6-d
2-2,9-二醇(0.13g,45％)固体。ms esi计算值c
19h16
d5no4[m+h]
+
,333.18,实验测得333.15；1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.66(s,1h),8.56(s,1h),6.78(d,j＝8.2hz,1h),6.70(s,1h),6.64(s,1h),6.58(d,j＝8.2hz,1h),4.01(d,j＝15.7hz,1h),3.74(s,3h),3.39-3.23(m,2h),3.21-3.13(m,1h),2.90(d,j＝15.7hz,1h),2.64-2.54(m,2h)；α＝-297.5(c＝0.2in meoh)；ee》99％；d5＝99.36％。
[0268]
制备实施例7
[0269]
化合物07-0q和07-0h的合成
[0270]
[0271]
合成路线7
[0272][0273]
实验部分
[0274]
1. 2-(3-(苄氧基)-2-(羟甲基)-4-(甲氧基-d3)苯基)-n-(2-(4-(苄氧基)-3-(甲氧基-d3)苯基)乙基-1,1-d2)乙酰胺
[0275][0276]
以8-(苄氧基)-7-(甲氧基-d3)异色-3-酮(2.00g,6.96mmol)和2-(4-(苄氧基)-3-(甲氧基-d3)苯基)乙烷-1,1-d
2-1-胺(2.19g,8.35mmol)为原料，按照制备实施例1中第8步的实验操作得到黄色2-(3-(苄氧基)-2-(羟甲基)-4-(甲氧基-d3)苯基)-n-(2-(4-(苄氧基)-3-(甲氧基-d3)苯基)乙基-1,1-d2)乙酰胺(2.64g,69％)油状物。ms esi计算值c
33h27
d8no6[m+h]
+
,550.3,实验测得550.3；1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.51-7.47(m,2h),7.46-7.43(m,2h),7.42-7.30(m,6h),6.97-6.93(m,1h),6.88-6.85(m,1h),6.81-6.73(m,1h),6.69-6.67(m,1h),6.51-6.47(m,1h),6.08(s,1h),5.14(s,2h),5.09(s,2h),4.64-4.60(m,2h),3.52(s,2h),2.67(s,2h)。
[0277]
2. 2-(苄氧基)-6-(2-((2-(4-(苄氧基)-3-(甲氧基-d3)苯基)乙基-1,1-d2)氨基)-2-氧乙基)-3-(甲氧基-d3)乙酸苄酯
[0278][0279]
以2-(3-(苄氧基)-2-(羟甲基)-4-(甲氧基-d3)苯基)-n-(2-(4-(苄氧基)-3-(甲氧基-d3)苯基)乙基-1,1-d2)乙酰胺(2.66g,4.84mmol)和乙酰氯(0.52ml,6.60mmol)为原料，按照制备实施例1中第9步的实验操作得到类白色2-(苄氧基)-6-(2-((2-(4-(苄氧基)-3-(甲氧基-d3)苯基)乙基-1,1-d2)氨基)-2-氧乙基)-3-(甲氧基-d3)乙酸苄酯(2.50g,87％)半固体。ms esi计算值c
35h29
d8no7[m+h]
+
,592.3,实验测得592.3；1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.48-7.41(m,5h),7.41-7.30(m,5h),6.94-6.86(m,2h),6.76(d,j＝8.2hz,1h),6.65(d,j＝2.0hz,1h),6.49-6.45(m,1h),5.14-5.10(m,4h),5.05(s,2h),3.54(s,2h),2.65(s,2h),1.95(s,3h)。
[0280]
3. 2-(苄氧基)-6-((7-(苄氧基)-6-(甲氧基-d3)-3,4-二氢异喹啉-1-基-3,3-d2)甲基)-3-(甲氧基-d3)乙酸苄酯
[0281][0282]
以2-(苄氧基)-6-(2-((2-(4-(苄氧基)-3-(甲氧基-d3)苯基)乙基-1,1-d2)氨基)-2-氧乙基)-3-(甲氧基-d3)乙酸苄酯(2.30g,3.89mmol)和三氯氧磷(2.17ml,14.18mmol)为原料，按照制备实施例1中第10步的实验操作得到橙色2-(苄氧基)-6-((7-(苄氧基)-6-(甲氧基-d3)-3,4-二氢异喹啉-1-基-3,3-d2)甲基)-3-(甲氧基-d3)乙酸苄酯(1.05g,47％)固体。ms esi计算值c
35h27
d8no6[m+h]
+
,574.3,实验测得574.3；1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.52-7.44(m,3h),7.43-7.30(m,7h),6.98-6.94(m,1h),6.85-6.79(m,2h),6.71(s,1h),5.21(s,2h),5.06(s,2h),5.01(s,2h),3.97(s,2h),2.66(s,2h),1.96(s,3h)。
[0283]
4. 2-(苄氧基)-6-((7-(苄氧基)-6-(甲氧基-d3)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-基-3,3-d2)甲基)-3-(甲氧基-d3)乙酸苄酯
[0284][0285]
以2-(苄氧基)-6-((7-(苄氧基)-6-(甲氧基-d3)-3,4-二氢异喹啉-1-基-3,3-d2)甲基)-3-(甲氧基-d3)乙酸苄酯(0.90g,1.57mmol)和硼氢化钠(89.02mg,2.35mmol)为原料，按照制备实施例2中第9步的实验操作得到黄色2-(苄氧基)-6-((7-(苄氧基)-6-(甲氧基-d3)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-基-3,3-d2)甲基)-3-(甲氧基-d3)乙酸苄酯(0.71g,79％)油状物。ms esi计算值c
35h29
d8no6[m+h]
+
,576.3,实验测得576.2；1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.50-7.45(m,4h),7.44-7.30(m,6h),7.01-6.94(m,2h),6.66-6.62(m,2h),5.35-5.29(m,
2h),5.17(d,j＝11.5hz,1h),5.11-5.09(m,4h),4.02-3.97(m,1h),3.12-3.05(m,1h),2.87-2.80(m,1h),2.76(s,2h),1.97(s,3h)。
[0286]
5.(2-(苄氧基)-6-((7-(苄氧基)-6-(甲氧基-d3)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-基-3,3-d2)甲基)-3-(甲氧基-d3)苯基)甲醇
[0287][0288]
以2-(苄氧基)-6-((7-(苄氧基)-6-(甲氧基-d3)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-基-3,3-d2)甲基)-3-(甲氧基-d3)乙酸苄酯(0.71g,1.24mmol)和氢氧化钠(0.30g,7.50mmol)为原料，按照制备实施例1中第12步的实验操作得到类白色(2-(苄氧基)-6-((7-(苄氧基)-6-(甲氧基-d3)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-基-3,3-d2)甲基)-3-(甲氧基-d3)苯基)甲醇(0.61g,92％)固体。ms esi计算值c
33h27
d8no5[m+h]
+
,534.3,实验测得534.4；1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.61-7.56(m,2h),7.54-7.47(m,2h),7.43-7.38(m,4h),7.37-7.30(m,2h),6.95-6.87(m,2h),6.82(s,1h),6.63(s,1h),5.26-5.15(m,2h),5.15-5.02(m,2h),4.88(d,j＝11.6hz,1h),4.46(d,j＝11.6hz,1h),4.05-4.01(m,1h),3.06-3.02(m,1h),2.93-2.89(m,1h),2.78(d,j＝16.1hz,1h),2.60(d,j＝16.0hz,1h)。
[0289]
6和7. 2,9-双(苄氧基)-3,10-双(甲氧基-d3)-5,8,13,13a-四氢-6h-异喹啉基[3,2-a]异喹啉-6,6-d2[0290][0291]
