抗CLL1抗体及其构建体的制作方法

本公开涉及靶向cll1的抗体、靶向cll1的嵌合抗原受体及其使用方法。

背景技术：

1、急性髓系白血病(aml)是髓系血细胞的癌症，其特征是未成熟血细胞(“母细胞”)的快速生长，这些未成熟血细胞在骨髓和血液中积聚并干扰正常血细胞。aml可能扩散到其他器官，如肝脏、脾脏和大脑。aml的临床症状包括疲劳、呼吸急促、容易瘀伤和出血以及感染风险增加。如果不进行治疗，aml进展迅速，通常在数周或数月内致命(de kouchkovsky,i.等人,2016,blood cancer j 6(7):e441.)。aml有几种亚型，这些亚型的治疗和结果可能会有所不同。通常，aml最初采用化疗进行治疗，有时与靶向治疗药物一起进行治疗。然后，患者可以继续接受干细胞移植、额外的化疗、手术或放疗。aml最常见于老年人，其中一些人不够健壮，无法接受强化化疗，因此临床结果不佳(h.等人,2015,n engl j med373(12):1136-1152；和medinger,m.等人,2019,ther umsch 76(9):481-486)。几乎所有接受目前aml治疗的患者最终都会复发。因此，需要有效的免疫治疗剂来治疗aml。

技术实现思路

1、本公开涉及与cll1结合的抗体及其抗原结合片段。本公开还涉及用于治疗患有cll1阳性癌症(包括例如急性髓系白血病(aml))的癌症患者的抗cll1 car-t细胞疗法。基因工程化t细胞可以识别和攻击靶细胞。这些t细胞可以从宿主中分离出来，并使用例如合适的病毒介导或非病毒转染手段进行基因修饰。此后，可以将修饰的t细胞输回患者体内作为过继细胞疗法。

2、在一方面，本公开涉及与cll1(c型凝集素样分子1，或c型凝集素结构域家族12成员a)结合的抗体或其抗原结合片段，其包含：包含互补决定区(cdr)1、2和3的重链可变区(vh)，其中该vh cdr1区包含与所选vh cdr1氨基酸序列至少80％相同的氨基酸序列，该vhcdr2区包含与所选vh cdr2氨基酸序列至少80％相同的氨基酸序列，以及该vh cdr3区包含与所选vh cdr3氨基酸序列至少80％相同的氨基酸序列；以及包含cdr 1、2和3的轻链可变区(vl)，其中该vl cdr1区包含与所选vl cdr1氨基酸序列至少80％相同的氨基酸序列，该vl cdr2区包含与所选vl cdr2氨基酸序列至少80％相同的氨基酸序列，以及该vl cdr3区包含与所选vl cdr3氨基酸序列至少80％相同的氨基酸序列，其中所选vh cdr 1、2和3氨基酸序列以及所选vl cdr 1、2和3氨基酸序列是以下中的一个：(1)所选vh cdr 1、2、3氨基酸序列分别在seq id no:1、2和3中列出，以及所选vl cdr 1、2、3氨基酸序列分别在seq idno:4、5和6中列出；(2)所选vh cdr 1、2、3氨基酸序列分别在seq id no:11、12和13中列出，以及所选vl cdr 1、2、3氨基酸序列分别在seq id no:14、15和16中列出；(3)所选vh cdr1、2、3氨基酸序列分别在seq id no:21、22和23中列出，以及所选vl cdr 1、2、3氨基酸序列分别在seq id no:24、25和26中列出；(4)所选vh cdr 1、2、3氨基酸序列分别在seq id no:31、32和33中列出，以及所选vl cdr 1、2、3氨基酸序列分别在seq id no:34、35和36中列出；(5)所选vh cdr 1、2、3氨基酸序列分别在seq id no:41、42和43中列出，以及所选vlcdr 1、2、3氨基酸序列分别在seq id no:44、45和46中列出；(6)所选vh cdr 1、2、3氨基酸序列分别在seq id no:51、52和53中列出，以及所选vl cdr 1、2、3氨基酸序列分别在seqid no:54、55和56中列出；(7)所选vh cdr 1、2、3氨基酸序列分别在seq id no:61、62和63中列出，以及所选vl cdr 1、2、3氨基酸序列分别在seq id no:64、65和66中列出；(8)所选vh cdr 1、2、3氨基酸序列分别在seq id no:71、72和73中列出，以及所选vl cdr 1、2、3氨基酸序列分别在seq id no:74、75和76中列出；(9)所选vh cdr 1、2、3氨基酸序列分别在seq id no:81、82和83中列出，以及所选vl cdr 1、2、3氨基酸序列分别在seq id no:84、85和86中列出；(10)所选vh cdr 1、2、3氨基酸序列分别在seq id no:91、92和93中列出，以及所选vl cdr 1、2、3氨基酸序列分别在seq id no:94、95和96中列出；(11)所选vh cdr 1、2、3氨基酸序列分别在seq id no:101、102和103中列出，以及所选vl cdr 1、2、3氨基酸序列分别在seq id no:104、105和106中列出；(12)所选vh cdr 1、2、3氨基酸序列分别在seq idno:111、112和113中列出，以及所选vl cdr 1、2、3氨基酸序列分别在seq id no:114、115和116中列出；以及(13)所选vh cdr 1、2、3氨基酸序列分别在seq id no:121、122和123中列出，以及所选vl cdr 1、2、3氨基酸序列分别在seq id no:124、125和126中列出。

