一种罗伊氏乳杆菌LR08及其制备防治阴道炎药物的用途、产品及方法与流程

本发明属于微生物，特别涉及一种罗伊氏乳杆菌lr08及其制备防治阴道炎药物的用途、产品及方法。

背景技术：

1、女性阴道是一个复杂的微生态体系，由阴道的解剖结构、微生态菌群、局部免疫及机体的内分泌调节功能共同组成，疾病受病因、环境和宿主3个因素的支配，但其核心是正常微生物群与其宿主的相互关系。从临床角度看，各种阴道炎的发病大多与阴道微生态失衡有关，会引起妇女外阴阴道各种不适。

2、目前，临床上主要采用抗生素等药物治疗；而药物治疗往往会造成患者免疫力下降，使得患者阴道菌相改变，进而重复感染，甚至使病原菌产生抗药性造成治疗上的障碍，此外，还有潜在的药物副作用风险，寻找无副作用、无抗药性问题，具较高疗效且避免复发的替代药物、或治疗方案，是近期阴道炎研究相关的重要议题。

3、另外，在治疗阴道炎的指标上，除了病原菌以及益生菌的变化外，患部的发炎等症状牵涉到免疫反应的活化，因此与免疫调节有关的分子表现量也是一项参考依据，其中il-10以及il-12为受病原菌入侵时大量产生的免疫调节分子，两者协同表现，促进宿主的免疫防御，除il-10以及il-12外，il-1β以及il-6在细菌感染时作为促发炎细胞激素，同样调控着发炎反应的发生（il-1β可促进细菌受宿主免疫细胞的吞噬，il-6会协助嗜中性球以非吞噬方式清除细菌），其表现量的下将可代表着患部发炎反应的缓和，意味着发炎症状的改善，因此，免疫调节因子可作为治疗阴道感染的疗效参考指标。

4、有鉴于近年来阴道炎对女性造成高威胁性及高感染率，以及不同种类病原菌可能产生交叉感染的问题，现有技术出现一些采用益生菌抑制病原菌并治疗阴道炎症的报道，但目前已报道的菌株种类有限，抑菌谱较窄且降低炎症因子的效果欠佳。

5、开发具有同时抑制不同种类病原菌且粘附定植能力强的新菌株来改善阴道清洁度、缓解炎症反应，从而有效提升临床上阴道炎的预防及治疗效果，是本领域的创新需要。

6、因此，本领域亟需开发更多的用于更好地临床治疗阴道炎、降炎症因子能力更强、各方面性能更优、抗菌谱更宽的新菌株。

技术实现思路

1、出于解决本领域现有技术存在的抑菌谱较窄且降低炎症因子的效果欠佳等问题的目的，本发明提供一株新筛选的罗伊氏乳杆菌（ lactobacillus reuteri）菌株lr08及其在制备对阴道上皮细胞粘附产品和/或抑菌产品的用途、产品和方法。

2、本发明的技术方案如下：

3、一种罗伊氏乳杆菌（ lactobacillus reuteri）菌株lr08，其特征在于，其保藏编号为cgmcc no. 1.12733。

4、保藏编号为cgmcc no. 1.12733的一种罗伊氏乳杆菌（ lactobacillus reuteri）菌株lr08体外抑菌和/或制备对阴道上皮细胞粘附产品和/或制备抑菌产品和/或制备防治阴道炎药物的用途，其特征在于，所述抑菌指：抑制白色念珠菌、阴道加德纳氏菌、大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、中间普雷沃氏菌中的一种或两种以上。

5、所述阴道上皮细胞指vk2/e6e7细胞；

6、优选地，所述防治阴道炎指降低炎症分值、和/或，提高清洁度、和/或，调节炎性因子含量；

7、优选地，所述炎性因子包括：tnf-α、il-1β、il-6、il-10；

8、优选地，所述调节炎性因子含量包括：降低tnf-α和/或il-1β和/或il-6的水平，和/或，提高il-10的水平。

9、一种抑菌产品，包括抑菌活性成分；所述抑菌活性成分包括：保藏编号为cgmccno. 1.12733的一种罗伊氏乳杆菌（ lactobacillus reuteri）菌株lr08。

10、所述的一种抑菌产品，还包括：辅料。

11、一种防治阴道炎的药物，包括药效活性成分；所述药效活性成分包括：保藏编号为cgmcc no. 1.12733的一种罗伊氏乳杆菌（ lactobacillus reuteri）菌株lr08。

12、所述的一种防治阴道炎的药物，还包括：药学上可接受的辅料。

13、一种对阴道上皮细胞粘附产品，包括：保藏编号为cgmcc no. 1.12733的一种罗伊氏乳杆菌（ lactobacillus reuteri）菌株lr08。

14、一种体外抑菌方法，采用保藏编号为cgmcc no. 1.12733的一种罗伊氏乳杆菌（ lactobacillus reuteri）菌株lr08抑菌。

15、所述抑菌指：抑制白色念珠菌、阴道加德纳氏菌、大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、中间普雷沃氏菌中的一种或两种以上。

