一种3-N-乙酰依替米星的制备方法与流程

一种3-n-乙酰依替米星的制备方法
技术领域：
1.本发明涉及药物化学领域，一种氨基糖苷类化合物的制备方法，具体来说是一种3-n-乙基庆大霉素c1a的制备方法。


背景技术：

2.硫酸依替米星(etimicin sulfate)为半合成氨基糖苷类抗生素，适用于对其敏感的大肠杆菌、肠杆菌属、克雷伯氏肺炎杆菌、沙雷氏杆菌属、不动杆菌属、枸橼酸杆菌、变形杆菌属、绿脓杆菌、嗜血流感杆菌和葡萄球菌等引起的各种感染。临床研究显示硫酸依替米星制剂对以下感染有较好的疗效，如呼吸道感染，肾脏和泌尿生殖系统感染，皮肤软组织和其它感染等。
3.3-n-乙酰依替米星，结构式如下：
[0004][0005]
3-n-乙酰基依替米星是硫酸依替米星原料药生产过程中的杂质之一，其存在不仅会影响到依替米星收率，对硫酸依替米星原料药质量也存在潜在风险。由于与依替米星结构相似，性质相近，较难从生产中分离。目前国内外均没有3-n-乙酰基依替米星的标准品出售。
[0006]
目前有关于3-n-乙酰基依替米星制备方法的专利(中国专利申请号：202011536901.4)，其主要步骤为：在圆底烧瓶中投入依替米星、乙醇、水搅拌均匀，降温至0℃，滴加二碳酸二叔丁酯，持续搅拌，反应完成后，将反应体系浓缩；反应体系中加入甲酸，升温至120℃，持续反应4h，反应结束后降温至室温；分别加入10％氢氧化钠，搅拌加热回流，反应结束后，降温至室温；除盐，通过分离的到目标产物3-n-乙酰基依替米星。该制备方法boc保护基不具有选择性，无法区分2
′‑
c-氨基和6
′‑
c-氨基和3-c-氨基，致使制备过程中必定产生副反应，收率低，且在用10％的氢氧化钠溶液脱保护时，由于反应时间过久，大量的3-n-乙酰基也会被破坏掉，造成收率进一步降低，同时因为同分异构体存在，分离难度更大，导致产率低或者纯度低等问题。