3、在一方面，本公开涉及与cll1结合的抗体或其抗原结合片段，其包含重链可变区(vh)和轻链可变区(vl)，该重链可变区包含与所选vh序列至少80％、85％、90％、95％或100％相同的氨基酸序列，该轻链可变区包含与所选vl序列至少80％、85％、90％、95％或100％相同的氨基酸序列，其中所选vh序列和所选vl序列是以下中的一个：(1)所选vh序列是seq id no:10，以及所选vl序列是seq id no:9；(2)所选vh序列是seq id no:20，以及所选vl序列是seq id no:19；(3)所选vh序列是seq id no:30，以及所选vl序列是seq id no:29；(4)所选vh序列是seq id no:40，以及所选vl序列是seq id no:39；(5)所选vh序列是seq id no:50，以及所选vl序列是seq id no:49；(6)所选vh序列是seq id no:60，以及所选vl序列是seq id no:59；(7)所选vh序列是seq id no:70，以及所选vl序列是seq id no:69；(8)所选vh序列是seq id no:80，以及所选vl序列是seq id no:79；(9)所选vh序列是seq id no:90，以及所选vl序列是seq id no:89；(10)所选vh序列是seq id no:100，以及所选vl序列是seq id no:99；(11)所选vh序列是seq id no:110，以及所选vl序列是seq idno:109；(12)所选vh序列是seq id no:120，以及所选vl序列是seq id no:119；以及(13)所选vh序列是seq id no:130，以及所选vl序列是seq id no:129。

4、在一方面，本公开涉及与cll1结合的抗体或其抗原结合片段，其包含重链可变区(vh)和轻链可变区(vl)，该重链可变区包含与所选vh序列的vh cdr1、vh cdr2和vh cdr3相同的vh cdr1、vh cdr2和vh cdr3，该轻链可变区包含与所选vl序列的vl cdr1、vl cdr2和vl cdr3相同的vl cdr1、vl cdr2和vl cdr3，其中所选vh序列和所选vl序列是以下中的一个：(1)所选vh序列是seq id no:10，以及所选vl序列是seq id no:9；(2)所选vh序列是seqid no:20，以及所选vl序列是seq id no:19；(3)所选vh序列是seq id no:30，以及所选vl序列是seq id no:29；(4)所选vh序列是seq id no:40，以及所选vl序列是seq id no:39；(5)所选vh序列是seq id no:50，以及所选vl序列是seq id no:49；(6)所选vh序列是seqid no:60，以及所选vl序列是seq id no:59；(7)所选vh序列是seq id no:70，以及所选vl序列是seq id no:69；(8)所选vh序列是seq id no:80，以及所选vl序列是seq id no:79；(9)所选vh序列是seq id no:90，以及所选vl序列是seq id no:89；(10)所选vh序列是seqid no:100，以及所选vl序列是seq id no:99；(11)所选vh序列是seq id no:110，以及所选vl序列是seq id no:109；(12)所选vh序列是seq id no:120，以及所选vl序列是seq idno:119；以及(13)所选vh序列是seq id no:130，以及所选vl序列是seq id no:129。