16、本发明一方面提供了一种罗伊氏乳杆菌（ lactobacillus reuteri）lr08。该罗伊氏乳杆菌lr08系以抗菌性能为指标筛选自申请人自有菌种资源库，该菌株具有其他菌株所不具备的对阴道病原菌的广谱抗菌特点，为自产菌粉。罗伊氏乳杆菌已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，分类命名：罗伊氏乳杆菌（ lactobacillus  reuteri），保藏号为cgmcc no. 1.12733，保藏日期为2020年07月20日，保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所。

17、本发明的罗伊氏乳杆菌lr08可产生各种代谢产物，包括磷壁酸、肽聚糖、酸性物质、乳酸菌素、罗伊氏素及h2o2等。其中脂磷壁酸、肽聚糖对上皮细胞具有粘附作用，从而形成空间占位达到防止病原菌粘附阴道上皮细胞的目的；酸性物质等代谢产物可以消耗大量细胞能量并影响细胞膜的稳定性，从而达到抑制病原菌增殖的目的。

18、本发明另一方面提供了上述罗伊氏乳杆菌（ lactobacillus reuteri）lr08体外抑菌和/或制备对阴道上皮细胞粘附产品和/或制备抑菌产品和/或制备防治阴道炎药物的用途。本发明在细胞炎症因子tnf-α、il-1β、il-6、il-10的平均水平进行检测，研究罗伊氏乳杆菌在细胞炎症因子表达中的作用，研究罗伊氏乳杆菌在阴道抑菌中的作用机制，为开发微生态制剂提供依据。

19、本发明罗伊氏乳杆菌具有较强的拮抗白色念珠菌、阴道加德纳氏菌、大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、中间普雷沃氏菌等阴道病原菌的能力，

20、本发明罗伊氏乳杆菌粘附性强，其粘附vk2/e6e7细胞能力高达116.10cfu/cell，粘附率为71.47%，显著高于商业菌株鼠李糖乳杆菌gr-1和罗伊氏乳杆菌rc-14。

21、本研究通过与阴道加德纳氏菌、大肠杆菌、葡萄球菌、白色念珠菌对阴道上皮细胞的粘附力作比较，结果显示，罗伊氏乳杆菌lr08对阴道上皮细胞vk2/e6e7粘附能力显著高于大肠杆菌、葡萄球菌、白色念珠菌；罗伊氏乳杆菌能较强地抑制阴道加德纳氏菌、大肠杆菌、葡萄球菌、白色念珠菌对阴道上皮细胞的粘附。罗伊氏乳杆菌粘附形成的空间占位是防止其他菌对阴道组织附着的一个重要保护机制。

22、本发明罗伊氏乳杆菌具有优异的耐酸能力，在ph4环境中孵育3h后，其存活率高达98.9%。说明该菌株可在正常阴道环境中定植并存活，具备制备阴道健康清洁产品的生物学特性。

23、所述罗伊氏乳杆菌经体外实验证明对常见抗生素敏感，无耐药性，安全无副作用。

24、在小鼠阴道炎模型中，以甲硝唑作为对照，利用罗伊氏乳杆菌干预治疗后，结果显示，罗伊氏乳杆菌对小鼠混合菌阴道炎的治愈率为90%，子宫的炎症反应得到了明显的改善，降低了组织充血和水肿现象，罗伊氏乳杆菌降低了小鼠血清中促炎因子il-1β、tnf-α、il-6的表达，提高了抗炎因子il-10的表达，表明罗伊氏乳杆菌对小鼠阴道炎康复有积极作用。

25、本发明罗伊氏乳杆菌具有活菌数高的特点，经小试发酵培养，其活菌数高达20亿cfu/ml，具有可实现工业化生产的潜能。

26、本发明以抗菌性能为目标筛选获得一株抗菌谱广且对阴道上皮细胞黏附性能强的罗伊氏乳杆菌（ lactobacillus reuteri）菌株lr08，经耐酸性、抗生素敏感性等实验验证，证明其为一株适应于阴道环境且对抗生素敏感、对人体安全的菌株。同时进一步通过小鼠实验证实，该菌株能有效防治阴道炎，降低阴道炎模型小鼠的阴道炎症分值、清洁度和炎性因子水平。本发明提供的罗伊氏乳杆菌（ lactobacillus reuteri）菌株lr08可用于制备对阴道上皮细胞黏附的产品、抗菌产品以及防治阴道炎的药物，具有较高的工业生产价值。

27、本发明罗伊氏乳杆菌（ lactobacillus reuteri）菌株lr08的保藏信息如下：

28、菌株名称：lr08；

29、保藏号：cgmcc no. 1.12733；

30、分类命名：罗伊氏乳杆菌 lactobacillus reuteri；

31、保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；

32、保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号；

33、保藏日期：2020年07月20日。