技术特征：
1.一种用于治疗杜氏肌营养不良症(dmd)的crispr-cas9系统，其特征在于，所述crispr-cas9系统包含：将发生在dmd基因27号外显子的点突变或无义突变通过碱基的删除或添加将(3n-1)的错误读码框纠正为(3n)恢复通读grna、敲除dmd基因27号外显子的grna、以及跳跃dmd基因27号外显子使外显子26和28连在一起恢复通读的grna中的一种或多种。2.根据权利要求1所述的用于治疗杜氏肌营养不良症的crispr-cas9系统，其特征在于，将发生在dmd基因27号外显子的点突变或无义突变通过碱基的删除或添加将(3n-1)的错误读码框纠正为(3n)恢复通读grna靶序列选自seq id no:1-seq id no:12中的至少一种。3.根据权利要求2所述的用于治疗杜氏肌营养不良症的crispr-cas9系统，其特征在于，将发生在dmd基因27号外显子的点突变或无义突变通过碱基的删除或添加将(3n-1)的错误读码框纠正为(3n)恢复通读grna靶序列选自seq id no：2、seq id no：7、seq id no：8、seq id no：11和seq id no：12中的至少一种。4.根据权利要求2所述的用于治疗杜氏肌营养不良症的crispr-cas9系统，其特征在于，所述grna由靶序列如seq id no：2、seq id no：3、seq id no：7和seq id no：8中的一种和靶序列如seq id no：6和seq id no：10中的一种进行组合，将发生在dmd基因27号外显子的点突变或无义突变通过碱基的删除或添加将(3n-1)的错误读码框纠正为(3n)恢复通读grna。5.根据权利要求1所述的用于治疗杜氏肌营养不良症的crispr-cas9系统，其特征在于，所述用于敲除dmd基因27号外显子的grna靶序列选自seq id no：10、seq id no：13-seq id no：17中的至少一种。6.根据权利要求5所述的用于治疗杜氏肌营养不良症的crispr-cas9系统，其特征在于，所述用于敲除dmd基因27号外显子的grna是靶序列如seq id no：14、seq id no：15中的一种；和靶序列如seq id no：10、seq id no：16中的一种进行组合。7.根据权利要求1所述的用于治疗杜氏肌营养不良症的crispr-cas9系统，其特征在于，所述跳跃dmd基因27号外显子的跳跃位点位于剪接受体5a处。8.根据权利要求1所述的用于治疗杜氏肌营养不良症的crispr-cas9系统，其特征在于，所述通过跳跃dmd基因27号外显子grna靶序列选自seq id no:18和seq id no:19中的至少一种。9.根据权利要求1所述的用于治疗杜氏肌营养不良症的crispr-cas9系统，其特征在于，所述crispr-cas9还包括表达载体和cas9蛋白，所述表达载体为aav载体；所述cas9蛋白为spcas9、sacas9、sauricas9或ncas9蛋白。10.如权利要求1-9任一所述的crispr-cas9系统在制备用于预防或治疗杜氏肌营养不良症的药物中的用途。
技术总结
本发明公开了一种用于治疗杜氏肌营养不良症的CRISPR-Cas9系统，包含：将发生在杜氏肌营养不良症(DMD)基因27号外显子的点突变或无义突变通过碱基的删除或添加将(3N-1)的错误读码框纠正为(3N)恢复通读gRNA；敲除DMD基因27号外显子的gRNA；以及跳跃DMD基因27号外显子，使外显子26和28连在一起恢复通读的gRNA。本发明能较全面地对DMD基因27号外显子进行基因编辑，利用特定的CRISPR-SaCas9、CRISPR-SauriCas9小体积系统，有利于实现单载体递送，将来更易应用到临床；而且能为DMD非热点突变的患者制备个性化基因编辑药物。的患者制备个性化基因编辑药物。
技术研发人员：陈永昌 杨娇 白绕仙 吴若 任帅伟
受保护的技术使用者：云南中科灵长类生物医学重点实验室
技术研发日：2022.11.11
技术公布日：2023/3/21