一株海氏肠球菌ZJ02及其应用

本发明涉及一株海氏肠球菌zj02及其应用，属于生物与新医药。

背景技术：

1、仔猪腹泻是生猪养殖中最常出现的问题。随着中国养猪规模的不断扩大，许多生猪企业采取早期断奶模式，然而哺乳仔猪肠道发育不完善，对环境的抵抗能力较差，加上断奶后环境以及饮食结构的变动极易引起仔猪腹泻，严重时会导致仔猪生产性能下降，发育迟缓甚至停滞，降低养殖场的效益。因此加强对仔猪断奶期间的饲养管理，降低腹泻率对养殖业尤为重要。

2、益生菌能够平衡肠道菌群、促进肠道发育、抑制病原微生物的定植、提高动物的免疫力等，作为饲用抗生素的替代品近年来被广泛应用于畜牧养殖业。乳酸菌是动物肠道中重要的有益菌，可发酵碳水化合物产生乳酸，维持肠道菌群的平衡。已广泛地用于医药、食品和饲料等行业中，被公认为是安全的食品级微生物。但胃肠道中很多生理屏障，如低ph值、胆汁盐、酶等会严重影响益生菌的生存。利用一些基质可提高益生菌的效益，乳制品在胃肠道中有较高的缓冲能力，可对益生菌起到保护作用，被认为是向胃肠道输送益生菌的理想载体。

3、研究发现猪源乳酸菌相较于体外分离的乳酸菌更容易定植于肠道环境。然而专门应用于仔猪生产的益生菌种类较少，因此，需要开发一种可作为液态发酵饲料应用于仔猪生产，降低仔猪腹泻率，提高仔猪生产性能的益生菌。

技术实现思路

1、发明目的：本发明的第一目的是提供一株海氏肠球菌zj02；本发明的第二目的是提供一种含有该海氏肠球菌zj02的菌株发酵液；本发明的第三目的是提供一种含有该海氏肠球菌zj02或其菌株发酵液的微生物制剂；本发明的第四目的是提供利用该海氏肠球菌zj02或其发酵液或微生物制剂在发酵酸奶中的应用。本发明的第五目的是提供利用该海氏肠球菌zj02或其发酵液或微生物制剂制备的发酵酸奶用于哺乳、断奶仔猪的生产。

2、技术方案：本发明的一株海氏肠球菌zj02，所述海氏肠球菌zj02于2023年2月27日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(cgmcc)，保藏编号为cgmccno.26708，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，分类命名为：海氏肠球菌(enterococcus hirae)zj02。

