野尻链霉菌（Streptomycesnojiriensis）菌株9-13及应用

nojiriensis)菌株9-13，所述野尻链霉菌(streptomyces nojiriensis)菌株9-13保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为cgmcc no.22798，保藏日期：2021年6月28日。
9.野尻链霉菌(streptomyces nojiriensis)菌株9-13的16s rrna序列及rpob基因序列分别如seq id no:1和seq id no:2所示。
10.野尻链霉菌(streptomyces nojiriensis)菌株9-13在高氏一号培养基上基内菌丝软木黄色，气生菌丝白色，无可溶性色素产生。孢子丝直、柔曲、钩状、松敞与紧密螺旋形，孢子椭圆形、柱形。
11.野尻链霉菌(streptomyces nojiriensis)菌株9-13的生理生化特征为：可产生黑色素，不能还原硝酸盐；能利用葡糖糖、甘露糖、甘露醇、乳糖、半乳糖等；能利用丙氨酸；不能利用苏氨酸、赖氨酸和脯氨酸。
12.野尻链霉菌(streptomyces nojiriensis)菌株9-13对引起双孢蘑菇疣孢霉病的有害疣孢霉(mycogone perniciosa)、红丝疣孢霉(m.rosea)和m.xinjiangensis均具有拮抗作用。
13.野尻链霉菌(streptomyces nojiriensis)菌株9-13在防治双孢蘑菇疣孢霉病中的应用。
14.野尻链霉菌(streptomyces nojiriensis)菌株9-13的发酵液的制备方法，野尻链霉菌(streptomyces nojiriensis)菌株9-13接种于isp2液体培养基，发酵温度为26-28℃，发酵培养时间7-8d，过滤得发酵液。
15.野尻链霉菌(streptomyces nojiriensis)菌株9-13的发酵液在防治双孢蘑菇疣孢霉病中的应用。
16.野尻链霉菌(streptomyces nojiriensis)菌株9-13的发酵液用于抑制双孢蘑菇疣孢霉病病原菌的菌丝生长；
17.所述双孢蘑菇疣孢霉病病原菌为有害疣孢霉(mycogone perniciosa)、红丝疣孢霉(m.rosea)和m.xinjiangensis。
18.较之现有技术而言，本发明的优点在于：野尻链霉菌(streptomyces nojiriensis)菌株9-13对引起双孢蘑菇疣孢霉病的3种病原菌均具有拮抗作用，其发酵液可以显著抑制3种疣孢霉菌的菌丝生长，制得的发酵液不仅对双孢蘑菇疣孢霉病的防治效果好而且对双孢蘑菇安全。
19.此外，野尻链霉菌(streptomyces nojiriensis)菌株9-13是从土壤中获得的，与土壤环境和谐相容，具有良好的应用前景。
附图说明
20.图1为野尻链霉菌(streptomyces nojiriensis)菌株9-13在高氏一号培养基上的培养特征。
21.图2为野尻链霉菌(streptomyces nojiriensis)菌株9-13与双孢蘑菇疣孢霉病的3种疣孢霉菌的对峙培养。注：a为有害疣孢霉(mycogone perniciosa)，b为红丝疣孢霉(m.rosea)，c为m.xinjiangensis，ck为对照组。
22.图3为野尻链霉菌(streptomyces nojiriensis)菌株9-13发酵液在离体条件下对
双孢蘑菇疣孢霉病的3种疣孢霉菌的抑制效果。注：a为有害疣孢霉(mycogone perniciosa)，b为红丝疣孢霉(m.rosea)，c为m.xinjiangensis，ck为对照组。
具体实施方式
23.下面结合说明书附图和实施例对本

技术实现要素：
进行详细说明：
24.实施例一：野尻链霉菌(streptomyces nojiriensis)菌株9-13的分离及鉴定。
25.1、土壤样品的采集
26.从江西井冈山采集土样3份，去除表面的土壤，采集5
–
20cm深处的土样，标记后带回实验室自然风干。
27.2、放线菌的分离
28.采用平板稀释法进行分离。将风干土样用研钵磨碎，称取样品1g悬浮于9ml无菌水中，于40℃、180rpm震荡30min后静置5min，依次稀释10倍，分别配制成10-2
、10-3
、10-4
的悬浮液，分别吸取不同浓度的悬浮液各0.1ml加入到改良的hva培养基(加入终浓度为100
–
200ppm的重铬酸钾)平板上，均匀涂布后倒置于28℃培养观察，5
–