5、在一些实施例中，抗体或抗原结合片段是单链可变片段(scfv)。

6、在一些实施例中，抗体或抗原结合片段特异性地与人cll1肽结合，该肽包含与seqid no:147的氨基酸序列至少80％、85％、90％、95％或100％相同的序列。

7、在一些实施例中，抗体或抗原结合片段特异性地结合人cll1的胞外结构域(ecd)。

8、在一些实施例中，抗体或抗原结合片段是人源化抗体或其抗原结合片段。

9、在一些实施例中，抗体或抗原结合片段是嵌合抗体或其抗原结合片段或人抗体或其抗原结合片段。

10、在一方面，本公开涉及与本文所述的抗体或其抗原结合片段中的任一个交叉竞争的抗体或其抗原结合片段。

11、在一方面，本公开涉及抗体-药物缀合物，其包含本文所述的抗体或其抗原结合片段。

12、在一方面，本公开涉及药物组合物，其包含本文所述的抗体或其抗原结合片段、或本文所述的抗体-药物缀合物以及药学上可接受的载剂。

13、在一方面，本公开涉及核酸，其包含编码本文所述的抗体或其抗原结合片段的多核苷酸。

14、在一方面，本公开涉及包含本文所述的核酸的载体。

15、在一方面，本公开涉及包含本文所述的载体的细胞。

16、在一方面，本公开涉及产生抗体或其抗原结合片段的方法，该方法包括：(a)在足以使包含本文所述载体的细胞产生抗体或其抗原结合片段的条件下培养该细胞；以及(b)收集由该细胞产生的抗体或其抗原结合片段。

17、在一方面，本公开涉及包含本文所述的其抗原结合片段的工程化受体。

18、在一些实施例中，工程化受体进一步包含跨膜区和胞内信号传导结构域。

19、在一些实施例中，工程化受体是嵌合抗原受体(“car”)。

20、在一些实施例中，工程化受体进一步包含铰链区。

21、在一些实施例中，跨膜区包含cd4、cd8和/或cd28的跨膜区或其一部分。

22、在一些实施例中，胞内信号传导结构域包含免疫效应细胞的初级胞内信号传导序列。

23、在一些实施例中，胞内信号传导结构域是或包含cd3ζ的功能性信号传导结构域。

24、在一些实施例中，胞内信号传导结构域进一步包含共刺激信号传导结构域。

25、在一些实施例中，共刺激信号传导结构域包含来自选自由以下组成的组的蛋白质的功能性信号传导结构域：mhc i类分子、tnf受体蛋白、免疫球蛋白样蛋白、细胞因子受体、整合素、信号传导淋巴细胞激活分子(slam蛋白)、激活nk细胞受体、btla、toll配体受体、ox40、cd2、cd7、cd27、cd28、cd30、cd40、cds、icam-1、lfa-1、cd11a/cd18、4-1bb(cd137)、b7-h3、cds、icam-1、icos(cd278)、gitr、baffr、light、hvem(lightr)、kirds2、slamf7、nkp80(klrf1)、nkp44、nkp30、nkp46、cd19、cd4、cd8α、cd8β、il2rβ、il2rγ、il7rα、itga4、vla1、cd49a、itga4、ia4、cd49d、itga6、vla-6、cd49f、itgad、cd11d、itgae、cd103、itgal、cd11a、lfa-1、itgam、cd11b、itgax、cd11c、itgb1、cd29、itgb2、cd18、lfa-1、itgb7、nkg2d、nkg2c、tnfr2、trance/rankl、dnam1(cd226)、slamf4(cd244、2b4)、cd84、cd96(tactile)、ceacam1、crtam、ly9(cd229)、cd160(by55)、psgl1、cd100(sema4d)、cd69、slamf6(ntb-a、lyl08)、slam(slamf1、cd150、ipo-3)、blame(slamf8)、selplg(cd162)、ltbr、lat、gads、slp-76、pag/cbp、cd19a和cd83配体。

