一株空气芽孢杆菌FLV6及其应用

本发明属于微生物领域，具体涉及菌草“绿洲一号”株内生细菌空气芽孢杆菌(bacillus aerius)flv6及其应用。

背景技术：

1、植物内生菌(endophyte)是某一阶段或全部阶段生活于健康植物的组织和器官内部的真菌、细菌、放线菌。植物内生细菌普遍存在于高等植物中，木本植物、草本植物，单子叶植物和双子叶植物内均有内生细菌的存在。目前植物内生菌已成为生物防治病原菌的有潜力的微生物农药。植物内生菌具有促进植物生长、提高作物产量和品质的作用。内生菌生防作用机理主要包括营养和空间位点竞争、产生抑菌物质和诱导植物抗病性。植物内生菌促进植物生长的机理是内生菌分泌的iaa等生长激素和多酚氧化酶等促生物质促进植物生长发育，通过溶磷、溶钾、固氮作用等方面提高植物对土壤养分的利用效率。

2、菌草“绿洲一号”((arundo donax cv.lv zhou.no.1)禾本科芦竹属多年生植物，根系发达、生长迅速、可在-20℃正常生长，植株富含各类粗蛋白，目前已被作为优质饲料、生物燃料、食用菌和药用菌的培养基等，在农牧业生产和生态环境改良上被广泛应用。菌草“绿洲一号”内生细菌资源丰富，目前对菌草“绿洲一号”内生菌的报道不多，尽管已有有关菌草“绿洲一号”内生菌的报道内生细菌的分离鉴定及对植物的促生效应，但菌草“绿洲一号”空气芽孢杆菌具有生防、促生潜能研究却鲜有报道，为此，开展菌草“绿洲一号”具生防、促生潜能的空气芽孢杆菌的开发和研究具有重要意义。

3、从福建农林大学菌草所基地“绿洲一号”叶片组织中筛选到具有拮抗四种病原真菌及促进玉米等作物生长的空气芽孢杆菌，对生防菌的开发及植物促生剂的应用具有重要意义。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一株空气芽孢杆菌(bacillus aerius)flv6及其应用，flv6为具有生防、促生功能、生长速度快、对环境适应性强的内生菌株。

2、本发明采用的技术方案为：

3、本发明提供的空气芽孢杆菌为空气芽孢杆菌(bacillus aerius)flv6，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心-cctcc，保藏地址：中国科学院微生物研究所，保藏编号：cgmcc no.26700，保藏日期：2023年02月27日。

4、进一步的，所述空气芽孢杆菌具有如下形态和生理、生化特性：

5、a)菌体形态特性

6、所述空气芽孢杆菌为革兰氏阳性菌，细胞呈杆状；

7、b)菌落形态特性

8、所述空气芽孢杆菌菌落为白色，边缘不规则，扁平。

9、c)生理生化特性

10、所述空气芽孢杆菌为兼性厌氧，对染料不易着色，稳定性好，耐氧化、耐挤压、常温下生长、具有耐60℃高温、耐酸碱、快速复活和较强分泌酶。

11、上述菌株的16s rrna基因序列如seq id no.1所示。

12、进一步的，所述空气芽孢杆菌的分离纯化方法，包括：

13、将新鲜、健康的绿洲一号叶片组织用自来水洗去表面的泥土和灰尘，洗净后切成3cm长的片段，用75％的酒精浸泡3min，再用2％的次氯酸钠浸泡2min，用无菌水冲洗叶片3次以上，取最后一次冲洗叶片的无菌水100μl涂布于lb平板，28℃培养2d，以判断消毒是否彻底；

14、取表面彻底消毒且去掉中脉的绿洲一号叶片组织5g，用消毒剪刀剪碎，加入到无菌的研钵中，加无菌水研磨，将上清液稀释至1、10、102、103、104，各取100μl稀释液涂布于lb平板上，28℃培养2d后进行编号、计数；

15、挑取不同形态的菌落于lb平板划线纯化3次以上，直到获得纯的菌株，最后通过镜检，进一步观察其形态，并确定已纯化；

16、挑取最后一次纯化的单菌落用60％的灭菌甘油于-20℃下保存。

17、进一步的，判断消毒是否彻底的方法具体为：若lb平板上无菌落生长则认为表面消毒彻底，反之则不彻底。

18、进一步的，lb培养基组分包括：胰蛋白胨10g/l、酵母提取物5g/l、氯化钠10g/l。

19、上述空气芽孢杆菌在拮抗稻瘟病菌(magnaporthe oryzae)、香蕉枯萎病四号生理小种(fusarium oxysporum f.sp.cubense race 4,foc4)病菌、灰霉菌(botrytiscinerea)、禾谷镰刀菌(fusarium graminearum)中的应用。