以(2-(苄氧基)-6-((7-(苄氧基)-6-(甲氧基-d3)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-基-3,3-d2)甲基)-3-(甲氧基-d3)苯基)甲醇(0.61g,1.14mmol)和氯化亚砜(0.50ml,4.18mmol)为原料，按照制备实施例1中第13步和第14步的实验操作得到黄色2,9-双(苄氧基)-3,10-双(甲氧基-d3)-5,8,13,13a-四氢-6h-异喹啉基[3,2-a]异喹啉-6,6-d2(0.51g,88％)油状物。ms esi计算值c
33h25
d8no4[m+h]
+
,516.3,实验测得516.3；1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.51-7.47(m,4h),7.44-7.31(m,6h),6.89-6.82(m,2h),6.76(s,1h),6.65(s,1h),5.16(s,2h),5.11(d,j＝11.1hz,1h),5.00(d,j＝11.2hz,1h),4.23-4.19(m,1h),3.48-3.41(m,2h),3.11(d,j＝15.9hz,2h),2.77-2.64(m,2h)。
[0292]
8. 3,10-双(甲氧基-d3)-5,8,13,13a-四氢-6h-异喹啉基[3,2-a]异喹啉-6,6-d
2-2,9-二醇
[0293]
[0294]
以2,9-双(苄氧基)-3,10-双(甲氧基-d3)-5,8,13,13a-四氢-6h-异喹啉基[3,2-a]异喹啉-6,6-d2(0.47g,0.91mmol)为原料，按照制备实施例1中第15步的实验操作得到淡橙色3,10-双(甲氧基-d3)-5,8,13,13a-四氢-6h-异喹啉基[3,2-a]异喹啉-6,6-d
2-2,9-二醇(0.24g,77％)固体。ms esi计算值c
19h13
d8no4[m+h]
+
,336.2,实验测得336.3。
[0295]
9.(r)-和(s)-3,10-双(甲氧基-d3)-5,8,13,13a-四氢-6h-异喹啉基[3,2-a]异喹啉-6,6-d
2-2,9-二醇
[0296][0297]
外消旋产物(0.24g)用手性高效液相色谱分离，条件如下(色谱柱:chiral art cellulose-sb,2x25cm,5μm；流动相a:正己烷(外加0.5％2m氨气甲醇溶液)；流动相b:乙醇；流速:18ml/min；等梯度:50％b 25分钟；检测波长：254/220nm；保留时间1:8.916分钟；保留时间2:16.952分钟。前峰收集减压蒸干，得到橙色(r)-或(s)-3,10-双(甲氧基-d3)-5,8,13,13a-四氢-6h-异喹啉基[3,2-a]异喹啉-6,6-d
2-2,9-二醇(0.10g,43％)固体。ms esi计算值c
19h13
d8no4[m+h]
+
,336.20,实验测得336.15；1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.66(s,1h),8.56(s,1h),6.78(d,j＝8.2hz,1h),6.69(s,1h),6.63(s,1h),6.58(d,j＝8.3hz,1h),4.00(d,j＝15.6hz,1h),3.36-3.30(m,1h),3.30-3.22(m,1h),3.18-3.13(m,1h),2.89(d,j＝15.6hz,1h),2.61-2.53(m,2h)；α＝+274.5(c＝0.2in meoh)；ee》99％；d8＝99.55％。
[0298]
后峰收集减压蒸干，得到橙色(s)-或(r)3,10-双(甲氧基-d3)-5,8,13,13a-四氢-6h-异喹啉基[3,2-a]异喹啉-6,6-d
2-2,9-二醇(0.10g,43％)固体。ms esi计算值c
19h13
d8no4[m+h]
+
,336.20,实验测得336.15；1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.66(s,1h),8.56(s,1h),6.78(d,j＝8.2hz,1h),6.69(s,1h),6.63(s,1h),6.58(d,j＝8.3hz,1h),4.00(d,j＝15.6hz,1h),3.33-3.30(m,1h),3.29-3.22(m,1h),3.19-3.13(m,1h),2.89(d,j＝15.6hz,1h),2.61-2.52(m,2h)；α＝-301.5(c＝0.2in meoh)；ee》99％；d8＝99.68％.
[0299]
制备实施例8
[0300]
化合物08-0q和08-0h的合成
[0301][0302]
合成路线8
[0303][0304]
实验部分
[0305]
1. 2-(苄氧基)-6-((7-(苄氧基)-6-甲氧基-1，2，3，4-四氢异喹啉-1-基-1-d)甲基)-3-(甲氧基-d3)乙酸苄酯
[0306][0307]
以[2-(苄氧基)-6-[[7-(苄氧基)-6-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-1-基]甲基]-3-(甲氧基-d3)苯基]乙酸甲酯(0.35g,0.09mmol)和硼氘化钠(30.94mg,0.11mmol)为原料，按照制备实施例2中第9步的实验操作得到褐色2-(苄氧基)-6-((7-(苄氧基)-6-甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-基-1-d)甲基)-3-(甲氧基-d3)乙酸苄酯(0.24g,68％)固体。ms esi计算值c
35h33
d4no6[m+h]
+
,572.29,实验测得572.15。
[0308]
2.(2-(苄氧基)-6-((7-(苄氧基)-6-甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-基-1-d)甲基)-3-(甲氧基-d3)苯基)甲醇
[0309][0310]
以2-(苄氧基)-6-((7-(苄氧基)-6-甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-基-1-d)甲基)-3-(甲氧基-d3)乙酸苄酯(0.24g,0.42mmol)和氢氧化钠(56.00mg,1.40mmol)为原料，按照制备实施例1中第12步的实验操作得到白色(2-(苄氧基)-6-((7-(苄氧基)-6-甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-基-1-d)甲基)-3-(甲氧基-d3)苯基)甲醇(0.27g,96％)固体。ms esi计算值c
33h31
d4no5[m+h]
+
,530.28,实验测得530.15；1h nmr(300mhz,cdcl3)δ7.58-7.52(m,2h),7.52-7.48(m,2h),7.45-7.37(m,6h),6.91-6.87(m,2h),6.80(s,1h),6.63(s,1h),5.21-5.18(m,2h),5.12(d,j＝10.8hz,1h),5.05(d,j＝10.7hz,1h),4.87(d,j＝11.6hz,1h),4.47(d,j＝11.6hz,1h),3.91(s,3h),3.10-2.87(m,2h),2.74-2.85(m,2h),2.72-2.58(m,2h)。
[0311]
3和4. 2,9-双(苄氧基)-3-甲氧基-10-(甲氧基-d3)-5,8,13,13a-四氢-6h-异喹啉基[3,2-a]异喹啉-13a-d
[0312][0313]
以(2-(苄氧基)-6-((7-(苄氧基)-6-甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-基-1-d)甲基)-3-(甲氧基-d3)苯基)甲醇(0.27g,0.51mmol)和氯化亚砜(0.21ml,2.90mmol)为原料，按照制备实施例1中第13步和第14步的实验操作得到褐色2,9-双(苄氧基)-3-甲氧基-10-(甲氧基-d3)-5,8,13,13a-四氢-6h-异喹啉基[3,2-a]异喹啉-13a-d(0.22g,85％)固体。ms esi计算值c
33h29
d4no4[m+h]
+
,512.27,实验测得512.15；1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.51-7.45(m,3h),7.44-7.30(m,7h),6.88-6.84(m,2h),6.76(s,1h),6.66(s,1h),5.32(s,2h),5.16(s,2h),5.10(d,j＝11.2hz,1h),5.00(d,j＝11.2hz,1h),4.23-4.19(m,1h),3.90(s,3h),3.46-3.42(m,1h),3.13-3.08(m,2h),2.75-2.58(m,2h)。