26、在一些实施例中，共刺激信号传导结构域包含4-1bb和/或cd28的胞内信号传导结构域。

27、在一些实施例中，工程化受体包含信号肽。

28、在一些实施例中，信号肽与seq id no:146至少80％、85％、90％、95％或100％相同。

29、在一些实施例中，工程化受体包含在seq id no:7、17、27、37、47、57、67、77、87、97、107、117和127中任一个中列出的氨基酸序列，或与seq id no:7、17、27、37、47、57、67、77、87、97、107、117和127中任一个至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。

30、在一些实施例中，氨基酸序列与seq id no:7、17、27、37、47、57、67、77、87、97、107、117和127中任一个相同。

31、在一方面，本公开涉及工程化受体，其包含：(a)第一抗原结合片段，其如本文所述的任一种抗原结合片段；和(b)与cd33结合的第二抗原结合片段。

32、在一些实施例中，第一抗原结合片段和第二抗原结合片段通过接头连接。

33、在一些实施例中，工程化受体进一步包含跨膜区和胞内信号传导结构域。

34、在一些实施例中，工程化受体是嵌合抗原受体(“car”)。

35、在一些实施例中，工程化受体进一步包含铰链区。

36、在一些实施例中，跨膜区包含cd4、cd8和/或cd28的跨膜区或其一部分。

37、在一些实施例中，胞内信号传导结构域包含免疫效应细胞的初级胞内信号传导序列。

38、在一些实施例中，胞内信号传导结构域是或包含cd3ζ的功能性信号传导结构域。

39、在一些实施例中，胞内信号传导结构域进一步包含共刺激信号传导结构域。

40、在一些实施例中，共刺激信号传导结构域包含来自选自由以下组成的组的蛋白质的功能性信号传导结构域：mhc i类分子、tnf受体蛋白、免疫球蛋白样蛋白、细胞因子受体、整合素、信号传导淋巴细胞激活分子(slam蛋白)、激活nk细胞受体、btla、toll配体受体、ox40、cd2、cd7、cd27、cd28、cd30、cd40、cds、icam-1、lfa-1、cd11a/cd18、4-1bb(cd137)、b7-h3、cds、icam-1、icos(cd278)、gitr、baffr、light、hvem(lightr)、kirds2、slamf7、nkp80(klrf1)、nkp44、nkp30、nkp46、cd19、cd4、cd8α、cd8β、il2rβ、il2rγ、il7rα、itga4、vla1、cd49a、itga4、ia4、cd49d、itga6、vla-6、cd49f、itgad、cd11d、itgae、cd103、itgal、cd11a、lfa-1、itgam、cd11b、itgax、cd11c、itgb1、cd29、itgb2、cd18、lfa-1、itgb7、nkg2d、nkg2c、tnfr2、trance/rankl、dnam1(cd226)、slamf4(cd244、2b4)、cd84、cd96(tactile)、ceacam1、crtam、ly9(cd229)、cd160(by55)、psgl1、cd100(sema4d)、cd69、slamf6(ntb-a、lyl08)、slam(slamf1、cd150、ipo-3)、blame(slamf8)、selplg(cd162)、ltbr、lat、gads、slp-76、pag/cbp、cd19a和cd83配体。

41、在一些实施例中，共刺激信号传导结构域包含4-1bb和/或cd28的胞内信号传导结构域。

42、在一些实施例中，工程化受体包含信号肽。在一些实施例中，信号肽与seq id no:146至少80％、85％、90％、95％或100％相同。

43、在一些实施例中，工程化受体是嵌合t细胞受体(“ctcr”)。

44、在一些实施例中，跨膜结构域衍生自选自由以下组成的组的tcr亚基的跨膜结构域：tcrα、tcrβ、tcrγ、tcrδ、cd3γ、cd3ε和cd3δ。

45、在一些实施例中，跨膜结构域衍生自cd3ε的跨膜结构域。

46、在一些实施例中，胞内信号传导结构域衍生自选自由以下组成的组的tcr亚基的胞内信号传导结构域：tcrα、tcrβ、tcrγ、tcrδ、cd3γ、cd3ε和cd3δ。

