一种用于miRNA检测的dT引物、试剂盒及检测方法与流程

文档序号:34569272发布日期:2023-06-28 11:43阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种用于mirna检测的dt引物,其特征在于,在5’至3’方向上由4个片段组成,分别为:反转录起始序列、通用短链引物universal pcr primer r序列、28个oligo(dt)序列和识别mirna3’端的2个简并碱基序列。

2.根据权利要求1所述的dt引物,其特征在于,所述dt引物的核苷酸序列如seq id no:1所示。

3.根据权利要求1所述的dt引物,其特征在于,所述反转录特异性的长链dt引物长度为50-60个碱基;所述通用短链检测引物universal pcr primer r的长度为20个碱基,tm值为55-65℃之间。

4.一种用于mirna检测的试剂盒,其特征在于,包含权利要求1-3任一项所述的dt引物。

5.根据权利要求4所述的试剂盒,其特征在于,还包括mirna反转录反应混合液,cdna扩增反应混合液。

6.根据权利要求5所述的试剂盒,其特征在于,所述mirna反转录反应混合液包括2*mirnabuffer,e.coli poly(a)polymerase酶,reverse transcriptase酶,dntp mix。

7.根据权利要求5所述的试剂盒,其特征在于,所述cdna扩增反应混合液包括2*mirnaqpcr buffer,udg酶,taq酶,dntps,sybr green染料,通用短链引物universal pcrprimer r,特异性短链检测引物forward u6 primer f。

8.根据权利要求7所述的试剂盒,其特征在于,所述通用短链引物universal pcrprimer r的核苷酸序列如seq id no:2所示;所述特异性短链检测引物forward u6 primerf的长度为18-25个碱基,tm值为55-65℃之间,核苷酸序列如seq id no:3所示。

9.一种mirna的检测方法,其特征在于,采用权利要求4-8任一项所述的试剂盒对样品mirna进行荧光实时定量pcr检测,根据荧光信号判断样品mirna分子表现量。

10.根据权利要求9所述的检测方法,其特征在于,所述pcr扩增程序为:


技术总结
本发明公开了一种用于miRNA检测的dT引物、试剂盒及检测方法,所述dT引物在5’至3’方向上由4个片段组成,分别为:反转录起始序列、通用短链引物Universal PCR Primer R序列、28个oligo(dT)序列和识别miRNA的3’端2个简并碱基序列。本发明的优点是提升了通用反转录引物及反向引物的特异性,能有效控制cDNA片段的长度和纯度,从而提升检测灵敏度。

技术研发人员:朱锋,梁思敏
受保护的技术使用者:广州科方生物技术股份有限公司
技术研发日:
技术公布日:2024/1/13
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