本发明涉及卫生防疫,特别涉及一种新型冠状病毒的快速检测及变异毒株快速识别方法及一种新型冠状病毒变异毒株快速识别芯片。
背景技术:
1、目前市面上大多数新冠病毒核酸检测能够在1~3小时内完成检测,确定阴阳性,甚至感染病毒的浓度情况。但是,新冠病毒是一种变异性极强的病毒,比如一些突变体如alpha、belta、delta、omicron等毒株,特别是奥密克戎,其传染力得到大大增强,需要卫生部门更加引起高度重视。同时也对检测技术提出新的要求,即不但能诊断出是否感染新冠,还能确定是哪一种变异株。现有的确定哪一种变异株的方法为基因测序比对,测试过程复杂,耗时较久。
技术实现思路
1、针对上述缺陷,本发明提供一种新型冠状病毒的快速检测及变异毒株快速识别方法,可以快速识别确定是哪一种变异株。
2、一种新型冠状病毒的快速检测及变异毒株快速识别方法,包括以下步骤:
3、s1,取pcr扩增冻干微球;
4、s2,新型冠状病毒检测,该步骤包括;
5、s20,提取核酸样本;
6、s21,向pcr扩增冻干微球中依次加入s20提取后的核酸样本复溶pcr扩增冻干微球,密封,充分震荡使pcr扩增冻干微球溶解后,瞬时离心;
7、s22,放入实时荧光定量pcr仪进行扩增;
8、s23,检测得检测结果,当检测结果为阳性,进行s3;
9、s3,新型冠状病毒变异毒株识别,该步骤包括:
10、s31,将新型冠状病毒检测结果为阳性的样本的扩增产物与杂交液混合后,加入新型冠状病毒变异毒株快速识别芯片中,离心后混合液流入反应池中,加热恒温反应直至反应后液体完全流入反应池外的识别必用池;
11、s32,用扫描仪扫描反应池,具有成团的荧光信号即为相应的突变类型,没有成团的荧光信号表明不具有相应的突变类型。
12、作为优选,所述pcr扩增冻干微球由下述方法制备后经保存或运输而来:
13、s11,配制:将引物、探针、酶及辅料按新型冠状病毒要求的比例混和形成pcr扩增试剂;
14、s12,点制,将s11形成的pcr扩增试剂用移液器或自动滴珠机点制到预冷过的冻干工装板,形成pcr扩增试剂微球;
15、s13,冻干,将s12点制后的板放入真空冷冻干燥箱进行脱水处理后形成冻干微球;
16、s14,填装,将pcr扩增冻干微球从冻干工装板取下装入管中,1管1个pcr扩增冻干微球,将管装入孔板的孔中,封口后真空密封,形成的pcr扩增冻干微球试剂盒;
17、s15,包装。
18、作为优选,所述真空冷冻干燥箱脱水处理包括以下两步骤:
19、s131,升华干燥;
20、s132,解析干燥。
21、作为优选,所述冻干工装板为已提前-65℃预冷过的工装板。
22、作为优选,所述新型冠状病毒变异毒株快速识别芯片包括芯片基体,芯片基体上设置有至少1个变异毒株快速识别单元,每一变异毒株快速识别单元包括样品池、第一反应池、第二反应池、第三反应池、第四反应池和第五反应池,该变异毒株快速识别单元还包括连接通道和分离通道,连接通道一端与样品池连通,另一端与分离通道连通,第一反应池、第二反应池、第三反应池、第四反应池和第五反应池各自与分离通道连通,第一反应池、第二反应池、第三反应池、第四反应池和第五反应池用于预装用于新型冠状病毒变异毒株识别的点样液。
23、作为优选,所述变异毒株快速识别单元还设置有识别必用池、第一虹吸通道、第二虹吸通道、第三虹吸通道、第四虹吸通道和第五虹吸通道,第一反应池通过第一虹吸通道与识别必用池连通,第二反应池通过第二虹吸通道与识别必用池连通,第三反应池通过第三虹吸通道与识别必用池连通,第四反应池通过第四虹吸通道与识别必用池连通,第五反应池通过第五虹吸通道与识别必用池连通。
24、作为优选,所述变异毒株快速识别单元还设置有收集池,收集池与分离通道连通。
25、作为优选,所述新型冠状病毒变异毒株快速识别芯片还包括芯片盖,该芯片盖盖在芯片基体上。
26、作为优选,所述芯片盖上还设置有第一排气孔和第二排气孔,变异毒株快速识别单元还设置第一排气通道和第二排气通道,第一排气通道一端与收集池连通,另一端与第一排气孔连通,第二排气通道一端与识别必用池连通,另一端与第二排气孔连通。
27、作为优选,所述芯片盖上设置有加样口,该加样口与样品池连通。
1.一种新型冠状病毒的快速检测及变异毒株快速识别方法,包括以下步骤:
2.根据权利要求1所述的新型冠状病毒的快速检测及变异毒株快速识别方法,其特征在于,所述pcr扩增冻干微球由下述方法制备后经保存或运输而来:
3.根据权利要求2所述的快速检测及变异毒株快速识别方法,其特征在于,所述真空冷冻干燥箱脱水处理包括以下两步骤:
4.根据权利要求1所述的新型冠状病毒的快速检测及变异毒株快速识别方法,其特征在于,所述冻干工装板为已提前-65℃预冷过的工装板。
5.根据权利要求1所述的新型冠状病毒的快速检测及变异毒株快速识别方法,其特征在于,所述新型冠状病毒变异毒株快速识别芯片包括芯片基体,芯片基体上设置有至少1个变异毒株快速识别单元,每一变异毒株快速识别单元包括样品池、第一反应池、第二反应池、第三反应池、第四反应池和第五反应池,该变异毒株快速识别单元还包括连接通道和分离通道,连接通道一端与样品池连通,另一端与分离通道连通,第一反应池、第二反应池、第三反应池、第四反应池和第五反应池各自与分离通道连通,第一反应池、第二反应池、第三反应池、第四反应池和第五反应池用于预装用于新型冠状病毒变异毒株识别的点样液。
6.根据权利要求5所述的新型冠状病毒的快速检测及变异毒株快速识别方法,其特征在于,所述变异毒株快速识别单元还设置有识别必用池、第一虹吸通道、第二虹吸通道、第三虹吸通道、第四虹吸通道和第五虹吸通道,第一反应池通过第一虹吸通道与识别必用池连通,第二反应池通过第二虹吸通道与识别必用池连通,第三反应池通过第三虹吸通道与识别必用池连通,第四反应池通过第四虹吸通道与识别必用池连通,第五反应池通过第五虹吸通道与识别必用池连通。
7.根据权利要求5所述的新型冠状病毒的快速检测及变异毒株快速识别方法,其特征在于,所述变异毒株快速识别单元还设置有收集池,收集池与分离通道连通。
8.根据权利要求5所述的新型冠状病毒的快速检测及变异毒株快速识别方法,其特征在于,所述新型冠状病毒变异毒株快速识别芯片还包括芯片盖,该芯片盖盖在芯片基体上。
9.根据权利要求8所述的新型冠状病毒的快速检测及变异毒株快速识别方法,其特征在于,所述芯片盖上还设置有第一排气孔和第二排气孔,变异毒株快速识别单元还设置第一排气通道和第二排气通道,第一排气通道一端与收集池连通,另一端与第一排气孔连通,第二排气通道一端与识别必用池连通,另一端与第二排气孔连通。
10.根据权利要求8所述的新型冠状病毒的快速检测及变异毒株快速识别方法,其特征在于,所述芯片盖上设置有加样口,该加样口与样品池连通。