47、在一些实施例中，胞内信号传导结构域衍生自cd3ε的胞内信号传导结构域。

48、在一些实施例中，本文所述的工程化受体进一步包含tcr亚基的胞外结构域的至少一部分。

49、在一些实施例中，抗原结合片段与cd3ε的n末端融合(“etcr”)。

50、在一方面，本公开涉及双受体系统，其包含：(a)第一工程化受体，该第一工程化受体包含可以是本文所述的任一种抗原结合片段的第一抗原结合片段(例如，与cll1结合的抗原结合片段)；和(b)第二工程化受体，该第二工程化受体包含与cd33结合的第二抗原结合片段。

51、在一些实施例中，第一工程化受体和第二工程化受体中的每一个进一步包含跨膜区和胞内信号传导结构域。

52、在一些实施例中，第一工程化受体和第二工程化受体都是嵌合抗原受体(“car”)。

53、在一些实施例中，第一工程化受体和第二工程化受体中的每一个进一步包含铰链区。

54、在一些实施例中，跨膜区包含cd4、cd8和/或cd28的跨膜区或其一部分。

55、在一些实施例中，胞内信号传导结构域包含免疫效应细胞的初级胞内信号传导序列。

56、在一些实施例中，胞内信号传导结构域是或包含cd3ζ的功能性信号传导结构域。

57、在一些实施例中，胞内信号传导结构域进一步包含共刺激信号传导结构域。

58、在一些实施例中，共刺激信号传导结构域包含来自选自由以下组成的组的蛋白质的功能性信号传导结构域：mhc i类分子、tnf受体蛋白、免疫球蛋白样蛋白、细胞因子受体、整合素、信号传导淋巴细胞激活分子(slam蛋白)、激活nk细胞受体、btla、toll配体受体、ox40、cd2、cd7、cd27、cd28、cd30、cd40、cds、icam-1、lfa-1、cd11a/cd18、4-1bb(cd137)、b7-h3、cds、icam-1、icos(cd278)、gitr、baffr、light、hvem(lightr)、kirds2、slamf7、nkp80(klrf1)、nkp44、nkp30、nkp46、cd19、cd4、cd8α、cd8β、il2rβ、il2rγ、il7rα、itga4、vla1、cd49a、itga4、ia4、cd49d、itga6、vla-6、cd49f、itgad、cd11d、itgae、cd103、itgal、cd11a、lfa-1、itgam、cd11b、itgax、cd11c、itgb1、cd29、itgb2、cd18、lfa-1、itgb7、nkg2d、nkg2c、tnfr2、trance/rankl、dnam1(cd226)、slamf4(cd244、2b4)、cd84、cd96(tactile)、ceacam1、crtam、ly9(cd229)、cd160(by55)、psgl1、cd100(sema4d)、cd69、slamf6(ntb-a、lyl08)、slam(slamf1、cd150、ipo-3)、blame(slamf8)、selplg(cd162)、ltbr、lat、gads、slp-76、pag/cbp、cd19a和cd83配体。

59、在一些实施例中，共刺激信号传导结构域包含4-1bb和/或cd28的胞内信号传导结构域。

60、在一些实施例中，第一工程化受体和第二工程化受体中的每一个包含信号肽。

61、在一些实施例中，信号肽与seq id no:146至少80％、85％、90％、95％或100％相同。

62、在一些实施例中，第一工程化受体包含在seq id no:7、17、27、37、47、57、67、77、87、97、107、117和127中任一个中列出的氨基酸序列，或与7、17、27、37、47、57、67、77、87、97、107、117和127至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。

63、在一些实施例中，第二工程化受体包含seq id no:159、163、167或171中列出的氨基酸序列或与seq id no:159、163、167或171至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。

