用于神经内分泌前列腺癌诊断的分子标志物和试剂盒

本发明属于肿瘤诊断及医药生物，具体涉及用于诊断神经内分泌前列腺癌的分子标志物、试剂盒。

背景技术：

1、神经内分泌前列腺癌(neuroendocr i ne prostate cancer，nepc)是前列腺癌(prostate cancer，pca)的亚型之一，常常发生在长期接受雄激素剥夺治疗(androgendepr ivat ion treatment，adt)后。该类型pca通过雄激素受体(androgen receptor,ar)非依赖机制使其对现有的ar信号通路抑制剂(androgen receptor pathway i nh ibitor，arpi)如阿比特龙、恩扎卢胺、阿帕他胺和达罗他胺等产生抵抗并介导肿瘤持续生长。nepc在病理上类似于前列腺小细胞癌(sma l l ce l l prostate cancer，scpc)，以低表达或不表达ar且高表达chga、syp和nse等神经内分泌标志物为特征。nepc具有极强的侵袭性，相较于其他类型pca更容易发生转移，因此患者预后极差，5年存活率低于20％。

2、针对nepc的诊断，目前eau和aua等国际协会发布的权威指南仅建议根据病理学家的专业知识进行诊断，然而这些专业知识可能有很大的差异，而且无法定量，缺乏一定的准确性和特异性。目前缺乏有效的分子生物标志物来预测nepc的发生。虽然能够通过在活检组织或血清样本中检测包括syp、eno2、chga和cd56在内的神经元标记物来监测nepc，但这些标记物均缺乏特异性，生物标志物如chga、nse、syp和cd56等，其灵敏度仅有41.5％到84.0％，远远无法满足临床准确预测nepc发生的需求。因此，临床迫切需求新的、非侵入性的分子标志物来诊断nepc的发生。

3、l ncrna是一种长度超过200bp的非编码rna，可折叠成3d结构，执行多种细胞功能，包括调节基因表达和翻译，参与前列腺癌的发生和发展。有研究通过对ltl331/ltl331r的l ncrna图谱模型分析发现了821种l ncrna可在nepc中特异性表达，证明了l ncrnas与nepc进展的相关性。l ncrna p21被发现在nepc中高表达，使用恩扎卢胺可增加p21的表达并诱导前列腺癌细胞的神经内分泌转化。lncrna-pcat6能够促进前列腺癌的转移，具有促进前列腺细胞向神经内分泌转化的功能。更有研究通过pdx模型发现了l i nc00261在nepc中高表达，并通过多个队列分析进行验证，发现l i nc00261可能在nepc中特异性上调，因此是nepc的潜在分子标志物。此外，有学者通过对具有神经内分泌特征的前列腺癌患者样本进行分析，发现nepc中的hotai r和malat1表达显著升高，其中hotai r能够调节ar的降解能力并与前列腺癌的神经内分泌转化相关。malat1的表达水平则被建议用于对恩扎卢胺治疗后的晚期前列腺癌患者进行分层。因此，l ncrnas可与目前已知的转录因子或mi rnas相互作用，密切调控nepc的发展，对于预测和诊断nepc具有极大的潜力。

技术实现思路

1、本发明基于临床nepc诊断的痛点，收集前列腺按摩后患者的尿液，通过分离尿液中外泌体并检测其中l ncrna表达变化，筛选得到了7种标志物gas5、hotai r、malat1、linc00161、pca3和pcat6。上述标志物能够精准预测nepc的发生，让nepc患者能够及时得到恰当的治疗，大大提高npec患者的预后。

2、本申请提供了诊断神经内分泌前列腺癌的分子标志物，所述标志物为外泌体lncrna分子标志物，所述外泌体l ncrna分子标志物包括：gas5、hotai r、malat1、l inc00161、lncrna、pca3、pcat6之一或组合。

3、优选的，外泌体l ncrna分子标志物是gas5、hotai r、malat1、l i nc00161、pca3和pcat6的组合。更优选的，所述外泌体来自于受试者前列腺按摩后的尿液。