[0314]
5. 3-甲氧基-10-(甲氧基-d3)-5,8,13,13a-四氢-6h-异喹啉基[3,2-a]异喹啉-13a-d-2,9-二醇
[0315][0316]
氮气保护下，在0℃将浓盐酸(0.50ml)滴加到2,9-双(苄氧基)-3-甲氧基-10-(甲氧基-d3)-5,8,13,13a-四氢-6h-异喹啉基[3,2-a]异喹啉-13a-d(0.20g,0.39mmol)的乙醇(2ml)溶液中。该反应液在80℃搅拌16小时。反应液用水稀释(20ml)后用二氯甲烷(3x20ml)萃取。有机相合并后，用饱和氯化钠水溶液(50ml)洗涤，无水硫酸钠干燥并过滤。在减压下
将滤液蒸干。残留物用制备液相分离，条件如下：制备柱：xbridge prep c18 obd column，19x150mm，5μm；流动相a:水(外加10mmol/l碳酸氢铵)，流动相b：乙腈；流速：20ml/min；梯度：30％b到60％b 6分钟；检测波长：210/254nm；保留时间：5.53分钟。将包含产物的馏分收集减压蒸干，得到粉色3-甲氧基-10-(甲氧基-d3)-5,8,13,13a-四氢-6h-异喹啉基[3,2-a]异喹啉-13a-d-2,9-二醇(16.8mg,13％)固体。ms esi计算值c
19h17
d4no4[m+h]
+
,332.17,实验测得332.10；1h nmr(300mhz,dmso-d6)δ8.67(s,1h),8.56(s,1h),6.79(d,j＝8.2hz,1h),6.70(s,1h),6.65(s,1h),6.59(d,j＝8.2hz,1h),4.01(d,j＝15.8hz,1h),3.75(s,3h),3.40-3.25(m,1h),3.18-3.08(m,2h),2.97-2.82(m,1h),2.62-2.48(m,3h)；d4＝99.67％。
[0317]
6.(r)-和(s)-3-甲氧基-10-(甲氧基-d3)-5,8,13,13a-四氢-6h-异喹啉基[3,2-a]异喹啉-13a-d-2,9-二醇
[0318][0319]
外消旋产物(16.8mg)用手性高效液相色谱分离，条件如下(色谱柱:chiral art cellulose-sb,2x25cm,5μm；流动相a:正己烷:二氯甲烷＝3:1(外加0.5％2m氨气甲醇溶液)；流动相b:乙醇；流速:20ml/min；等梯度:50％b 7分钟；检测波长：254/220nm；保留时间1:4.107分钟；保留时间2:6.066分钟。前峰收集减压蒸干，得到粉色(r)-或(s)-3-甲氧基-10-(甲氧基-d3)-5,8,13,13a-四氢-6h-异喹啉基[3,2-a]异喹啉-13a-d-2,9-二醇(4.2mg,25％)固体。ms esi计算值c
19h17
d4no4[m+h]
+
,332.17,实验测得332.10；1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.67(s,1h),8.56(s,1h),6.79(d,j＝8.2hz,1h),6.70(s,1h),6.64(s,1h),6.59(d,j＝8.2hz,1h),4.01(d,j＝15.8hz,1h),3.74(s,3h),3.40-3.26(m,1h),3.17-3.08(m,2h),2.97-2.82(m,1h),2.65-2.40(m,3h)；ee》99％。
[0320]
后峰收集减压蒸干，得到粉色(s)-或(r)3-甲氧基-10-(甲氧基-d3)-5,8,13,13a-四氢-6h-异喹啉基[3,2-a]异喹啉-13a-d-2,9-二醇(4.3mg,26％)固体。ms esi计算值c
19h17
d4no4[m+h]
+
,332.17,实验测得332.10；1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.67(s,1h),8.56(s,1h),6.79(d,j＝8.2hz,1h),6.70(s,1h),6.64(s,1h),6.59(d,j＝8.2hz,1h),4.01(d,j＝15.8hz,1h),3.74(s,3h),3.40-3.20(m,1h),3.18-3.10(m,2h),2.97-2.82(m,1h),2.65-2.40(m,3h)；ee》99％。
[0321]
制备实施例9
[0322]
化合物09-0q和09-0h的合成
[0323][0324]
合成路线9
[0325][0326]
实验部分
[0327]
1. 2-(4-(苄氧基)-3-溴苯基)乙酸甲酯
[0328][0329]
以2-(3-溴-4-羟基苯基)乙酸甲酯(29.20g,119.15mmol)和溴化苄(22.51g,131.61mmo)为原料，按照制备实施例1中第2步的实验操作得到白色的2-(4-(苄氧基)-3-溴苯基)乙酸甲酯(35.4g,89％)固体。ms esi计算值c
16h15
bro3[m+nh3+h]
+
,352.02,354.02,实验测得352.15,354.15；1hnmr(300mhz,cdcl3)δ7.55-7.48(m,3h),7.45-7.30(m,3h),7.17(dd,j＝8.4,2.2hz,1h),6.91(d,j＝8.4hz,1h),5.17(s,2h),3.72(s,3h),3.56(s,2h)。
[0330]
2. 2-(4-(苄氧基)-3-羟基苯基)乙酸
[0331][0332]
以2-(4-(苄氧基)-3-溴苯基)乙酸甲酯(15.70g,46.84mmol)和双(8-喹啉酸)铜(ii)(2.47g,7.02mmol)为原料，按照制备实施例1中第3步的实验操作得到褐色的2-(4-(苄氧基)-3-羟基苯基)乙酸(4g,33％)固体。ms esi计算值c
15h14
o4[m-h]-,257.09,实验测得257.05；1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.47-7.34(m,5h),7.00-6.87(m,2h),6.77(dd,j＝8.2,2.1hz,1h),5.68(s,1h),5.12(s,2h),3.59(s,2h)。
[0333]
3. 7-(苄氧基)-8-羟基异色-3-酮
[0334][0335]
以2-(4-(苄氧基)-3-羟基苯基)乙酸(4.00g,15.49mmol)，苯基硼酸(2.83g,
23.21mmol)和多聚甲醛(3.64g,121.33mmol)为原料，按照制备实施例1中第4步的实验操作得到褐色的7-(苄氧基)-8-羟基异色-3-酮(3.52g,84％)固体。ms esi计算值c
16h14
o4[m-h]-,269.09,实验测得269.20。
[0336]
4. 7-(苄氧基)-8-甲氧基异色-3-酮
[0337][0338]
以7-(苄氧基)-8-羟基异色-3-酮((3.5g,12.85mmol)和碘甲烷(2.02g,14.23mmol)为原料，按照制备实施例1中第5步的实验操作得到褐色7-(苄氧基)-8-甲氧基异色-3-酮(1.5g,40％)固体。ms esi计算值c
17h16
o4[m+h]
+
,285.10,实验测得285.20；1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.50-7.23(m,5h),6.96(d,j＝8.2hz,1h),6.88-6.86(m,1h),5.43(s,2h),5.15(s,2h),3.94(s,3h),3.64(d,j＝0.8hz,2h)。
[0339]
5. 2-(4-(苄氧基)-2-(羟甲基)-3-甲氧基苯基)-n-(4-(苄氧基)-3-(甲氧基-d3)苯乙基)乙酰胺
[0340][0341]
以7-(苄氧基)-8-甲氧基异色-3-酮(0.61g,2.15mmol)和2-(4-(苄氧基)-3-(甲氧基-d3)苯基)乙烷-1-胺(0.60g,2.31mmol)为原料，按照制备实施例1中第8步的实验操作得到类白色2-(4-(苄氧基)-2-(羟甲基)-3-甲氧基苯基)-n-(4-(苄氧基)-3-(甲氧基-d3)苯乙基)乙酰胺(0.93g,74％)固体。ms esi计算值c
33h32
d3no6[m+h]
+
,545.27,实验测得545.30；1h nmr(300mhz,cdcl3)δ7.51-7.25(m,11h),6.93-6.81(m,2h),6.78(d,j＝8.1hz,1h),6.68(d,j＝2.0hz,1h),6.50(dd,j＝8.1,2.0hz,1h),5.96(br s,1h),5.15(d,j＝4.6hz,4h),4.70(s,2h),3.96(s,3h),3.52(s,2h),3.48-3.46(m,2h),2.70(t,j＝6.8hz,2h)。
