一种可快速鉴定人群中性别情况的PCR引物对及其应用

本发明属于生物，具体地涉及一种鉴定人群中性别情况的pcr引物对及其应用。

背景技术：

1、研究表明，sry基因(sex determining region y gene，y染色体性别决定基因)是哺乳动物y染色体上起着性别决定的序列，是控制性别的睾丸决定因子(tdf)的遗传基础，也是胚胎发育过程中雄性个体区别于雌性个体的关键基因。因此，作为性别鉴定的重要遗传标记之一，其在遗传病防控，物种性别鉴定等方面有着广泛的应用。

2、近些年来，随着性别决定理论的研究，性别鉴定的方法也由个体水平、细胞水平发展到了分子水平。在人类医学领域中，某些染色体遗传相关疾病会通过遗传信息遗传给下一代，由此双亲可以通过鉴定来避免性别缺陷个体的产生，对人类社会的发展起着重要作用。在司法鉴定相关领域，如何利用未知的人体皮肤组织、血液等快速简单的获知个体性别，对社会的资源发展也起到了关键作用。

3、随着分子生物技术和繁殖技术的发展，性别鉴定及控制技术成为国内外研究的热点，并取得了快速发展。目前性别鉴定方法包括细胞遗传学方法、x-相关酶法、细胞毒性分析法、间接荧光免疫法、囊胚形成抑制法、荧光原位杂交技术、核型分析法。以上鉴定技术原理较为复杂，操作繁琐且耗时较长。此时利用分子生物学方法—pcr扩增技术，最为简便，具有鉴定迅速、准确、灵敏度高、特异性强等优点。

技术实现思路

1、针对以上为解决技术问题，本发明提供了一种可快速鉴定人群中性别情况的pcr引物对，通过pcr扩增sry基因，进行电泳检测，实现快速、便捷、低成本的性别鉴定。

2、本发明提供的一种可快速鉴定人群中性别情况的pcr扩增dna试剂盒，检测试剂盒上表面开设有若干凹槽形成若干容器孔，所述若干容器孔分别卡接有若干试剂瓶和\或管；

3、所述试剂瓶和\或管分别用于盛放2×pcr master mix、sry基因上游引物序列、sry基因下游引物序列、核酸免提取裂解液、使用说明书、ddh20。

4、进一步的，所述pcr检测试剂盒铰接有上盖板；

5、当所述上盖板覆盖于所述pcr检测试剂盒的上表面时，所述pcr检测试剂盒内部呈封闭状态。

6、进一步的，所述2×pcr master mix包括taqdna polymerase，mg2+，2×dntp，ddh2o,溴酚蓝示踪剂。

7、进一步的，所述sry基因上游引物序列

8、sry-f atgcaatcatatgcttctgctatgt。

9、进一步的，所述sry基因下游引物序列

10、sry-r ctacagctttgtccagtggctgtag。

11、sry作为人类性别决定基因，pcr扩增产物长度为615bp。

12、本发明具有以下有益效果：

13、(1)根据人类sry基因组的保守基因序列设计引物，选择的引物片段位于sry基因的cds区域，与其它引物相比，具有较高的特异性和敏感性，可以大批次进行准确检测，且过程简单易操作。

14、(2)本发明可对人类细胞、组织、血液等样本进行快速检测，试剂盒提供的试剂中，无感染性、无生物安全隐患成分，使用安全性很高。

15、(3)本发明创新性设计出的引物，和本发明中的试剂所组成的试剂盒可在收到样品3小时候进行定性诊断结果，为快速鉴定人群中性别情况提供有效工具。

16、本发明的其它特征和优点将在随后的说明书中阐述，并且，部分地从说明书中变得显而易见，或者通过实施本发明而了解。本发明的目的和其他优点可通过在所写的说明书、权利要求书、以及附图中所特别指出的结构来实现和获得。

17、下面通过附图和实施例，对本发明的技术方案做进一步的详细描述。

技术特征：

1.一种可快速鉴定人群中性别情况的pcr引物对，其特征在于，其包括两条寡核苷酸，其中包括(3)sry上游引物序列；(4)sry下游引物序列

2.一种可快速鉴定人群中性别情况的pcr扩增dna试剂盒，其特征在于，其包括如权利要求1所述的pcr引物对，(3)sry上游引物序列；(4)sry下游引物，可以特异性扩增sry基因序列。

3.如权利要求2所述pcr扩增dna试剂盒，其特征在于，其还包括(5)2×pcr mastermix；(7)核酸免提取裂解液；(6)ddh2o；(8)使用说明书。

4.一种pcr扩增dna的方法，其特征在于，其反应体系包括如权利要求1所述sry基因pcr引物对、2×pcr master mix、10-100ng/μl模板dna和ddh2o，所述sry基因pcr引物对中的两条引物的含量均为0.1-3μmol/l；所述pcr扩增dna的方法包括以下步骤：

5.如权利要求4所述pcr扩增dna的方法，其特征在于，其还包括步骤(6)：将步骤(5)的产物4℃保存。

6.如权利要求4所述pcr扩增dna的方法，其特征在于，其反应体系包括：0.5μl权利要求1所述(3)pcr上游引物、0.5μl权利要求1所述(4)pcr下游引物、5μl权利要求3所述(5)2×pcr master mix、3μl和1μl模板dna，最后用权利要求3所述(6)ddh2o补齐为10μl体系。

7.如权利要求4所述pcr扩增dna的方法，其特征在于，其反应体系包括如权利要求1所述通用pcr引物对，权利要求3所述(5)2×pcr master mix、(7)核酸免提取裂解液、(6)ddh2o，模板dna，所述pcr扩增dna的方法包括以下步骤：

8.如权利要求4所述pcr扩增dna的方法，其特征在于，其模板dna由核酸免提取裂解液获得，其包括以下步骤：

9.如权利要求7所述方法，其特征在于，步骤(6)中，所述产物可以进行电泳，利用琼脂糖凝胶观察产物片段，如若出现了长度约为615bp的片段，则可以判断该样本来自男性，如若未出现615bp的片段，则说明该样本来自女性。

10.核苷酸序列表

技术总结
本发明公开了一种可快速鉴定人群中性别情况的PCR引物对、一种PCR扩增试剂盒和一种PCR扩增DNA的方法。所述引物对包括两条寡核苷酸，PCR扩增试剂盒的上表面开设有若干凹槽形成若干容器孔，所述若干容器孔分别卡接有若干试剂瓶和\或管和卡槽，用于放置试剂瓶和\或管；试剂瓶和\或管和卡槽分别用于盛放2×PCR Master Mix、一对SRY引物、ddH<subgt;2</subgt;O、核酸免提取裂解液。本发明提供的可快速鉴定人群中性别情况的PCR引物对及其试剂盒可以实现快速、便捷的鉴定，通用性强，费用低，在遗传、司法鉴定等领域具有广阔的应用前景。

技术研发人员：陈亦然,王曙光,刘欣雨
受保护的技术使用者：安徽理工大学
技术研发日：
技术公布日：2024/2/1