技术实现要素：

[0007]
本发明的目的在于提供一种3-n-乙酰基依替米星的制备方法。该方法具有专属性好副反应少，易于纯化分离的优点。
[0008]
本发明所述的制备方法，包括以下步骤：
[0009]
步骤1)庆大霉素c1a和乙酸锌反应得锌络合物；
[0010]
步骤2)三乙胺作为缚酸剂，加入乙酸酐反应后得到氨基被乙酰化的产物；
[0011]
步骤3)与草酸钠反应解开络合，经分离纯化得p1中间体；
[0012]
步骤4)加入乙二醇二甲醚、六甲基二硅氮烷和浓硫酸反应，得羟基硅烷化产物；步骤5)浓缩除溶剂后再加入二氯甲烷和乙醛反应，随后加入硼氢化钾和硼酸缓冲液反应得到乙基化物；
[0013]
步骤6)用氢氧化钠溶液水解，水解液过柱，制备液相分离纯化得到3-n-乙酰基依替米星。
[0014]
所述方法，制备路线如下：
[0015][0016]
本发明方法，核心在于步骤6)的水解，水解液过柱，纯化步骤。
[0017]
其中，所述水解步骤如下：
[0018]
反应液6中加入10％氢氧化钠溶液100ml，浓缩蒸去二氯甲烷，再加入20％氢氧化钠240ml溶液，升温至110℃回流，搅拌3小时，得反应液7。
[0019]
其中，所述水解液过柱步骤如下：
[0020]
反应液7以大孔树脂吸附，以无盐水冲洗除盐，以5％～25％乙醇梯度洗脱，收集纯度＞80％的洗脱液，真空浓缩后得到粗品。
[0021]
其中，所述纯化，采用制备液相分离纯化，步骤如下：
[0022]
取2g粗品置于离心管中，用流动相a溶解，按照以下制备液相条件进行：
[0023][0024]
得3-n-乙酰基依替米星纯品，经过检测，3n-乙酰依替米星面积归一化含量为97.18％(elsd)。
[0025]
本发明的方法，相对于现有的工艺而言，具有以下有益效果：
[0026]
通过本发明的方法制备得到的3-n-乙酰基依替米星有专属性好副反应少，产品易于分离纯化，产率高等特点。同时，对该杂质进行深入研究，通过优化水解工艺，降低该杂质生成，对于提高药品质量，提高临床用药的安全性具有重大的意义。
[0027]
以下通过对比进一步说明本发明的有益效果:
[0028]
附图说明
[0029]
图1：3-n-乙酰依替米星质谱图
[0030]
图2：3-n-乙酰依替米星氢谱
[0031]
图3：3-n-乙酰依替米星碳谱
[0032]
图4：-乙酰依替米星hsqc谱
[0033]
图5：3n-乙酰依替米星cosy谱
[0034]
图6：3-n-乙酰基依替米星薄层色谱图
[0035]
图7：3-n-乙酰依替米星粗品制备图
[0036]
图8：3-n-乙酰依替米星检测图
具体实施方式：
[0037]
以下通过实施例进一步说明本发明，但不作为对本发明的限制。
[0038]
实施例1：
[0039]
取庆大霉素c1a 20.0g溶于甲醇200ml中得溶液1。溶液1中加入无水乙酸锌20.6g，搅拌溶解搅拌2小时，得反应液1。
[0040]
反应液1冷却至0～10℃，加入三乙胺20ml和乙酸酐18.0ml，搅拌2小时，得反应液2。
[0041]
反应液2浓缩去溶剂，加入水300ml溶解，加入草酸钠16.6g，搅拌3小时，沉淀过滤，得滤液2。滤液浓缩去溶剂，以大孔树脂分离，得到中间体p1。
[0042]
中间体p1加入乙二醇二甲醚100ml、六甲基二硅氮烷120ml和浓硫酸0.2ml，90℃加
热回流4小时，得反应液3。
[0043]
反应液3浓缩蒸去大部分溶剂，以二氯甲烷5.4ml溶解，得溶液3。溶液3冷却至0～10℃，加入40％乙醛4.8ml，搅拌1小时，得反应液4。
[0044]
反应液4中加入硼氢化钾7.2g，搅拌1小时，得反应液5。
[0045]
反应液5中加入ph为10的硼酸缓冲液30ml(由10.0g硼酸加去离子水30ml搅拌溶解，用氢氧化钠调节ph＝10制得)，搅拌5小时，得反应液6。
[0046]
反应液6中加入10％氢氧化钠溶液100ml，浓缩蒸去二氯甲烷，再加入20％氢氧化钠240ml溶液，升温至110℃回流，搅拌3小时，得反应液7。
[0047]
反应液7以大孔树脂吸附，以无盐水冲洗除盐，以5％～25％乙醇梯度洗脱，收集纯度＞80％的洗脱液，真空浓缩后得到粗品，
[0048]
粗品按照以下制备液相条件进行分离纯化：
[0049][0050][0051]
经制备液相分离得3-n-乙酰依替米星纯品，共收集1.2g。
[0052]
综合解析：
[0053]
3-n-乙酰依替米星exact mass为519.3268，分子式为c
23h45
n5o8；在高分辨质谱正离子模式下，显示准分子离子峰为520.33417，即为([c
23h45
n5o8]+h)
+
，在负离子模式下，准分子离子峰为518.31812，即为([c
23h45
n5o8]-h)-，均与3n-乙酰依替米星的分子式相符。
[0054]
在nmr图谱中，本品的1h nmr中共有20组峰(除溶剂峰外)，其积分比从低场到高场为1:1:1:1:2:2:1:1:1:1:1:3:3:5:3:3:1:3:5:6，共45个质子；
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c nmr谱图中从低场到高场有23个c信号(除溶剂峰外)，因此共含有23个碳原子；同时通过hsqc和cosy分析，样品与3n-乙酰依替米星结构式相符且能得到合理的解释。
[0055]
综上所述，本品通过hrms和nmr的方法，确证了样品与3n-乙酰依替米星结构式一致。