山绿茶总多糖及其制备方法与应用

本发明涉及天然产物提取及应用领域，具体涉及山绿茶总多糖及其制备方法与应用。

背景技术：

1、山绿茶为冬青科植物海南冬青（ ilex hainanensismerr.）的干燥叶经加工炮制而成，为民间中草药，具有清热解毒、消肿止痛、活血通脉的功效，主要用于降血压、降血脂、降血糖及保护肝脏等。在临床上山绿茶及其制剂已经得到的广泛应用，由山绿茶制成的单方制剂山绿茶降压片收录于《中国药典》一部（2020版）。目前山绿茶化学成分、药理作用的研究较为系统。然而，除已经报道的黄酮类、三萜皂苷类、挥发油类、有机酸类成分外，山绿茶中还具有丰富的多糖类成分，但目前尚无关于山绿茶总多糖的报道。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供山绿茶总多糖及其制备方法与应用，以推动山绿茶总多糖在制药和功能食品上的应用，从而为山绿茶总多糖的应用提供新的方向，为一些疾病的治疗提供新的思路。

2、本发明从山绿茶中提取山绿茶总多糖，该山绿茶总多糖兼具保肝、降血脂、降血糖、调节肠道菌群、减肥的作用，其制备方法包括以下步骤：

3、（1）山绿茶药材，加入95%乙醇浸泡过夜；

4、（2）将浸泡后的山绿茶药材用蒸馏水煎煮1-3 h，过滤，滤液浓缩，离心，弃去沉淀；

5、（3）在步骤（2）获得的上清液中加入95%乙醇至含醇量为80%，密封静置12-36 h，离心，收集沉淀，冷冻干燥，得山绿茶粗多糖；

6、（4）采用sevag法除去山绿茶粗多糖中的游离蛋白，之后将水相冷冻干燥得山绿茶总多糖。

7、本发明通过对山绿茶总多糖进行药理学实验，利用肥胖小鼠模型考察了山绿茶总多糖抑制肥胖小鼠体重增加的实验，评价山绿茶总多糖的减肥作用。肥胖小鼠实验表明，山绿茶总多糖对正常小鼠无明显毒性反应，且对小鼠摄食量无影响，除低剂量组外，中、高剂量组小鼠体重均显著降低。与模型组相比，山绿茶总多糖各剂量组在肝重、性腺脂肪及肾周脂肪重量上，均有显著性改善，且呈一定剂量依赖性。这些实验结果证明：本发明提供的山绿茶总多糖具有显著的减肥作用，可用于制备具有减肥功能的药物和/或食品。即：山绿茶总多糖可以在制备具有减肥功能的药物和/或食品中应用。

8、进一步，山绿茶总多糖在制备治疗或预防由高脂饮食导致的肥胖的药物和/或食品中应用。

9、本发明还利用肥胖小鼠模型考察了山绿茶总多糖降低血清中tc、tg及ldl-c的实验，评价山绿茶总多糖的降血脂作用。肥胖小鼠实验表明，山绿茶总多糖以剂量依赖性的方式显著改善了血清ldl-c水平，同时降低了血清tc和tg水平。这些实验结果证明：本发明提供的山绿茶总多糖具有显著的降血脂作用，可以在制备降血脂的药物和/或食品中应用。

10、进一步，降血脂的药物和/或食品是指降低低密度脂蛋白胆固醇的药物或食品，或同时降低低密度脂蛋白胆固醇、总胆固醇和甘油三酯的药物或食品。

11、进一步，山绿茶总多糖在制备治疗或预防由高脂饮食导致的高脂血症的药物和/或食品中的应用。

12、本发明还利用肥胖小鼠模型考察了山绿茶总多糖对肝脏重量、血清ast和alt水平、肝脏组织形态及肝脏内炎症因子的影响，评价山绿茶总多糖抗肝损伤和保肝的作用。肥胖小鼠实验表明，山绿茶总多糖能够显著降低肝脏重量，改善肝细胞脂肪变性，同时还能显著降低血清ast、alt水平，降低肝脏中il-1β、il-6和tnf-α炎症因子水平。这些实验结果证明：本发明提供的山绿茶总多糖具有显著的保肝的作用，可以在制备保肝的药物和/或食品中应用。

13、进一步，山绿茶总多糖在制备治疗或预防由高脂饮食导致的肝损伤的药物和/或食品中的应用。

14、进一步，肝损伤是由病毒、药物、脂肪变性、肿瘤导致的肝损伤，包括脂肪肝、肝炎。

15、进一步，抗肝损伤、保肝的药物和/或食品是指降低血清ast和alt的药物或食品，或降低肝脏中il-1β、il-6和tnf-α炎症因子的药物或食品，或改善肝脏组织形态的药物或食品。

16、本发明还利用肥胖小鼠模型考察了山绿茶总多糖对糖耐量和胰岛素水平的影响，评价山绿茶总多糖改善胰岛素抵抗及糖脂代谢紊乱的作用。肥胖小鼠糖耐量实验表明，山绿茶低、中、高剂量给药组的空腹血糖及血糖峰值显著下降，提示山绿茶总多糖可以一定程度改善小鼠血糖不耐受的状态；另外，血清胰岛素水平的测定结果显示，山绿茶总多糖各剂量给药均可显著降低小胰岛素抵抗指数（homa-ir），改善血清胰岛素水平升高的状态。这些实验结果证明：本发明提供的山绿茶总多糖具有显著的改善胰岛素抵抗及糖脂代谢紊乱的作用，可以在制备治疗或改善胰岛素抵抗及糖脂代谢紊乱的药物和/或食品中应用。