[0342]
6. 3-(苄氧基)-6-(2-((4-(苄氧基)-3-(甲氧基-d3)苯乙基)氨基)-2-氧乙基)-2-甲氧基苄基乙酸酯
[0343][0344]
以2-(4-(苄氧基)-2-(羟甲基)-3-甲氧基苯基)-n-(4-(苄氧基)-3-(甲氧基-d3)苯乙基)乙酰胺(0.93g,1.71mmol)和乙酰氯(0.20g,2.56mmol)为原料，按照制备实施例1中第9步的实验操作得到类白色3-(苄氧基)-6-(2-((4-(苄氧基)-3-(甲氧基-d3)苯乙基)氨
基)-2-氧乙基)-2-甲氧基苄基乙酸酯(1.02g,96％)固体。ms esi计算值c
35h34
d3no7[m+h]
+
,587.28,实验测得587.10；1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.50-7.31(m,10h),6.92(d,j＝8.5hz,1h),6.86(d,j＝8.5hz,1h),6.76(d,j＝8.2hz,1h),6.66(d,j＝2.0hz,1h),6.48(dd,j＝8.1,2.1hz,1h),5.48-5.46(m,1h),5.18(s,2h),5.13(s,4h),3.91(s,3h),3.56(s,2h),3.46-3.44(m,2h),2.68(t,j＝6.9hz,2h),2.02(s,3h)。
[0345]
7. 3-(苄氧基)-6-((7-(苄氧基)-6-(甲氧基-d3)-3,4-二氢异喹啉-1-基)甲基)-2-甲氧基乙酸苄酯
[0346][0347]
以3-(苄氧基)-6-(2-((4-(苄氧基)-3-(甲氧基-d3)苯乙基)氨基)-2-氧乙基)-2-甲氧基苄基乙酸酯(0.9g,1.53mmol)和三氯氧磷(0.86ml,9.20mmol)为原料，按照制备实施例1中第10步的实验操作得到黄色3-(苄氧基)-6-((7-(苄氧基)-6-(甲氧基-d3)-3,4-二氢异喹啉-1-基)甲基)-2-甲氧基乙酸苄酯(0.62g,58％)固体。ms esi计算值c
35h32
d3no6[m+h]
+
,569.27,实验测得569.20；1h nmr(300mhz,cdcl3)δ7.47-7.29(m,10h),6.97(s,1h),6.83(d,j＝8.5hz,1h),6.72(d,j＝9.4hz,2h),5.25(s,2h),5.08(s,2h),4.99(s,2h),4.03(s,2h),3.91(s,3h),3.72(t,j＝7.6hz,2h),2.69(t,j＝7.7hz,2h),2.03(s,3h)。
[0348]
8. 3-(苄氧基)-6-((7-(苄氧基)-6-(甲氧基-d3)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-基)甲基)-2-甲氧基乙酸苄酯
[0349][0350]
以3-(苄氧基)-6-((7-(苄氧基)-6-(甲氧基-d3)-3,4-二氢异喹啉-1-基)甲基)-2-甲氧基乙酸苄酯(0.57g,1.00mmol)和硼氢化钠(56.88mg,1.50mmol)为原料，按照制备实施例2中第9步的实验操作得到类白色3-(苄氧基)-6-((7-(苄氧基)-6-(甲氧基-d3)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-基)甲基)-2-甲氧基乙酸苄酯(0.32g,55％)固体。ms esi计算值c
35h34
d3no6[m+h]
+
,571.28,实验测得571.10；1h nmr(300mhz,cdcl3)δ7.51-7.27(m,10h),7.00-6.92(m,2h),6.63-6.60(m,2h),5.39-5.29(m,1h),5.21(d,j＝11.5hz,1h),5.14(s,2h),5.07(s,2h),4.06-4.04(m,1h),3.94(s,3h),3.20-3.15(m,2h),3.06-2.76(m,4h),2.06(s,3h)。
[0351]
9.(3-(苄氧基)-6-((7-(苄氧基)-6-(甲氧基-d3)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-基)甲基)-2-甲氧基苯基)甲醇
[0352][0353]
以3-(苄氧基)-6-((7-(苄氧基)-6-(甲氧基-d3)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-基)甲基)-2-甲氧基乙酸苄酯(0.27g,0.46mmol)和氢氧化钠(0.95ml,2.79mmol,3n)为原料，按照制备实施例1中第12步的实验操作得到白色(3-(苄氧基)-6-((7-(苄氧基)-6-(甲氧基-d3)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-基)甲基)-2-甲氧基苯基)甲醇(0.27g,99％)固体。ms esi计算值c
33h32
d3no5[m+h]
+
,529.27,实验测得529.20；1h nmr(300mhz,cdcl3)δ7.50-7.30(m,10h),6.91(d,j＝8.4hz,1h),6.88-6.78(m,2h),6.62(s,1h),5.20-5.15(m,4h),4.86(d,j＝11.5hz,1h),4.48(d,j＝11.5hz,1h),4.04-4.01(m,1h),3.97(s,3h),3.60-3.80(m,2h),3.12-2.98(m,2h),2.97-2.71(m,3h),2.68-2.55(m,1h)。
[0354]
10和11. 2,10-双(苄氧基)-9-甲氧基-3-(甲氧基-d3)-5,8,13,13a-四氢-6h-异喹啉基[3,2-a]异喹啉
[0355][0356]
以(3-(苄氧基)-6-((7-(苄氧基)-6-(甲氧基-d3)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-基)甲基)-2-甲氧基苯基)甲醇(0.22g,0.41mmol)和氯化亚砜(0.30g,2.49mmol)为原料，按照制备实施例1中第13步和第14步的实验操作得到黄色2,10-双(苄氧基)-9-甲氧基-3-(甲氧基-d3)-5,8,13,13a-四氢-6h-异喹啉基[3,2-a]异喹啉(0.17g,80％)油状物。ms esi计算值c
33h30
d3no4[m+h]
+
,511.26,实验测得511.40。
[0357]
12. 9-甲氧基-3-(甲氧基-d3)-5,8,13,13a-四氢-6h-异喹啉基[3,2-a]异喹啉-2,10-二醇
[0358][0359]
以2,10-双(苄氧基)-9-甲氧基-3-(甲氧基-d3)-5,8,13,13a-四氢-6h-异喹啉基[3,2-a]异喹啉(0.17g,0.03mmol)为原料，按照制备实施例1中第14步的实验操作得到类白色9-甲氧基-3-(甲氧基-d3)-5,8,13,13a-四氢-6h-异喹啉基[3,2-a]异喹啉-2,10-二醇(60mg,55％)固体。ms esi计算值c
19h18
d3no4[m+h]
+
,331.17,实验测得331.25。
[0360]
13.(r)-和(s)-9-甲氧基-3-(甲氧基-d3)-5,8,13,13a-四氢-6h-异喹啉基[3,2-a]异喹啉-2,10-二醇
[0361][0362]
外消旋产物(60mg)用手性高效液相色谱分离，条件如下(色谱柱:chiral art cellulose-sb,2x25cm,5μm；流动相a:正己烷(外加10mm氨气甲醇溶液)；流动相b:乙醇；流速:20ml/min；等梯度:50％b 10.5分钟；检测波长：254/220nm；保留时间1:5.367分钟；保留时间2:8.524分钟。前峰收集减压蒸干，得到粉色(r)-或(s)-9-甲氧基-3-(甲氧基-d3)-5,8,13,13a-四氢-6h-异喹啉基[3,2-a]异喹啉-2,10-二醇(22.9mg,38％)固体。ms esi计算值c
19h18
d3no4[m+h]
+
,331.17,实验测得331.10；1h nmr(300mhz,dmso-d6)δ9.06(s,1h),8.66(s,1h),6.77-6.61(m,4h),4.04(d,j＝15.8hz,1h),3.73(s,3h),3.39-3.34(m,2h),3.19-3.06(m,2h),2.96-2.82(m,1h),2.59-2.41(m,3h)；α＝+268.3(c＝0.1in meoh)；ee＝98.2％；d3＝99.14％.