7天后挑取不同的单菌落划线纯化，纯化后的菌株采用甘油法保藏于-80℃冰箱。
29.3、野尻链霉菌(streptomyces nojiriensis)菌株9-13的鉴定
30.(1)形态特征观察
31.野尻链霉菌(streptomyces nojiriensis)菌株9-13在多数培养基上生长良好，都不产可溶性色素(表1)。光学显微镜下野尻链霉菌(streptomyces nojiriensis)菌株9-13孢子丝直、柔曲、钩状、松敞及紧密螺旋形，孢子椭圆形、柱形。
32.表1野尻链霉菌(streptomyces nojiriensis)9-13的培养特征
[0033][0034]
(2)生理生化特征
[0035]
参照《链霉菌鉴定手册》中所述的方法测定野尻链霉菌(streptomyces nojiriensis)9-13硝酸盐还原及碳、氮源的利用等特性，结果见表2。
[0036]
表2野尻链霉菌(streptomyces nojiriensis)菌株9-13的生理生化特征
[0037][0038][0039]
(3)序列分析
[0040]
细菌基因组提取试剂盒提取菌株9-13基因组dna后，分别进行16s rrna和rpob基因扩增，得到的序列全长分别为1412bp和859bp，将所得序列提交至genbank数据库进行blast比对分析得出菌株9-13为野尻链霉菌(streptomyces nojiriensis)。
[0041]
实施例二：野尻链霉菌(streptomyces nojiriensis)菌株9-13对3种疣孢霉菌的拮抗作用测定。
[0042]
采用平板对峙培养法，将野尻链霉菌(streptomyces nojiriensis)菌株9-13对有害疣孢霉、红丝疣孢霉及m.xinjiangensis进行拮抗测定。首先在pda培养基靠边缘两侧划线接种野尻链霉菌(streptomyces nojiriensis)菌株9-13，3d后在平板中央接入直径5mm供试病原菌菌饼，25℃下培养5d测量野尻链霉菌(streptomyces nojiriensis)菌株9-13对供试病原菌的抑菌带宽度和病原菌直径(表3)，以不接拮抗菌的供试病原菌为对照。结果表明，野尻链霉菌(streptomyces nojiriensis)菌株9-13对有害疣孢霉、红丝疣孢霉和m.xinjiangensis均具有非常强的拮抗作用(图2)。
[0043]
表3野尻链霉菌菌株9-13对3种疣孢霉菌的拮抗作用
[0044][0045]
实施例三：野尻链霉菌(streptomyces nojiriensis)菌株9-13发酵液对3种疣孢霉菌的抑制作用。
[0046]
将高氏一号培养基活化的野尻链霉菌(streptomyces nojiriensis)菌株9-13的
nojiriensis)菌株9-13的发酵液对双孢蘑菇疣孢霉病的防治效果分别为77.53％和75.62％，均对双孢蘑菇安全，未见药害。野尻链霉菌(streptomyces nojiriensis)菌株9-13的发酵液对双孢蘑菇疣孢霉病的防治效果在5％显著水平上及1％极显著水平上与50％咪鲜胺锰盐wp1.0克/平方米防效差异均不显著。由此可见，野尻链霉菌(streptomyces nojiriensis)菌株9-13的发酵液对双孢蘑菇疣孢霉病的防治效果与50％咪鲜胺锰盐wp1.0克/平方米防效相当，具备良好的应用前景。
[0057]
野尻链霉菌(streptomyces nojiriensis)菌株9-13的16s rrna序列及rpob基因序列分别如seq id no:1和seq id no:2所示。
[0058]
seq id no:1
[0059]
tgcggcgtgcttaccatgcagtcgaacgatgaacctccttcgggagggattagtggcgaacgggtgagtaacacgtgggcaatctgcccttcactctgggacaagccctggaaacggggtctaataccggatatgacacggggtcgcatgatctccgtgtggaaagctccggcggtgaaggatgagcccgcggcctatcagcttgttggtgaggtagtggctcaccaaggcgacgacgggtagccggcctgagagggcgaccggccacactgggactgagacacggcccagactcctacgggaggcagcagtgggaatattgcacaatgggcgaaagcctgatgcagcgacgccgcgtgagggatgacggccttcgggttgtaaacctctttcagcagggaagaagcgagagtgacggtacctgcagaagaagcgccggctaactacgtgccagcagccgcggtaatacgtagggcgcgagcgttgtccggaattattgggcgtaaagagctcgtaggcggcttgtcacgtcggatgtgaaagcccggggcttaaccccgggtctgcattcgatacgggcaggctagagttcggtagggagatcggaattcctggtgtagcggtgaaatgcgcagatatcaggaggaacaccggtggcgaaggcggatctctgggccgatactgacgctgaggagcgaaagcgtggggagcgaacaggattagataccctggtagtccacgccgtaaacgttgggaactaggtgtgggcgacattccacgtcgtccgtgccgcagctaacgcattaagttccccgcctggggagtacggccgcaaggctaaaactcaaaggaattgacggggcccgcacaagcagcggagcatgtggcttaattcgacgcaacgcgaagaaccttaccaaggcttgacatacaccggaaaaccgtggagacacggtcccccttgtggtcggtgtacaggtggtgcatggctgtcgtcagctcgtgtcgtgagatgttgggttaagtcccgcaacgagcgcaacccttgttctgtgttgccagcatgcctttcggggtgatggggactcacaggagactgccggggtcaactcggaggaaggtggggacgacgtcaagtcatcatgcccttatgtcttgggctgcacacgtgctacaatggccggtacaatgagctgcgataccgcgaggtggagcgaatctcaaaaagccggtctcagttcggattgggtctgcaactcgaccccatgaagtcggagttgctagtaatcgcagatcagcattgctgcggtgaatacgttcccgggccttgtacacaccgcccgtcacgtcacgaaagtcggtaacacccgaagccggtggcccaaccccttgtgggagggaatcgtcgaagg
[0060]
seq id no:2
[0061]
gtacggctaaaaaagcgcgcctgtcggcgctgggccccggcggtctgtcccgtgagcgggccggcttcgaggtccgtgacgttcacccgtcgcactacggccgcatgtgcccgatcgagacccctgaaggcccgaacatcggtctgatcggctcgctcgcctcctacggtcgcgtcaacgcgttcggtttcgtcgagaccccgtaccgcaaggtcatcgacggtgtcgtcaccgacgaggtcgactacctgacggccgacgaggaagaccgcttcgtcatcgcccaggccaacgccggcctgtccgaggacatgcgcttcaccgagaaccgcgtgctggtgcgccgtcgtggcggcgagatcgactacatcgccggcgacgacgtcgactacatggacgtctccccgcgccagatggtgtccgtcgcgaccgcgatgatccccttcctggagcacgacgacgccaaccgtgccctcatgggcgcgaacatgatgcgccaggccgttccgctcatcaaggcggaggccccgctcgtcggcaccggcatggagtaccgctgtgcggtcgacgccggtgactcgatccgtgcggagaaggacggtgtcgtccaggaggtctcggccgactacatcaccgtcgccaacgacgacggcacgtacaccacgtaccgcgtcgccaagttctcccgctcgaaccagggcacctcggtcaaccagaaggtcatcgtcaacgagggtgaccggatcatcgagtcccaggtcc
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[0063]
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