64、在一些实施例中，第一工程化受体包含seq id no:27或97中列出的氨基酸序列或与seq id no:27或97至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。

65、在一些实施例中，第二工程化受体包含seq id no:163中列出的氨基酸序列，且第一工程化受体包含seq id no:97中列出的氨基酸序列。

66、在一些实施例中，第二工程化受体包含seq id no:163中列出的氨基酸序列，且第一工程化受体包含seq id no:27中列出的氨基酸序列。

67、在一些实施例中，第二工程化受体包含seq id no:171中列出的氨基酸序列，且第一工程化受体包含seq id no:97中列出的氨基酸序列。

68、在一些实施例中，第二工程化受体包含seq id no:171中列出的氨基酸序列，且第一工程化受体包含seq id no:27中列出的氨基酸序列。

69、在一些实施例中，第一工程化受体和第二工程化受体都是嵌合t细胞受体(“ctcr”)。

70、在一方面，本公开涉及编码本文所述的任一种工程化受体或双受体系统的工程化受体的多核苷酸。

71、在一些实施例中，本文所述的多核苷酸编码包含seq id no:132-145中任一个的氨基酸序列，或与seq id no:132-145至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列的多肽。

72、在一方面，本公开涉及包含本文所述的多核苷酸的载体。

73、在一些实施例中，载体是病毒载体。

74、在一方面，本公开涉及表达本文所述的任一种工程化受体或双受体系统的工程化细胞。

75、在一些实施例中，本文所述的工程化细胞包含编码seq id no:132-145中任一个的氨基酸序列，或与seq id no:132-145至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列的多核苷酸。

76、在一些实施例中，工程化细胞是免疫细胞。

77、在一些实施例中，免疫细胞是nk细胞或t细胞。

78、在一些实施例中，工程化细胞是t细胞。

79、在一些实施例中，t细胞选自由以下组成的组：细胞毒性t细胞、辅助t细胞、自然杀伤t(nk-t)细胞、αβt细胞和γδt细胞。

80、在一方面，本公开涉及生产工程化细胞的方法，其包括在体外或离体将本文所述的载体引入细胞中。

81、在一些实施例中，载体是病毒载体，并且引入通过转导进行。

82、在一方面，本公开涉及治疗受试者中癌症的方法，该方法包括向该受试者施用有效量的本文所述的抗体或其抗原结合片段、本文所述的抗体-药物缀合物、本文所述的药物组合物或本文所述的工程化细胞。

83、在一些实施例中，癌症是急性髓系白血病(aml)、慢性粒细胞白血病(cml)或骨髓增生异常综合征(mds)。

84、如本文所用，术语“抗体”是指含有至少一个(例如，一个、两个、三个、四个、五个或六个)互补决定区(cdr)(例如，来自免疫球蛋白轻链的三个cdr中的任一个或来自免疫球蛋白重链的三个cdr中的任一个)并且能够特异性结合抗原中的表位的任何抗原结合分子。抗体的非限制性实例包括：单克隆抗体、多克隆抗体、多特异性抗体(例如，双特异性抗体)、单链抗体、单可变结构域(vhh)抗体、嵌合抗体、人抗体和人源化抗体。在一些实施例中，抗体可以含有人抗体的fc区。术语抗体还包括衍生物，例如，多特异性抗体、双特异性抗体、单链抗体、双抗体和由这些抗体或抗体片段形成的线性抗体。

85、如本文所用，术语“抗原结合片段”是指全长抗体的一部分，其中抗体的该部分能够特异性结合抗原。在一些实施例中，抗原结合片段含有至少一个可变结构域(例如，重链的可变结构域、轻链的可变结构域或vhh)。抗体片段的非限制性实例包括，例如，fab、fab'、f(ab’)2和fv片段、scfv和vhh。