[0363]
后峰收集减压蒸干，得到粉色(s)-或(r)9-甲氧基-3-(甲氧基-d3)-5,8,13,13a-四氢-6h-异喹啉基[3,2-a]异喹啉-2,10-二醇(22.0mg,36％)固体。ms esi计算值c
19h18
d3no4[m+h]
+
,331.17,实验测得331.10；1h nmr(300mhz,dmso-d6)δ9.06(s,1h),8.66(s,1h),6.77-6.61(m,4h),4.04(d,j＝15.8hz,1h),3.73(s,3h),3.39-3.34(m,2h),3.19-3.06(m,2h),2.96-2.82(m,1h),2.59-2.41(m,3h)；a＝-265.7(c＝0.1in meoh)；ee＝95.1％；d3＝99.24％。
[0364]
制备实施例10
[0365]
化合物10-0q和10-0h的合成
[0366][0367]
合成路线10
[0368][0369]
实验部分
[0370]
1. 2-(4-(苄氧基)-2-(羟甲基)-3-甲氧基苯基)-n-(2-(4-(苄氧基)-3-甲氧基苯
基)乙基-1,1-d2)乙酰胺
[0371][0372]
以7-(苄氧基)-8-甲氧基异色-3-酮(0.70g,2.46mmol)和2-[4-(苄氧基)-3-甲氧基苯基](1,1-d2)乙胺盐酸盐(0.75g,2.54mmol)为原料，按照制备实施例3中第2步的实验操作得到类白色2-(4-(苄氧基)-2-(羟甲基)-3-甲氧基苯基)-n-(2-(4-(苄氧基)-3-甲氧基苯基)乙基-1,1-d2)乙酰胺(0.82g,59％)固体。ms esi计算值c
33h33
d2no6[m+h]
+
,544.26,实验测得544.01；1h nmr(300mhz,cdcl3)δ7.49-7.30(m,11h),6.92-6.82(m,2h),6.78(d,j＝8.2hz,1h),6.69(d,j＝2.0hz,1h),6.50(dd,j＝8.1,2.0hz,1h),5.93(s,1h),5.15(s,2h),5.14(s,2h),4.71(s,2h),3.96(s,3h),3.86(s,3h),3.53(s,2h),2.69(s,2h)。
[0373]
2. 3-(苄氧基)-6-(2-((2-(4-(苄氧基)-3-甲氧基苯基)乙基-1,1-d2)氨基)-2-氧乙基)-2-甲氧基苄基乙酸酯
[0374][0375]
以2-(4-(苄氧基)-2-(羟甲基)-3-甲氧基苯基)-n-(2-(4-(苄氧基)-3-甲氧基苯基)乙基-1,1-d2)乙酰胺(0.82g,1.40mmol)和乙酰氯(0.16g,2.10mmol)为原料，按照制备实施例1中第9步的实验操作得到类白色3-(苄氧基)-6-(2-((2-(4-(苄氧基)-3-甲氧基苯基)乙基-1,1-d2)氨基)-2-氧乙基)-2-甲氧基苄基乙酸酯(0.81g,99％)固体。ms esi计算值c
35h35
d2no7[m+h]
+
,586.27,实验测得586.20；1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.50-7.27(m,10h),6.92(d,j＝8.5hz,1h),6.86(d,j＝8.4hz,1h),6.76(d,j＝8.1hz,1h),6.66(d,j＝2.0hz,1h),6.49(dd,j＝8.1,2.0hz,1h),5.46(s,1h),5.18(s,2h),5.15-5.12(m,4h),3.91(s,3h),3.85(s,3h),3.56(s,2h),2.67(s,2h),2.02(s,3h)。
[0376]
3. 3-(苄氧基)-6-((7-(苄氧基)-6-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-1-基-3,3-d2)甲基)-2-甲氧基乙酸苄酯
[0377][0378]
以3-(苄氧基)-6-(2-((2-(4-(苄氧基)-3-甲氧基苯基)乙基-1,1-d2)氨基)-2-氧乙基)-2-甲氧基苄基乙酸酯(0.81g,1.38mmol)和三氯氧磷(0.77ml,8.29mmol)为原料，按照制备实施例1中第10步的实验操作得到黄色3-(苄氧基)-6-((7-(苄氧基)-6-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-1-基-3,3-d2)甲基)-2-甲氧基乙酸苄酯(0.50g,64％)固体。ms esi计算值c35h33
d2no6[m+h]
+
,568.26,实验测得568.30；1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.49-7.31(m,6h),7.32-7.24(m,4h),6.98(s,1h),6.84(d,j＝8.5hz,1h),6.78-6.70(m,2h),5.26(s,2h),5.10(s,2h),5.01(s,2h),4.00(s,2h),3.92(2s,6h),2.66(s,2h),2.04(s,3h)。
[0379]
4. 3-(苄氧基)-6-((7-(苄氧基)-6-甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-基-3,3-d2)甲基)-2-甲氧基苄基乙酸酯
[0380][0381]
以3-(苄氧基)-6-((7-(苄氧基)-6-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-1-基-3,3-d2)甲基)-2-甲氧基乙酸苄酯(0.50g,0.91mmol)和硼氢化钠(41.19mg,1.08mmol)为原料，按照制备实施例2中第9步的实验操作得到红色3-(苄氧基)-6-((7-(苄氧基)-6-甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-基-3,3-d2)甲基)-2-甲氧基苄基乙酸酯(0.30g,58％)半固体。ms esi计算值c
35h35
d2no6[m+h]
+
,570.27,实验测得570.25；1h nmr(300mhz,cdcl3)δ7.46-7.25(m,10h),7.00-6.91(m,2h),6.63(s,1h),6.39(s,1h),5.15-4.94(m,6h),4.22-4.12(m,1h),3.92(s,3h),3.87(s,3h),3.11(br s,2h),2.90-2.86(m,2h),2.04(s,3h)。
[0382]
5.(3-(苄氧基)-6-((7-(苄氧基)-6-甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-基-3,3-d2)甲基)-2-甲氧基苯基)甲醇
[0383][0384]
以3-(苄氧基)-6-((7-(苄氧基)-6-甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-基-3,3-d2)甲基)-2-甲氧基苄基乙酸酯(0.30g,0.53mmol)和氢氧化钠(0.13g,3.18mmol)为原料，按照制备实施例1中第12步的实验操作得到粉色(3-(苄氧基)-6-((7-(苄氧基)-6-甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-基-3,3-d2)甲基)-2-甲氧基苯基)甲醇(0.20g,72％)固体。ms esi计算值c
33h33
d2no5[m+h]-,528.26,实验测得528.40；1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.53-7.26(m,10h),6.90(d,j＝8.4hz,1h),6.87-6.78(m,2h),6.63(s,1h),5.20-5.15(m,4h),4.86(d,j＝11.6hz,1h),4.48(d,j＝11.5hz,1h),4.03-4.00(m,1h),3.97(s,3h),3.90(s,3h),3.05-3.01(m,1h),2.92-2.89(m,1h),2.77(d,j＝16.1hz,,1h),2.59(d,j＝16.1hz,1h)。
[0385]
6和7. 2,10-双(苄氧基)-3,9-二甲氧基-5,8,13,13a-四氢-6h-异喹啉基[3,2-a]异喹啉-6,6-d2[0386]
[0387]
以(3-(苄氧基)-6-((7-(苄氧基)-6-甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-基-3,3-d2)甲基)-2-甲氧基苯基)甲醇(0.23g,0.43mmol)和氯化亚砜(0.31g,2.61mmol)为原料，按照制备实施例1中第13步和第14步的实验操作得到橙色2,10-双(苄氧基)-3,9-二甲氧基-5,8,13,13a-四氢-6h-异喹啉基[3,2-a]异喹啉-6,6-d2(0.18g,81％)固体。ms esi计算值c
33h31
d2no4[m+h]
+
,510.25,实验测得510.40；1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.49-7.43(m,4h),7.45-7.29(m,6h),6.86-6.80(m,2h),6.76(s,1h),6.67(s,1h),5.17-5.14(m,4h),4.27(d,j＝15.9hz,1h),3.92(2s,6h),3.56-3.54(m,2h),3.13-3.10(m,2h),2.72-2.69(m,2h)。
[0388]
8. 3,9-二甲氧基-5,8,13,13a-四氢-6h-异喹啉基[3,2-a]异喹啉-6,6-d
