一种梭子蟹卵唾液酸糖肽及其制备方法

本发明属于海洋生物研究，具体涉及一种梭子蟹唾液酸糖肽及其制备方法。

背景技术：

1、唾液酸糖肽是一种复杂的n糖链糖肽，目前只能从天然产物中分离获得。唾液酸糖肽是一种人源化的糖肽，具有调节肾小球的透过性、抑制破骨细胞生长的作用。高活性的唾液酸糖肽主要存在于性成熟的动物卵细胞中。国际上分离纯化唾液酸糖肽的方法主要是以日本akiraseko于1997年报道的方法为主。该方法要经过两次葡聚糖凝胶分离和一次deae离子交换柱和一次cm-sephadexc分离，过程非常复杂，周期较长。国内某专利是利用一次葡聚糖凝胶进行分离，活性碳吸附后利用乙腈洗脱法获得鸡蛋卵黄唾液酸糖肽，其过程简化，得率较高，但由于提取过程引入了苯酚，分离纯化过程引入了乙腈，使得获得的唾液酸糖肽存在严重的安全隐患。

2、梭子蟹是我国重要的海洋经济生物，其肉质鲜美，一直深受国内消费者的喜爱，且其生长快，产量高，在1981年被列为我国海洋养殖重要对象之一。目前，尚无任何文献对梭子蟹卵唾液酸糖肽进行报道。鉴于唾液酸糖肽的高生物活性，开发一种从梭子蟹卵中获得唾液酸糖肽的制备方法，对增加梭子蟹的附加值和促进人类的健康产业发展具有积极的影响。

技术实现思路

1、针对现有技术中存在的问题，本发明设计的目的在于提供一种梭子蟹卵唾液酸糖肽及制备方法。具体通过以下技术方案加以实现：

2、一种梭子蟹卵唾液酸糖肽的制备方法，包括以下步骤：

3、1)取新鲜三疣梭子蟹卵后，高速搅拌进行破碎，得三疣梭子蟹卵浆液；

4、2)将步骤1)制得的三疣梭子蟹卵浆液与95％乙醇的按体积比1:10的比例进行混合脱脂4h，过滤除去乙醇后低温烘干，得脱脂唾液酸糖蛋白；

5、3)按料液比g/ml 1:30往脱脂唾液酸糖蛋白中加入蒸馏水混合搅拌，于4℃的温度下超声提取2h，之后低温静置提取12h，提取液过滤后50℃下旋蒸浓缩，浓缩液离心取上清液4℃暂存，即得粗pt-sgp；

6、4)往步骤3)制得的粗pt-sgp中加入碱性蛋白酶和中性蛋白酶进行酶解，水浴震荡反应后升温加热继续反应，反应结束后旋蒸浓缩，室温冷却，调ph至中性，冷却干燥制得粗pt-sgpp；

7、5)将步骤4)制得的粗pt-sgpp依次经极性分离及纯化处理，制得梭子蟹卵唾液酸糖肽。

8、进一步地，步骤1)中高速搅拌的转速为8r/s。

9、进一步地，步骤3)中离心条件为：转速8000r/min，离心时间为20min。

10、进一步地，步骤4)中碱性蛋白酶和中性蛋白酶的添加量均占粗pt-sgp总量量的1.5％，水浴震荡反应的温度为50℃，反应的时间为2h，升温加热具体为升温到100℃，加热10min。

11、上述制备方法制得的梭子蟹卵唾液酸糖肽。

12、进一步地，梭子蟹卵唾液酸糖肽的多糖含量为71.43％，梭子蟹卵唾液酸糖肽的总蛋白含量为11.27％，梭子蟹卵唾液酸糖肽的唾液酸含量为10.69％。

13、本发明提供了一种从梭子蟹卵中制备唾液酸糖肽的方法，弥补了目前梭子蟹加工产业在唾液酸糖肽方面的空白。该方法是利用脱脂蟹卵经超声波辅助水提取法获得梭子蟹卵唾液酸糖肽粗品，经酶解及水浴加热极性分离村纯化制得梭子蟹卵唾液酸糖肽。该制备方法既简单方便，提取率及安全性较高。

技术特征：

1.一种梭子蟹卵唾液酸糖肽的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

2.如权利要求1所述的一种梭子蟹卵唾液酸糖肽的制备方法，其特征在于步骤1）中高速搅拌的转速为8r/s。

3.如权利要求1所述的一种梭子蟹卵唾液酸糖肽的制备方法，其特征在于步骤3）中离心条件为：转速8000r/min，离心时间为20min。

4.如权利要求1所述的一种梭子蟹卵唾液酸糖肽的制备方法，其特征在于步骤4）中碱性蛋白酶和中性蛋白酶的添加量均占粗pt-sgp总量量的1.5%，水浴震荡反应的温度为50℃，反应的时间为2h，升温加热具体为升温到100℃，加热10min。

5.权利要求1-4任一所述的制备方法制得的梭子蟹卵唾液酸糖肽。

6.如权利要求5所述的梭子蟹卵唾液酸糖肽，其特征在于梭子蟹卵唾液酸糖肽的多糖含量为71.43%，梭子蟹卵唾液酸糖肽的总蛋白含量为11.27%，梭子蟹卵唾液酸糖肽的唾液酸含量为10.69%。

技术总结
本发明公开了一种梭子蟹卵唾液酸糖肽及其制备方法，弥补了目前梭子蟹加工产业在唾液酸糖肽方面的空白，本发明利用脱脂蟹卵经超声波辅助水提取法获得梭子蟹卵唾液酸糖肽粗品，经酶解及水浴加热极性分离村纯化制得梭子蟹卵唾液酸糖肽。该制备方法既简单方便，提取率及安全性较高。

技术研发人员：胡世伟,姜维,刘宇,葛亚明
受保护的技术使用者：浙江海洋大学
技术研发日：
技术公布日：2024/3/31