17、进一步，胰岛素抵抗及糖脂代谢紊乱是指由高脂饮食引起的胰岛素抵抗、糖脂代谢紊乱。

18、本发明还利用肥胖小鼠模型考察了山绿茶总多糖对肠道内菌群的影响，评价山绿茶总多糖调节肠道菌群的作用。肥胖小鼠实验表明，山绿茶总多糖可显著提高肠道菌群alpha多样性指数，同时提高有益菌 alistipes、 flavonifractor、 clostridium_iv的丰度，降低有害菌 desulfovibrio、 mucispirillum的丰度。这些实验结果证明：本发明提供的山绿茶总多糖具有调节肠道菌群结构和丰度的作用，可以在制备治疗或调节肠道菌群紊乱的药物和/或食品中应用。

19、进一步，肠道菌群紊乱是指由高脂饮食导致的肠道菌群紊乱。

20、进一步，治疗或调节肠道菌群紊乱的药物和/或食品是指调节肠道菌群结构，增加有益菌 alistipes、 flavonifractor、 clostridium_iv丰度，降低有害菌 desulfovibrio、 mucispirillum丰度的药物或食品。

21、本发明山绿茶总多糖作为活性成分在药物或食品中添加时，山绿茶总多糖的剂量为240 mg/（kg·d）至960 mg/（kg·d），优选为960 mg/（kg·d），可以按药剂学方法，将本发明的山绿茶总多糖与辅料混合制备成多个临床药物剂型，通常采用口服制剂即可，所述口服制剂选自于散剂、口服液、颗粒剂、片剂、胶囊剂或丸剂中的任意一种。

22、本发明所述食品指各种供人食用或者饮用的成品和原料，以及按照传统既是食品又是药品的物品，但不包括以治疗为目的的物品。具体的，本发明中的食品为可供人类食用或者饮用的物质，包括加工食品，半成品和未加工食品，包括保健食品，不包括烟草或只作药品用的物质。本发明中所述食品包括但不限于保健食品，凡是本领域技术人员能够接受的食品形式，均在本发明的保护范围之内，可以为固体制品、乳制品、溶液制品、粉末制品或悬浮液制品中的一种或多种，本发明在此不做限定。

23、本发明还提供一种兼具保肝、降血脂、降血糖、调节肠道菌群、减肥作用的活性多糖，所述活性多糖包括山绿茶总多糖。

24、进一步，所述活性多糖的制备方法包括以下步骤：

25、（1）山绿茶药材，加入95%乙醇浸泡过夜；

26、（2）将浸泡后的山绿茶药材用蒸馏水煎煮1-3 h，过滤，滤液浓缩，离心，弃去沉淀；

27、（3）在步骤（2）获得的上清液中加入95%乙醇至含醇量为80%，密封静置12-24 h，离心，收集沉淀，冷冻干燥，得山绿茶粗多糖；

28、（4）采用sevag法除去山绿茶粗多糖中的游离蛋白，之后将水相冷冻干燥得山绿茶总多糖。

29、本发明的优点和有益效果：

30、（1）本发明提供的山绿茶总多糖在正常高脂饮食期间，仍能减轻体重，其具有显著的减肥作用，可用于制备具有减肥功能的药物和/或食品，有效预防由高脂饮食所导致的肥胖。

31、（2）本发明提供的山绿茶总多糖还具有显著的降血脂作用，可以在制备降血脂的药物和/或食品中应用，有效预防由高脂饮食所导致的高血脂症。

32、（3）本发明提供的山绿茶总多糖还具有显著的抗肝损伤和保肝的作用，可以在制备抗肝损伤、保肝的药物和/或食品中应用，有效预防由高脂饮食所导致的肝损伤（脂肪肝或肝炎）。

33、（4）本发明提供的山绿茶总多糖还具有改善胰岛素抵抗及糖脂代谢紊乱的作用，可以在制备治疗或改善胰岛素抵抗及糖脂代谢紊乱的药物和/或食品中应用，有效预防由高脂饮食所导致的糖耐量能力减低，胰岛素抵抗指数升高等血糖异常的症状。

34、（5）本发明提供的山绿茶总多糖还具有调节肠道菌群结构和丰度的作用，可以在制备治疗或调节肠道菌群紊乱的药物和/或食品中应用，有效预防由高脂饮食所导致的肠道菌群紊乱的症状。

35、（6）本发明提供的山绿茶总多糖兼具保护肝脏、降血脂、降血糖、调节肠道菌群、减肥的作用。高脂饮食期间同服山绿茶总多糖，既能降低血清ast、alt水平，改善肝细胞脂肪变性，降低肝脏中炎症因子il-1β、il-6和tnf-α水平，保护肝脏不受损；还能够显著改善血清ldl-c、tc、tg水平以及胰岛素水平，避免引起高血脂和高血糖症，降低心脑血管疾病的发生；同时还能在摄食量不变的情况下减缓体重增长，减轻体重，调节肠道菌群，可以全方面调节高脂饮食群体的身体健康，延长寿命。