2-2,10-二醇
[0389][0390]
以2,10-双(苄氧基)-3,9-二甲氧基-5,8,13,13a-四氢-6h-异喹啉基[3,2-a]异喹啉-6,6-d2(0.18g,0.35mmol)为原料，按照制备实施例1中第15步的实验操作得到粉色3,9-二甲氧基-5,8,13,13a-四氢-6h-异喹啉基[3,2-a]异喹啉-6,6-d
2-2,10-二醇(90mg,77％)固体。ms esi计算值c
19h19
d2no4[m+h]
+
,330.16,实验测得330.30。
[0391]
9.(r)-和(s)-3,9-二甲氧基-5,8,13,13a-四氢-6h-异喹啉基[3,2-a]异喹啉-6,6-d
2-2,10-二醇
[0392][0393]
外消旋产物(0.09g)用手性高效液相色谱分离，条件如下(色谱柱:chiral art cellulose-sb,2x25cm,5μm；流动相a:正己烷:二氯甲烷＝3:1(外加10mm氨气甲醇溶液)；流动相b:乙醇；流速:20ml/min；等梯度:10％b 24分钟；检测波长：254/220nm；保留时间1:7.013分钟；保留时间2:11.323分钟。前峰收集减压蒸干，得到粉色(r)-或(s)-3,9-二甲氧基-5,8,13,13a-四氢-6h-异喹啉基[3,2-a]异喹啉-6,6-d
2-2,10-二醇(22.2mg,25％)固体。ms esi计算值c
19h19
d2no4[m+h]
+
,330.16,实验测得330.00；1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.03(s,1h),8.64(s,1h),6.72-6.63(m,4h),4.02(d,j＝15.6hz,1h),3.73(s,3h),3.71(s,3h),3.37-3.31(m,1h),3.16-3.09(m,1h),2.91-2.85(m,1h),2.53-2.50(m,3h)；α＝+299.3(c＝0.1in meoh)；ee》99％；d2＝99.13％。
[0394]
后峰收集减压蒸干，得到粉色(s)-或(r)3,9-二甲氧基-5,8,13,13a-四氢-6h-异喹啉基[3,2-a]异喹啉-6,6-d
2-2,10-二醇(21.1mg,23％)固体。ms esi计算值c
19h19
d2no4[m+h]
+
,330.16,实验测得330.00；1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.03(s,1h),8.64(s,1h),6.72-6.63(m,4h),4.02(d,j＝15.3hz,1h),3.73(s,3h),3.71(s,3h),3.37-3.31(m,1h),3.16-3.09(m,1h),2.91-2.85(m,1h),2.58-2.50(m,3h)；α＝-282.3(c＝0.1in meoh)；ee＝96.5％；d2＝99.16％。
[0395]
分析实施例
[0396]
对以上制备的各化合物进行了d1、d
2l
、d4和5ht
2a
受体的配体结合分析和受体激动和抑制活性的测试。未氘化的化合物左旋千金藤啶碱(l-stepholidine,l-spd,21-0)和左旋金黄紫堇碱(l-scoulerine,l-slr,22-0)在试验中用作对照。
[0397]
分析实施例1.5ht
2a
放射配体结合分析实验方案
[0398]
1、实验材料及仪器设备
[0399]
试剂品牌货号5-羟色胺5ht
2a
(人)膜perkinelmeres-313-m400ua3h-酮色林盐酸盐perkinelmernet791250uc盐酸米安色林sigmam2525ultima goldperkin elmer77-16061聚乙烯亚胺(pei),支化的sigma408727tris-碱sigma77-86-1cacl2sigmac5670l-抗坏血酸tianjin guangfu50-81-7
[0400]
耗材品牌货号96孔圆底深孔板1.1mlperkin elmerp-dw-11-c384孔圆底板corning3657unifilter-96gf/b过滤板perkinelmer6005177离心管(15ml,50ml)bd352096,352070加样槽jet biofilltt001050托盘jet biofilltt001050
[0401]
仪器品牌货号涡旋混合器ikams3 basic电热恒温培养箱上海一恒dhp-9032微板振动筛vwr12620-928topcountperkinelmerntxuniversal harvesterperkin elmerunifilter-96
[0402]
2、实验方法
[0403]
1)向96深孔板每个孔中加入100μl的反应缓冲液。
[0404]
2)每个孔加入5μl稀释后的化合物(1％dmso)到96深孔板中。
[0405]
3)每个孔中加入300μl膜与缓冲液的混合液：每个孔加入1.5μl膜蛋白和298.5μl缓冲液，600rpm震荡5min。
[0406]
4)加入100μl反应缓冲液和[3h]-盐酸酮色林(终浓度为2nm)的混合液到反应体系中，600rpm震荡5min，27℃孵育1h。
[0407]
5)0.5％pei预处理unifilter-96gf/b板，每孔加入150μl的0.5％pei，4℃孵育1小时。
[0408]
6)用universal harvester洗unifilter-96gf/b板2次，每次50ml洗液。
[0409]
7)用universal harvester将反应体系转移到unifilter-96gf/b板上，每孔加入900μl洗液洗gf/b板4次，洗后的unifilter-96gf/b板放55℃烘箱10min烘干。
[0410]
8)每孔加入40μl ultima gold闪烁液，使用topcount读数。
[0411]
分析实施例2.d1放射配体结合分析
[0412]
实验方案
[0413]
1、实验材料及仪器设备
[0414][0415][0416]
耗材品牌货号96孔圆底深孔板1.1mlperkin elmerp-dw-11-c384孔圆底板corning3657unifilter-96gf/b过滤板perkinelmer6005177离心管(15ml,50ml)bd352096,352070加样槽jet biofilltt001050托盘jet biofilltt001050
[0417]
仪器品牌货号涡旋混合器ikams3 basic电热恒温培养箱上海一恒dhp-9032微板振动筛vwr12620-928topcountperkinelmerntxuniversal harvesterperkin elmerunifilter-96
[0418]
2实验方法
[0419]
1)向96深孔板每个孔中加入100μl的反应缓冲液。
[0420]
2)每个孔加入5μl稀释后的化合物(1％dmso)到96深孔板中。
[0421]
3)每个孔中加入300μl膜与缓冲液的混合液：每个孔加入1μl膜蛋白和299μl缓冲液，600rpm震荡5min。
[0422]
4)加入100μl反应缓冲液和[3h]-sch 23390(终浓度为0.25nm)的混合液到反应体系中，600rpm震荡5min，27℃孵育1h。
[0423]
5)0.5％pei预处理unifilter-96gf/b板，每孔加入150μl的0.5％pei，4℃孵育1小时。
[0424]
6)用universal harvester洗unifilter-96gf/b板2次，每次50ml洗液。
[0425]
7)用universal harvester将反应体系转移到unifilter-96gf/b板上，每孔加入900μl洗液洗gf/b板4次，洗后的unifilter-96gf/b板放55℃烘箱10min烘干。
[0426]
8)每孔加入40μl ultima gold闪烁液，使用topcount读数。
[0427]
分析实施例3.d
2l
放射配体结合分析
[0428]
实验方案
[0429]
1、实验材料及仪器设备
[0430]
试剂品牌货号[3h]-甲螺哌隆(methylspiperone)perkinelmernet856250uc氟哌啶醇sigmah1512-5gd
2l
膜pharmaronin houseultima goldperkin elmer77-16061聚乙烯亚胺(pei),支化的sigma408727tris-碱sigma77-86-1mgcl2sigma7786-30-3naclsigma7647-14-5edtainvitrogen15575-038蛋白酶抑制剂混合物片roche4693132001piercetm bca蛋白质分析试剂盒thermo23227
[0431]
耗材品牌货号96孔圆底深孔板1.1mlperkin elmerp-dw-11-c384孔圆底板corning3657unifilter-96gf/c过滤板perkinelmer6005174离心管(15ml,50ml)bd352096,352070加样槽jet biofilltt001050托盘jet biofilltt001050
[0432]
仪器品牌货号电热恒温培养箱上海一恒dhp-9032微板振动筛vwr12620-928universal harvesterperkin elmerunifilter-96co2培养箱thermo371电动移液器thermo/台式离心机eppendorf5702电热恒温水槽jinghongdkb-8a玻璃组织匀浆器南京銮玉化玻仪器50ml高速分散机ikat18
