一株解淀粉芽孢杆菌及其应用

本发明属于作物病害生物防治领域，特别涉及一株解淀粉芽孢杆菌及其应用。

背景技术：

1、解淀粉芽孢杆菌(bacillus amyloliquefaciens)广泛存在于各种不同生态环境，在其生长过程中产生多种抑菌物质，如脂肽类、多肽类、抑菌蛋白类等，具有抑制真菌、细菌、病毒、菌原体等作用，是植物病害生防功能的重要组成部分。解淀粉芽孢杆菌产生内生芽孢，耐热、抗逆性较强，生长速度快，营养需求简单，在土壤中容易定殖和繁殖，对人和动物无害，对环境友好，其制剂工艺简单，制剂稳定、施用方便，储存期长，是理想的生防微生物。

2、植物枯萎(根腐)病是由致病性镰刀菌侵染引起的一种土传病害，病原菌从根部危害植物，引起维管束坏死，造成植株枯萎，危害严重，且极难防治。烟草镰刀根腐病在世界烟区普遍发生，镰刀菌既可单独侵染，又可与黑胫病菌、青枯病菌、根结线虫等混合侵染，造成烟叶大幅减产，甚至绝收，成为严重危害烟草的根茎病害之一。该病为土传病害，化学药剂防治不理想。

3、目前，生物农药的研究与应用已成为热点，在生防细菌方面，樊炳君等筛选出特基拉芽孢杆菌(bacillus tequilensis)，该菌对烟草镰刀根腐病的4个病原菌(腐皮镰刀菌、禾谷镰刀菌、尖孢镰刀菌和拟枝孢镰孢菌)均有不同程度的抑制效果，但其盆栽和田间试验尚不明确。陈长卿等研究现有生物菌剂对烟草镰刀根腐病的田间防治效果，4种芽孢杆菌的田间防效达42.97～70.19％，防治效果不突出。因此，有必要筛选防治效果更好的生防细菌。

技术实现思路

1、本发明的首要目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一株解淀粉芽孢杆菌。

2、本发明的另一目的在于提供所述解淀粉芽孢杆菌的应用。

3、本发明的目的通过下述技术方案实现：

4、一株解淀粉芽孢杆菌，名称为解淀粉芽孢杆菌(bacillus amyloliquefaciens)gdnxj-5，保藏编号为gdmcc no：62051，于2021年11月11日保藏于广东省广州市先烈中路100号大院59号楼5楼的广东省微生物菌种保藏中心。

5、一种培养所述解淀粉芽孢杆菌的方法，包括如下步骤：将解淀粉芽孢杆菌接种到种子培养基中，于30℃～37℃条件下进行培养。

6、所述的种子培养基含有如下按质量百分数计的组分：牛肉膏0.3％、酵母膏0.1％、蛋白胨0.5％、葡萄糖1％，ph＝7.0～7.2。

7、所述的培养的转速为150～200转/min；优选为180～190转/min。

8、所述的培养的温度优选为33℃～35℃。

9、所述的培养的时间为12～16h；优选为15h。

10、所述的解淀粉芽孢杆菌的接种量为体积百分比3～8％；优选为体积百分比5％。

11、一种解淀粉芽孢杆菌的发酵方法，包括以下步骤：将上述解淀粉芽孢杆菌接种于发酵培养基中，于30℃～37℃条件下发酵培养24～48h。

12、所述的解淀粉芽孢杆菌的接种量为体积百分比4～8％；优选为体积百分比5％。

13、所述的发酵培养基选自如下任一种：

14、(1)含有如下按质量百分数计的组分：玉米淀粉0.3％、大豆蛋白粉1.5％、玉米浆2.5％、k2hpo4 0.3％、kh2po4 0.15％、30.8mg/l的mnso4 0.1％、mgso4 0.05％、feso40.01％、caco3 0.01％，ph＝7.0～7.2；

15、(2)含有如下按质量百分数计的组分：玉米淀粉0.2％、大豆蛋白粉1.5％、酵母膏0.5％、牛肉膏0.15％、k2hpo4 0.3％、kh2po4 0.15％、30.8mg/l的mnso4 0.1％、mgso40.05％、feso4 0.01％、caco3 0.01％，ph＝7.0～7.2。

