本发明涉及卵巢癌化疗，具体为一种用于保持免疫细胞多样性的培养方法。
背景技术：
1、化疗是利用化学物质杀死肿瘤细胞，抑制肿瘤细胞生长繁殖，促进肿瘤细胞分化的治疗方法。化疗是一种全身治疗方法，在化疗过程中，化学物质不但会杀死肿瘤细胞，还会把正常细胞和免疫细胞一起杀死，进而会导致人体免疫力下降。
2、在疾病诊断、治疗、生物系统控制等领域应用纳米技术开发的药物称为纳米药物。纳米药物颗粒是一种通过直接操纵原子、分子，使其重新排列、组合，形成具有磷脂双分子层结构的载体。纳米药物颗粒直径在1～1000nm之间。纳米药物通透生物膜能力强，可以大幅度提高药物的利用效率；同时还能够通过对纳米药物进行表面修饰，促进药物对病变组织、器官的选择性富集，进而提高药物的靶向性，降低不良反应发生率。
3、当前应用于临床的卵巢癌化疗药物缺乏特异性和靶向性，在杀灭肿瘤细胞的同时，也不可避免的损害到机体的免疫细胞，因此需要一种靶向药物可以对卵巢癌患者的肿瘤细胞进行定向化疗，从而使得免疫细胞可以保持多样性。
技术实现思路
1、本发明的目的在于提供一种用于保持免疫细胞多样性的培养方法，以解决上述背景技术中提出的现有卵巢癌化疗药物缺乏特异性和靶向性的问题。
2、为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种用于保持免疫细胞多样性的培养方法，该用于保持免疫细胞多样性的培养方法如下：
3、步骤一：从卵巢癌患者的腹水中提取出卵巢癌肿瘤细胞和免疫细胞，然后将卵巢癌肿瘤细胞放入高糖型dmem培养基中进行培养，将免疫细胞放入rpmi-1640培养基进行培养；
4、步骤二：模拟卵巢癌患者的卵巢环境搭建模拟培养皿，然后将高糖型dmem培养基中的卵巢癌肿瘤细胞以及rpmi-1640培养基中的免疫细胞转移到模拟培养皿中进行培养；
5、步骤三：对碳纳米管进行表面修饰，使碳纳米管的表面富集叶酸，然后在碳纳米管中加入fth1sirna和枸橼酸铁铵；
6、步骤四：在模拟培养皿中加入重组人铁蛋白重链，当卵巢癌肿瘤细胞和免疫细胞均出现分裂后，将作为运输载体的碳纳米管放入模拟培养皿中；
7、步骤五：对模拟培养皿中卵巢癌肿瘤细胞的数量以及免疫细胞的数量进行统计。
8、优选的，所述步骤一中在提取免疫细胞时，免疫细胞包括淋巴细胞和吞噬细胞。
9、优选的，所述高糖型dmem培养基中包括10％体积的胎牛血清以及0.1～0.2ug/ml被磷酸化的irs4；高糖型dmem培养基放置环境中二氧化碳占比为5％，温度为37℃。
10、优选的，所述免疫细胞放入rpmi-1640培养基包括10％体积的胎牛血清、0.05～0.1ug/ml活性蛋白il-1、0.2～0.3ug/ml活性蛋白il-6、0.1～0.15ug/ml活性蛋白il-7以及0.2～0.43ug/ml抗cd3抗体。
11、优选的，所述免疫细胞在培养过程中通过免疫酶标记技术对免疫细胞进行标记。
12、优选的，所述步骤四中将模拟培养皿非为若干个实验组，然后在不同的实验组中逐渐增大碳纳米管的添加量，最后在步骤五中，观察多个实验组中免疫细胞多样性。
13、优选的，所述碳纳米管为磁性碳纳米管。
14、与现有技术相比，本发明的有益效果是：
15、1)本发明通过对碳纳米管进行表面修饰，可以增强碳纳米管对卵巢癌肿瘤细胞的选择性，然后通过碳纳米管作为fth1sirna和枸橼酸铁铵的作为运输载体，将fth1sirna和枸橼酸铁铵精准的送入卵巢癌肿瘤细胞中，实现卵巢癌肿瘤细胞的凋亡，从而避免免疫细胞被伤害，进而可以保持免疫细胞的多样性；
16、2)本发明在模拟培养皿中加入重组人铁蛋白重链，通过重组人铁蛋白重链维持细胞内铁蛋白、fe2+含量稳定，从而降低免疫细胞对铁死亡的敏感性，进而使得卵巢癌肿瘤细胞在死亡后，免疫细胞仍可以保持正常的活性，从而确保免疫细胞的多样性。
1.一种用于保持免疫细胞多样性的培养方法，其特征在于：该用于保持免疫细胞多样性的培养方法如下：
2.根据权利要求1所述的一种用于保持免疫细胞多样性的培养方法，其特征在于：所述步骤一中在提取免疫细胞时，免疫细胞包括淋巴细胞和吞噬细胞。
3.根据权利要求1所述的一种用于保持免疫细胞多样性的培养方法，其特征在于：所述高糖型dmem培养基中包括10％体积的胎牛血清以及0.1～0.2ug/ml被磷酸化的irs4；高糖型dmem培养基放置环境中二氧化碳占比为5％，温度为37℃。
4.根据权利要求1所述的一种用于保持免疫细胞多样性的培养方法，其特征在于：所述免疫细胞放入rpmi-1640培养基包括10％体积的胎牛血清、0.05～0.1ug/ml活性蛋白il-1、0.2～0.3ug/ml活性蛋白il-6、0.1～0.15ug/ml活性蛋白il-7以及0.2～0.43ug/ml抗cd3抗体。
5.根据权利要求1所述的一种用于保持免疫细胞多样性的培养方法，其特征在于：所述免疫细胞在培养过程中通过免疫酶标记技术对免疫细胞进行标记。
6.根据权利要求1所述的一种用于保持免疫细胞多样性的培养方法，其特征在于：所述步骤四中将模拟培养皿非为若干个实验组，然后在不同的实验组中逐渐增大碳纳米管的添加量，最后在步骤五中，观察多个实验组中免疫细胞多样性。
7.根据权利要求1所述的一种用于保持免疫细胞多样性的培养方法，其特征在于：所述碳纳米管为磁性碳纳米管。