一种桃仁中D-苦杏仁苷的提取方法及其应用

本发明涉及一种苦杏仁苷的提取方法，尤其是涉及一种桃仁中d-苦杏仁苷的提取方法及其应用。

背景技术：

1、桃仁是蔷薇科（ rosaceae）桃属（ amygdalus）植物或山桃（ prunus davidiana（carr.））成熟干燥的种子。浙江省桃栽培历史悠久，是我国桃栽培的最适宜区之一，尤其是宁波市奉化区为我国著名的传统水蜜桃产区。低值桃和残次桃果品通常作为原料发展加工业，如果汁、果酒、罐头等。但是，随之而来的大量皮渣、果核（占全果的40-60%）未开展有效应用。大量桃皮渣和果核的废弃不仅环境污染，也造成大量生物资源的浪费，果核中富含特色油脂和苦杏仁苷，若能好好利用就能变废为宝。

2、苦杏仁苷是生氰糖苷家族中最常见的成员之一。它是α-羟基腈的衍生物，也是一种简单的天然化学物质，广泛存在于许多蔷薇科植物的种子中，如苹果、山楂、枇杷、杨梅、杏、桃、欧李和青梅等。苦杏仁苷的分子式为c20h27o11n，相对分子量为 457.43，由两分子的葡萄糖和一分子的杏仁腈组合而成，是一种糖苷类化合物。苦杏仁苷具有明显的药理活性，临床上用于镇咳和抗哮喘，抗肿瘤，降血糖，抗凝血等，并用其作止咳祛痰剂、抗癌辅助性药物，它还可用于治疗急性和慢性呼吸道感染、慢性支气管炎和脓疱疮，并可与其他药物联合治疗皮肤癌，临床医用价值较高。

3、苦杏仁苷存在一对差向异构体，苦杏仁苷的天然存在形式为ｄ型，且d-苦杏仁苷对酸较稳定，但在碱性条件下，尤其是ph11时，一部分ｄ-苦杏仁苷会快速转化成为其差向异构体——ｌ-苦杏仁苷，而在中性条件下，ｄ、ｌ-苦杏仁苷能够稳定共存；除受环境的酸、碱条件影响外，苦杏仁中苦杏仁苷的差向异构化还会发生在热水溶液中。苦杏仁苷经β-葡萄糖苷酶酶解后的酶解产物——氢氰酸和苯甲醛有较强的抗肿瘤效果，有研究表明，β-葡萄糖苷酶对于d-苦杏仁苷的亲和力显著高于l-苦杏仁苷，由此而造成两种构型苦杏仁苷在抗肿瘤活性方面的较大差异。因此，如何有效避免在桃仁苦杏仁苷提取过程中d-苦杏仁苷的异构化就显得尤为重要。苦杏仁苷的提取方法包括有机溶剂提取方法，水提取方法，超临界co2流体提取方法。溶剂提取方法和水提取方法都属于溶剂萃取方法，是常用的传统提取方法之一，但是这些方法通常提取效率低，耗时高。

技术实现思路

1、本发明所要解决的技术问题是提供一种提取效率高、产品纯度高，耗时短的桃仁中d-苦杏仁苷的提取方法及其应用。

2、本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：一种桃仁中d-苦杏仁苷的提取方法，包括以下步骤：

3、（1）将桃仁置于微波炉中，采用功率400-500w处理5min，对桃仁中的β-葡萄糖苷酶进行灭活处理，将灭酶后的桃仁采用高速冷冻研磨机粉碎处理，过100目筛，得到灭酶桃仁粉末；

4、（2）将灭酶桃仁粉末按质量体积比1g：10-15ml的比例加入到沸程为60-90℃的石油醚中混匀，在288w，40-50℃条件下超声处理30-40min后，过滤，取脱脂桃仁滤渣室温下干燥，挥发除去残留石油醚后研磨成细粉，得到脱脂桃仁粉末；除去桃仁粉中的油脂便于苦杏仁苷的提取；