16、所述的发酵培养的温度优选为33℃～35℃。

17、所述的发酵培养的时间为36～40h。

18、所述的发酵培养的通气量10～14l/min；优选为13l/min。

19、一种解淀粉芽孢杆菌生物菌剂，含有上述解淀粉芽孢杆菌。

20、所述的解淀粉芽孢杆菌占所述生物菌剂质量的4％～8％；优选为占生物菌剂质量的6％。

21、所述的解淀粉芽孢杆菌优选为通过如下方法获得：将上述发酵方法获得的发酵液在25℃～30℃、15000～20000rpm下离心，获得解淀粉芽孢杆菌菌体。

22、所述的解淀粉芽孢杆菌生物菌剂还含有载体和保护剂。

23、所述的载体为硅藻土、高岭土、轻质碳酸钙、膨润土、蛭石和草碳中的至少一种；优选为硅藻土和高岭土。

24、所述的载体占所述生物菌剂质量的86％～93.2％；优选为占生物菌剂质量的90％。

25、所述的保护剂为可溶性淀粉、糊精、玉米粉、蔗糖和谷氨酸钠中的至少一种；优选为玉米粉、糊精和蔗糖。

26、所述的保护剂占所述生物菌剂质量的2.8％～6％；优选为占生物菌剂质量的4％。

27、所述的解淀粉芽孢杆菌生物菌剂的水份含量低于10％，菌体含量高于2×1011cfu/g(优选为高于3.2×1011cfu/g)。

28、所述的解淀粉芽孢杆菌生物菌剂的制备方法，包括如下步骤：将解淀粉芽孢杆菌、载体和保护剂混合均匀，然后在50℃～60℃条件下烘干至水份含量低于10％，粉碎，得到解淀粉芽孢杆菌生物菌剂。

29、所述的解淀粉芽孢杆菌生物菌剂的使用方法，为将解淀粉芽孢杆菌生物菌剂稀释400～500倍，在种子期拌种、苗期蘸根或淋施、或成株期淋施。

30、所述的解淀粉芽孢杆菌和/或所述的解淀粉芽孢杆菌生物菌剂在防治作物镰刀根腐病和/或作物枯萎病中的应用。

31、所述的作物镰刀根腐病包括烟草镰刀根腐病。

32、所述的作物枯萎病包括西瓜枯萎病、黄瓜枯萎病、苦瓜枯萎病、冬瓜枯萎病和香蕉枯萎病中的至少一种。

33、本发明中的解淀粉芽孢杆菌分离自广东省韶关市始兴县马市镇的烟草根际土壤，其形态和生化特征为：在lb培养基上，菌落乳白色，圆形到椭圆形，菌落边缘不平整，有锯齿状，菌落平，中间稍凹陷，表面粗燥。菌体为短直杆状，大小为0.7～0.9μm×1.8～3.0μm，革兰氏阳性，可产生芽孢。硝酸还原阳性，可水解淀粉，液化明胶和酪素。适宜生长温度30℃～37℃，适宜生长ph为5.7～7.8。

34、本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：

35、1、本发明以广东省烟草镰刀根腐病菌(fusarium oxysporum)为靶标，筛选出对该病菌具有显箸生防效果的解淀粉芽孢杆菌gdnxj-5，该gdnxj-5菌株可明显抑制多种作物的致病性镰刀菌，可用于防治多种作物枯萎(根腐)病，尤其对烟草镰刀根腐病防效突出。

36、2、本发明提供的具有生防作用的解淀粉芽孢杆菌gdnxj-5生物菌剂对环境友好，无农药残留、发酵成本低、生产工艺简单，为探索植物镰刀菌枯萎(根腐)病的生物防治提供了有效途径。

37、3、本发明中将解淀粉芽孢杆菌gdnxj-5进行液体发酵并离心获得菌体，然后将菌体与载体、保护剂混合，烘干粉碎后可制成生物菌剂；该生物菌剂可在种子期、苗期和成株期使用，即可采用种子拌种、幼苗淋施或蘸根、以及大田淋施的方式防治作物镰刀枯萎(根腐)病，且该生物菌剂在土壤中能够有效增殖，可持续控制病害；另外，该生物菌剂对烟草镰刀根腐病防效突出，稀释400～500倍、施药21d后，对病害的防治效果达到80％以上，可为该病害的防治提供一种新的储备生物制剂。