多模板酶标仪perkinelmervictor nivo 35小型高速离心机eppendorf5810r低温高速离心机sorvalllynx4000涡旋混合器ikams3 basictopcountperkinelmerntx
[0433]
2实验方法
[0434]
1)向96深孔板每个孔中加入100μl的反应缓冲液。
[0435]
2)每个孔加入5μl稀释后的化合物(1％dmso)到96深孔板中。
[0436]
3)每个孔中加入300μl膜与缓冲液的混合液：每个孔加入10μl膜蛋白和290μl缓冲液，600rpm震荡5min。
[0437]
4)加入100μl反应缓冲液和[3h]-甲螺哌隆(终浓度为0.5nm)的混合液到反应体系中，600rpm震荡5min，27℃孵育1h。
[0438]
5)0.5％pei预处理unifilter-96gf/c板，每孔加入150μl的0.5％pei，4℃孵育1小时。
[0439]
6)用universal harvester洗unifilter-96gf/c板2次，每次50ml洗液。
[0440]
7)用universal harvester将反应体系转移到unifilter-96gf/c板上，每孔加入900μl洗液洗gf/c板4次，洗后的unifilter-96gf/c板放55℃烘箱10min烘干。
[0441]
8)每孔加入40μl ultima gold闪烁液，使用topcount读数。
[0442]
分析实施例4.d4放射配体结合分析
[0443]
实验方案
[0444]
1、实验材料及仪器设备
[0445][0446][0447][0448]
仪器品牌货号电热恒温培养箱上海一恒dhp-9032微板振动筛vwr12620-928universal harvesterperkin elmerunifilter-96co2培养箱thermo371
电动移液器thermo/台式离心机eppendorf5702电热恒温水槽jinghongdkb-8a玻璃组织匀浆器南京銮玉化玻仪器50ml高速分散机ikat18多模板酶标仪perkinelmervictor nivo 35小型高速离心机eppendorf5810r低温高速离心机sorvalllynx4000涡旋混合器ikams3 basictopcountperkinelmerntx
[0449]
2实验方法
[0450]
1)向96深孔板每个孔中加入100μl的反应缓冲液。
[0451]
2)每个孔加入5μl稀释后的化合物(1％dmso)到96深孔板中。
[0452]
3)每个孔中加入300μl膜与缓冲液的混合液：每个孔加入20μl膜蛋白和290μl缓冲液，600rpm震荡5min。
[0453]
4)加入100μl反应缓冲液和[3h]-甲螺哌隆(终浓度为1.5nm)的混合液到反应体系中，600rpm震荡5min，27℃孵育1h。
[0454]
5)0.5％pei预处理unifilter-96gf/c板，每孔加入150μl的0.5％pei，4℃孵育1小时。
[0455]
6)用universal harvester洗unifilter-96gf/c板2次，每次50ml洗液。
[0456]
7)用universal harvester将反应体系转移到unifilter-96gf/c板上，每孔加入900μl洗液洗gf/c板4次，洗后的unifilter-96gf/c板放55℃烘箱10min烘干。
[0457]
8)每孔加入40μl ultima gold闪烁液，使用topcount读数。
[0458]
上述受体结合测试的结果如下表1中所示。
[0459]
表1.化合物对d1、d
2l
、d4和5ht
2a
受体的亲和力(ic
50
,nm)
[0460]
化合物d1d
2l
d45ht
2a
21-0(l-spd)0.6249.99835.166880.5522-0(l-slr)5.3747.46151.36》1000001-0h6.1948.61129.3》1000002-0h3.6449.384.97》1000003-0h15.0854.36113.32》1000004-0h8.1253.92103.76》1000005-0h7.960.41103.55》1000006-0h12.1748.1479.02》1000007-0q无测定无测定无测定无测定07-0h11.6449.0195.78》1000008-0q无测定无测定无测定无测定08-0h5.0252.63117.3》1000009-0h2.7259.05888.095238.16
10-0q135843389》10000047593.2610-0h0.4161.11044.315427.82
[0461]
分析实施例5. 5ht
2a
受体钙流分析
[0462]
实验方案
[0463]
1、实验材料及仪器设备
[0464]
试剂品牌货号flp-in-cho-5ht
2a
稳定细胞系pharmaron-胎牛血清gibco10999141透析fbsthermofisher scientific30067334青霉素-链霉素，液体gibco15140122ham's f-12khyclonesh30526.011x tryple express enzyme，无酚红thermofisher scientific12604021组分a:钙离子探针molecular devicesr8191潮霉素b gold溶液invivogenant-hg-5hbss,钙,镁，无酚红gibco14025076hepesgibco15630080flipr钙6分析试剂盒molecular devicesr8191
[0465]
耗材品牌货号384-孔板corning3764echo合格384-孔聚丙烯微板，透明，平底labcytepp-0200384-孔板corning3657384-孔flipr tetra移液吸头molecular devices9000-076496-孔锥形底pp plt天然无rnase/dnase板thermofisher249944
[0466][0467][0468]
2、实验方法
[0469]
2.1化合物ec
50
值的测定
[0470]
1)flp-in-cho-5ht
2a
细胞株培养于完全培养基(ham's f-12k+10％fbs+1x青霉素-链霉素+600μg/ml潮霉素b)，于37℃,5％co2培养。
[0471]
2)tryple消化处理后将细胞重悬于接种培养基(ham's f-12k+10％透析fbs)中，接种于384孔细胞培养板，每孔接种10,000个细胞，于37℃,5％co2培养过夜。
[0472]
3)冻融20x组分a至室温，用实验缓冲液将其稀释至2x工作浓度含5mm丙磺舒，置于室温待用。
[0473]
4)取出384孔细胞培养板，室温静置10min。去除培养基，每孔加入20μl实验缓冲液，随后加入20μl 2x组分a含5mm丙磺舒至各实验孔中,200g,rt离心3-5秒，于37℃孵育2小时。
[0474]
5)配制5x阳性对照化合物和待测化合物工作液，置于室温待用。
[0475]
6)取出细胞培养板于室温静置10分钟。
[0476]
7)利用flipr tetra将10μl步骤5)中稀释好的化合物工作液加入各实验孔中，收集数据。
[0477]
2.1化合物ic
50
值的测定
[0478]
1)flp-in-cho-5ht
2a
细胞株培养于完全培养基(ham's f-12k+10％fbs+1x青霉素-链霉素+600μg/ml潮霉素b)，于37℃,5％co2培养。
[0479]
2)tryple消化处理后将细胞重悬于接种培养基中(ham's f-12k+10％透析fbs)，接种于384孔细胞培养板，每孔接种10,000个细胞，于37℃,5％co2培养过夜。
[0480]
3)冻融20x组分a至室温，用实验缓冲液将其稀释至2x工作浓度含5mm丙磺舒，置于室温待用。
[0481]
4)取出384孔细胞培养板，室温静置10min。去除培养基，每孔加入20μl实验缓冲液，随后加入20μl 2x组分a含5mm丙磺舒至各实验孔中,200g,rt离心3-5秒，于37℃孵育2小时。
[0482]
5)配制6x阳性对照化合物和待测化合物工作液。
[0483]
6)取出细胞培养板于室温静置10分钟；加入10μl步骤5)中的6x化合物工作液至384孔细胞培养板相应实验孔中，于室温孵育30分钟。
[0484]
7)用实验缓冲液将5ht稀释至6nμ，置于室温待用。
[0485]
8)利用flipr tetra将10μl步骤7)中稀释好的5ht加入各实验孔中，收集数据。
[0486]
分析实施例6.d1受体钙流分析
[0487]
实验方案
[0488]
1、实验材料及仪器设备
[0489]
[0490]
耗材品牌货号384-孔板corning3764echo合格384-孔聚丙烯微板，透明，平底labcytepp-0200384-孔板corning3657384-孔flipr tetra移液吸头molecular devices9000-076496-孔锥形底pp plt天然无rnase/dnase板thermofisher249944
[0491]
仪器品牌货号fliprmolecular devicesflipr tetra个人移液器apricot designsippazms-384-125(3)countess
tm
ii自动细胞计数器invitrogenamqax1000离心机eppendorf5424rco2培养箱thermofisher371生物安全柜(ii级)thermofisher1389
[0492]
2、实验方法
[0493]
2.1化合物ec
50
值的测定
[0494]
1)flp-in-cho-gan15-d