4、本申请进一步提供了外泌体l ncrna分子标志物在制备诊断神经内分泌前列腺癌的试剂盒中的用途，所述外泌体l ncrna分子标志物包括：gas5、hotai r、malat1、l inc00161、pca3、pcat6之一或组合。优选的，外泌体l ncrna分子标志物是gas5、hotai r、malat1、l i nc00161、pca3和pcat6的组合。更优选的，所述外泌体来自于受试者前列腺按摩后的尿液。

5、另一方面，本申请提供了一种诊断神经内分泌前列腺癌的试剂盒，所述试剂盒包括检测外泌体l ncrna分子标志物的试剂，所述外泌体l ncrna分子标志物包括：gas5、hotai r、malat1、l i nc00161、pca3、pcat6之一或组合。优选的，外泌体l ncrna分子标志物是gas5、hotai r、malat1、l i nc00161、pca3和pcat6的组合。更优选的，所述外泌体来自于受试者前列腺按摩后的尿液。所述检测外泌体l ncrna分子标志物的试剂包括如表4所示引物。

6、与现有技术相比，本申请的有益技术效果如下。

7、液体活检作为一种微创检查方法，具有高特异性和敏感性的特点，可以很好地解决活组织检查中存在的问题。直肠指检后的尿液虽然是目前应用最多的检测前列腺癌分子标志物的来源，但无论是尿液还是血液，均不是前列腺癌细胞直接分泌的液体，检测其中的l ncrna等分子标志物无法准确、敏感地反映出前列腺癌的分子分型。本发明针对性获取患者前列腺按摩后的尿液，实现了无创采样，更容易被受试者接受。采集受试者前列腺按摩后的尿液，在检测尿液外泌体的同时还能够检测前列腺液中的外泌体，能够更准确、更直接的反映出前列腺癌的进展情况。本申请筛选出7种l ncrna标志物，每种均能够作为独立的标志物用于nepc的诊断，进一步的，发明人发现联合检测7种标志物具有更高的特异性。

技术特征：

1.诊断神经内分泌前列腺癌的分子标志物，其特征在于，所述标志物为外泌体lncrna分子标志物，所述外泌体lncrna分子标志物包括：gas5、hotair、malat1、linc00161、pca3、pcat6之一或任意组合。

2.根据权利要求1所述的分子标志物，其特征在于，外泌体lncrna分子标志物是malat1、gas5、hotair、pcat6、pca3、和linc00161的组合。

3.根据权利要求1或2所述的分子标志物，其特征在于，所述外泌体来自于受试者前列腺按摩后的尿液。

4.外泌体lncrna分子标志物在制备诊断神经内分泌前列腺癌的试剂盒中的用途，其特征在于，所述外泌体lncrna分子标志物包括：gas5、hotair、malat1、linc00161、pca3、pcat6之一或任意组合。

5.根据权利要求4所述的用途，其特征在于，外泌体lncrna分子标志物是malat1、gas5、hotair、pcat6、pca3、和linc00161的组合。

6.根据权利要求4或5所述的用途，其特征在于，所述外泌体来自于受试者前列腺按摩后的尿液。

7.一种诊断神经内分泌前列腺癌的的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括检测外泌体lncrna分子标志物的试剂，所述外泌体lncrna分子标志物包括：gas5、hotair、malat1、linc00161、pca3、pcat6之一或任意组合。

8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，外泌体lncrna分子标志物是malat1、gas5、hotair、pcat6、pca3、和linc00161的组合。

9.根据权利要求7或8所述的试剂盒，其特征在于，所述外泌体来自于受试者前列腺按摩后的尿液。

10.根据权利要求7或8所述的试剂盒，其特征在于，所述外泌体来自于受试者前列腺按摩后的尿液，所述检测外泌体lncrna分子标志物的试剂包括如表4所示引物。

技术总结
本发明针对性获取患者前列腺按摩后的尿液，分离出了尿液中外泌体，筛选出7个与NEPC发生发展密切相关的外泌体lncRNA分子标志物，GAS5、HOTAIR、MALAT1、Linc00161、LncRNA‑LBCS、PCA3和PCAT6。本发明实现了无创采样，在检测尿液外泌体的同时还能够检测前列腺液中的外泌体，能够更准确、更直接的反映出前列腺癌的进展情况。

技术研发人员：党强,罗马耀,陈卫红,梁司,陈婕
受保护的技术使用者：南方医科大学南方医院
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13