20、上述空气芽孢杆菌在制备防治/抑制稻瘟病菌(magnaporthe oryzae)、香蕉枯萎病四号生理小种(fusarium oxysporum f.sp.cubense race 4,foc4)病菌、灰霉菌(botrytis cinerea)、禾谷镰刀菌(fusarium graminearum)药物或菌剂中的应用。

21、上述空气芽孢杆菌在玉米促生中的应用。

22、本发明发现了一株具有生防、促生作用的菌草绿洲一号内生菌株flv6，该菌株分离自菌草绿洲一号，为绿洲一号内生细菌。目前尚未有报道绿洲一号内生细菌产气芽孢杆菌bacillus aerius具有生防和促生作用的报道。经鉴定菌株flv6为空气芽孢杆菌，该菌能够对稻瘟病病菌、香蕉枯萎病四号生理小种病菌、灰霉菌和禾谷镰刀菌4种植物致病菌菌丝的生长具有良好的抑制作用。虽然在专利cn111808776和cn 102286412中告知了空气芽孢杆菌能够分别用于防治玉米纹枯病和番茄枯萎病，但这两种病害的致病菌与本发明的4种植物致病菌不同。另外，有文献报道空气芽孢杆菌能够用于防治黄曲霉(李俊峰等,2019)、刺梨白粉病(冉继平等，2019)和小麦赤霉病(juan et al.,2007)等病害，但这些病害与本发明中四种病原真菌导致的病害也不相同。

23、此外，本发明提供的菌株flv6的发酵液能够促进玉米苗的生长。虽然meng q等(2016)发现贝莱斯芽孢杆菌bac03能够不同程度地促进甜菜，胡萝卜，黄瓜，胡椒，土豆，萝卜，南瓜，西红柿和萝卜等共9种植物的生长，但关于空气芽孢杆菌促进植物苗的生长的文献未见报道。

24、发明的有益效果在于：

25、本发明在菌草“绿洲一号”叶片组织内筛选分离到具有生防和促生作用的内生细菌菌株flv6，经鉴定该菌为空气芽孢杆菌。它能够产生多种抑菌性活性物质，包括蛋白酶、溶杆菌素、假定蛋白、丰原素、表面活性素、伊枯草素、杆菌霉素和杆菌素对稻瘟病病菌、香蕉枯萎病四号生理小种病菌、灰霉菌和禾谷镰刀菌4种植物致病菌菌丝的生长具有良好的抑制作用。该菌还能够产生生长素(iaa)、降解硅酸盐、植物激素对玉米苗的生长具有促进作用。此外，溶血试验中，该菌株菌落周围无溶血现象，属于γ型溶血、说明该菌株对动物不具有致病性；综上，该菌株的发现为植物病原真菌生防菌的开发和利用提供了良好的基础。

技术特征：

1.一株空气芽孢杆菌，其特征在于，所述空气芽孢杆菌为空气芽孢杆菌(bacillusaerius)flv6，保藏号为cgmcc no.26700。

2.如权利要求1所述的空气芽孢杆菌，其特征在于，所述空气芽孢杆菌具有如下形态和生理、生化特性：

3.如权利要求1所述的空气芽孢杆菌，其特征在于，菌株的16s rrna基因序列如seq idno.1所示。

4.如权利要求1所述的空气芽孢杆菌，其特征在于，所述空气芽孢杆菌的分离纯化方法，包括：

5.如权利要求4所述的空气芽孢杆菌，其特征在于，判断消毒是否彻底的方法具体为：若lb平板上无菌落生长则认为表面消毒彻底，反之则不彻底。

6.如权利要求4所述的空气芽孢杆菌，其特征在于，lb培养基组分包括：胰蛋白胨10g/l、酵母提取物5g/l、氯化钠10g/l。

7.一种如权利要求1-6之一所述的空气芽孢杆菌在拮抗稻瘟病菌、香蕉枯萎病四号生理小种病菌、灰霉菌、禾谷镰刀菌中的应用。

8.一种如权利要求1-6之一所述的空气芽孢杆菌在制备防治/抑制稻瘟病菌、香蕉枯萎病四号生理小种病菌、灰霉菌、禾谷镰刀菌药物或菌剂中的应用。

9.一种如权利要求1-6之一所述的空气芽孢杆菌在玉米促生中的应用。

技术总结
本发明公开了一株空气芽孢杆菌FLV6及其应用，本发明提供的空气芽孢杆菌(Bacillus aerius)FLV6，该菌株已于2023年2月27日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏‑CGMCC，保藏号为CGMCC No.26700；该FLV6菌株不仅能抑制四种病原真菌的生长；还能促进玉米等作物的生长。

技术研发人员：叶文雨,邵登科,刘娟,赖泽成,张春源,刘梓烨,陈诗瑜,鲁国东
受保护的技术使用者：福建农林大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15