特异性结合胰激肽原酶的纳米抗体及其应用的制作方法

本发明属于生物医学或生物制药，具体涉及一种特异性结合胰激肽原酶的纳米抗体及其应用。

背景技术：

1、胰激肽原酶是一种蛋白水解酶类药物，目前主要从猪的胰腺中提取而得，主要由4种糖和18种氨基酸所组成，是人体组织和哺乳动物中的一种激肽释放酶，是生物体内激肽释放酶-激肽系统的重要成员，在体内以无活性的前体一激肽释放酶原形式存在，能使激肽原降解成激肽发挥药理作用，能扩张血管和毛细血管，增加血管通透性，改善微循环，起调节血压等作用；能降低心肌耗氧量；能激活磷酸脂酶a2，促使肾髓质分泌前列腺素e2，抑制氧化应激，增加血流量；促进前列环素(pgi2)分泌，抑制血栓素(txa2)生成，避免血小板过度聚集，降低血粘度，预防血栓形成，避免加重肾脏微循环损害；通过激活激肽系统，扩张肾小球动脉壁和毛细血管，可显著改善微循环，使肾脏毛细血管功能得以恢复，从而抑制系膜细胞增殖、基底膜的增厚，延缓糖尿病肾病的进展。

2、纳米抗体是一类源于骆驼科动物体内的只有可变区结构的单克隆抗体，分子量约为15kd，常规抗体的十分之一。相比于常规的单抗，纳米抗体具有高组织渗透性、高稳定性、高溶解度和低聚集性以及易于克隆等优点。常规单克隆抗体大多采用哺乳动物细胞进行培养生产，而纳米抗体能够利用微生物系统发酵生产，这样能大大缩短开发时间及显著降低生产开发成本。因此，纳米抗体具有便于下游开发应用的诸多优势。

3、目前胰激肽原酶的成熟纯化工艺主要是采用多步有机溶剂沉淀的方法获得，生产效率较低，耗费大量人力物力和有机溶剂，且市面上尚没有针对胰激肽原酶的亲和纯化方法。

技术实现思路

1、本发明的主要目的就是针对现有技术中的问题，提供一种特异性结合胰激肽原酶的纳米抗体及其应用。

2、为达到上述目的，本发明一方面提供了一种特异性结合胰激肽原酶的纳米抗体，其主要特点是，所述的纳米抗体的核苷酸序列如seq id no.1、3、5任一所示。

3、本发明另一方面提供了一种特异性结合胰激肽原酶的纳米抗体，其主要特点是，所述的纳米抗体的氨基酸序列如seq id no.2、4、6任一所示。

4、本发明还提供了一种重组载体，其主要特点是，包括编码所述的纳米抗体的核苷酸序列。

5、本发明还提供了一种重组菌，其主要特点是，包括所述的重组载体，例如酵母细胞。

6、本发明还提供了所述的特异性结合胰激肽原酶的纳米抗体的用途，其主要特点是，用于纯化胰激肽原酶；或，检测胰激肽原酶的水平。

7、本发明还提供了一种层析填料，其主要特点是，所述的层析填料包括相偶联的基础介质和配基，所述的配基为所述的纳米抗体。

8、较佳地，所述的基础介质为琼脂糖微球、聚苯乙烯-二乙烯基苯微球、或聚甲基丙烯酸酯微球。

9、本发明还提供了一种胰激肽原酶纯化方法，其主要特点是，采用所述的层析填料对胰激肽原酶进行免疫亲和层析。

10、本发明还提供了一种试剂盒，其主要特点是，所述的试剂盒含有所述的纳米抗体，用于检测胰激肽原酶的水平。

技术特征：

1.一种特异性结合胰激肽原酶的纳米抗体，其特征在于，所述的纳米抗体的核苷酸序列如seq id no.1、3、5任一所示。

2.一种特异性结合胰激肽原酶的纳米抗体，其特征在于，所述的纳米抗体的氨基酸序列如seq id no.2、4、6任一所示。

3.一种重组载体，其特征在于，包括编码权利要求1所述的纳米抗体的核苷酸序列。

4.一种重组菌，其特征在于，包括权利要求3所述的重组载体。

5.权利要求1或2所述的特异性结合胰激肽原酶的纳米抗体的用途，其特征在于，用于纯化胰激肽原酶；或，检测胰激肽原酶的水平。

6.一种层析填料，其特征在于，所述的层析填料包括相偶联的基础介质和配基，所述的配基为权利要求1或2所述的纳米抗体。

7.根据权利要求6所述的层析填料，其特征在于，所述的基础介质为琼脂糖微球、聚苯乙烯-二乙烯基苯微球、或聚甲基丙烯酸酯微球。

8.一种胰激肽原酶纯化方法，其特征在于，采用权利要求6所述的层析填料对胰激肽原酶进行免疫亲和层析。

9.一种试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒含有权利要求1或2所述的纳米抗体。

技术总结
本发明提供了一种特异性结合胰激肽原酶的纳米抗体，其中，所述的纳米抗体的核苷酸序列如SEQ ID No.1、3、5任一所示。本发明还提供了相应的应用。本发明成功筛选鉴定出具有良好表达活性的抗胰激肽原酶纳米抗体，采用毕赤酵母系统进行表达生产，可大幅度地降低生产成本，更有利于该抗体的产业化；还成功构建了以抗胰激肽原酶纳米抗体作为配件的纯化填料，为后续纯化胰激肽原酶奠定良好的基础。

技术研发人员：先宗树,穆宁,朱庆庆,孙国威,阮必武
受保护的技术使用者：上海慧谱瑞生物技术有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/12