技术特征：
1.一种改性分子酶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：枯草芽孢杆菌制备，得到原生质体；将原生质体置于des溶液中处理，得到待用菌溶液a；将原生质体置于紫外环境下处理，得到待用菌溶液b；将待用菌溶液a、待用菌溶液b混合，加入助溶剂促融合，离心后弃去上清液，清洗后得到待筛选原生质体；将待筛选原生质体放入再生培养基中，做成ph6.0-12.0的梯度坡面培养皿，取存活原生质体；然后再将存活原生质体涂布于25-50mg/ml的庆大霉素的梯度斜面上，培养18-25天，挑选存活的菌落进行培养；培养的菌落进行发酵培养后从菌液中提取分子酶；将分子酶与edc溶液、nhs溶液混合，配置成分子酶溶液，分子酶溶液的浓度为20-200mg/ml；按体积份数，取15-25份edc溶液和35-45份nhs溶液，加入到分子酶溶液中反应；离心，去上清，离心得到的剩余部分用mes溶液复溶，并加入peg-聚精氨酸，避光反应；加入封闭液，旋转封闭反应；离心，去上清，得到改性分子酶；分子酶为μvsx酶、μvsy酶、gp32酶、bsμ酶、nfo酶、creatine kinase m-type酶中的一种。2.根据权利要求1所述的改性分子酶的制备方法，其特征在于：所述待用菌溶液a的处理包括以下步骤：取原生质体，配置成原生质体悬浮液；将des溶液与原生质体悬浮液混合，配置至des终浓度为0.7-1.0%；混合均匀后，置于35-42℃处理30-120min，得到待用菌溶液a。3.根据权利要求1所述的改性分子酶的制备方法，其特征在于：所述待用菌溶液b的处理包括以下步骤：取原生质体，配置成原生质体悬浮液；在10-25w、250-300nm的条件下对原生质体悬浮液进行紫外处理，处理时间为90-160s，避光，得到待用菌溶液b。4.根据权利要求1所述的改性分子酶的制备方法，其特征在于：取所述edc溶液和nhs溶液加入到分子酶溶液中反应时，edc溶液和nhs溶液的体积比为1：（2-3）。5.根据权利要求1所述的改性分子酶的制备方法，其特征在于：所述助溶剂为硝酸钠、聚乙二醇、二甲亚砜中的一种。6.一种分子免疫层析检测方法，其特征在于，包括以下步骤：将1-3g待测样品加入到95-105μl核酸释放剂，在95-100℃下处理2-5min，得到待检测模板；然后将2
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10-4-3
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10-4
μmol/l的改性分子酶和1-2μl待检测模板混合，混合均匀后加入0.8-1.5μl激活剂，在35-40℃下反应20-45min，得到反应产物；将反应产物用反应缓冲液稀释45-50倍，插入试剂，观察结果；
改性分子酶由权利要求1-5任一项所述的改性分子酶的制备方法制备而成。7.根据权利要求6所述的分子免疫层析检测方法，其特征在于：所述核酸释放剂包括以下组分：90-110mmol/l tris-hcl溶液、18-23mmol/l edta-na、0.65-0.9% nacl溶液、0.03-0.06% sds。8.根据权利要求6所述的分子免疫层析检测方法，其特征在于：插入所述试剂后，在沸水水浴中进行1-3min，观察结果。9.根据权利要求6所述的分子免疫层析检测方法，其特征在于：所述改性分子酶被制成冻干粉，冻干粉与溶解剂、反应缓冲剂共同混合后，再与待检测模板混合。10.根据权利要求9所述的分子免疫层析检测方法，其特征在于：所述溶解剂、反应缓冲剂的体积比例为（8-12）：（10-15）。
技术总结
本申请涉及分子检测领域，更具体地说，它涉及一种改性分子酶的制备方法及其分子免疫层析检测方法。改性分子酶的制备方法：枯草芽孢杆菌的制备；枯草芽孢杆菌置于DES溶液中/紫外环境下处理得到待用菌溶液A/B；将待用菌溶液A、B混合，加助溶剂，离心、弃上清；将其做成pH6.0-12.0梯度斜面培养皿，将存活原生质体涂布于庆大霉素的梯度斜面培养，挑选存活菌落、进行发酵培养，收集菌液，提取分子酶，制得分子酶溶液；取EDC、NHS溶液加入到分子酶溶液；离心、去上清，用MES复溶，加入PEG-聚精氨酸；加封闭液旋转封闭；离心，去上清，得到改性分子酶。本申请具有简化操作、提高效率优点。提高效率优点。提高效率优点。
技术研发人员：蓝基贤 邵南津 黄彩兰 华松婷
受保护的技术使用者：深度进化（广州）生物技术有限公司
技术研发日：2022.12.08
技术公布日：2023/3/21