5、（3）将脱脂桃仁粉末按质量体积比1g：20-25 ml的比例加入到70-80vt%乙醇溶液中混匀，在360-432w，40-50℃条件下超声40min后，将提取液真空抽滤去除滤渣，取滤液于60 rpm，50℃旋转蒸发除去乙醇，即得到总苦杏仁苷粗品。

6、优选的，步骤（3）中所述的脱脂桃仁粉末与所述的乙醇溶液的质量体积比为1g：25ml。

7、优选的，步骤（3）中所述的乙醇溶液浓度为70vt%。采用70vt%乙醇溶液作为提取溶剂，一方面能减少提取液中水溶性杂质，提高苦杏仁苷的相对含量；另一方面，70%乙醇能很大程度抑制提取过程中的d-苦杏仁苷转变为l-苦杏仁苷。

8、优选的，步骤（3）中所述的超声功率为432w。在该条件下提取效率最佳。

9、优选的，步骤（3）中所述的超声温度为40℃。在该条件下提取效率最佳。

10、上述方法提取的d-苦杏仁苷在制备hepg2细胞生长增殖抑制剂方面的应用。

11、与现有技术相比，本发明的优点在于

12、1、传统的热水煎煮灭酶法在灭酶过程的中就会引起苦杏仁苷的溶出，使苦杏仁苷得率降低，且会促进d-苦杏仁苷转变为l-苦杏仁苷。本发明采用微波灭酶法，对β-葡萄糖苷酶的灭酶效果更加彻底，灭酶过程无水介质存在，进一步降低了d-苦杏仁苷异构化比例，且经过微波灭酶后的桃仁无需再进行干燥处理。

13、2、利用高速研磨机进行低温粉碎并借助分级处理，得到颗粒度更均一、小且性质稳定的桃仁粉末，降低异构程度，增大了比表面积，从而提高优质苦杏仁苷的得率。

14、3、采用优化后的乙醇超声波辅助提取法，控制提取过程中的温度，提取溶剂的含水量，相比于传统的热水浸提法，总苦杏仁苷得率由1.62%提高至1.84%,其中d-苦杏仁苷在总苦杏仁苷的比例由52.7%提高至96.3%。

技术特征：

1.一种桃仁中d-苦杏仁苷的提取方法，其特征在于包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种桃仁中d-苦杏仁苷的提取方法，其特征在于：步骤（3）中所述的脱脂桃仁粉末与所述的乙醇溶液的质量体积比为1g：25 ml。

3.根据权利要求1所述的一种桃仁中d-苦杏仁苷的提取方法，其特征在于：步骤（3）中所述的乙醇溶液浓度为70vt%。

4.根据权利要求1所述的一种桃仁中d-苦杏仁苷的提取方法，其特征在于：步骤（3）中所述的超声功率为432w。

5.根据权利要求1所述的一种桃仁中d-苦杏仁苷的提取方法，其特征在于：步骤（3）中所述的超声温度为40℃。

6.一种权利要求1-5中任一项提取方法制备的d-苦杏仁苷在制备hepg2细胞生长增殖抑制剂方面的应用。

技术总结
本发明公开了一种桃仁中D‑苦杏仁苷的提取方法及其应用，特点是包括以下步骤：（1）将桃仁置于微波炉中，采用功率400‑500W处理5min后粉碎处理，得到灭酶桃仁粉末；（2）将灭酶桃仁粉末按质量体积比1g：10‑15mL的比例加入到石油醚中混匀，超声处理后过滤，滤渣干燥得到脱脂桃仁粉末；（3）将脱脂桃仁粉末按质量体积比1g：20‑25 mL加入到70‑80vt%乙醇溶液中混匀，在360‑432W，40‑50℃条件下超声40min后，过滤取滤液蒸发除去乙醇，即得到总苦杏仁苷粗品，在制备HepG2细胞生长增殖抑制剂方面的应用；优点是提取效率高、产品纯度高，耗时短。

技术研发人员：邵兴锋,张德财,叶建芬,韦莹莹,陈义,姜舒
受保护的技术使用者：宁波大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/11