1 clone#25细胞株培养于完全培养基(ham's f-12k+10％fbs+1x青霉素-链霉素+600μg/ml潮霉素b+800μg/ml g418)，于37℃,5％co2培养。
[0495]
2)tryple消化处理后将细胞重悬于接种培养基(ham's f-12k+10％fbs)中，接种于384孔细胞培养板，每孔接种6,500个细胞，于37℃,5％co2培养过夜。
[0496]
3)冻融20x组分a至室温，用实验缓冲液将其稀释至2x工作浓度含5mm丙磺舒，置于室温待用。
[0497]
4)取出384孔细胞培养板，室温静置10min。去除培养基，每孔加入20μl实验缓冲液，随后加入20μl 2x组分a含5mm丙磺舒至各实验孔中,200g,rt离心3-5秒，于37℃孵育2小时。
[0498]
5)配制5x阳性对照化合物和待测化合物工作液，置于室温待用。
[0499]
6)取出细胞培养板于室温静置10分钟。
[0500]
7)利用flipr tetra将10μl步骤5)中稀释好的化合物工作液加入各实验孔中，收集数据。
[0501]
2.1化合物ic
50
值的测定
[0502]
1)flp-in-cho-gan15-d
1 clone#25细胞株培养于完全培养基(ham's f-12k+10％fbs+1x青霉素-链霉素+600μg/ml潮霉素b+800μg/ml g418)，于37℃,5％co2培养。
[0503]
2)tryple消化处理后将细胞重悬于接种培养基(ham's f-12k+10％fbs)中，接种于384孔细胞培养板，每孔接种6,500个细胞，于37℃,5％co2培养过夜。
[0504]
3)冻融20x组分a至室温，用实验缓冲液将其稀释至2x工作浓度含5mm丙磺舒，置于室温待用。
[0505]
4)取出384孔细胞培养板，室温静置10分钟。去除培养基，每孔加入20μl实验缓冲液，随后加入20μl 2x组分a含5mm丙磺舒至各实验孔中,200g,rt离心3-5秒，于37℃孵育2小时。
[0506]
5)配制6x阳性对照化合物和待测化合物工作液。
[0507]
6)取出细胞培养板于室温静置10分钟，加入10μl步骤5)中的6x化合物工作液至384孔细胞培养板相应实验孔中，于室温孵育30分钟。
[0508]
7)用实验缓冲液将多巴胺稀释至30nμ，置于室温待用。
[0509]
8)利用flipr tetra将10μl步骤7)中稀释好的多巴胺加入各实验孔中，收集数据。
[0510]
分析实施例7.d
2l
受体camp实验方案
[0511]
1、实验材料及仪器设备
[0512]
试剂品牌货号flp-in-cho-d
2l
稳定细胞系pharmaron-胎牛血清,500mlgibco10999141ham's f-12k(kaighn's)培养基hyclonesh30526.01青霉素-链霉素，液体gibco15140122潮霉素b goldinvivogenant-hg-5forskolin,10mgsellecks2449bsa稳定剂7.5％,50mlperkin elmercr84-100ibmxsigmai5879hepes,1m,100mlgibco15630080
[0513][0514]
仪器品牌货号envisionperkin elmerenvison 2105countess
tm
ii自动细胞计数器invitrogenamqax1000离心机eppendorf5424rco2培养箱thermofisher371生物安全柜(ii级)thermofisher1389
[0515]
2、实验方法
[0516]
2.1化合物ec
50
值的测定
[0517]
1)将flp-in-cho-d
2l
细胞株培养于完全培养基(ham's f12k+10％fbs+青霉素-链霉素+800μg/ml潮霉素b)中，于37℃,5％co2培养。
[0518]
2)tryple消化处理后，将细胞重悬于完全培养基中，接种于384孔细胞培养板，每孔接种8,000个细胞，于37℃,5％co2培养过夜。
[0519]
3)用实验缓冲液(1x hbss含0.1％bsa,20mm hepes,500μm ibmx)配制化合物工作液。
[0520]
4)去除384孔板中的培养基，每孔分别加入15μl实验缓冲液以及2.5μl化合物工作液，然后于37℃，孵育10分钟。
[0521]
5)用实验缓冲液配置8x forskolin(8μm)，每孔加入2.5μl准备好的forskolin溶液，将384孔板置于37℃，孵育30分钟。
[0522]
6)按照试剂盒说明书配置eu-camp示踪剂和ulight-抗-camp，每个实验孔分别加入10μl eu-camp示踪剂和10μl ulight-抗-camp。
[0523]
7)将反应板于室温200g离心30秒，25℃静置1小时后，利用envision收集数据。
[0524]
2.2化合物ic
50
值的测定
[0525]
1)将flp-in-cho-d
2l
细胞株培养于完全培养基(ham's f12k+10％fbs+青霉素-链霉素+800μg/ml潮霉素b)中，于37℃,5％co2培养。
[0526]
2)tryple消化处理后，将细胞重悬于完全培养基中，接种于384孔细胞培养板，每孔接种8,000个细胞，于37℃,5％co2培养过夜。
[0527]
3)用实验缓冲液(1x hbss含0.1％bsa,20mm hepes,500μm ibmx)配制化合物工作液。
[0528]
4)去除384孔板中的培养基，每孔分别加入15μl实验缓冲液以及2.5μl化合物工作液，然后于37℃，孵育10分钟。
[0529]
5)用实验缓冲液配置8x forskolin(8μm)和多巴胺(80nm)混合液，每孔加入2.5μl上述准备好的混合液，将384孔板置于37℃，孵育30分钟。
[0530]
6)按照试剂盒说明书配置eu-camp示踪剂和ulight-抗-camp，每个实验孔分别加入10μl eu-camp示踪剂和10μl ulight-抗-camp。
[0531]
7)将反应板于室温200g离心30秒，25℃静置1小时后，利用envision收集数据。
[0532]
分析实施例8.d4受体camp实验方案
[0533]
1、实验材料及仪器设备
[0534][0535][0536]
[0537]
仪器品牌货号envisionperkin elmerenvison 2105countess
tm
ii自动细胞计数器invitrogenamqax1000离心机eppendorf5424rco2培养箱thermofisher371生物安全柜(ii级)thermofisher1389
[0538]
2、实验方法
[0539]
2.1化合物ec
50
值的测定
[0540]
1)将flp-in-cho-d4细胞株培养于完全培养基中(ham's f12k+10％fbs+1x青霉素-链霉素+800μg/ml潮霉素b)，于37℃,5％co2培养。
[0541]
2)tryple消化处理后，将细胞重悬于完全培养基中，接种于384孔细胞培养板，每孔接种8,000个细胞，于37℃,5％co2培养过夜。
[0542]
3)用实验缓冲液(1x hbss含0.1％bsa,20mm hepes,500μm ibmx)配制化合物工作液。
[0543]
4)去除384孔板中的培养基，每孔加入15μl实验缓冲液以及2.5μl化合物工作液，然后于37℃，孵育10分钟。
[0544]
5)用实验缓冲液配置8x forskolin(16μm)，每孔加入2.5μl准备好的forskolin溶液，将384孔板置于37℃，孵育30分钟。
[0545]
6)按照试剂盒说明书配置eu-camp示踪剂和ulight-抗-camp，每个实验孔分别加入10μl eu-camp示踪剂和10μl ulight-抗-camp。
[0546]
7)将反应板于室温200g离心30秒，25℃静置1小时后，利用envision收集数据。
[0547]
2.2化合物ic
50
值的测定
[0548]
1)将flp-in-cho-d4细胞株培养于完全培养基中(ham's f12k+10％fbs+1x青霉素-链霉素+800μg/ml潮霉素b)，于37℃,5％co2培养。
[0549]
2)tryple消化处理后，将细胞重悬于完全培养基中，接种于384孔细胞培养板，每孔接种8,000个细胞，于37℃,5％co2培养过夜。
[0550]
3)用实验缓冲液(1x hbss含0.1％bsa,20mm hepes,500μm ibmx)配制化合物工作液。
[0551]
4)去除384孔板中的培养基，每孔分别加入15μl实验缓冲液以及2.5μl化合物工作液，然后于37℃，孵育10分钟。
[0552]
5)用实验缓冲液配置8x forskolin(16μm)和多巴胺(320nm)混合液，每孔加入2.5μl上述准备好的混合液，将384孔板置于37℃，孵育30分钟。
[0553]
6)按照试剂盒说明书配置eu-camp示踪剂和ulight-抗-camp，每个实验孔分别加入10μl eu-camp示踪剂和10μl ulight-抗-camp。
[0554]
7)将反应板于室温200g离心30秒，25℃静置1小时后，利用envision收集数据。
[0555]
上述分析测试的结果如以下表2中所示。
[0556]
表2.化合物对d1、d
2l
、d4和5ht
2a
受体的激动和抑制活性(nm)
[0557][0558][0559]
应当理解，在此描述的详细实施例和实施方案仅作为示例给出，并不被视为对本公开的限制。本领域技术人员将根据其提出各种修改或变化，并且这些修改或变化包括在本公开的精神和范围内，并且被视为包括在所附权利要求的范围内。此外，本领域技术人员将认识到或能够仅通过常规实验确定与本文所述公开的具体实施方案的许多等同物。该等同物旨在包含在权利要求中。