3、进一步地，所述海氏肠球菌zj02从杜长大三元猪肠道中筛选得到。

4、进一步地，所述海氏肠球菌zj02的全基因序列上传至ncbi数据库，序列登录号为prjna953844。

5、本发明所述一种菌株发酵液，包括海氏肠球菌zj02。

6、本发明一种微生物制剂，包括本发明所述的海氏肠球菌zj02或本发明所述菌株发酵液。

7、本发明所述的海氏肠球菌zj02或本发明所述菌株发酵液或本发明所述微生物制剂在制备发酵酸奶、发酵饲料、添加剂中的应用。

8、进一步地，制备发酵酸奶包括以下步骤：

9、将去离子水煮沸后加入全脂乳粉、蔗糖、低聚果糖、低聚半乳糖，搅拌均匀后，进行巴氏灭菌，冷却至室温，进行乳酸菌的接种，摇晃均匀后放入培养箱发酵即可。

10、进一步地，所述全脂乳粉、蔗糖、低聚果糖、低聚半乳糖、乳酸菌、水的质量比为14～16：7～8：0.4～0.6：0.4～0.6：3～4：100。

11、进一步地，所述乳酸菌包括海氏肠球菌zj02、约氏乳杆菌和粪肠球菌。

12、进一步地，所述海氏肠球菌zj02、约氏乳杆菌和粪肠球菌的体积比为2:3:3。

13、进一步地，所述巴氏灭菌的温度为65℃，巴氏灭菌的时间为30min。

14、进一步地，所述发酵在37℃恒温培养箱，发酵24h。

15、本发明所述发酵酸奶、发酵饲料、添加剂用于哺乳、断奶仔猪的生产，可以提高肠道的免疫功能，缓解哺乳仔猪和断奶仔猪的腹泻，提高仔猪的生长性能等。

16、本发明所述海氏肠球菌zj02生长代谢产酸，在固体培养基中菌落形态为乳白色，不透明圆点，边缘光滑。海氏肠球菌zj02在基因组中有多种与pts转运系统相关的底物，并且有代谢蔗糖、半乳糖、淀粉、果糖等多种碳源的酶系，对不同环境的适应性较强。海氏肠球菌zj02对常见抗生素例如头孢曲松、四环素、氯霉素等敏感，是可以安全使用的益生菌。海氏肠球菌zj02对酸性环境以及胆盐耐受性较好，在ph为3～4环境中处理两小时其存活率仍高于65％。说明其可以作用到肠道并发挥作用。

17、有益效果：与现有技术相比，本发明具有如下显著优点：

18、(1)本发明筛选的海氏肠球菌zj02耐酸、耐胆盐能力较好，可适应肠道内复杂的环境，并发挥益生菌的作用。

19、(2)本发明所筛选的海氏肠球菌zj02对不同碳源有较强的利用能力，可应用于发酵饲料、添加剂等。

20、(3)本发明筛选的海氏肠球菌zj02可发酵酸奶，作为液态发酵饲料代替饲用抗生素缓解仔猪断奶腹泻、应激等症状。

技术特征：

1.一株海氏肠球菌zj02，其特征在于，所述海氏肠球菌zj02于2023年2月27日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(cgmcc)，保藏编号为cgmcc no.26708。

2.根据权利要求1所述海氏肠球菌zj02，其特征在于，所述海氏肠球菌zj02从杜长大三元杂交猪的肠道中筛选得到。

3.根据权利要求1所述海氏肠球菌zj02，其特征在于，所述海氏肠球菌zj02的全基因序列已上传至ncbi数据库，序列登录号为prjna953844。

4.一种菌株发酵液，其特征在于，包括海氏肠球菌zj02。

5.一种微生物制剂，其特征在于，包括权利要求1-3任一项所述的海氏肠球菌zj02或权利要求4所述菌株发酵液。

6.权利要求1-3任一项所述的海氏肠球菌zj02或权利要求4所述菌株发酵液或权利要求5所述微生物制剂在制备发酵酸奶、发酵饲料、添加剂中的应用。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，制备发酵酸奶包括以下步骤：

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述全脂乳粉、蔗糖、低聚果糖、低聚半乳糖、乳酸菌、水的质量比为14～16：7～8：0.4～0.6：0.4～0.6：3～4：100。

9.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述乳酸菌包括海氏肠球菌zj02、约氏乳杆菌和粪肠球菌，所述海氏肠球菌zj02、约氏乳杆菌和粪肠球菌的体积比为2:3:3。

10.权利要求6所述发酵酸奶、发酵饲料、添加剂用于哺乳、断奶仔猪的生产。

技术总结
本发明公开了一种海氏肠球菌ZJ02及其应用，该海氏肠球菌ZJ02于2023年2月27日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏编号为CGMCC No.26708，基因组序列登录号为PRJNA953844。本发明从杜长大三元杂交猪的肠道中筛选出一株性能良好的海氏肠球菌ZJ02，其对酸性环境以及胆盐有较好的耐受性，对常见抗生素敏感，且对不同碳源有较强的利用能力。海氏肠球菌ZJ02是性能优良的潜在益生菌，可用于制备发酵酸奶，作为液态发酵饲料应用于哺乳、断奶仔猪，缓解仔猪腹泻以及断奶应激。

技术研发人员：苏勇,席思藤,牛德楷
受保护的技术使用者：南京农业大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13