86、如本文所用，术语“受试者”和“患者”在整个说明书中可互换使用，并描述根据本公开的方法向其提供治疗的动物，人类或非人类。在本公开中设想了兽医和非兽医应用。人类患者可以是成年人或青少年(例如，18岁以下的人类)。除人类外，患者包括但不限于小鼠、大鼠、仓鼠、豚鼠、兔子、雪貂、猫、狗和灵长类动物。例如，包括非人类灵长类动物(例如，猴子、黑猩猩、大猩猩等)、啮齿动物(例如，大鼠、小鼠、沙鼠、仓鼠、雪貂、兔子)、兔形目动物、猪(例如，猪、小型猪)、马、犬、猫、牛和其他家养动物、农场动物和动物园动物。

87、如本文所用，当提及抗体或抗原结合片段时，短语“特异性结合(specificallybinding和specifically binds)”意味着抗体或抗原结合片段与其他分子相比优选地与其靶分子相互作用，因为这种相互作用取决于靶分子上特定结构(即抗原决定簇或表位)的存在；换句话说，试剂识别并结合包含特定结构的分子，而不是一般的所有分子。特异性结合靶分子的抗体可称为靶点特异性抗体。例如，特异性结合cll1的抗体可称为cll1抗体、cll1特异性抗体或抗cll1抗体。

88、如本文所用，术语“双特异性抗体”是指结合两个不同表位的抗体。表位可以位于同一抗原上或位于不同抗原上。

89、如本文所用，术语“三特异性抗体”是指结合三个不同表位的抗体。表位可以位于同一抗原上或位于不同抗原上。

90、如本文所用，术语“多特异性抗体”是指结合两个或更多个不同表位的抗体。表位可以位于同一抗原上或位于不同抗原上。多特异性抗体可以是例如双特异性抗体或三特异性抗体。在一些实施例中，多特异性抗体结合两个、三个、四个、五个或六个不同表位。

91、如本文所用，“vhh”是指仅重链抗体的可变结构域。在一些实施例中，vhh是人源化vhh。

92、如本文所用，“嵌合抗原受体”或“car”是指融合蛋白，其包含能够结合抗原的胞外结构域和包含一个或多个衍生自信号转导蛋白的胞内信号传导结构域的胞内区。这些胞内信号传导结构域通常与衍生胞外结构域的多肽不同。胞外结构域可以是可以特异性结合预定抗原的任何蛋白质分子或其部分。在一些实施例中，胞外结构域包含抗体或其抗原结合片段。在一些实施例中，胞内信号传导结构域可以是已知的任何寡肽或多肽结构域，其功能是传递引起细胞中生物过程的激活或抑制的信号，例如免疫细胞如t细胞或nk细胞的激活。

93、如本文所用，“串联car”是指包含两个或更多个能够结合抗原的胞外结构域的car。在一些实施例中，串联car可以具有2、3、4、5、6、7、8、9或10个能够结合抗原的胞外结构域。这些抗原结合结构域可以相同或不同。在一些实施例中，这些抗原结合结构域可以结合相同或不同抗原。在一些实施例中，这些抗原结合结构域可以结合同一抗原上的不同表位。

94、如本文所用，“双受体系统”或“双car系统”是指包含两个或多个工程化受体(例如car)的系统，每个靶向不同的分子或不同的表位。每个工程化受体(例如，car)还可以包括跨膜区；和/或胞内信号传导结构域。在一些实施例中，本文所述的双car系统包括两个工程化受体。在一些实施例中，本文所述的双car系统包括靶向cll1的第一car和靶向cd33的第二car。在一些实施例中，工程化受体在单个载体中表达。在一些实施例中，工程化受体通过自切割肽(例如，p2a蛋白)连接。在一些实施例中，两个工程化受体在不同载体中表达。除非另有定义，否则本文中使用的所有技术和科学术语具有与本公开所属领域的普通技术人员通常理解的含义相同的含义。本文描述的方法和材料用于本公开；也可以使用本领域已知的其他合适的方法和材料。材料、方法和示例仅供说明之用，无意限制。文中提及的所有出版物、专利申请、专利、序列、数据库条目和其他参考文献均通过引用以其全文并入本文。如有冲突，将以包括定义的本说明书为准。

95、从下面的详细描述和附图以及权利要求中可以明显看出本公开的其他特征和优点。